药敏试验方法1
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告药敏试验实验报告一、实验目的了解不同药物对细菌的敏感性，为临床选择合适的药物提供参考依据。
二、实验材料及方法1. 实验材料：试验细菌、各种抗生素药品、琼脂培养基、平板培养基、培养皿、试管等。
2. 实验方法：(1) 细菌培养：取一根无菌的接种棒，沾取细菌液悬浊液，在琼脂平板上划线接种。
(2) 药物敏感性试验：将各种抗生素药品通过滴定法或漏斗法加入琼脂平板培养基中制成不同浓度的培养基，然后滴加在含有细菌的琼脂平板上。
(3) 实验观察：观察不同抗生素对细菌的抑制情况，通过测定菌落直径，判断细菌对该药物的敏感性。
三、实验结果及分析根据实验结果，我们发现不同细菌对不同抗生素药物表现出不同的敏感性。
对于某些细菌，某种抗生素可能具有很好的抑制效果，而对于另一些细菌则无效。
这表明细菌的敏感性是多种因素相互作用的结果。
四、实验总结通过本次药敏试验，我们获得了一些细菌对不同抗生素药物的敏感性信息。
在临床应用中，我们可以根据该信息选择合适的抗生素进行治疗，提高治疗效果。
实验中发现不同细菌对不同抗生素的敏感性差异很大，这与细菌的生物特性、遗传变异、环境因素等有关。
因此，在临床应用中，我们应该充分了解细菌的敏感性情况，并结合患者的具体情况，选择适合的抗生素进行治疗。
需要注意的是，药敏试验结果只是一种参考，我们不能单纯地根据结果选择抗生素。
在实际应用中，我们还需要综合考虑患者的病情、用药历史、并发症等因素，综合评估选择合适的抗生素方案。
继续深入研究细菌对抗生素的敏感性是必要的，只有通过进一步的研究，我们才能更好地了解细菌的抗药性机制，指导合理使用抗生素，避免抗生素滥用导致的抗药性问题。
五、参考文献1. XXX，XXX，XXX. 药敏试验在临床中的应用和意义[J]. 中国抗生素杂志，2020，35(4).2. XXX，XXX，XXX. 不同细菌对抗生素的敏感性研究进展[J]. 临床药学杂志，2019，15(2).。
药物敏感试验判断标准 mic
药物敏感试验判断标准 mic药物敏感性试验判断标准Mic是药物敏感性试验中常用的标准之一。
它代表着最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration），即能抑制菌株生长的最低浓度。
药物敏感性试验是评估细菌、真菌或其他微生物对某种抗生素或抗真菌药物的敏感性的常用方法之一，用于指导临床上的抗感染治疗。
本文将详细介绍Mic的定义、测定方法以及其在药物治疗中的意义。
一、Mic的定义Mic是指药物在试验条件下能够抑制细菌生长的最低浓度。
在药物敏感性试验中，通常使用微量稀释法来测定Mic。
微量稀释法是一种常用的半定量方法，通过逐渐稀释药物溶液来确定能够抑制菌株生长的最小药物浓度。
Mic的值越小，意味着细菌对药物的敏感性越高。
二、Mic的测定方法1. 罗氏法（Broth dilution method）：将不同浓度的药物加入含有培养基的试管中，接种细菌，培养一定时间后观察细菌生长情况。
通过观察菌落的形成与否来确定Mic。
2. 珠光法（E-test）：将含有药物梯度的试纸片放置在含有细菌的琼脂平板上，培养一定时间后观察试纸片上的菌落生长与否。
根据试纸片上药物浓度梯度的一侧出现菌落的最后一个点，结合标尺上的数值，确定Mic。
3. 剂量杯法（Cup method）：将不同浓度的药物加入含有琼脂基质的杯中，接种细菌，培养一定时间后观察细菌生长情况。
通过观察药物浓度对细菌生长的抑制效果来确定Mic。
以上三种Mic测定方法各有优缺点，临床上根据具体情况选择合适的方法进行药物敏感性试验。
三、Mic的临床意义Mic值是临床上选择合适药物进行治疗的重要指标之一。
根据Mic值的不同，通常将药物分为以下几个分类：1. 敏感：当Mic值较低时，说明细菌对药物敏感，拟合适的治疗药物。
2. 中介：当Mic值介于敏感和耐药之间时，表示细菌对药物的敏感性较差，治疗时需慎重考虑。
3. 耐药：当Mic值较高时，说明细菌对药物耐药，该药物对细菌已失去或极低的抑菌作用，应避免使用。
35药敏试验(1)
35药敏试验：K-B法（1）1，M-H琼脂平板厚度：正常应为4mm，当它太厚时，会引起假性耐药，抑菌圈变小。
当它太薄时，出现假性敏感，圈变大。
直径90 mm平板可注入25—30 ml的M—H肉汤，制造好后于4度可保存一周。
2，M-H琼脂平板的PH值：正常应为7.2—7.4,当PH升高时，使青霉素、四环素类的抑菌圈变小，大环内脂类的抑菌圈变大。
当PH降低时，使青霉素、四环素类的抑菌圈变大，氨基糖苷类和大环内脂类的抑菌圈变小。
3，M-H琼脂平板中有胸腺密啶或核苷类物质，当它们的含量增多时，抑菌圈变大。
4，M-H琼脂平板中有钙、镁离子，当它们的含量过高时，引起抑菌圈变小。
当它们的含量过低时，引起抑菌圈变大。
5，纸片含药量：饱和法应为20微克，半饱和法应为10微克。
含药量大则抑菌圈小。
纸片的含药量与纸片的重量、吸水性、直径有关。
纸片的含药量应是每一张都相同。
纸片的PH值应为中性。
纸片的厚度应为1厘米，过厚则抑菌圈变小，过薄则抑菌圈变大。
纸片的直径应为6—6.35 mm，过大引起药物浓度变小,故则抑菌圈变小。
过小，则抑菌圈变大。
纸片于零下20度保存，使用时应室温平衡10分钟以上再打开，注意防潮。
纸片保存不当，引直药量损失，可引起能生长的菌增多，故出现抑菌圈变大。
6，标准菌液的浓度：应为0.5个麦氏浊管，相当于1.5＊108CFU/ml，当过浓时，引起抑菌圈变小。
过稀时，抑菌圈变大。
7，加菌液后，应在15分钟内加药片，不能超过15分钟，否则引起抑菌圈变小。
因细菌已过多的渗透入琼脂中。
8，贴纸片时：纸片间的间距应不小于24 mm，距平板边缘应不小于15 mm。
90mm的平板，要加5片：可防不同药物的相互干扰，防抑菌圈边缘交叉，保持纸片周围浓度相对恒定。
加了一个纸片后，应高温灼烧镊子，再冷却后取下一个纸片。
药敏试验
判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养 菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该 药的MBC。
试 材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方 法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其 余各试管中加入0.5mL； （3）向第1支试管中加0.1mL药液 取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂 平板 向1-14试管中各加0.5mL菌液 培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖 步 骤 （1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基 （4）涂菌液 （5）放置牛津杯 （6）加菌液 （7）盖陶瓦盖 （8）培养 （9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试 材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、 培养箱
方 法
（1）制备药敏片 （2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤 （3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片 （5）培养:37℃ 24小时 （6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm
支原体药敏试验操作方法
支原体药敏试验操作方法
支原体药敏试验是对支原体细菌进行敏感性测试，以确定它们对不同抗生素的敏感程度。
操作方法如下：
1. 支原体细菌的筛选：首先选择纯化的支原体细菌株，应当检查其纯度和生长状态。
2. 制备试验用平板：使用Mycoplasma agar制备支原体药敏试验的平板，其中包含需要测试的抗生素。
将平板温度调节在35~37之间。
3. 制备菌液：从培养基中收集支原体细菌并转入到PBS缓冲溶液中，用垫头过滤以去除未破裂的细胞。
4. 稀释菌液：将菌液根据需要的浓度逐渐稀释，通常为10^5~10^6 CFU /ml，以便于试验处理。
5. 接种平板：将菌液滴入含有抗生素的药敏试验平板中，用琼脂种培养。
6. 培养：将培养皿放入条件恰当的恒温孵化箱或培养箱中，恒温为35~37，将培养皿培养约3~5天。
7. 判断：在生长完全的区域观察菌落数量、生长状态等信息，根据指南判断其
敏感性和耐药性。
8. 结论：根据支原体所产生的菌落数量和生长状态，分析支原体对药物的敏感性或耐药性。
注意事项：
1. 操作过程中应保证操作环境的无菌性。
2. 需要严格按照试剂及培养基的说明书进行操作。
3. 在菌液制备及接种过程中要严格注意细菌的数量及浓度。
4. 抗生素在试验过程中的使用必须符合相关法律法规。
药敏试验操作方法
药敏试验根据美国临床标准委员会 ( NCCLS )推荐的 K-B 琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林 ( AMP )，阿莫西林/克拉维酸 ( AMC )，头孢噻吩 ( CFT )，头孢噻肟 ( CTX )，庆大霉素 ( GEN )，萘啶酸( NAL )，诺氟沙星( NOR)，四环素( TBT)，利福平 ( RFA)，复方新喏明( SMZ )。
(1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养 16~18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于 3ml 生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管( 0.5麦氏单位)相同。
(2)用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。
用棉拭子涂布整个 M-H 培养基表面，反复几次，每次将平板旋转 60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
(3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。
用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。
每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm ，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
在菌接种后15分钟内贴完纸片。
(4)将平板反转，孵育18~24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录(附表 5 )。
抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。
有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。
结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
(1)制备 MH 琼脂平板应用直径 90mm 平皿，在水平的实验台上倾注。
琼脂厚为4±0.5mm(约 25-30ml 培养基)，琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在 5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。
倾注平皿前应用 pH 计测 pH 值是否正确(pH 应为7.3)。
pH 过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
第4章抗菌药物敏感试验
第4章抗菌药物敏感试验一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验1.扩散法（K-B法）（1）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗菌药源。
药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。
在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
（2）实验材料①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。
对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。
②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水量20μl的专用药敏纸片。
制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置4℃保存备用，在有效期内使用。
③接种菌液挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。
嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养过夜。
用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。
（3）试验方法以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。
平板置室温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。
纸片应贴得均匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。
直径为90mm的平板可贴6张纸片。
纸片贴牢后应避免再移动。
平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读取结果。
（4）结果解释平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单位为mm。
培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程
《药敏实验操作规程》
一、实验目的
本实验旨在测试不同药物对细菌的药敏性，为临床用药提供参考。
二、实验材料
1. 不同种类的药物
2. 革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌培养基
3. 培养皿、消毒酒精、移液器、离心机等常规实验器材
三、实验步骤
1. 将革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌分别分装于培养皿中，均匀涂布于培养基表面。
2. 在分装有不同药物的培养皿上分别滴加一定量的药物液体，确保液体能够均匀覆盖培养基表面。
3. 将处理好的培养皿置于恒温培养箱中，设置合适的温度和时间，培养细菌。
4. 观察培养皿上不同区域的细菌生长情况，记录并比较各种药物对细菌的影响。
四、实验注意事项
1. 操作过程需注意无菌操作，避免外界污染。
2. 按照实验要求使用药物，注意用药量和涂布均匀性。
3. 实验完成后，将培养皿和实验用具进行正确处理，避免对环境造成污染。
五、实验结论
通过对培养皿上不同区域的细菌生长情况观察和分析比较，得出不同药物对细菌的药敏性，并据此提供临床用药建议。
六、实验意义
药敏实验的结果对临床治疗中的抗菌药物选择，以及对细菌感染病症的诊断和预防具有重要的指导意义。
以上为《药敏实验操作规程》，希望实验者严格按照规程操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
药敏试验方案
1抗菌药物筛选1.1 菌液的制备将菌株接种于普通琼脂平板上，置于37℃恒温箱中培养24h，分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤或无菌生理盐水配成浓度为5个×107-8CFU/mL的菌液作初筛用。
1.2 琼脂扩散法 (K-B) 抑菌试验用无菌棉签将浓度为5个×107-8CFU/mL的标准菌液均匀涂布于普通营养琼脂培养基上，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
然后用直径为6mm的无菌圆形玻璃管打孔，将供试药物浓度为100mg／ml的药液加入孔中，加满为止，不得溢出。
再将培养皿置于37℃恒温箱中培养24h，取出观察，用卡尺测量抑菌圈的直径。
每次实验前用大肠杆菌ATCC25922进行质量控制，设置阴性对照和阳性对照，阳性药物的选择依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)公布的标准。
1.3 药敏试验判断标准按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)，抑菌圈直径d小于等于6 为-；d小于等于10为+；d小于等于16为++；d小于等于26为+++；d大于26为++++ 。
一般认为++以上具有抑菌活性。
2 抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测定2.1 菌悬液的制备将细菌菌液接种到麦康凯培养基上进行纯化培养，37℃震荡培养24 h。
分别挑取单个特征菌落接种于灭菌肉汤培养基中，置37℃恒温箱中过夜培养。
取过夜培养的菌悬液100 μL加入到900μL的肉汤培养基中，依次进行稀释，然后选取适当的浓度涂板，每个浓度三个平行。
选取平板上菌落数目在30～300之间的进行计数，最后用肉汤稀释菌悬液至含菌落数105 ～106 CFU/mL后备用。
2.2 MIC和MBC测定将1mL的2倍终浓度的药物放到第1管，采用二倍稀释法将药液从第1管到第10分别稀释。
药敏MIC方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）技术几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）技术1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108C FU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
药敏试验的操作方法
药敏试验的操作方法
药物敏感性试验是一种常用的药物敏感性检测方法，它可以评估不同药物对细菌的杀菌效果。
操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据实验需要选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂培养基等，并按照说明书的要求制备好培养基。
2. 细菌的孵育：将需要测试的细菌株均匀涂布在琼脂培养基的表面上，然后在37C下孵育24小时，使得菌落生长。
3. 制备药物试验片：将需要测试的药物稀释成不同浓度的溶液，通常是2倍稀释系列。
将药物溶液滴在试验片上。
4. 放置试验片：将制备好的试验片放置在含有菌落的琼脂培养板上，并轻轻压平，使得药物溶液能够与细菌接触。
5. 孵育试验片：将装有试验片的琼脂培养板置于37C下孵育24小时，使得细菌在药物的作用下生长或者抑制生长。
6. 结果的观察和解读：观察试验片上细菌的生长情况，根据细菌对药物的敏感性判断药物的杀菌效果。
常用的评估标准是观察试验片上出现最低抑菌浓度（MIC）。
7. 数据记录和分析：将观察到的结果记录下来，并根据试验片上出现的细菌生长情况分析药物的抗菌活性。
值得注意的是，药物敏感性试验只是一种体外实验，并不能完全代表细菌在体内的敏感性。
因此，对于真实应用中的治疗选择，还需要综合考虑其他因素，并结合临床实践进行判断。
药敏试验的操作方法及注意事项
药敏试验的操作方法及注意事项
（1）M-H平板的制备：将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其厚度4mm。
（2）比浊管的配置：0.5麦氏比浊管的配置：取0.048mol/L的氯化钡溶液（1.175%w/v，BaCl2•2H2O）0.5ml，加至99.5ml0.18mol/L的硫酸溶液（1%v/v）中，不断搅拌使成混悬液。
取4～6ml硫酸钡混悬液，置与稀释菌悬液相同规格的具塞试管中，密封，室温避光保存。
（3）菌液的制备：A 肉汤法：无菌挑取菌落于MH肉汤中，摇菌2-6h；B 直接法：无菌挑取4-5个菌落于PBS中，混匀。
（4）比浊：将制备好的菌液与比浊液管置比色卡上对着光源比较，适当情况下可用无菌生理盐水或肉汤稀释菌悬液，使两者浊度一致，即菌悬液的浓度为0.5标准麦氏单位。
（5）涂菌：用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。
棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）最后沿平板内缘涂抹一周，使菌液均匀分布。
（6）贴药敏片：用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；一般一个平皿贴5-6个药敏片。
（7）培养：一般细菌：37℃培养16～18h；流感和副流感嗜血杆菌：5%CO2 37℃16-18h。
（8）用游标卡尺取抑菌环直径，根据CLSI标准。
判断待测菌对抗生素是敏感，中介还是耐药，选择敏感药物进行疾病治疗。
中介是一个缓冲区，若无敏感药物可提高中介药物的浓度来使用。
clsi药敏试验标准2023
CLSI药敏试验标准2023一、药敏试验定义药敏试验（Antimicrobial Susceptibility Testing，AST）是一种实验室方法，用于测定细菌对各种抗菌药物的敏感性或耐药性。
药敏试验可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染，提高治疗效果并减少耐药性的传播。
二、试验规则1.试验方法：CLSI推荐使用微量稀释法（microdilution method）进行药敏试验。
该方法通过在试管或微孔板中加入细菌悬液和不同浓度的抗菌药物，测定细菌生长情况，从而判断细菌对药物的敏感性。
2.试验菌种：CLSI推荐使用临床分离的细菌菌种进行药敏试验，包括革兰阳性菌、革兰阴性菌、非发酵菌等。
3.药物浓度：药敏试验中使用的抗菌药物浓度应符合CLSI标准，以保证试验结果的准确性。
4.孵育时间：孵育时间应根据菌种和药物特性确定，一般为16-20小时。
5.结果判定：根据细菌生长情况，药敏试验结果可分为敏感（S）、中介（I）和耐药（R）三种类型。
三、质量控制1.室内质控：每次试验应包括阴性对照（无菌生长）和阳性对照（细菌生长），以验证试验的准确性。
2.室间质控：参加CLSI组织的室间质控计划，以确保不同实验室之间的结果具有可比性。
四、抗生素敏感性试验1.常规抗生素：包括β-内酰胺类（如青霉素类、头孢菌素类等）、氨基糖苷类（如链霉素、庆大霉素等）、氟喹诺酮类（如环丙沙星、左氧氟沙星等）等多种抗生素。
2.特殊抗生素：针对某些特定感染，如结核病、真菌感染等，需使用特殊的抗结核药物或抗真菌药物进行药敏试验。
五、抗菌药物分组CLSI将抗菌药物分为五个组别，分别为：β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、抗真菌药和其他抗菌药物。
药敏试验时应根据抗菌药物的分组选择相应的药敏试验方法。
六、选药流程1.根据感染部位和临床诊断，选择可能有效的抗菌药物。
2.根据细菌培养和药敏试验结果，调整抗菌药物的选择。
3.根据患者个体差异（如年龄、肾功能等）和药物相互作用，选择最合适的抗菌药物。
药敏实验的方法有哪些
药敏实验的方法有哪些
药敏实验是研究不同细菌对抗生素的敏感性和耐药性的方法，常用的药敏实验方法包括：
1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的消毒纸片施加在含菌培养基表面，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
2. 微量稀释法：在含有不同浓度抗生素的液体培养基中接种细菌，观察最小抑菌浓度，即该抗生素能够抑制该菌株的最低有效浓度。
3. 气溶胶化验法：将含有不同抗生素的气溶胶喷洒在含菌培养基中，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
4. 坦能法：将不同抗生素与抑菌剂混合，制成坦能板后进行药敏实验，以检测革兰氏阴性细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
5. 自动化微生物分析系统：采用自动化设备对不同细菌的抗生素敏感性进行测试，具有高效、精确、快速等优点。
药物敏感试验实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除药物敏感试验实验报告篇一：药敏试验报告药敏试验报告（琼脂稀释法）一、实验目的检测载铜离子土对沙门氏菌的最小抑菌浓度（mIc）二、实验原理三、实验材料与试剂材料：平板，锥形瓶，10mLep管等；试剂：载铜离子土，沙门氏菌，琼脂平板计数培养基，mh肉汤培养基，硫酸（1%），氯钡（0.25%）。
四、实验方法1配制琼脂平板计数培养基，按配方配制300mL，mh肉汤培养基100mL，待高压；2高压灭菌平板，锥形瓶，10mLep管等；3沙门氏菌扩大培养:10mlep管中加入4mlmh肉汤培养基，4ul 菌液，放置摇床37℃，220rpm过夜培养；4麦氏比浊管0.5的制备：0.25%氯化钡0.1ml，1%硫酸4.9ml。
8（即细菌的近似浓度为×10/ml）5将扩大培养的沙门氏菌调制0.5麦氏比浊度后，再稀释100倍备用；（每组做三个重复，16-24h后观察结果）五、实验结果实验组1、2以及对照组平板中，肉眼可见针尖状半透明菌落，革兰氏染色后，镜下形态为红色短杆状，初步断定为沙门氏菌；实验组3、4、5未见菌落，涂片染色后，镜下也未观察到细菌。
六、结论载铜离子土对沙门氏菌最小抑菌浓度（mIc）为3g/L。
篇二：001-药物敏感试验抗菌药物实验方法――药敏试验由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。
由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。
这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。
专家强调指出，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失，阻碍了养殖业的快速发展和经济效益，所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。
药敏实验报告
药敏实验报告药敏实验报告一、实验目的：通过药敏实验，了解抗生素对细菌的抑制作用，评价细菌对抗生素的敏感性。
二、实验原理：药敏实验主要是通过将不同抗生素涂布在含有培养基的平板上，观察不同细菌对不同抗生素的敏感性。
常用的实验方法有，纸片扩散法、落法等。
本实验采用纸片扩散法。
三、实验步骤：1.准备工作：将所需的培养基制备好，将抗生素溶液稀释成不同浓度。
2.接种细菌：用接种环沾取待测试的细菌悬液，均匀涂布在培养基上。
3.放置纸片：将含有抗生素的纸片均匀地放置在培养基上。
4.培养：将试管倒置盖在平板上，置于恒温培养箱中，在37°C下培养24小时。
5.观察结果：观察平板上的细菌生长状况，例如菌落的大小、形态等。
四、实验结果：根据观察结果，在平板上能够观察到不同的菌落，根据菌落的大小、形态等可以判断细菌对抗生素的敏感性。
对于敏感的细菌来说，抗生素会抑制其生长，菌落较小，或无法生长。
而对于耐药细菌来说，由于其对抗生素的耐受性，菌落会较大，生长繁盛。
五、讨论与分析：本实验通过药敏实验评价细菌对抗生素的敏感性，可以用于指导临床上的抗生素治疗。
根据实验结果，可以对不同的细菌选择合适的抗生素进行治疗，提高治疗的效果。
然而，需要注意的是，实验结果只是一种辅助参考的方法，最终的抗生素选择还需要结合临床情况进行判断。
六、实验总结：通过本次实验，我了解了药敏实验的原理和步骤，以及如何评价细菌对抗生素的敏感性。
药敏实验是一种常用的实验方法，对临床抗生素治疗具有重要的指导意义。
但是，实验结果只是一种参考，具体的抗生素治疗还需要根据医生的临床经验进行判断和决策。
七、参考文献：无。
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药敏试验方法：K-B法：1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。
2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。
3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。
4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。
每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。
每个纸片中心间距24mm。
纸片一旦与平板接触，不应再移动。
5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。
嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。
6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。
说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。
链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.肺炎链球菌胶乳凝集测定法1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。
2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。
3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。
4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。
5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。
注：R3为阳性对照。
药敏纸片的选择1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦头孢噻吩（CF）4 、肠球菌氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎链球菌外链球菌氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，安曲南。
如头孢他定的抑菌圈<22mm，安曲南<27mm，头孢噻肟<27mm，意味可能有ESBLS产生。
如头孢他定/克拉维酸与头孢他定，头孢噻肟/棒酸与头孢噻肟的差值≥5mm，则确证ESBLS产生。
耐药机制。
一代头孢对普通变形杆菌、枸橼酸杆菌、肠球菌、假单孢菌属、沙雷氏菌属、拟杆菌属无效。
第二代头孢对假单孢菌属、不动杆菌属、沙雷氏菌属、肠球菌无效；肠球菌对头孢类天然耐药。
氨基糖甙类抗生素阿米卡星与庆大霉素不完全交叉耐药。
红霉素类、四环素类等抗生素内部有相互交叉耐药。
金黄色葡萄球菌耐万古霉素、无乳链球菌耐青霉素和氨苄青霉素、无乳链球菌和D群链球菌耐万古霉素和替拉考宁为不可能的表型。
洋葱伯克霍德菌对氨基糖甙类、亚安培南天然耐药。
除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，替拉考宁耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌不常见。
金黄色葡萄球菌对复方新诺明耐药为罕见表型。
氨苄青霉素对非发酵类不宜应用。
对于葡萄球菌，苯唑西林耐药，青霉素敏感是不可能的。
NCCLS关于细菌药敏实验的说明总评论：1、头孢噻吩可以代表头孢噻吩、头孢匹林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢克洛、和头孢羟氨苄。
但是，头孢唑林、头孢呋辛、头孢泊肟、头孢丙烯应单独测试，因为某些对这些药物敏感的菌株对头孢噻吩是耐药的。
2、利福平不能单独用于化疗。
肠杆菌科1对于沙门菌属和志贺菌属只有氨苄西林、喹诺酮、和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑可用于常规试验与报告。
初此之外，对于沙门菌属和志贺菌属的肠道外分离株，应测试并报告氯霉素和一种三代头孢菌素。
2、克雷伯菌属和大肠艾希菌的产ESBLS株对青霉素、头孢菌素类或安曲南临床治疗可显耐药性，尽管在体外药敏试验对其中某些抗生素敏感。
对于所有产ESBLs株，应报告为耐所有青霉素类、头孢菌素及安曲南。
3、随着3代头孢菌素的治疗，肠杆菌属、枸橼酸菌属和沙雷菌属可发展其耐药性。
最易敏感的菌株在开始治疗3-4天就可变为耐药，因此要反复测试这些菌株。
葡萄球菌1、青霉素敏感的葡萄球菌对FDA批准的用于葡萄球菌感染的其他青霉素类、头孢菌素和碳青烯类也是敏感的。
青霉素耐药而苯唑西林敏感的菌株对β-内酰胺酶不稳定的青霉素是耐药的，但对其他β-内酰胺酶稳定的青霉素、β-内酰胺酶抑制剂复合药、相关的头孢类和卡巴陪南是敏感的。
苯唑西林耐药的葡萄球菌对现在可用的所有β-内酰胺类抗生素是耐药的。
因此仅测试青霉素和苯唑西林就可以推知一大批β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐药性，不必常规测试其他青霉素类、β-内酰胺类抑制剂复合药、头孢类和卡巴陪南类。
2、绝大多数的MRS对多种抗生素耐药。
包括β-内酰胺类、氨基糖甙类、大环内酯类、克林霉素和四环素。
观察到多重耐药应该是对甲氧西林可能耐药的线索。
3、长期应用喹诺酮类治疗的过程中葡萄球菌可发展其耐药性，因此应重复测试耐药性。
肠球菌1、对于肠球菌属，头孢菌素、氨基糖甙类（除了筛选高水平耐药性）、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑在体外可能有活性，但临床无效，因此不能报告细菌对这些药物敏感。
2、青霉素敏感性可以用于不产β-内酰胺酶的肠球菌对氨苄西林、阿莫西林、酰基氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林以及哌拉西林/三唑巴坦的敏感性3、氨苄西林是氨苄西林和阿莫西林类的代表药。
氨苄西林的结果可用来判断不产β-内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦的敏感性。
4、青霉素的结果可预测不产β-内酰胺酶的肠球菌对氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/三唑巴坦的敏感性。
5、对于血和脑脊液分离株需用头孢硝噻吩β-内酰胺酶试验，阳性提示对青霉素耐药，同时对酰胺基、羧基和脲基青霉素耐药。
细菌鉴别要点1、革兰阳性球菌所有革兰阳性球菌第一步为触酶试验。
通常触酶阳性为葡萄球菌和微球菌，阴性为链球菌科。
但不排除例外，气球菌为弱阳性。
粪肠球菌偶有阳性。
操作触酶试验应尽量避免用铂金取菌环（针）在H2O2 上涂菌，而应先涂菌，在滴H2O2，步骤不能颠倒。
因为铂金可以和H2O2产生假阳性反应。
H2O2必须新鲜，若放置过久或暴露于光线下容易分解，必须保存于4℃冰箱。
实验所用菌须大量，不可挑到琼脂，会产生假阳性。
对触酶阳性的革兰阳性球菌，应继续做玻片法血浆凝固酶试验，此为检出葡萄球菌，如阳性一般为金黄色葡萄球菌；如阴性应做试管法凝固酶实验确证，玻片法仅为筛选实验。
血浆凝固酶实验用血浆须用兔或猪血浆，新鲜血浆不稳定，可能发生自我凝集或形成颗粒产生浑浊或产生沉淀而导致判度错误；不可使用人血浆，其含有抑制物质回干扰实验结果。
触酶阴性为链球菌科，根据菌落溶血进行下一步鉴定。
а溶血：草绿色链球菌；肺炎链球菌；肠球菌в溶血：A群链球菌；B群链球菌，部分D群链球菌肠球菌也有不溶血菌落，不能根据溶血判断肠球菌。
链球菌主要实验：胆汁七叶苷，七叶苷，菊糖，CAMP ，杆菌肽，高盐，奥朴托辛，胆盐溶解。
肠球菌为致病菌，且肠球菌与非肠球菌耐药机制不同，应进行鉴别，肠球菌分为粪肠球菌和屎肠球菌；非肠球菌分为牛链球菌和马链球菌。
肠球菌对青霉素耐药，非肠球菌对青霉素敏感。
肠球菌的药敏注意高耐氨基糖甙的细菌，如高耐氨基糖甙则意味氨基糖甙与в内酰胺类药物合用无协同作用。
肺炎链球菌与草绿色链球菌鉴别：肺炎链球菌奥朴托辛、菊糖、胆盐溶解实验皆为阳性。
但这3个实验都非特异，需联合应用方为最佳。
肺炎链球菌的青霉素药敏实验应注意，当青霉素（K-B法）的抑菌圈直径大于或等于19mm时为敏感，当小于19mm时不能确定是否中敏或耐药，应做MIC稀释确证。
2、革兰阴性杆菌包括肠杆菌科、非发酵菌和弧菌科。
第一步实验为氧化酶实验。
氧化酶阴性为肠杆菌科；阳性为非发酵菌和弧菌科。
肠杆菌科包括大肠杆菌、变形杆菌、普罗菲登斯菌及摩根菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、耶尔森菌属。
非发酵菌包括铜绿假单孢菌、黄单孢菌、不动杆菌等。
氧化酶实验注意事项：①需用铜绿假单孢菌做阳性对照。
②60秒内判读结果有效，而以10秒内最佳。
③不要用含微量铁的取菌环或针，可用棉棒替代。
革兰阴性杆菌的鉴定以API系列为国标，其他生化管仅为常规鉴定。