液体配制及实验方法
溶液配制学生实验报告(3篇)
第1篇实验名称：溶液配制实验日期：2023年X月X日实验地点：化学实验室一、实验目的1. 掌握溶液配制的基本原理和方法。
2. 学会使用托盘天平、量筒、滴定管等仪器进行溶液配制。
3. 了解溶液浓度的计算和应用。
二、实验原理溶液配制是将溶质溶解于溶剂中，形成一定浓度的溶液。
溶液的浓度是指单位体积溶液中所含溶质的量。
本实验以配制一定浓度的盐酸溶液为例，介绍溶液配制的原理和方法。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：托盘天平、量筒、滴定管、烧杯、玻璃棒、洗瓶、滤纸等。
2. 试剂：盐酸（分析纯）、蒸馏水、标准溶液（如0.1mol/L NaOH溶液）。
四、实验步骤1. 计算所需盐酸的物质的量：根据实验要求，计算所需盐酸的物质的量，即n （HCl）=C×V，其中C为溶液浓度，V为溶液体积。
2. 称量盐酸：使用托盘天平准确称量所需盐酸的质量，注意称量过程中避免污染。
3. 溶解盐酸：将称量好的盐酸加入烧杯中，加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
4. 定容：将溶解后的盐酸转移至量筒中，加入蒸馏水至刻度线，用滴定管调整液面，使液面与刻度线相切。
5. 混匀：将量筒中的溶液摇匀，确保溶液浓度均匀。
6. 标准溶液的配制：按照相同的方法配制标准溶液，用于滴定实验。
五、实验数据记录1. 称量盐酸的质量：m（HCl）=X g2. 溶液体积：V（溶液）=Y mL3. 溶液浓度：C（溶液）=Z mol/L六、实验结果分析1. 计算溶液浓度：C（溶液）=m（HCl）/M（HCl）×1000/V（溶液），其中M （HCl）为盐酸的摩尔质量。
2. 比较实验结果与理论值：将实验测得的溶液浓度与理论值进行比较，分析误差产生的原因。
七、实验总结1. 本实验通过溶液配制，掌握了溶液配制的基本原理和方法。
2. 实验过程中，应注意称量准确、溶解充分、定容精确，以确保实验结果的准确性。
3. 实验结果与理论值存在一定误差，可能是由于实验操作不规范、仪器精度等因素造成的。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
理化实验配制方案
理化实验配制方案在进行理化实验时，不同的实验要求使用不同的试剂和药品，并且需要按照一定的比例和配制方法进行混合。
在进行实验前，正确的配制方案对于实验结果的准确性和可重现性非常重要。
本文将针对常见的理化实验，介绍一些常用的试剂配制方案。
pH缓冲溶液Phosphate Buffered Saline (PBS) 缓冲液PBS缓冲液是一种理化实验中常用的缓冲液，可以用于细胞培养、免疫组化等实验。
其配制方法如下：•向1L去离子水中加入8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4。
调节pH值至7.4。
•用0.22μm的无菌滤膜过滤，分装到无菌的50mL离心管中。
•灭菌，储存在4℃。
Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液广泛用于生化实验和分子生物学实验中，其配制方法如下：•向800mL去离子水中加入Tris 11.1g, 调节pH值至所需值。
•加入到1L容量瓶中，用去离子水调至1L。
酶解液RIPA缓冲液RIPA缓冲液是广泛用于蛋白提取和酶解实验的缓冲液，其配制方法如下：•向1L去离子水中加入150mM NaCl、1% NP-40、0.5% sodium deoxycholate、0.1% SDS、50mM Tris-Cl pH 8.0、1mM EDTA。
•加入到1L容量瓶中，用去离子水调至1L。
Tris-HCl酶解液Tris-HCl酶解液是生化实验和分子生物学实验中常用的酶解液，其配制方法如下：•向1L去离子水中加入10mM Tris-HCl(pH8.2)、1mM EDTA、1% Triton X-100、0.1% SDS、50μg/ml Proteinase K。
•加入到1L容量瓶中，用去离子水调至1L。
其他试剂甲醛PBS固定液甲醛PBS固定液是常用的细胞固定液，可用于细胞培养、免疫组化等实验。
其配制方法如下：•向10ml PBS中加入1 ml 37%甲醛。
做溶液配制实验报告(3篇)
第1篇实验名称：溶液配制实验目的：1. 熟悉溶液配制的基本操作方法。
2. 掌握使用量筒、容量瓶、移液管等仪器进行溶液配制的技巧。
3. 了解溶液浓度、摩尔浓度等基本概念。
实验原理：溶液配制是指将溶质按照一定比例溶解在溶剂中，形成一定浓度的溶液。
溶液的浓度可以用质量浓度、摩尔浓度等表示。
在实验中，我们通过准确称量溶质的质量、量取溶剂的体积，利用容量瓶、移液管等仪器进行溶液的配制。
实验仪器与试剂：1. 仪器：电子天平、量筒、容量瓶、移液管、烧杯、玻璃棒、滴定管、洗瓶、滤纸等。
2. 试剂：氯化钠、蒸馏水、氢氧化钠、硫酸等。
实验步骤：1. 称取一定质量的溶质。
根据实验要求，使用电子天平准确称取所需质量的溶质。
2. 量取一定体积的溶剂。
使用量筒量取所需体积的溶剂，倒入烧杯中。
3. 将溶质加入溶剂中。
将称量好的溶质小心地加入烧杯中的溶剂中，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
4. 调整溶液体积。
将溶解后的溶液转移到容量瓶中，用蒸馏水冲洗烧杯和玻璃棒，将冲洗液一并转移到容量瓶中。
5. 定容。
向容量瓶中加入蒸馏水，至刻度线处。
用滴定管滴加蒸馏水，直至液面与刻度线相切。
6. 摇匀。
将容量瓶盖紧，倒置几次，使溶液混合均匀。
实验结果与分析：1. 实验结果：配制了一定浓度的溶液。
2. 结果分析：通过准确称量溶质的质量、量取溶剂的体积，以及使用容量瓶、移液管等仪器进行溶液的配制，成功配制了一定浓度的溶液。
实验讨论：1. 在溶液配制过程中，应注意避免溶质粘附在容器壁上，影响溶液的浓度。
2. 使用量筒、容量瓶、移液管等仪器时，要确保准确读取刻度，避免读数误差。
3. 在定容过程中，要注意液面与刻度线相切，避免液面高于刻度线。
实验总结：本次实验成功配制了一定浓度的溶液，掌握了溶液配制的基本操作方法。
通过实验，加深了对溶液浓度、摩尔浓度等基本概念的理解。
在实验过程中，需要注意操作细节，确保实验结果的准确性。
实验日期：____年__月__日实验人：____指导教师：____第2篇一、实验目的1. 熟悉溶液配制的基本操作方法。
实验室液体溶液配制方法及技巧
实验室液体溶液配制方法及技巧摘要:液体溶液配制是实验室分析人员最基础的一门技术,液体溶液的配置包括溶质的计算、移液、定容等基础操作,还包括一些混合溶液的前后加入顺序及利用一些试剂自身的化学性质缩短配置时间关键词:液体溶液配制方法溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物,被分散的物质(溶质)以分子或更小的质点分散于另一物质(溶剂)中。
溶液是混合物。
物质在常温时有固体、液体和气体三种状态。
因此溶液也有三种状态,大气本身就是一种气体溶液,固体溶液混合物常称固溶体,如合金。
一般溶液只是专指液体溶液。
液体溶液包括两种,即能够导电的电解质溶液和不能导电的非电解质溶液。
1 液体溶液配制过程(1)计算:计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。
(2)称量:用托盘天平称量固体质量或用量筒或移液管量取液体体积。
(3)溶解:在烧杯中溶解或稀释溶质,恢复至室温(如不能完全溶解可适当加热)。
检查容量瓶是否漏水。
(4)转移:将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入一定体积的容量瓶中(玻璃棒下端应靠在容量瓶刻度线以下)。
(5)洗涤:用蒸馏p将100 g二水合氯化钡溶于约800 mL水中,加热有助于溶解,冷却并稀释至1 L。
2.1.2 质量分数ωω=m1/m2ω为欲配制的质量分数；m1为欲配溶液溶质的质量；m2为欲配溶液质量;例:1%淀粉指示液。
称取1 g可溶性淀粉用少量水调成糊状,再用刚煮沸水冲稀至100 mL。
2.1.3 物质的摩尔浓度C公式m=C×V×M/1000m为需称取的质量;C为欲配溶液浓度;V为欲配溶液体积;M为摩尔质量。
例:预配0.5 mol/L的碳酸钠溶液500 mL,该称取碳酸钠多少克？代入公式m=0.5 mol/L×500 mL×106 g/mol/1000=26.5 g2.2 液体试剂的配制2.2.1 物质的摩尔浓度CC1V1=C2V2C1为溶液摩尔浓度;C2为欲配溶液摩尔浓度;V1为溶液体积;V2为欲配溶液体积。
实验室常用液体配制标准操作规程
v1.0 可编辑可修改常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
液体配制溶液实验报告
一、实验目的1. 掌握配制溶液的基本原理和方法。
2. 熟悉常用溶液的配制方法。
3. 培养严谨的实验态度和良好的实验习惯。
二、实验原理溶液是由溶质和溶剂组成的均相混合物。
在实验中，我们常常需要配制一定浓度的溶液。
溶液的浓度是指溶质在溶剂中的含量，通常用质量分数、体积分数、摩尔浓度等表示。
三、实验器材1. 电子天平2. 烧杯3. 玻璃棒4. 量筒5. 容量瓶6. 滴定管7. 滴定管夹8. 试管9. 移液管10. 滴瓶11. 药品：氯化钠、蒸馏水、盐酸、酚酞指示剂四、实验步骤1. 准备工作（1）检查实验器材是否完好，确保实验安全。
（2）称取适量的溶质，如氯化钠，准确至0.01g。
（3）准备好蒸馏水、盐酸、酚酞指示剂等试剂。
2. 配制一定浓度的溶液（1）将溶质放入烧杯中，加入少量蒸馏水溶解。
（2）用玻璃棒搅拌，使溶质完全溶解。
（3）将溶液转移到容量瓶中，用蒸馏水冲洗烧杯，并将冲洗液转移到容量瓶中。
（4）向容量瓶中加入蒸馏水至刻度线，用玻璃棒搅拌均匀。
（5）用滴定管取一定体积的溶液，进行滴定实验。
3. 滴定实验（1）取一定体积的待测溶液于试管中，加入酚酞指示剂。
（2）用滴定管滴加盐酸溶液，边滴边搅拌。
（3）观察溶液颜色变化，当颜色由无色变为浅红色时，停止滴定。
（4）记录滴定所用盐酸溶液的体积。
4. 计算溶液浓度（1）根据滴定结果，计算待测溶液的浓度。
（2）根据计算结果，分析实验误差。
五、实验数据及结果1. 称取氯化钠质量：1.2g2. 溶解后溶液体积：100ml3. 滴定实验结果：盐酸溶液体积为20.0ml根据实验数据，计算待测溶液的浓度为：C（NaCl）= (1.2g / 58.44g/mol) / (0.02L) = 2.04mol/L六、实验讨论1. 在配制溶液过程中，应注意防止溶质吸湿、受潮，以免影响溶液浓度。
2. 在转移溶液时，应确保烧杯内壁无残留，以免影响溶液浓度。
3. 在滴定实验中，应确保滴定管夹紧，防止溶液泄漏。
配制溶液的实验步骤
1.计算:计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。
2.称量:用托盘天平称量固体质量或用量筒(应用移液管，但中学阶段一般用量筒)量取液体体积。
3. 溶解:在烧杯中溶解或稀释溶质，恢复至室温(如不能完全溶解可适当加热)。
检查容量瓶是否漏水。
(1)计算:计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。
(2)称量:用托盘天平称量固体质量或用量筒(应用移液管，但中学阶段一般用量筒)量取液体体积。
(3)溶解:在烧杯中溶解或稀释溶质，恢复至室温(如不能完全溶解可适当加热)。
检查容量瓶是否漏水
(4)转移:将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入一定体积的容量瓶中(玻璃棒下端应
靠在容量瓶刻度线以下)。
(5)洗涤:用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2~3次，并将洗涤液转入容器中，振荡，使溶液混合均匀。
(6)定容:向容量瓶中加水至刻度线以下1cm~2cm处时，改用胶头滴管加水，使溶液凹面恰好与刻度线相切。
(7)摇匀:盖好瓶塞，用食指顶住瓶塞，另一只手的手指托住瓶底，反复上下颠倒，使溶液混合均匀。
最后将配制好的溶液倒入试剂瓶中，贴好标签。
实验室溶液配制技巧
实验室溶液配制技巧-标准化文件发布号：（9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII实验室溶液配制技巧液体溶液配制可以说是实验室分析人员最基础的一门技术，也是每天工作中的必选项。
液体溶液的配置包括溶质的计算、移液、定容等基础操作，还包括一些混合溶液的前后加入顺序及利用一些试剂自身的化学性质，掌握了溶液配制的技巧，可以大大缩短配置时间，提高实验效率。
我们都知道，溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质（溶质）以分子或更小的质点分散于另一物质（溶剂）中。
溶液是混合物。
种类分为：一般溶液和标准溶液。
一般溶液只是专指液体溶液。
一般溶液的配制过程1.计算：计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。
2.称量：用托盘天平称量固体质量或用量筒或移液管量取液体体积。
3.溶解：在烧杯中溶解或稀释溶质，恢复至室温（如不能完全溶解可适当加热）。
检查容量瓶是否漏水。
4.转移：将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入一定体积的容量瓶中（玻璃棒下端应靠在容量瓶刻度线以下）。
5.洗涤：用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2～3次，并将洗涤液转入容器中，振荡，使溶液混合均匀。
6.定容：向容量瓶中加水至刻度线以下1～2cm处时，改用胶头滴管加水，使溶液凹面恰好与刻度线相切。
7.摇匀：盖好瓶塞，用食指顶住瓶塞，另一只手的手指托住瓶底，反复上下颠倒，使溶液混合均匀。
8.装瓶，贴签。
举例：配制500mL，L碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器：烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤：第一步：计算：所需碳酸钠的质量=**106=克；第二步：称量：在天平上称量克碳酸钠固体，并将它倒入小烧杯中；第三步：溶解：在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使其溶解；第四步：移液：将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中；第五步：洗涤：用蒸馏水洗烧杯2～3次，并倒入容量瓶中；第六步：定容：倒水至刻度线1～2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直；第七步：摇匀：盖好瓶塞，上下颠倒、摇匀；第八步：装瓶、贴签；误差分析：固体药品的称量与液体药品的量取是否准确；把溶液向容量瓶中转移，溶液洒了；未洗涤烧杯和玻璃棒；用待配液润洗了容量瓶；定容时水加多了或加少了；定容时未平视刻度线。
溶液的配制及分析
溶液的配制及分析引言：溶液是化学实验中常见的一种状态，它由溶质和溶剂组成，并且可以用于实验室中的各种化学实验。
本文将介绍溶液的配制方法以及常用的溶液分析方法。
一、溶液的配制：1.质量配制法：根据所需溶质质量和溶液的浓度，称取溶质，并加入少量溶剂进行溶解，然后再加入足量的溶剂至所需体积。
这种方法适用于固体溶质的配制。
2.体积配制法：根据所需溶质质量和溶液的浓度，先将溶质称取至容量瓶中，然后加入少量溶剂进行溶解，最后加入足量的溶剂至刻度线。
这种方法适用于固体溶质和液体溶质的配制。
3.定容配制法：将一定体积的溶液配制至所需浓度。
首先称取所需溶质质量，并加入足量溶剂溶解，然后将溶液转移到容量瓶中，加入溶剂至刻度线。
这种方法适用于固体溶质和液体溶质的配制。
4.稀释法：将浓溶液稀释为所需浓度的溶液。
用浓溶液配制较小体积的溶液，然后将其加入稀释液中，搅拌均匀即可得到所需浓度的溶液。
二、溶液的分析：1.pH值的测定：测定溶液的pH值可以用来判断其酸碱性。
常用的方法有酸碱滴定法、玻色法、玻尔视域法等。
2.浓度的测定：常见的溶液浓度测定方法有重量法、体积法、比色法和化学分析法等。
其中，常用的浓度测定方法有酸碱滴定法、络合滴定法、氧化还原滴定法等。
3.离子浓度的测定：常见的离子浓度测定方法有电导法、滴定法、复合电极法、离子交换色谱法等。
其中，电导法是一种简便快捷的离子浓度测定方法。
4.溶液中其中一种特定物质的测定：比如溶解度的测定、吸收测定、荧光测定等。
这些测定方法主要应用光谱仪器进行测量。
结论：。
液体培养基配制方法
液体培养基配制方法方法/步骤1、配制溶液向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。
对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。
并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。
用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。
4、分装已过滤的培养基应进行分装。
如果要制作斜面培养基，需将培养基分装于试管中。
如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则需将培养基分装于锥形瓶内。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。
分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。
一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。
每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。
堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。
棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
将细菌置于0℃，低渗CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。
液体培养基配制实验报告
一、实验目的1. 理解液体培养基的配制原理和方法。
2. 掌握液体培养基的配制步骤和注意事项。
3. 熟悉液体培养基的灭菌方法。
二、实验原理液体培养基是一种供微生物生长繁殖的营养物质混合物，主要由碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等组成。
根据微生物的种类和实验目的，可以配制不同类型的液体培养基。
本实验以LB液体培养基为例，介绍液体培养基的配制过程。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）胰蛋白胨：25g（2）酵母提取物：5g（3）氯化钠：5g（4）蒸馏水：1000mL（5）pH试纸（6）高压蒸汽灭菌锅2. 实验仪器：（1）分析天平（2）烧杯（3）玻璃棒（4）量筒（5）三角瓶（6）棉塞四、实验步骤1. 称量：准确称取25g胰蛋白胨、5g酵母提取物和5g氯化钠。
2. 溶解：将称取好的原料放入烧杯中，加入约500mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 定容：将溶解好的培养基转移至三角瓶中，用蒸馏水定容至1000mL。
4. 调pH：用pH试纸检测培养基的pH值，若pH值不在6.8-7.2之间，可用1M的HCl或NaOH溶液进行调节。
5. 灭菌：将配制好的培养基分装到灭菌瓶中，用棉塞塞紧，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌15min。
6. 冷却：待培养基冷却至室温，即可使用。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本实验成功配制了LB液体培养基，培养基颜色呈淡黄色，透明度良好。
2. 结果分析：（1）称量准确是保证培养基质量的关键，本实验称量误差控制在±0.1g以内。
（2）溶解过程中，玻璃棒搅拌可防止原料沉淀，确保培养基均匀。
（3）定容过程中，需注意量筒的读数，避免定容过量或不足。
（4）调节pH值时，应遵循“宁酸勿碱”的原则，避免过度调节。
（5）灭菌过程中，高压蒸汽灭菌锅的压力和温度对灭菌效果有重要影响，本实验灭菌效果良好。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了液体培养基的配制原理、方法和步骤，了解了液体培养基的灭菌过程。
溶液的配制实验步骤详细
溶液的配制实验步骤详细配制溶液分三种情况：第一情况是用固体配制溶液；第二情况是用液体配制溶液；第三情况是用气体配制溶液。
初中只需掌握前两种溶液的配制。
例1、配制100克质量分数为10%的氯化钠溶液的实验步骤：1、计算配制100克质量分数为10%的氯化钠溶液所需氯化钠的质量=100g*10%=10克，所需水的质量=100g-10g=90g，所需水的体积=90g/（1g/ml）=90ml2、称量用托盘天平称量10克的氯化钠，e79fa5e98193e4b893e5b19e31333330353631倒入烧杯中。
3、溶解用量筒量取90毫升的水，倒入盛有氯化钠的烧杯里，用玻璃棒搅拌，使氯化钠溶解。
4、贴标签贮存把配好的溶液装入试剂瓶并贴上标签（标签中应包括药品名称和溶液中溶质的质量分数），放到试剂柜中例2：用质量分数98%的浓硫酸（p=1.84g/ml）配制500克质量分数为20%的稀硫酸的实验步骤：1、计算配制500克质量分数为20%的稀硫酸需要浓硫酸的质量=（500g*20%）/98%=102g需要浓硫酸的体积=102g/1.84g/ml=55.4ml所需水的质量=500g-102g=398g所需水的体积=398g/（1g/ml）=398ml2、量取（此步与固体配制溶液不同）用量筒量取398ml水，倒入烧杯中。
3、稀释（此步与固体配制溶液也不同）用量筒量取55.4毫升的浓硫酸，沿烧杯壁慢慢注入水中，并不断用玻璃棒搅拌，使产生的热量迅速扩散。
4、贴标签贮存把配好的溶液冷却后装入试剂瓶并贴上标签（标签中应包括药品名称和溶液中溶质的质量分数），放到试剂柜中。
液体配制及实验方法
（一)液体配制1.完全培养基DMEM+10％FBS+1％双抗+（1%HAPS液）若放置时间长于2周加1％谷氨酰胺2.PBS1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0。
2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO43.胰酶用之前调节PH值至7.64.CaCl2将0。
165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性5.双抗终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml青霉素0.6μg为1个单位链霉素1。
2195μg为一个单位称取青、链霉素粉末各0.6、1。
2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml6.两性霉素B100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X）的浓缩液每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml7.细胞冻存液20％DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS）8STZ溶液STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0。
145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕。
9油红O原液:油红O 0。
6g溶于异丙醇( 99% ）100ml .稀释液：油红O 原液20ml ,蒸馏水20ml ，过滤后使用。
10茜素红称取0。
1g茜素红粉溶于100mlPBS,调节PH值到7.2，过滤后使用.11成骨诱导液配方:DMEM(H)+10％FBS+10mmol/Lβ—甘油磷酸钠+0。
1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1)β-甘油磷酸钠分子量：216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ—甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2）地塞米松分子量：392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmol/L=0。
九年级化学配制溶液的步骤
九年级化学配制溶液的步骤
一、选择物质
选择需要配制的溶液所需要使用的物质,如盐类、酸、碱等。
二、准备设备和原料
准备适当的烧杯、量漏、托盘等设备,并准备好需要使用的各种物质。
确保量有准确性。
三、衡量物质量
使用量漏或秤采集规定量的各种物质。
精确衡量各种物质的质量。
四、下粉末状物质
如果物质是固体粉末状,先把它下到烧杯中。
五、加入溶液
等到固体完全下入烧杯后,开始加入另一种液态物质,形成溶液。
六、搅拌均匀
使用搅拌棒或漏斗将溶液搅拌均匀,使各种物质充分溶解。
七、观察溶液
观察溶液的颜色、澄清程度等,判断是否配制成功。
如有淀积需要继续搅拌。
八、标签和保存
在烧杯或容器上贴标签注明物质名称和浓度,密封后妥善保存。
1 1液体的配制方法
1 1液体的配制方法
要配制1%的液体，需要一定的溶质和溶媒。
步骤如下：
1. 首先确定需要配制的液体的总体积。
假设需要制备100mL的液体。
2. 确定溶质的质量。
根据液体配制的浓度公式（质量浓度=溶质的质量/溶液的体积），计算出所需的溶质质量。
在这种情况下，溶质质量为溶液体积乘以所需浓度。
即0.01g = 100mL x 0.01。
3. 将所需的溶质质量称量或体积计量。
将溶质加入一个容器中。
4. 加入足够量的溶剂。
在本例中，根据溶液的总体积和溶质的质量计算，将足够的溶剂（如水或其他溶剂）加入容器中，直至总体积达到100mL。
5. 彻底混合溶剂和溶质，以确保其均匀分布。
需要注意的是，在液体配制过程中，应遵循相关的安全操作规范，并确保准确计量和标记溶剂和溶质的标准。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：少伟、顾颖、晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：毅歆、）六、EIA系统（责任人：胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，含0.5g卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
实验2--液体药剂的制备
90%乙醇600ml，蒸馏水加至1 000ml。
5．加精制滑石粉作分散剂时，研磨时间不宜过长，以免滑石粉过细，而使溶液浑浊，需反复滤过才能澄明。
（二）复方碘溶液【处方】碘5g 碘化钾10g 蒸馏水加至100ml【制法】取碘化钾置容器中，加蒸馏水约5ml，搅拌使溶解，加入碘，随加随搅拌，使溶解后，再加蒸馏水至全量，混匀，即得。
【作用与用途】调节甲状腺机能。
用于因缺碘所引起的疾病，如甲状腺功能亢进等辅助治疗。
亦可作为甲状腺术前给药。
【用法与用量】口服。
一次0．1～0．5ml，一日0．3～0．8ml；极量：一次1ml，一日3ml。
饭后服。
【注】 1．碘具有强氧化性、腐蚀性和挥发性，称取时可用玻璃器皿或蜡纸，不宜用纸衬垫，不应直接置于天平托盘上称量，以防腐蚀天平；称取后不宜长时间露置空气中；切勿接触皮肤与粘膜。
2．碘难溶于水(1：2950)，故加碘化钾作助溶剂，以增大其溶解度。
制备时，为使碘能迅速溶解，宜先将碘化钾加适量蒸馏水浓溶液，然后加入碘溶解。
碘化钾与碘生成易溶于水及醇的络合物。
其结合形式如下：I2+KI→KI33．碘溶液具氧化性，应贮存于密闭玻璃塞瓶内，不得直接与木塞、橡胶塞及金属塞接触。
为避免被腐蚀，可加一层玻璃纸衬垫。
4．本品为深棕色澄明溶液，有碘特臭。
内服时用水稀释5～10倍，以减少刺激性。
(二)复方硼砂溶液【处方】硼砂2g 甘油3.5ml 碳酸氢钠1.5g 液化苯酚0.3ml 蒸馏水加至100ml【制法】取硼砂加入约50ml热蒸馏水中，溶解，放冷，加入碳酸氢钠溶解。
另取液化苯酚加甘油搅匀，缓缓加入上述溶液中，随加随搅拌，待气泡消失后，加蒸馏水至100ml，必要时过滤，即得。
【作用与用途】杀菌防腐。
为含漱剂，用于口腔炎，咽喉炎及扁桃体炎等。
【用法与用量】加5倍温水稀释后漱口，慎勿咽下，一日数次。
【注】 1．硼砂在水中溶解度为1:20，沸水中为1:1，甘油中易溶。
故制备时，宜用热水加速硼砂溶解。
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(一)液体配制1.完全培养基DMEM+10%FBS+1%双抗+(1%HAPS液)若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺2.PBS1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO43.胰酶用之前调节PH值至7.64.CaCl2将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液(终浓度3μmol/L)用于激活胶原酶的活性5.双抗终浓度:青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml青霉素0.6μg为1个单位链霉素 1.2195μg为一个单位称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml6.两性霉素B100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中,制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液,稀释为终浓度2.5μg/ml7.细胞冻存液20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS)8STZ溶液STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ 溶液,调节PH值至4.5,4°避光保存,由于STZ水溶性不稳定,溶液最好在半小时内使用完毕.9油红O原液:油红O 0.6g溶于异丙醇(99% )100ml 。
稀释液:油红O 原液20ml ,蒸馏水20ml ,过滤后使用。
10茜素红称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS,调节PH值到7.2,过滤后使用.11成骨诱导液配方:DMEM(H)+10%FBS+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+0.1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1)β-甘油磷酸钠分子量:216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ-甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2)地塞米松分子量:392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmol/L=0.04mg/L将100mg地塞米松溶于100ml无水乙醇中制成25000X的浓缩液每100ml低糖完全培养基中加入4μl地塞米松浓缩液3)VitC分子量176.1 溶于水称取5mgVitC粉末溶于100ml低糖完全培养基中12成脂诱导液配方:DMEM(L)+10%FBS+10μmol/L地塞米松+200μmol/L吲哚美辛+0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)+10mg/L胰岛素1)每100ml高糖完全培养基中400μl地塞米松浓缩液2)吲哚美辛分子量:357.79 在无水乙醇中的溶解度为1g/50ml PH 7.4以下0.2mmol/L=7.16mg/100ml称取720mg吲哚美辛粉末溶于50ml无水乙醇制成200X的浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入500μl吲哚美辛浓缩液3)IBMX分子量:222.25 在DMSO中的溶解度为1M(222.25mg/ml)0.5mmol/L=1.1mg/100ml将100mgIBMX粉末溶于1mlDMSO 制成100mg/ml(9100X)浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入11μlIBMX浓缩液4)Insulin浓缩液浓度为10mg/ml(1000X)每100ml高糖完全培养基中加入Insulin浓缩液100μl.溶解粉末时均需先用少量液体溶解,再定容。
(二)细胞培养1.骨髓基质干细胞(BMSC)、脂肪基质干细胞(ADSC)的原代培养1)准备工作所需液体:培养基,血清(FBS),胶原酶消毒(器械、烧杯、滤纸、离心管等)(PBS,枪头,青瓶和塞子,5套器械+3~4个烧杯+滤纸,离心管50+15ml)水浴锅调节温度至37°预热配制BMSC清洗液将PBS倒入50ml的烧杯中加2%双抗和200ul两性霉素配制ADSC清洗液由于脂肪组织易污染,故将清洗液装入青瓶中,每100mlPBS 加2%双抗和20~40ul两性霉素配制骨髓冲洗液(PBS+3%FBS)即300ul血清BMSC冲洗液及胶原酶可放入37度水浴锅或温箱中预热2)取组织将SD大鼠(4周60-80g)引颈处死,用75%酒精浸泡5-10分钟取大鼠内脏脂肪,取脂肪时剪开皮肤及剪取脂肪分别用两套器械减少污染,将取好的腹部脂肪放入事先配制好的青瓶清洗液中取大鼠长骨,尽量将附着的肌肉剔除干净,若骨头断裂髓腔暴露,污染可能性大,弃之。
将取出的脂肪及骨头分别在清洗液中清洗3-5次3)收集细胞ADSC: 将清洗后的脂肪组织在广口小青瓶中剪碎,加入适量II型胶原酶(每1ml脂肪组织加1ml胶原酶)以及CaCl2(200X),将混合物移至15ml离心管中37°C水浴30分钟(每间隔十分钟震荡15秒),30分钟后将混悬液用细胞筛网滤过,并用终止夜(10%FBS的PBS)2ml终止消化,收集液体至离心管,1500rpm离心5-6分钟,弃上清重悬细胞,细胞计数并种入培养瓶中,加适量培养基,在培养瓶上标记动物种属、细胞类别、原代、日期.BMSC:用器械剪去长骨两端,暴露骨髓腔,5ml注射器冲洗骨髓腔,收集液体至离心管,1000rpm离心8分钟,弃上清重悬细胞,细胞计数并种入培养瓶中,加适量培养基,在培养瓶上标记动物种属、细胞类别、原代、日期.2.换液每2-3天一次,具体时间和频率根据细胞状态及培养基的颜色而定.准备物品:PBS、试管吸管步骤:吸出培养基,PBS清洗2遍,再加入培养基. 原代细胞首次换液时无需PBS清洗.3.传代原代细胞7天后传代,之后每2-7天传代,依据细胞密度及状态而定传代时根据细胞密度选择所传的瓶数,一般1瓶90%融合的细胞可传2-4瓶.准备物品:15ml离心管、试管吸管、培养瓶、PBS、培养基、胰酶(ph调至7.4-7.6)步骤:1)吸出培养基,用PBS清洗2遍(应彻底清除培养基,否则血清会影响胰酶的消化作用)2) 加3-5ml(75cm规格培养瓶)胰酶至培养瓶中,放入37°C水浴锅或培养箱中消化2-3分钟,此过程中,显微镜下观察细胞形态由梭形变为圆形,立即加入3-5ml培养基终止消化.3)用吸管轻柔吹打内壁数次帮助细胞脱落,也可用手轻拍瓶壁数下,将细胞悬液收集至离心管中,1000rpm离心6-8分钟4)沿细胞沉淀方向缓慢倾倒液体,加1ml培养基重悬,将重悬液分配至各培养瓶中,再加入适量培养基,标记日期、代数.4.冻存准备物品:15ml离心管、试管吸管、冻存管、PBS、培养基、胰酶、冻存液、冰步骤:1)将冻存液及培养基冰浴,保持低温,2) 如传代步骤中的1-3将细胞离心后,加入冰浴的培养基500μl重悬,移至冻存管中3)在冻存管中加入等量冻存液,约550μl(一滴一滴地加入),混匀4)直接放入-80°C冰箱(梯度降温效果不理想),过夜转入液氮罐5.复苏准备物品:37°C水浴锅、15ml 离心管、培养瓶、培养基步骤:1)预热水浴锅(37°C),在离心管中事先加入7-8ml培养基2)将冻存的细胞在37°C水浴锅中迅速地摇晃,使其快速溶解3)将1ml培养基加入冻存管中(一滴一滴地加入),混匀4)将冻存管中混匀的细胞悬液加入有培养基的离心管中,1000rpm离心5分钟5)弃上清,用1ml培养基重悬细胞,种入培养瓶,加适量培养基,标记6.细胞计数步骤:1)细胞悬液的制备同前2)取细胞悬液15μl与等量0.08%胎盘蓝染液混合,将30μl混合液注入细胞计数板3)数出四个象限(各16小格)的细胞总数后除以4,再乘以稀释倍数(一般细胞悬液与染液是1:1混合,故乘以2),最后乘以104,即为细胞数量7.流式细胞检测前的样品制备准备物品:15ml离心管、1.5mlEP管、PBS、洗涤液(PBS+1%FBS)步骤:1)将细胞消化、离心、去上清2)用洗涤液洗涤一次,加1ml洗涤液重悬,将细胞悬液分装至数个EP管中(数量依据上机管数而定)3)继续用洗涤液将EP管中的细胞洗涤2遍,最后每管中加适量PBS重悬4)将所需抗体与PBS进行1:1稀释,每EP管细胞悬液中加3-5μl相应抗体,保留1管空白对照,4°C保存,待上机8.流式细胞检测的抗体选择设置同型对照,也可设置双标(FITC/PE)1)CD29-FITC hamster IgG ——control2)CD45-FITC mouse IgG1 ———control3)CD44-FITC mouse IgG2a——control4)CD34-FITC rabbit IgG ——control9.细胞爬片的制备准备物品:六孔板、盖玻片、离心管、PBS、胰酶、培养基步骤:1)将第三代ADSC(数量约为2x104)制成细胞悬液1.8ml2)将消毒好的盖玻片放入六孔板中,每孔取300μl细胞悬液平铺在盖玻片上3)待细胞贴壁后(约30分钟),每孔加入约3ml培养基10.干细胞的诱导分化1)成骨诱导:ADSC(P3-P5)制细胞爬片,待细胞70%融合后,将培养基换成成骨诱导液诱导,每3天换液,共诱导21天,之后进行茜素红染色2)成脂诱导: ADSC(P3-P5)制细胞爬片,待细胞70%融合后,将培养基换成成脂诱导液诱导,每3天换液,诱导21天,之后进行油红O染色11.染色方法茜素红法作用原理:利用沉积的钙于茜素红发生显色反应,得到红色的染色效果。
步骤:1)吸去诱导液,再PBS洗一到两次;2)加入10%中性甲醛,固定30min-60min;3)吸去固定液,加入0.1%的茜素红染色液,染色6-10min;4)用PBS洗两次,去处残留的染色液;结果:染料品种的不同,矿化结节呈现不同的红色。
油红O染色法作用原理:细胞在胞浆中不断有油滴的累积,并不断的增加变大,利用Oil Red O的油溶性对油滴染色。
步骤:1)吸去诱导液,再PBS洗一到两次;2)加入10%中性甲醛,固定60min;3)吸去固定液,加入现配和过滤后的Oil Red O染色液,染色60min;4)用PBS洗2-5次,去处残留的染色液和残渣结果:分化的脂肪细胞呈红色(三)动物模型的建立免疫炎性1型糖尿病小鼠模型的建立采用小剂量多次STZ腹腔注射Balb/c小鼠(6-8周,22-25g)、1%STZ、40-60mg/Kg剂量连续五天注射步骤:1)小鼠禁食过夜2)次日清晨,甲紫溶液标记小鼠,测空腹血糖,称体重,计算所需药物剂量3)配制1%STZ溶液(方法件上文)4)1ml注射器抽取STZ对小鼠进行腹腔注射(注意注射器内因残留而损失的药物)重复上述步骤共五天在造模第三天进行第一次干细胞注射步骤:1)制细胞悬液,每只小鼠1X106细胞2)注射器抽取细胞悬液,用5#或4.5#头皮针对小鼠进行尾静脉注射,注射前75%酒精消毒,注射后伤口涂红霉素软膏注意:小鼠尾静脉共4条,进针前绷直鼠尾,使静脉充盈,选择鼠尾下1/3处毛鳞片较薄部位,两毛鳞片之间进针,如感觉无阻力,表明注射成功,若阻力较大或鼠尾皮下肿胀发白,表明未打入血管,则应重新注射。