第四章-真实性、品种纯度与田间检验

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种子花纹、大小、形状、光泽、蜡质、种脐等

鉴定时,需备好标准样品的相关资料,必要时可借助放
大镜等工具逐粒检验。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 1、种子形态鉴定法

优点:简单易行,不需要复杂设备 缺点:可供鉴别的种子形态特征有限,有时不易区分环境 因素对种子形态特征的影响,且受主观因素影响较大

种植株数要根据国家标准种子质量标准的要求而定。一般
用公式 N 4 (1 b) 表示,b为标准品种纯度。如标准 纯度为98%时,N为200株即可达到要求。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 5、田间小区种植鉴定法 (4)鉴定时期

许多种在幼苗期就有可能鉴别出品种真实性和纯度,但成 熟期,花期和食用器官成熟期是品种特征、特性表现最明

2、实验室检验 3、田间小区种植检验
防止机械混杂
四、真实性和品种纯度鉴定


(四)实验室检验
各种方法在准确性、经济性、可操作性等方面均有不同程度 差异,可根据实际检验目的和要求选择合适的技术和方法。

总的原则:简单、易行、经济、准确、快速。 1、种子形态鉴定法

根据不同品种在种子形态特征方面的差异进行鉴定,如
六、种子生活力测定

(一)种子生活力测定的意义 1、概念

种子生活力指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。

2、意义

(1)休眠种子必须通过测定生活力才能了解其真正品质和
潜在发芽能力。

(2)种子贸易中可以生物化学速测法测定种子生活力 。
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法

⑦ 测定结果填报在检验结果报告单的规定空格中,精确度 为1%。
六、种子生活力测定

(二)种子生活 力测定的方法
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
2、靛蓝染色法和红墨水染色法

(1)测定原理 衰老种子或死种子的原生质膜失去选择性透性,细胞外的 染色剂容易进入细胞,故细胞被染色,而活细胞不能被染 色,所以根据胚组织的染色反应可区分无活力种子和有活 力种子。
四、种子真实性及品种纯度鉴定


(一)种子真实性和品种纯度鉴定的意义
1、相关概念

(1)种子真实性:一批种子所属品种、种或属与文件描 述(品种证书、标签等)是否相符。这是鉴定种子样品 的真假问题。 (2)品种纯度:品种个体之间在特征特性方面典型一致 的程度,用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的 百分率表示,这是鉴定品种一致性程度高低的问题。

四、真实性和品种纯度鉴定


(一)种子真实性和品种纯度鉴定的意义
2、意义

(1)保证良种优良性状充分发挥的有效措施; (2)正确评定种子等级的主要依据; (3)品种权保护的重要依据。
利用分子标记技术鉴定品种纯度
四、真实性和品种纯度鉴定


(二)种子真实性和品种纯度鉴定的原理
检验品种的特异性(Distinctness)、一致性(Uniformity)、 稳定性(Stability),即DUS测试
箱内染色,可缩短染色时间。

如在规定时间内样品的染色不够充分,可适当延长染色 时间,以确定是TCC渗入速度问题,还是种子胚的缺陷
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
1、四唑(TTC)染色法

(3)测定方法 ⑤ 鉴定:取出染色的种子并用清水冲洗干净,放在白色滤
纸上逐粒观察胚和胚乳的染色情况。
(四)实验室检验 7、分子标记鉴定法 在DNA和RNA等分子水平上鉴别不同品种,最常用的是 SSR、 RAPD、AFLP、ISSR、SCAR、SRAP等。

其中,SSR标记应用最多,为共显性标记,可区分双亲和 F1。
甘 蓝 种 子 纯 度 鉴 定
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 8、检验结果报告

六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
1、四唑(TTC)染色法

(3)测定方法 ③ 样品准备:去掉种皮,没种胚纵切成两半,使种胚的主
要构造暴露在切面上,便于染色和鉴别。

④ TTC染色:将每份100-200个半粒种子,分别浸入TTC溶 液,室温下染色10-12h。为加快染色,可放入30-45℃的温
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 4、化学鉴定法
NaOH
小 麦 种 子
根据不同品种皮壳成分和化学物质对不同化学试剂反应显色 的差异来鉴定品种。

鉴定方法:取试样2份,每份100粒,将每粒种子放入直径为
8mm的小试管中,每管加入3滴10%的NaOH,25-28℃下放置
2h,取出种子鉴定浸出液颜色

鉴定方法:随机从送验样品中数取4份种子,每份100粒。
在培养室或温室中种植,当幼苗长到适宜评价的阶段时, 根据不同品种之间幼苗形态上的差异,对幼苗进行鉴定。

如叶缘形状、下胚轴颜色、子叶形状等。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 2、幼苗形态鉴定法
甜菜不同品种的叶柄颜色
四、真实性和品种纯度鉴定
种子田间检验
三、田间检验的次数及时期

田间检验可按苗期、开花期、成熟期等3个时期分多次进行
如果条件不允许,也可在品种性状表现最充分时进行 1次检查。
如杂交制种田在开花期,蔬菜植物在产品器官成熟期
四、田间检验的一般程序

(一)了解情况和检查标签
(7)计算判定是否符合种子质量标准,能否作为种用种子。
二、对田间检验员的要求

田间检验是通过田间检验员来完成的,必须满足以下条件

(1)必须经过培训,通过田间检验原理和程序知识的书面
考核、田间检验技能的实践考核

(2)必须熟悉田间检验方法和田间标准、品种特征特性、 种子生产的方法和程序等方面的知识

种子活力鉴定方法与TTC法相同。
第三节 种子田间检验技术

在植物生长期间,到种子生长田进行检验,是保证种子质量的
重要措施,具有可操作性好且鉴定结果可靠等优点。

一、田间检验的内容

(1)检查种子生产田是否符合要求(如隔离、前茬作物等) (2)检查种子生产程序是否符合要求 (3)检查异作物情况 (4)检查杂草情况 (5)检查病虫害情况 (6)检查植株生长状况

为了鉴定品种真实性,应在鉴定的各个阶段与标准样品进
行比较。标准样品应代表品种原有的特征、特性,最好是 育种家种子。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 5、田间小区种植鉴定法 (2)田间小区的设置

为使品种特征、特性充分表现,试验的设计和布局上要选 择气候环境条件适宜、土壤均匀、肥力一致、前茬无同类

特异性:每个品种都具有明显区别其他品种的特征,包 括表型特征、解剖特征、代谢特征、分子特征等

一致性:每个品种不同个体之间具有相同的特征
稳定性:采用合理的繁殖方式,品种的特征是可以稳定 遗传的

借助各种有效手段,找出不同品种在形wk.baidu.com学、细胞遗传学、
解剖学、生理学、生物化学、分子生物学等方面的差异
作物和杂草的田块,并有适宜的栽培管理措施。

每个样品最少有2个重复,为了避免失败,重复应适当布 置在不同田块上。小区的大小应为准确鉴定提供足够的植 株数。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 5、田间小区种植鉴定法 (3)种植密度的确定和种植株数的计算

播种时应有足够的株距和行距,大株作物可适当增加行株 距,必要时可用点播和点栽。

鉴定方法:随机从送验样品中数取4份种子,每份100粒种
子,逐粒观察,区分出本品种和异品种种子,计数,并按 下列公式计算品种纯度百分率。
品种纯度 ( % ) 供检种子 数 异品种种 子数 100% 供检种子 数
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 2、幼苗形态鉴定法

在合适的发育条件下,让幼苗发育到一定阶段,根据幼苗 的形态特征区别不同品种,或在一定的逆境条件下,根据 品种对逆境的反应来鉴别不同品种。

(3)必须具备能依据品种特征特性证实品种真实性,能鉴 别种子田混杂株并使之量化的能力

(4)对被检品种有丰富的知识,熟悉被检种品种间差异的 特征特性
二、对田间检验员的要求

(5)有良好的健康,每年保持一定田间检验工作量,技能
一直保持良好的状态

(6)应独立地根据检验结果报告田间状况并作出评价,评 价结果只对检查机构负责
重复。

② 预处理:使种子加快和充分吸湿,软化种皮,方便样品 准备和促进活组织酶系统的活化。

预措:除去种子外部的附属物,包括剥去果壳和弄破种
皮,但不能损伤种子内部胚的主要构造。 预湿:包括快速水浸预湿(活力强、不易破裂种子)、 缓慢纸床预湿(活力弱、易破裂种子) 、H2O2溶液浸 种预湿等(加速酶系统活化)。

DPNH2 TTC DPN TTCH HCl
判断种子有无活力,主要取决于染色部位和染色面积,而 不一定在于颜色的深浅。
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
1、四唑(TTC)染色法

(2)应用范围:

测定休眠种子的发芽潜力
测定收获后马上播种的种子发芽潜力

(四)实验室检验 3、物理鉴定法 应用较多的是荧光分析法,其原理是不同类型和品种的种子, 其种皮结构和化学成分不同,在紫外线照射下发出的荧光也 不同。

鉴定方法:取试样4份,每份100粒,分别排列在黑纸上,放
于波长365nm的紫外光下照射,数分钟后即可观察。

菜用豌豆发淡蓝色或粉红色荧光,谷实豌豆发褐色荧光 白菜绿色,白芥鲜红色,黑芥深蓝色,田芥鲜蓝色
测定发芽缓慢种子的发芽潜力 测定发芽末期未发芽种子的发芽潜力


测定因收获或加工而受损种子的发芽潜力,并探明原因
查明发芽试验中不正常幼苗的原因 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 为种子贸易快速测定种子活力
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
1、四唑(TTC)染色法

(3)测定方法 ① 扦取试样:从净种子中随机取样4份,每份100粒,4次
1、四唑(TTC)染色法

(1)原理:有活力种子的胚在呼吸过程中会发生氧化还原 反应,三苯基四氮唑(TTC)为无色指示剂,被种子活组
织吸收后,会参与活细胞的还原反应,从脱氢酶接受 H+,
在活细胞中产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基 甲臜。而无活力组织无此反应故不染色。
辅酶IH2 辅酶I 甲臜
四、真实性和品种纯度鉴定


(三)种子真实性和品种纯度的监控途径
影响种子真实性和品种纯度的因素有遗传分离、自然变异、 生物学混杂、机械混杂和其他不可预知的因素等。

针对以上因素,监控种子真实性和品种纯度的主要途径有:

1、田间检验:在种子田植株生长期间监控种子真实性和
品种纯度,不符合田间标准的种子田不准收获
有生活力种子:胚被染成有光泽 的鲜红色 不正常种子:胚的主要构造局部 不染色或染色异常 死种子:完全不染色或染成无 光泽的淡红色或灰白色
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
1、四唑(TTC)染色法

(3)测定方法 ⑥ 结果计算:统计有生活力种子的个数,并计算种子生活 力百分率,如果重复间差距超过最大容许差距( P116,表 4-4),需重新进行测定。

结球甘蓝樱桃色,花椰菜樱桃色至玫瑰色,抱子甘蓝和皱 叶甘蓝浓茶色,油菜、芥菜和芸薹浅黄色,芜菁白色
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 5、田间小区种植鉴定法 鉴定品种真实性和纯度最常用、最可靠、最准确的方法,适 用于种子质量纠纷的仲裁试验,并作为赔偿损失的依据。

(1)标准样品的使用

靛蓝染色法:死胚染成蓝色,活胚不染色 红墨水染色法:死胚染成红色,活胚不染色

应用范围:豆类、谷类和瓜类等大粒种子
六、种子生活力测定

(二)种子生活力测定的方法
2、靛蓝染色法和红墨水染色法

(2)测定方法 种子准备与TTC法相同。 将每份100-200个半粒种子放入培养皿中(剖面向下),立 即注入靛蓝溶液或红墨水,淹没种胚进行染色。到规定时 间将种子取出、洗净,再进行鉴定。
显的时期,必须进行鉴定。
四、真实性和品种纯度鉴定

(四)实验室检验 6、生理生化鉴定法 根据品种所特有的蛋白质或同工酶(电泳法、免疫技术)和 代谢产物(色谱法)来进行品种纯度鉴定。

比较简单和常用的是电泳法,根据蛋白谱带的组成及一致性,
来区分本品种和异品种。
四、真实性和品种纯度鉴定

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