第五章、中药制剂含量测定

六、高效液相色谱法
分离效能高、分析速度快及应用范围广

适用于测定
－挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及 离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类 脂、核酸、维生素及无机盐类

系统适应性试验
高效液相色谱法

实验条件的选择
色谱柱的选择 流动相的选择—优质纯或光谱纯，脱气，过滤（0.45μ m）
毛细管电泳法（CE）是经典电泳技术与 现代色谱技术相结合的一种新型现代电泳 技术，与传统电泳技术和现代HPLC相比 具有很多优点：搞笑；快速；进样量少； 低消耗、无污染；多模式，应用广。
九、联用技术
GC-MS
LC-MS
第二节 含量测定方法验证
提取条件的考察

提取方式、浸泡时间、提取时间等

部分含水溶剂：适用于分离中等极性、弱极性药物
非水溶剂：分离疏水性物质
缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如 蛋白质、肽及弱酸、弱碱类化合物。
洗脱方式：等度洗脱与梯度洗脱 检测器：UVD, FD, ELSD, ECD,RID
高效液相色谱法
双黄连口服液的含量测定（反相HPLC外标一点法）
七、离子色谱法
离子色谱法（IC）系采用高压输液泵系统将规 定的洗脱液泵入装有填充剂的色谱柱进行分离 测定的色谱分析方法。
离子色谱法常用于无机阴离子、无机阳离子。 有机酸、糖醇类、氨基糖类、氨基酸、蛋白质 、糖蛋白等物质的定性和定量分析。在药学方 便的主要应用时药物的含量测定和有关物质检 查。
八、毛细管电泳法
标准溶液加入法
气相色谱法
川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定 [含量测定] 照气相色谱（附录VI E）测定。 色谱条件与系统适用性试验 改良聚乙二醇毛细管柱（柱长30m， 内径0.32mm，膜厚度0.25um），柱温110℃；进样口温度为250℃；检测 器温度为250℃；分流比为25:1。理论板数按萘峰计算应不低于5000。 校正因子测定 精密称取萘适量，加环已烷制成每1ml含15mg的溶 液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中 ，加环已烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加 入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪， 计算校正因子。 测定法 精密量取本品50ml，照挥发油测定法（附录X D）试验， ……(加环已烷回流提取），合并环已烷液，置20ml量瓶中，精密加入 内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪，测 定，即得。 本品每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不得少于0.20mg。
五、气相色谱法

适用于测定
－挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、
龙脑等 －中药制剂含水量、含醇量

系统适应性试验
理论塔板数 n＝5.54(tR/W1/2)2 ※最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响 分离度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)
※ R≥1.5（两峰完全分离）
重复性，相对标准偏差RSD≤2.0％ (n=5) 拖尾因子T =W0.05h/2d1 (d1峰极大至峰前沿之间的距离) ※ 1.05≥T≥0.95

实验条件的选择
固定相的选择
气固色谱－硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等 气液色谱－烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（高温、手 性）
柱温的选择
配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物
碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量
氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等
二、紫外－可见分光光度法

对照品比照法
cf. 标准曲线法
对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（100±10％）

吸收系数法 A=ECL
紫外－可见分光光度法，吸收系数法
戊己丸中总生物碱的含量测定
[含量测定] 取本品粉末（过三号筛）0.7~0.9g，精密称定，置索氏提 取器中，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流至提取液无色，提取液浓 缩后移至25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法（附录VI C）试验，精密量取5ml，置氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿 法装柱，用乙醇30ml预洗）上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶 中 ， 加 乙 醇 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 精 密 量 取 2ml ， 置 50ml 量 瓶 中 ， 用 0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录V A），在345nm的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸 收系数（E1%1cm）为728计算，即得。 本品按干燥品计算，每1g含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4） 计，不得少于30mg。
三、原子吸收分光光度法
原子吸收分光光度法是以待测元素的气态基态原 子对该元素特征普贤的吸收为基础。 准确度高、灵敏度高、选择性好、分析速度快。
四、薄层色谱扫描法

薄层吸收扫描法
光源：氘灯(190-340nm)和W灯(340-900nm
※ 薄层板引起的散射现象（散射系数SX）→标准
曲线（Kubella-Munk曲线）弯曲→校正（曲线校直 法和计算机回归法）
其它条件的选择 进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用） 进 样 口（ 汽化室 ）温度：样品的沸点或稍高于沸点 ，
30℃/ 30℃/ 50℃+T柱≤T汽≤ 50℃+T沸点
检测室温度：30℃+T柱≤T检≈T汽

实验条件的选择
其它条件的选择

进样时间：1秒以内

进样量

理论允许最大进样量使下降的塔板数不超过 10％。

计算分光光度法
等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数光谱法
紫外－可见分光光度法，标准曲线法
排石颗粒中总黄酮的含量测定
[含量测定] 对照品溶液的制备 取120℃干燥至恒重的芦丁对照品20mg ，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.2mg）。 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分 别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀 ，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠 试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可 见分光光度法（附录V A），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为 纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 测定法 取装量差异下的本品，研细，……（甲醇超声提取）。精密量 取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精 密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50%甲 醇至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无 水芦丁的量，计算，即得。 本品每袋含总黄酮以无水芦丁（C27H30H16）计，不得少于0.12g。
第五章 中药制剂含量测定
反映其制剂中有效成 分或者毒性成分的含 量
衡量其制剂工艺的稳 定性和中药材的质量 优劣
35.00% 30.00% 25.00% 20.00% 15.00% 10.00% 5.00% 0.00% 药典中中药及其制剂的含量测定所占 比例 1977 1990 1985 1995 2000

薄层荧光扫描法
光源：汞灯(250-580nm) 直线式扫描，无需曲线校直

系统适应性试验
检测灵敏度 分离度 R=2(d1-d2)/(W1+W2)
※ R≥1.0
重复性，相对标准偏差RSD≤3.0％
显色后测定，RSD≤5.0％
健脾丸中熊果酸的含量测定 [含量测定] 取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g ，精密称定，加水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室 温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器 内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石 油醚（30~60℃）浸泡两次，每次10ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚， 残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内 ，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精 密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄 层色谱法（附录VI B）试验，精密吸取供试品溶液4ul与6ul，对照品溶液 2ul与4ul，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙 酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙 醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小 的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长：λS=540nm，λR=700nm， 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。 本 品 含 山 楂 以 熊 果 酸 （ C30H48O3 ） 计 ， 小 蜜 丸 每 1g 不 得 少 于 0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。
供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲 醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇 匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相 色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。 金银花 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。
第一节 常用含量测定方法
一、化学分析法

适用于含量较高的成分及无机成分的测定 包括：重量分析和滴定分析
挥发法：如水分测定 萃取法：如冰片散中冰片的含量测定 沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定
（一）重量分析
（二）滴定分析
酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类
万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定—硫氰酸铵法 沉淀滴定法 本品剪碎，取5g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸


气体0.1－1ml；液体0.1-1μl
分流器分流进样，1/10~1/100
检测器：TCD, FID, NPD, ECD
气相色谱法

毛细管柱
柱长 内径 其它
毛细管柱 5-60m
0.25mm,0.32mm，固定液厚度 0.53mm 0.1-0.5um 2-4mm 粒径为0.1250.25mm
填充柱
30ml与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml 银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物 锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1% 高锰酸钾溶液至显粉红色，两分种内不消失，再滴加2%硫酸 亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵 四苯硼钠法：+生物碱→白色沉淀 滴定液（0.1mol/L）滴定。 本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞（HgS）计，小丸应为 亚铁氰化钾法 69~90mg；大丸应为138~180mg。
2-4m

气相色谱测定法
内标法加校正因子

求算校正因子
f
fR WR / AR AS / CS % fs WS / AS AR / CR %

待测组分含量测定
CX CR AX AR
CX % f
AX CS % As
外标法
面积归一化法
Ci %
Ai 100 % Ai
[含量测定] 黄芩 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm。理论 板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇 制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
样品沸点范围 柱温 固定液用量 （固定液:载体）
300~400℃
宽沸程样品： 程序升温法 200~300℃ 100~200℃
200~
5~10% 10~15% 15~25%
气体等低沸点样品 室温或50℃下

实验条件的选择
载气的选择
H2，He：流速大，柱长，热导检测器 N2：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器 流速：20－80ml/min