实验七标准曲线制作(AST赖氏法)(精)
做标准曲线的操作流程
做标准曲线的操作流程
制作标准曲线是一种实验技术，用于确定未知样品的浓度。
以下是制作标准曲线的一般操作流程：
1. 准备标准溶液：准备一系列已知浓度的标准溶液，通常
有5个以上的浓度级别，覆盖可能的未知样品浓度范围。
标准溶液中的目标分析物应保持稳定。
2. 测定光学密度：使用适当的方法（如分光光度法）测定
每个标准溶液的光学密度（吸光度）。
3. 绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，光学密度
为纵坐标，绘制标准曲线。
通常，线性拟合（如回归分析）被用来拟合标准曲线，以获得一个线性方程。
4. 测试未知样品：使用相同的测量方法，测定未知样品的
光学密度。
5. 使用标准曲线计算未知样品的浓度：将未知样品的光学
密度代入标准曲线的线性方程中，计算出未知样品的浓度。
需要注意的是，制作标准曲线的操作流程可能会根据具体
的分析方法和仪器设备而有所不同。
因此，在进行实验之前，最好阅读相应的实验方案和设备操作手册，以确定适
合您的具体情况的操作流程。
应用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样品浓度
应用绘制标准曲线及计算样品浓度在实验结束后，我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的值。
其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的值及其相对应的浓度，以值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。
这样，我们把样本的值以值代入，便可求出值，即样本浓度。
下面我们就一步步来实现这个目标：、首先，将数据整理好输入，分别为经酶标仪读出标准品的值及其对应的浓度值。
、拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“散点图”，并选择子图表类型的“散点图”（第一个没有连线的），如下图所示。
、点击“下一步”，出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。
在做标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本值是已知的，因此我们需要将值设为。
根据上图我们可以看到，横坐标值为值，纵坐标为标准品浓度，这正是我们想要的。
有时需要我们手动选择值，这时可以点击“系列”来更改，如下图。
如果要对横坐标和纵坐标进行调换，我们可以就点击值和值文本框右边的小图标，结果如下图：出现上图后，拖动鼠标选取正确的数据区域以调整或。
、调好之后，然后点击“下一步”出现图标选项界面，如下图。
、点击“下一步”，在弹出的窗口再点击“完成”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。
、到了这一步，散点图便完成了。
我们可能会问，曲线在哪里啊？其实很简单，先点击图上的标准值点（记住一定要点选上），然后单击右键，点击“添加趋势线”。
弹出趋势线类型选择对话框，有线性，对数，多项等选项，如下图：、在选择之前，我们先对上图做一下肉眼观察，如果那些点能连成一条直线，或接近直线，我们就选择“线性”，意思就是出来的趋势线是一条直线，相应的该直线的方程就是的形式。
不过一般的都不会是所有的标准点呈完全的线性关系的，也就是说不是一条完全的直线，这时我们可以选择“多项式”，多项式后面还有“阶数”的选择，也就是说求出来的方程是几次方，我们一般选“阶”，即出来的方程为. 选择完毕后，弹出以下窗口。
标准曲线的作法
标准曲线的作法(1)标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值，一般可选择5种浓度。
浓度差距最好是成倍增加或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。
(2)标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少仪器不稳定而产生的误差。
(3)标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度一浓度标准曲线。
①用普通方格纸作图。
图纸最好是正方形(长：宽=l：1)或长方形(长：宽=3 ：2)，以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占用相同的格数。
在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度位置向上延长，光密度位置向右延长、交点即为此座标标点。
然后，将各座标点和原点联成一条线，假设符合Lambert-Beer氏定律，则系通过原点的直线。
②假设各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边。
③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。
④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应用。
⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。
当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。
⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。
1.5 原子吸收光谱分析的定量方法原子吸收光谱分析是一种动态分析方法，用校准曲线进行定量。
常用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和浓度直读法。
如为多通道仪器，可用内标法定量。
在这些方法中，标准曲线法是最基本的定量方法。
1.5.1 标准曲线法前面已经指出，原子吸收光谱和原子荧光光谱分析是一种相对测定方法，不能由分析信号的大小直接获得被测元素的含量，需通过一个关系式将分析信号与被测元素的含量关联起来。
实验七血清丙氨酸氨基转移酶
实验七血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ）测定——改良赖氏法一、实验目的了解丙氨酸氨基转移酶测定原理及方法。
二、实验原理丙氨酸氨基转移酶（ALT）又称谷一丙转氨酶（GPT）。
它催化L—丙氨酸和L—谷氨酸之间氨基的转移，反应式为：丙酮酸与2，4—二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙。
此二硝基苯腙在强碱溶液中显红棕色，色泽深浅与产生的丙酮酸多少即酶活性成正比。
三、仪器和试剂1 •仪器：37C水浴恒温装置，试管和试管架，吸管，722型分光光度计。
2．试剂：⑴0.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液。
⑵丙氨酸氨基转移酶基质液：称取DL丙氨酸1.78克，？一酮戊二酸30毫克，先溶于0.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液约20 毫升中，用1mol/L NaOH （约0.5毫升）调节pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100毫升。
4~6 C中保存，并加一至二滴氯仿，防止细菌分解作用。
⑶2,4-二硝基苯肼溶液：溶2,4-二硝基苯肼200 毫克于热1 mol/L HCl 中，并用1 mol/L HCl 加至1 升刻度，避光保存。
⑷0.4 mol/L NaOH 溶液。
⑸丙酮酸标准液（2mmol/L ）:溶丙酮酸钠22毫克于缓冲液100毫升中，存放冰箱，此溶液在数天内是稳定的。
四、实验步骤加入物（ml）测定管测定空白管血清0.10 —加温至37 C的丙氨酸氨基转移酶基质液0.50 0.50各管分别混和，置37 C水浴30分钟，取出。
2, 4 —二硝基苯肼溶液0.50 0.50血清一0.10各管分别混匀，置37 T水浴20分钟，取出。
0.4 mol/L NaOH 溶液5.00 5.00在30分钟内用波长505nm比色，以蒸馏水校正零点和100%，读取各管吸光度测定管吸光度减去测定空白管吸光度后，于标准曲线上查得酶活性单位。
标准曲线绘制：（所加试剂按毫升计）加入物（ml）管号1 2 3 4 5丙酮酸标准液（2mmol/L ）0 0.05 0.10 0.15 0.20丙氨酸氨基转移酶基质液0.50 0.45 0.40 0.35 0.300.0667 mol/L 磷酸盐缓冲液0.10 0.10 0.10 0.10 0.10相当于丙酮酸实际含量（？mol/L）0 0.1 0.20 0.30 0.40相当于丙氨酸氨基转移酶活力（卡门氏单位）0 28 57 97 150各管混匀后置37 T水浴5分钟，加2,4—二硝基苯肼溶液0.5毫升混匀，置37 C 水浴20分钟，取出，每管各加0.4 mol/L NaOH溶液5.0毫升，于30分钟内用波长505nm比色，以蒸馏水校正零点和100%，读取各管吸光度。
标准曲线制作、检验、使用知识大全
分析检测的首要任务是定性和定量，定性可以说是有和无的问题，定量是提供待测物质含量范围的一个过程，这当中包含了任何定性定量都有不确定度的含义。
而普遍采用的标准曲线已然是分析检测中的常规工作，本篇内容以讲解加问答的形式探讨标准曲线使用过程中的难点和误区，结合数据处理版面关于标准曲线的问题交流，以期答疑解惑、共同精进。
内容提要本文内容共分为【四个部分】1、标准曲线的本质：系列浓度待测物质与响应的关系，用以推算样品含量。
2、标准曲线的做法：3点以上，至少重复2次，浓度均匀设置。
3、标准曲线的检验：拟合检验、失拟检验和斜率、截距检验。
4、标准曲线使用中的问题。
标准曲线的本质分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量（浓度/量）的物质与仪器响应/信号之间的关系，数学处理就是曲线方程，图形表示就是标准曲线。
标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。
当我们得到一系列已知含量的物质的响应后，就会去建立函数关系，数学上称曲线拟合，由于直线最为简单，所以常常用直线方程加以拟合，当然会用到多项式拟合等其他方式。
标准曲线的核心问题要解决：1、能找到确切浓度的标准物质或标准品。
2、标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体，因为样品基体可能会干扰仪器的响应，从这个意义上讲，样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境，尽量祛除干扰基体。
所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。
而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题，推荐用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。
标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准，然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异，若有差异需考虑用标准加入法定量；而Youden曲线就是对样品做一系列稀释，然后用稀释倍数如1/10,1/5,1/2,1对仪器响应做曲线，考察该Youden曲线的截距与0的差别，若有差别则提示有加和性干扰，此时测定值要减去该截距才是真实值。
标准曲线的绘制
标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析,通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标（X）表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量,纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值,如吸光度、电极电位等），称为随机变量。
当X取值为X1，X2，…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1，Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi，Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系,这就是常用的标准曲线法.用作绘制标准曲线的标准物质,它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量,标准曲线不能任意延长.用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的,尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据）进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值,设回归直线方法为(2－15）式中a表示截距,b表示斜率.假设Xi和Yi (i=1，2,3,……，n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值,在直线(）上都有一个确定的值.但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：（2－16)上式表示与直线(）的偏离程度，即直线的误差程度.如果全部n个测定引起的总偏差用表示，则偏差平方和s为(2－17）在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线的斜率b和截距a应使s 值达到最小,这种要使所有数据的偏差平方和达到最小的求回归直线法称为最小二乘法。
(整理)标准曲线制作操作步骤
三、内标法
1、打开要制作标准曲线的色谱图
2、
点击左侧工具栏的 图标，
出现下图
点击“下一步”，出现下图，在下图左侧选中要做标准曲线的色谱峰，注意，也要选择内标物的色谱峰
然后点击“下一步”，出现下图，在“定量方法”栏选择“内标法”；“校准级别”选择“5”；“零点”选择“未强制”
然后点击“下一步”，出现下图，
然后点击“下一步”，出现下图，在浓度栏中输入样品浓度
然后点击“完成”
点击左侧工具栏的 图标，出现如下图
点击“是”，出现如下图
在“文件名”中输入名称，本次以“咖啡因”命名，点击“保存”，出现如下图
点击“确定”，然后点击左侧工具栏的 图标，出现如下图
双击数据栏里，刚刚保存的文件“咖啡因”
出现如下图
把该图中，“数据文件”下面的数据，点击鼠标右键删除，然后点击 图中左下角的 图标，出现如下图
双击数据栏里，刚刚保存的文件“咖啡因”
出现如下图
删除上图中“数据文件级别下的数据”
然后点击
图中左下角的 图标，出现如下图
在左侧数据栏中，鼠标左键点住起初要制作标准曲线的色谱图，把该数据拖到上图中“数据文件级别：”下面，然后松开鼠标左键，出现如下图
点击确定，出现如下图
该标准曲线的方法就建立好了。
打开要分析的色谱图，鼠标左键点住左侧的刚刚建立的标准曲线方法“咖啡因”，把它拖到右侧的色谱图中，
出现如下图
点击“确定”，结果出现在下图右下角的“结果”栏中
未知样的定量完成。
四、面积归一化化法
1、打开要制作标准曲线的色谱图
2、
点击左侧工具栏的 图标，
出现下图
点击“下一步”，出现下图，在下图左侧选中所有色谱峰，
标准曲线的绘制
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载标准曲线的绘制地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。
当X取值为X1, X2,…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1, Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线法。
用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标准曲线不能任意延长。
用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的，尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据)进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值，设回归直线方法为(2－15)式中a表示截距，b表示斜率。
假设Xi和Yi (i=1,2,3,……,n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值，在直线( )上都有一个确定的值。
但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：(2－16)上式表示与直线()的偏离程度，即直线的误差程度。
实验七标准曲线制作(AST赖氏法)(精)
3. 标本的测定 按表2操作。
表二：
对照管 基质液（ul） 样品（ul） 显色剂 50 250 μ L 混合37℃水浴30分钟 250 μ L 样品管 250 50
基质液（ul） 37℃水浴20分钟
稀释氢氧化钠
250
2.5ml 2.5ml
室温放置3min，在波长510nm处，以蒸馏水调零，读取各 管吸光度。测定管吸光度减去对照管吸光度即为标本的吸 光度，查标准曲线，即可得到ALT的卡门单位。。
【操作】 1、试剂配制 1份4N 氢氧化钠和9份蒸馏水混合均匀，即可 使用 将酶标准液（3.0mmol/L）取出1ml加0.5ml 蒸馏水使酶标准备液浓度变为2.0mmol/L 2.AST标准曲线的绘制 （1）按表1向各管加入相应试剂。
表一：
管号 0 1
225 25 50 250
AST L 天门冬氨酸 酮戊二酸 草酰乙酸 L 谷氨酸
经60分钟反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反 应，并与反应液中的二种α -酮酸生成相应的 2,4-二硝基苯腙。在碱性条件下，两种苯肼的 吸收光谱曲线有差别，在500nm～520nm处 差异最大，草酰乙酸生成的苯腙的呈色强度显 著大于α -酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测 定AST活力。
【实验评价】
Hale Waihona Puke 1.本法为终点法，难以确定酶促反应30～60min内产物生成 量与时间成正比。同时也存在底物和2，4-二硝基苯肼用量不 足的问题，由于标本AST活性高时，草酰乙酸对AST显示反馈 抑制，使AST活性下降，测定结果偏低。 2.重复性差 血清中含有多种酶对AST测定产生负干扰现象， 如耦联转氨基作用，即AST作用生成的产物草酰乙酸会不可 逆地转变为丙酮酸而成为ALT的底物影响AST的测定；产物旁 路效应，生成的草酰乙酸可被血清内源性苹果酸脱氢酶催化 而消耗，草酰乙酸自发转变成的丙酮酸可被血清中的LD催化。 本法最适条件下的变异系数为8%，常规条件下的变异系数＜ 16%。 3.操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。
如何正确绘制标准曲线
如何正确绘制标准曲线
首先，准备好实验所需的标准样品和试剂，确保实验环境整洁干净，仪器设备正常运行。
在进行曲线绘制之前，需要对样品进行稀释或者预处理，以确保样品浓度在标准曲线的线性范围内。
同时，选择合适的检测方法和仪器，确保能够准确测量样品的吸光度或荧光强度。
其次，进行标准曲线的绘制。
在选择标准曲线的浓度范围时，需要考虑样品的浓度范围和实验方法的灵敏度，以确保曲线能够覆盖样品的浓度范围并且具有良好的线性关系。
在进行测定时，要注意避免气泡和杂质的干扰，保证测量结果的准确性。
在进行数据处理时，需要对实验数据进行统计分析，计算出各个浓度点的平均值和标准差，以确保曲线的准确性和可靠性。
最后，对绘制的标准曲线进行分析和评价。
在分析曲线时，需要注意曲线的线性关系、斜率和截距的准确性，以及相关系数和拟合度的好坏。
同时，对曲线的斜率和截距进行统计学分析，确定曲线的灵敏度和可靠性。
在评价曲线时，需要考虑实验方法的可行性和实用性，以及曲线的应用范围和稳定性。
综上所述，正确绘制标准曲线是科研和实验中非常重要的技能，需要在实验设计、数据测定和数据处理等方面严格把关，以确保曲线的准确性和可靠性。
希望以上内容能够对大家有所帮助，谢谢阅读！。
标准曲线的绘制
标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。
当X取值为X1, X2,…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1, Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X 与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线法。
用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标准曲线不能任意延长。
用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的，尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据)进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值，设回归直线方法为(2－15)式中a表示截距，b表示斜率。
假设Xi和Yi (i=1,2,3,……,n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值，在直线( )上都有一个确定的值。
但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：(2－16)上式表示与直线()的偏离程度，即直线的误差程度。
如果全部n个测定引起的总偏差用表示，则偏差平方和s为(2－17)在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线的斜率b和截距a应使s 值达到最小，这种要使所有数据的偏差平方和达到最小的求回归直线法称为最小二乘法。
做标准曲线的操作流程 (2)
做标准曲线的操作流程
做标准曲线的基本操作流程如下：
1. 准备实验用品：标准品溶液和实验所需的试剂和仪器设备。
2. 准备一系列标准品溶液：根据分析的需要，取不同浓度
的标准品，通常为5个以上的浓度，可以是等间隔浓度或
者非等间隔浓度。
3. 取定量的标准品溶液：使用容量瓶或移液管等工具，取
出每个浓度的标准品溶液并转移到称量瓶或色谱瓶中。
4. 量取样品：取待测样品，规定样品的取样量，注意遵循
实验操作规范。
5. 操作仪器：根据实验需要选择合适的仪器设备进行操作，如分光光度计、色谱仪等。
6. 设置仪器参数：根据实验需要设置仪器的参数，如吸光
度的波长，分析方法等。
7. 测量样品吸光度或浓度：将标准品溶液和需要测量的样
品依次放入仪器中，使用仪器操作程序进行测量。
8. 绘制标准曲线：根据测得的吸光度或浓度数据，将浓度
作为横坐标，吸光度作为纵坐标绘制标准曲线。
9. 确定样品浓度：通过标准曲线，根据待测样品的吸光度，可以确定样品的浓度。
10. 分析结果：根据得到的样品浓度等信息，进行结果的分析和报告。
以上是做标准曲线的基本操作流程，具体操作可以根据实
验的要求和仪器设备的要求进行相应调整。
标准曲线的绘制
标准曲线的绘制标准曲线的绘制Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标(X)表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量，纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值，如吸光度、电极电位等)，称为随机变量。
当X取值为X1, X2,…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1, Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi, Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系，这就是常用的标准曲线法。
用作绘制标准曲线的标准物质，它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量，标准曲线不能任意延长。
用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的，尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据)进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值，设回归直线方法为(2－15)式中a表示截距，b表示斜率。
假设Xi和Yi (i=1,2,3,……,n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值，在直线( )上都有一个确定的值。
但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：(2－16)上式表示与直线()的偏离程度，即直线的误差程度。
如果全部n个测定引起的总偏差用表示，则偏差平方和s为(2－17)在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线的斜率b和截距a应使s值达到最小，这种要使所有数据的偏差平方和达到最小的求回归直线法称为最小二乘法。
标准曲线制作方法
图五,选:”选项”—“显示公式” “显示R 2值”选中,确定.即生成了拟合公式(图六)
4如图七输入公式“=334.83*B12-0.1582”,回车即得出所求浓度值.(图8)下拉即可得出其他值.
测出标准品od值及待测样本od值输入excelb列所表示输入对应标准品浓度选好两列数值图点取图标向导按钮图一依次选择散点图图2最终点击完成
1、先作出标准曲线:测出标准品的OD值及待测样本的OD值,输入EXCEL点取”图标向导”按钮(如图一),依次选取”散点图”(图2),最后点击完成.即生成了标准曲线(如图3)
生化检验实验赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶
步骤：一．组长取5个试剂瓶贴标签注明将要装的实际名称，然后倒取试剂。
血清由老师分装后，由组长领取。
二．测定血清ALT1.取2支试管，贴标签注明组别、学号、对照管（B）和测定管（U），用微量移液器分别加0.1ml血清。
2.用移液管向U管中加入0.5ml基质缓冲液。
B管不加。
混匀后同时在水浴温箱中37℃保温30min。
作用：U管中有酶促反应，B管无。
3.用移液管向B、U管各加0.5ml 2,4-二硝基苯肼溶液。
作用：终止反应，生成显色物质。
4.用移液管向B管加入0.5ml基质缓冲液，U管不加。
混匀后在水浴温箱中37℃保温20min。
作用：保证检测条件的一致性。
5.用移液管向B、U管各加2,4-二硝基苯肼溶液作用：碱性条件，显色。
6.B、U管室温放置5min，在波长505nm以蒸馏水调零，读取吸光度。
注意：基质缓冲液和2,4-二硝基苯肼溶液的加入顺序不能颠倒A。
表13-7三．ALT标准曲线绘制1.取5支试管，贴标签标明组别、学号、序号（0、1、2、3、4）。
用移液管取0.1 mol/l磷酸盐缓冲液，各加0.1ml。
2.用移液管取2.0 mol/l丙酮酸标准液加入各试管，0管不加，1、2、3、4管各加0.05、0.10、0.15、0.20ml。
作用：代替酶促反应产物。
3.用移液管取基质缓冲液加入各试管，0、1、2、3、4管分别加0.50、0.45、0.40、0.35、0.30ml。
4.用移液管取2,4-二硝基苯肼溶液加入各试管，各加0.5ml。
5.混匀，各试管同时在水浴温箱中37℃保温20min。
6.用移液管向各试管加2,4-二硝基苯肼溶液。
7.混匀，室温放置5min，在波长505nm以蒸馏水调零，读取吸光度A。
各管吸光度减去0管吸光度为该标准管的吸光度值。
8.以吸光度值为纵坐标，对应的卡门单位为横坐标，各标准管代表的活性单位与吸光度值作图，即成标准曲线。
表13-6。
标准曲线的做法
标准曲线的做法标准曲线的做法任何科学实践必须有科学理论的支撑。
在这个意义上讲，经验有时候是一种误导。
在寻求某个困扰自己的问题答案的时候，我提倡用理论支撑的观点来表达自己和说服自己。
任何的盲从和权威都是不可取的。
标准曲线的做法问题也是如此。
1、标准曲线的本质。
标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。
建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。
如果有不需要标准曲线的方法，比如绝对校正，我想大家都会高兴。
2、标准曲线的适用性。
这是做标准曲线的重要前提，这个问题实际很简单，就是这样一个问题：我的样品的仪器响应能否用我们所建立的标准曲线来推导其理化属性？答案建立在仪器响应的特异性和标准系列和样品的匹配性上面。
一方面我们总是力求仪器的响应对于标准和样品是一视同仁；同时我们也要求我的样本跟标准基体匹配。
所以最好的标准是基体匹配标准，最好的标准曲线是工作曲线。
这样，我们也很好理解为什么大多数分析要求标准曲线和样品同批测定（除非经过实验，标准曲线的变化不大），同样的道理也可以理解为什么我们在做大批量检测的时候要插入QC检验样本，以考察仪器的稳定性。
即使在任何信息未知的情况下，我们还是要做我们的分析测试的（要不，我们都失业了），因为大家都是用同样的方法做，要错大家一起错；同时也因为我们相信伴随科学的进步，我们所测试的结果的准确性就越接近真理。
3、简单的标准曲线----单点校正。
对于分析成本高的测试，单点校正是不得以的选择。
现在应用最多的是色谱分析，很多国家标准或国际标准都采用单点校正，实际是建立在色谱分析的高选择性上面：我们的空白一般都很小，我们的线性一般都很好。
在有这么多验前概率的支撑下，色谱分析中大量的单点校正不失为一个合理的选择。
但单点校正要丢失很多的信息量，这个信息量就是不确定度。
4、标准曲线的点的分布。
从不确定度理论推算样本的不确定度时，有二个重要的结论：一、标准曲线的重心点处，所查出来的样品不确定度最小。
标准曲线的绘制
标准曲线绘制在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析,通常情况下的标准工作曲线是一条直线。
标准曲线的横坐标（X）表示可以精确测量的变量(如标准溶液的浓度)，称为普通变量,纵坐标(Y)表示仪器的响应值(也称测量值,如吸光度、电极电位等），称为随机变量。
当X取值为X1，X2，…… Xn时，仪器测得的Y值分别为Y1，Y2, …… Yn。
将这些测量点Xi，Yi描绘在坐标系中，用直尺绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系,这就是常用的标准曲线法.用作绘制标准曲线的标准物质,它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量,标准曲线不能任意延长.用作绘制标准曲线的绘图纸的横坐标和纵坐标的标度以及实验点的大小均不能太大或太小，应能近似地反映测量的精度。
由于误差不能完全避免，实验点完全落在工作曲线的的情况是极少的,尤其是在误差较大时，实验点比较分散，它们通常并不在同一条直线上，这样凭直觉很难判断怎样才能使所连接的直线对于所有实验点来说误差是最小的，目前较好的方法是对实验点(数据）进行回归分析。
研究随机现象中变量之间相关关系的数理统计方法称为回归分析，当自变量只有一个或X与Y在坐标图上的变化轨迹近似一直线时，称为一元线性回归。
2.6.1一元线性回归方程的求法确定回归直线的原则是使它与所有测量数据的误差的平方和达到极小值,设回归直线方法为(2－15）式中a表示截距,b表示斜率.假设Xi和Yi (i=1，2,3,……，n)是变量X和Y的一组测量数据。
对于每一个Xi值,在直线(）上都有一个确定的值.但值与X轴上Xi处的实际测定值Yi是不相等的，与Yi之差为：（2－16)上式表示与直线(）的偏离程度，即直线的误差程度.如果全部n个测定引起的总偏差用表示，则偏差平方和s为(2－17）在所有直线中，偏差平方和s最小的一条直线就是回归直线，即这条直线的斜率b和截距a应使s 值达到最小,这种要使所有数据的偏差平方和达到最小的求回归直线法称为最小二乘法。
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经60分钟反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反 应，并与反应液中的二种α -酮酸生成相应的 2,4-二硝基苯腙。在碱性条件下，两种苯肼的 吸收光谱曲线有差别，在500nm～520nm处 差异最大，草酰乙酸生成的苯腙的呈色强度显 著大于α -酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测 定AST活力。
标准曲线制作（AST赖氏法）
【实验要求】 掌握血清天冬氨酸氨基转移酶测定（赖氏法） 的原理 熟悉操作方法及标准曲线的绘制； 了解实验注意事项，方法评价及临床意义。 【实验任务】 一大组绘制二条标准曲线 2个同学一组测出样品管中吸光度值，并在曲 线上查值。
【实验原理】
AST催化天门冬氨酸与α -酮戊二酸间的氨基移 换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸：
【注意事项】
1. 本法的缺点是标本AST活性高时，草酰乙酸对AST有反馈 抑制，使测定结果偏低；酮血症中乙酰乙酸及β-羟丁酸，因 设对照管不会引起测定结果假性增高。 2. 血清中AST在室温下可保存2天，在4℃冰箱可保存1周，在 -25℃可保存1个月。严重溶血、黄疸及脂血血清可增加测定 的吸光度。
【实验评价】
1.本法为终点法，难以确定酶促反应30～60min内产物生成 量与时间成正比。同时也存在底物和2，4-二硝基苯肼用量不 足的问题，由于标本AST活性高时，草酰乙酸对AST显示反馈 抑制，使AST活性下降，测定结果偏低。 2.重复性差 血清中含有多种酶对AST测定产生负干扰现象， 如耦联转氨基作用，即AST作用生成的产物草酰乙酸会不可 逆地转变为丙酮酸而成为ALT的底物影响AST的测定；产物旁 路效应，生成的草酰乙酸可被血清内源性苹果酸脱氢酶催化 而消耗，草酰乙酸自发转变成的丙酮酸可被血清中的LD催化。 本法最适条件下的变异系数为8%，常规条件下的变异系数＜ 16%。 3.操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。
【参考范围】 0～50卡门单位 【临床意义】 1. 用于肝病的诊断 血清中AST可来源于肝细胞，各种 肝病可引起血清AST升高，有时可达1200U/L，中毒 性肝炎病人还可更高。 2. 用于心肌梗死的诊断 AST在心肌细胞中含量较多， 心肌梗死病人发病时，血清中AST活性增高，在发病 后6~12小时内显著增高，在48小时达到高峰，约在 3～5天恢复正常。 3.其他疾病的协助诊断 胸膜炎、肾炎以及肺炎病人等 也可引起血清AST的轻度增高。
【操作】 1、试剂配制 1份4N 氢氧化钠和9份蒸馏水混合均匀，即可 使用 将酶标准液（3.0mmol/L）取出1ml加0.5ml 蒸馏水使酶标准备液浓度变为2.0mmol/L 2.AST标准曲线的绘制 （1）按表1向各管加入相应试剂。
表一：
管号 0 1
225 25 50 250
2
200 50 50 250
3175 ຫໍສະໝຸດ 5 50 2504150 100 50 250
基质液（ul） 250 2.0mmol/L 标准液（ul） 蒸馏水（ul） 50 2,4-二硝基 苯肼（ul） 活力单位 （U） 250
混匀，37℃水浴20分钟 0 24 61 114 190
取出，各管加稀释氢氧化钠2.5ml,室温放置3分钟上机波长 510nm测定.以蒸馏水调零，测定各管吸光度。各管吸光度 减去“0”号管吸光度为该管的吸光度值。 以吸光度值为纵坐标，卡门氏单位为横坐标，各标准管的 吸光度值对活性单位作图，即为标准曲线。
3. 标本的测定 按表2操作。
表二：
对照管 基质液（ul） 样品（ul） 显色剂 50 250 μ L 混合37℃水浴30分钟 250 μ L 样品管 250 50
基质液（ul） 37℃水浴20分钟
稀释氢氧化钠
250
2.5ml 2.5ml
室温放置3min，在波长510nm处，以蒸馏水调零，读取各 管吸光度。测定管吸光度减去对照管吸光度即为标本的吸 光度，查标准曲线，即可得到ALT的卡门单位。。