盐酸克伦特罗的检测方法

盐酸克伦特罗的检测方法

科技信息职教与成教

盐酸克伦特骂硇楦测方法

河南科技大学林业职业学院刘荣森

[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱

法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.

[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展

中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥

用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:

Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯

苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:

]}H31.

l

盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减

少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该

药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦

特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉

精已成为重大的食品安全问题.

中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情

况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒

事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在

检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,

方便,精确的检测方法.

检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高

效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法

(CE)等.

1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS)

气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法

fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳

性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲

基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间

长,需贵重仪器等缺点.

吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱

克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化

条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸

克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓

缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯

洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦

特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n.

2.高效液相色谱法(HPLC)

高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合

大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是

检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵

重仪器,难于操作,价格昂贵.

吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗

和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉

淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析.

本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特

罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相

色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相,

用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦

特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%.

相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤

维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气

流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的

试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg 之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织

中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%,

91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法

操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残

留的检测.

高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽

莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反

相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的

线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为

0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好.

3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)

ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础

是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测

限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不