促性腺激素抑制激素对性腺,垂体的发育和维护

• 为了调查GnIH睾丸细胞凋亡和生精活动的影响，用渗 透泵给成熟的鸟类施加GnIH(0.3微克/h)两周。在 1400-1600小时之间将其麻醉并且在用完4%多聚醛的 固定液后用PBS灌流。去除睾丸存于固定液两天，然 后脱水嵌入石蜡。切成6微米的小段，通过末端脱氧 核苷酸转移酶介导的缺口末端标记检测凋亡细胞，睾 丸的形态通过苏木-伊红染色调查。 • 最后为了了解GnIH家禽生殖的生理作用，我们分析了 GnIH在幼年蛻毛到成熟时成年蛻毛的影响，GnIH被 注射入未成熟鸟类，以三种不同的剂量（0.01,0.1,1微 克在100微升0.9%的生理盐水中）每天一次，每组8 只，8-20日龄，1400-1600小时之间，对照组仅提供 生理盐水。
1.研究背景
任何有关神经肽能够抑制促性腺激素的的分泌的说法 没有得到证实，他们最近证明了在鹌鹑中一种新型的 下丘脑十二肽能直接抑制促性县激素的释放，并命名 它为GnIH,抑制促性腺激素释放的作用是以鹌鹑下丘 脑中一种新型G蛋白偶联受体为媒介的。这个新的促 性腺激素抑制系统被看作是鸟类的普遍特性，以一个 完全新颖的观点，提供了一个前所未有的机遇来研究 鸟类繁殖调控。为了了解GnIH在家禽生殖方面的作 用，他们调查了GnIH在性腺发育和维护的作用。通 过渗透泵给成熟的鸟类连续施加两周的GnIH,降低了 促性腺激素共同α，LHβ亚基mRNA的表达。
实验计划:为了确定GnIH合成和分泌的影响，利用小 型渗透泵把GnIH施加给三个月大的成熟个体，用三个 不用的剂量(0.03,0.3,3微克GnIH在0.5微升0.9%的生 理盐水中/h,每组七只），对照组用相同的渗透泵摄入 生理盐水。每个渗透泵在戊巴比妥钠（40mg/kg)下植 入ip（趋化因子干扰素诱导蛋白），在连续两周的施 加GnIH后，所有鸟类在1400至1600小时之间通过去 头终止生命活动，血液收集在肝素化中并在4℃离心 20min，血浆保存在20 ℃，立即收集血液后去除垂体， 将其速冻，保存在-80℃中。促性性腺激素common α， LHβ和FSHβ亚基mRNA在垂体表达用竞争性PCR量化。 PlasmaLH和睾酮浓度用RIA量化。
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• 为了调查GnIH在睾丸发育方面的影响，向不成熟的鹌 鹑（每组8只)注射三种不同剂量的GnIH，从8-20日 龄开始在1400-1600小时之间每天一次，因为不成熟 鹌鹑体型较小，注射用小型渗透泵。它们在实验过程 中，平均体重由17.1g增至56.8g。将GnIH剂量由 5.8ng每天降至1.8ng每天/g（体重）。对照组仅提供 生理盐水。所有的鹌鹑在1400-1600小时之间，在第 二十一天的时候通过去头收集血液和睾丸，血液收集 后，移除睾丸，称重，浸泡在Bouin氏固定液里两天。 随后脱水嵌入石蜡，切成6微米小段苏木-伊红染色用 于组织学检查，血浆睾酮浓度用RIA量化。
• 作者：Takayoshi Ubuka, Kazuyoshi Ukena, Peter J. Sharp, George E. Bentley, and Kazuyoshi Tsutsui • 通讯地址：Kazuyoshi Tsutsui，脑科学 实验室，广岛大学综合艺术与科学学院， 739-8521，东广岛，日本
PlasmaLH和睾酮浓度也降低。此外，给成熟鸟类施加 GnIH会诱发睾丸中睾丸细胞的凋亡和降低生精活性。 对不成熟的鸟类两周每天施加GnIH会抑制正常睾丸细 胞的生长和血浆睾酮浓度的升高。幼年时蛻毛抑制也 在给予GnIH后发生，这些结果暗示GnIH通过降低促 性腺激素的合成和释放来抑制性腺发育和维护。GnIH 也许能够解释在鹌鹑中下丘脑的GnRH可观察到降低 之前光照能够诱发性腺的回归的现象。据他们所知， GnIH是首种被证明能抑制任何脊椎动物生殖功能的一 种下丘脑神经肽。
2.目的及意义
●为了阐示GnIH作用模式。 ●GnIH功能性意义和它作为一种涉及到家禽生殖关键 神经肽的潜在功能。 ●为了调查GnIH是否抑制睾丸细胞的发育与维护。
3.材料和方法
• 动物：成熟和未成熟的雄性日本鹌鹑。 新孵出的鹌鹑被放置在一个温度控制室 (35±2℃)日常16小时光照和8小时黑暗 (开灯700小时)育雏第一周。温度以每周 下降3.5 ℃的梯度到第四周，将鹌鹑分 离到单独的笼子。所有的鸟类提供鹌鹑 食物和自来水。
4.结果分析
• 成年时GnIH对促性腺激 素合成和释放的作用
图 一
成年时GnIH对血浆睾酮浓度，睾丸凋亡细胞，生 精活动的作用。
图二
图三
图 四
发育时期GnIH对睾丸生长，生精活动以及血浆睾 酮浓度的作用
图 六
图 五 图 七
发育时期GnIH对幼年蛻毛进入成年的影响
5.讨论
• 实验数据表明，GnIH直接作用于垂体GnIH受 体，导致促性腺激素的合成和释放减少 ，抑 制睾丸的发育和维护 ，但不能排除GnIH对睾 丸的直接作用，然而，体外促黄体激素直接抑 制和GnIH下丘脑位置表明它的影响是通过直 接抑制促性腺激素表现的，但是GnIH也有可 能通过抑制GnRH分泌起作用。组织学证据猜 测GnIH阳性纤维和GnRH-1和2胞体以及纤维 末端有功能性连接。这些可能是进一步研究的 课题
Gonadotropin-Inhibitory Hormone Inhibits Gonadal Development and Maintenance by Decreasing Gonadotropin Synthesis and Release in Male Quail
雄性鹌鹑中促性腺激素抑制激素通过 降低促性腺激素合成和释放来抑制性 腺发育和维护 夏佳豪