山豆根中苦参碱不同提取方法的对比研究
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稀盐酸为溶媒 ,采用渗漉法和温浸法从山豆根中提 取生物碱 。 21111 渗漉法从山豆根中提取苦参碱
步骤 :闷润 →封底 →装筒 →封顶 →加液 →浸渍 →渗漉
方法 : 取山豆根药粉 (01042 mm) 50 g ,置于大 烧杯中 ,加入适量 (约 40 mL ) 014 %的盐酸水溶液 , 拌润均匀 ,闷润 15～30 min 。取脱脂棉一小片 ,少 量 014 %盐酸水溶液润湿 ,轻轻垫在渗漉筒底部 ,铺 平 。然后将闷润后的药粉分多次装筒 ,并注意压匀 压平 (压紧些) ,上盖滤纸 ,加玻璃珠压稳 。打开渗漉 筒下口开关后 ,加入溶媒 (014 %盐酸) 。待有流出液 时关闭开关 。将流出液倒回筒内 。继续加入溶媒 , 当溶媒加到高出药面 4～5 cm 处 ,加盖放置 24 h 。 以 5 mL·min - 1的流速渗漉 。收集到 10 倍量的溶液 时 ,压渣取液合并 。循环水真空泵抽滤 。在恒温 80 ℃的水浴锅内加热蒸发 。浓缩干燥 ,制成干浸膏 ,干 膏得率为 618 %。其工艺流程图如图 1 所示 。 21112 温浸法从山豆根中提取苦参碱
/ mL·min - 1
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图 1 渗漉法从山豆根中提取苦参碱
图 2 温浸法从山豆根中提取苦参碱
212 超临界 CO2 萃取山豆根中苦参碱 取山豆根粗粉 ( 01042 mm) 50 g , 置入萃取罐
中 ,分别在表 1 所示的条件下萃取 。达到萃取时间 后 ,打开阀门 ,收集萃取物 。在 80 ℃的恒温条件下 水浴加热 ,挥去乙醇 ,浓缩 ,置电热恒温干燥箱中干
本实验主要考察了传统方法与超临界 CO2 萃 取方法从山豆根中提取生物碱的工艺的优劣 ,从而 确定从山豆根中提取苦参碱的最佳方法 。利用高效 液相色谱法检测传统方法与超临界方法提取的山豆 根中苦参碱的含量 。
在超临界萃取实验中 ,制冷温度不能过高 。如 果制冷温度过高 ,会导致 CO2 贮罐液位过低 ,使萃 取压力不能上升 。实验过程中要选择适当的制冷温 度。
[1 ] 祁彦 ,汪宝其 ,等. 苦参碱和氧化苦参碱的研究概况 [J ] . 西北药学杂志 ,1996 , (11) :62264.
[ 2 ] 李淑芬 ,等. 超临界 CO2 萃取天然产品的特性研究[J ] . 化工进展 ,1997 , (2) :10214.
Comparative Study on Extraction of Martine from Radix Sophore Tonkinesis by Different Methods
取山豆根药材粗粉 50 g ,加入 8 倍量的 014 % 的盐酸水溶液 。放置 30 min 后 ,于 60 ℃的恒温水 浴锅内加热提取 4 h 。过滤后 , 再 加 入 6 倍 量 的
收稿日期 :2007209210
1 8 化 工 技 术 与 开 发 第 37 卷
山豆根为豆科植物越南槐的根茎 ,主产广西 ,野 生 ,具有豆腥气 ,味极苦 ,具有清热解毒 ,祛风止痛 , 消肿利咽的功效 。其药理作用的主要基础物质为各 种生物碱 ,包括苦参碱 、氧化苦参碱 、安那吉碱和甲 基金雀花碱 。研究发现苦参碱类生物碱在中枢神经 系统 ,心血管系统 ,抗病毒 ,抗炎 ,免疫及抗肿瘤等方 面有重要的药理活性和应用前途[1 ] 。 超临界萃取技术 ( Supercritical Fluid Ext raition , 简称 SFE) 是 20 世纪 60 年代兴起的一种新型分离 技术 ,是利用超临界流体具有特异增加的溶解能力 而发展出来的化工分离新方法[2 ] 。山豆根的主要 成分为生物碱 ,高效液相色谱法 ( HPL C) 在生物碱 分析中广泛应用 。 本文分别采用 CO2 超临界萃取法与传统提取 方法提取山豆根中苦参碱 ,运用 HPL C 测定各萃取 物中苦参碱的含量 ,从而确定从山豆根中萃取苦参 碱的最佳方法 。
L IA N G Y an2m i ng , YA N G Xiao2x iao , GU O W ei
( Guangxi Hygiene Administration College ,Nanning 530021 ,China)
Abstract : The ext raction effect of martine f rom Radix Sophore Tonkinesis by different met hods was compared. The content of martine was determined by HPL C. The yield of martine by SFE was higher t han t he t raditional met hod. Key words : supercritical2CO2 ; HPL C ; Radix Sop horae Tonkinensis ; mat rine
摘 要 :采用渗漉法 、温浸法 2 种传统方法和 CO2 超临界萃取法分别提取山豆根中苦参碱 ,运用高效液相色谱 法 ,以苦参碱为标准品 ,测定各提取物中苦参碱的含量 ,考察了传统方法与超临界 CO2 萃取方法从山豆根中提取生 物碱的工艺的优劣 ,从而确定从山豆根中提取苦参碱的最佳方法 。结果表明 ,用超临界萃取方法萃取的苦参碱含 量比渗漉法高出 01072 % ,比温浸法高出 01105 % ,可看出 ,超临界萃取方法萃取的苦参碱的含量要高于传统方法 。 关键词 :超临界萃取 ;高效液相色谱法 ;山豆根 ;苦参碱 中图分类号 : R 28412 文献标识码 :A 文章编号 :167129905 (2008) 0420017203
使用的山豆根及实验中使用的试剂均为市售 。 95 %乙醇 (分析纯) 、37 %的盐酸 、苦参碱 ( Matrine ,
中国药品生物制品检定所提供) 、乙腈 (色谱纯) 、磷 酸二氢钠 (分析纯) ,所有实验用水为纯净水 。
2 实验方法
211 传统方法从山豆根中提取苦参碱 传统提取生物碱的方法有许多 ,本实验主要以
3 结果与讨论
311 样品的测定结果 按 21313 项制备的各样品溶液 (同一条件下平
行 3 个样品) 经滤过后在上述色谱条件下进样 ,每次 进样 10μL ,取平均值 ,测定结果如表 2 所示 。
第 4 期 梁燕明等 :山豆根中苦参碱不同提取方法的对比研究 19
213 HPLC 法测定苦参碱的含量 21311 色谱条件
色谱柱为迪马公司 ODS2C18 柱 ,150 L ×416 , 流动相为乙腈20105 mol·L - 1 磷酸二氢钠 (85∶15) ; 检测波长 210 nm ;流速为 110 mL·min - 1 。 21312 标准曲线的制备
1 实验材料
111 实验器材 9FZ214 粉碎机 , GM 3221 型超临界 CO2 萃取实
验装 置 , 电 热 恒 温 干 燥 箱 , 万 分 之 一 电 子 天 平 ; D ION EX 高效液相色谱仪 (包括 P680 泵 ,ASI2100 自动进样器 ,UVD340U 检测器 ,柱温控制系统) ;渗 漉筒 、大烧杯 、抽滤瓶 、布氏漏斗 、容量瓶等 。 112 药品与试剂
精密称取苦参碱的标准品 10 mg 于 10 mL 的 容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 配成 1000μg·mL - 1 的溶液 ,经 0145 μm 的微孔滤膜滤 过 ,分别进样 10 、5 、215 、1 、015 mL ,按上述色谱条件 测定 ,以峰面积对浓度 (μg·mL - 1) 进行回归 ,得回归 方程为 Y = 016169 X + 513937 , R2 = 019995 。苦参 碱浓度范围为 510～1000 μg·mL - 1时 ,峰面积与苦 参碱的浓度呈良好的线性关系 。 21313 样品溶液的制备
分别精密称取渗漉法 、温浸法和超临界萃取法 所得浸膏各约 0115 g ,用氨水调纯净的甲醇 p H = 9 左右 ,分别用该碱性的甲醇溶解浸膏 ,超声振荡提取 30 min (加入甲醇的体积不大于 10 mL ) 。将该溶液 置于离心管中 , 高速离心机离心 25 min 。取上清 液 ,加入 p H = 9 左右的甲醇溶液 ,定容于 10 mL 的 容量瓶中 ,得样品溶液 ,并对样品进行稳定性实验 、 精密度实验 、重现性实验 、加样回收率实验 ,均符合 要求 。
第
37 卷 第 4 2008 年 4 月
期
化
Technology
工 技 术 与 & Development of
开 发 Chemical
Indust ry
Vol137 No14 Ap r12008
山豆根中苦参碱不同提取方法的对比研究
梁燕明 ,郭 伟
(广西卫生管理干部学院 ,广西 南宁 530021)
014 %的盐酸 ,于 60 ℃的恒温水浴锅内加热提取 4 h 。合并提取液 。加热浓缩 ,干燥 ,制成干浸膏 ,干膏 得率为 710 %。提取工艺如图 2 所示 。
燥 ,制成干浸膏 ,干膏得率为 517 %。
表 1 超临界 CO2 萃取条件
样品序号
温度 /℃
压力 萃取时间 夹带剂流速
/ MPa
/h
表 2 样品的测定结果
序号
超临 界1
超临 界2
超临 界3
超临 界4
超临 界5
渗漉
温浸
苦参碱/ % 01373 01403 01361 01387 01329 01331 01298
对实验结果进行分析 ,以超临界萃取方法萃取 的苦参碱含量比渗漉法高出 01072 % ,比温浸法高 出 01105 % ,可看出 ,超临界萃取方法萃取的苦参碱 的含量要高于传统方法 。再加上超临界萃取方法清 洁卫生 ,萃取时间短 ,而传统方法操作繁琐 ,人为影 响因素过大 ,因此超临界萃取方法成为从山豆根中 萃取苦参碱的较理想的方法 。 在超临界萃取的 5 个提取条件中 ,较优的条件 为 :萃取压力 20 MPa , 温度为 50 ℃, 提取时间为 215 h ,夹带剂为 95 %的乙醇 ,夹带剂流量为 8 mL · min - 1 。 312 讨论
wenku.baidu.com
夹带剂流量计算公式丢失 ,我们通过实际测定 夹带剂泵头每一刻度处 ,单位时间内流出的夹带剂 体积 ,来测定夹带剂流量 。
在渗漉法萃取山豆根中苦参碱时 ,装筒时一定 要压平压紧 ,压在滤纸上的石子密度一定要大 ,否 则 ,药粉会悬浮于溶剂中 。
在 HPL C 法测定苦参碱含量时 ,刚开始我们依 据资料选用甲醇2水2三乙胺 ( 55 ∶45 ∶0102) 为流动 相 ,209 nm 为检测波长 。但是该条件下样品的分离 效果不好 ,而且样品在应该出苦参碱峰处出负峰 ,基 线也不够平稳 。经查阅资料 ,甲醇在紫外检测条件 下 ,在 210 nm 处有吸收 。因此 ,我们选用乙腈2水2 磷酸二氢钠适当比例为流动相 。 参考文献 :
步骤 :闷润 →封底 →装筒 →封顶 →加液 →浸渍 →渗漉
方法 : 取山豆根药粉 (01042 mm) 50 g ,置于大 烧杯中 ,加入适量 (约 40 mL ) 014 %的盐酸水溶液 , 拌润均匀 ,闷润 15～30 min 。取脱脂棉一小片 ,少 量 014 %盐酸水溶液润湿 ,轻轻垫在渗漉筒底部 ,铺 平 。然后将闷润后的药粉分多次装筒 ,并注意压匀 压平 (压紧些) ,上盖滤纸 ,加玻璃珠压稳 。打开渗漉 筒下口开关后 ,加入溶媒 (014 %盐酸) 。待有流出液 时关闭开关 。将流出液倒回筒内 。继续加入溶媒 , 当溶媒加到高出药面 4～5 cm 处 ,加盖放置 24 h 。 以 5 mL·min - 1的流速渗漉 。收集到 10 倍量的溶液 时 ,压渣取液合并 。循环水真空泵抽滤 。在恒温 80 ℃的水浴锅内加热蒸发 。浓缩干燥 ,制成干浸膏 ,干 膏得率为 618 %。其工艺流程图如图 1 所示 。 21112 温浸法从山豆根中提取苦参碱
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图 1 渗漉法从山豆根中提取苦参碱
图 2 温浸法从山豆根中提取苦参碱
212 超临界 CO2 萃取山豆根中苦参碱 取山豆根粗粉 ( 01042 mm) 50 g , 置入萃取罐
中 ,分别在表 1 所示的条件下萃取 。达到萃取时间 后 ,打开阀门 ,收集萃取物 。在 80 ℃的恒温条件下 水浴加热 ,挥去乙醇 ,浓缩 ,置电热恒温干燥箱中干
本实验主要考察了传统方法与超临界 CO2 萃 取方法从山豆根中提取生物碱的工艺的优劣 ,从而 确定从山豆根中提取苦参碱的最佳方法 。利用高效 液相色谱法检测传统方法与超临界方法提取的山豆 根中苦参碱的含量 。
在超临界萃取实验中 ,制冷温度不能过高 。如 果制冷温度过高 ,会导致 CO2 贮罐液位过低 ,使萃 取压力不能上升 。实验过程中要选择适当的制冷温 度。
[1 ] 祁彦 ,汪宝其 ,等. 苦参碱和氧化苦参碱的研究概况 [J ] . 西北药学杂志 ,1996 , (11) :62264.
[ 2 ] 李淑芬 ,等. 超临界 CO2 萃取天然产品的特性研究[J ] . 化工进展 ,1997 , (2) :10214.
Comparative Study on Extraction of Martine from Radix Sophore Tonkinesis by Different Methods
取山豆根药材粗粉 50 g ,加入 8 倍量的 014 % 的盐酸水溶液 。放置 30 min 后 ,于 60 ℃的恒温水 浴锅内加热提取 4 h 。过滤后 , 再 加 入 6 倍 量 的
收稿日期 :2007209210
1 8 化 工 技 术 与 开 发 第 37 卷
山豆根为豆科植物越南槐的根茎 ,主产广西 ,野 生 ,具有豆腥气 ,味极苦 ,具有清热解毒 ,祛风止痛 , 消肿利咽的功效 。其药理作用的主要基础物质为各 种生物碱 ,包括苦参碱 、氧化苦参碱 、安那吉碱和甲 基金雀花碱 。研究发现苦参碱类生物碱在中枢神经 系统 ,心血管系统 ,抗病毒 ,抗炎 ,免疫及抗肿瘤等方 面有重要的药理活性和应用前途[1 ] 。 超临界萃取技术 ( Supercritical Fluid Ext raition , 简称 SFE) 是 20 世纪 60 年代兴起的一种新型分离 技术 ,是利用超临界流体具有特异增加的溶解能力 而发展出来的化工分离新方法[2 ] 。山豆根的主要 成分为生物碱 ,高效液相色谱法 ( HPL C) 在生物碱 分析中广泛应用 。 本文分别采用 CO2 超临界萃取法与传统提取 方法提取山豆根中苦参碱 ,运用 HPL C 测定各萃取 物中苦参碱的含量 ,从而确定从山豆根中萃取苦参 碱的最佳方法 。
L IA N G Y an2m i ng , YA N G Xiao2x iao , GU O W ei
( Guangxi Hygiene Administration College ,Nanning 530021 ,China)
Abstract : The ext raction effect of martine f rom Radix Sophore Tonkinesis by different met hods was compared. The content of martine was determined by HPL C. The yield of martine by SFE was higher t han t he t raditional met hod. Key words : supercritical2CO2 ; HPL C ; Radix Sop horae Tonkinensis ; mat rine
摘 要 :采用渗漉法 、温浸法 2 种传统方法和 CO2 超临界萃取法分别提取山豆根中苦参碱 ,运用高效液相色谱 法 ,以苦参碱为标准品 ,测定各提取物中苦参碱的含量 ,考察了传统方法与超临界 CO2 萃取方法从山豆根中提取生 物碱的工艺的优劣 ,从而确定从山豆根中提取苦参碱的最佳方法 。结果表明 ,用超临界萃取方法萃取的苦参碱含 量比渗漉法高出 01072 % ,比温浸法高出 01105 % ,可看出 ,超临界萃取方法萃取的苦参碱的含量要高于传统方法 。 关键词 :超临界萃取 ;高效液相色谱法 ;山豆根 ;苦参碱 中图分类号 : R 28412 文献标识码 :A 文章编号 :167129905 (2008) 0420017203
使用的山豆根及实验中使用的试剂均为市售 。 95 %乙醇 (分析纯) 、37 %的盐酸 、苦参碱 ( Matrine ,
中国药品生物制品检定所提供) 、乙腈 (色谱纯) 、磷 酸二氢钠 (分析纯) ,所有实验用水为纯净水 。
2 实验方法
211 传统方法从山豆根中提取苦参碱 传统提取生物碱的方法有许多 ,本实验主要以
3 结果与讨论
311 样品的测定结果 按 21313 项制备的各样品溶液 (同一条件下平
行 3 个样品) 经滤过后在上述色谱条件下进样 ,每次 进样 10μL ,取平均值 ,测定结果如表 2 所示 。
第 4 期 梁燕明等 :山豆根中苦参碱不同提取方法的对比研究 19
213 HPLC 法测定苦参碱的含量 21311 色谱条件
色谱柱为迪马公司 ODS2C18 柱 ,150 L ×416 , 流动相为乙腈20105 mol·L - 1 磷酸二氢钠 (85∶15) ; 检测波长 210 nm ;流速为 110 mL·min - 1 。 21312 标准曲线的制备
1 实验材料
111 实验器材 9FZ214 粉碎机 , GM 3221 型超临界 CO2 萃取实
验装 置 , 电 热 恒 温 干 燥 箱 , 万 分 之 一 电 子 天 平 ; D ION EX 高效液相色谱仪 (包括 P680 泵 ,ASI2100 自动进样器 ,UVD340U 检测器 ,柱温控制系统) ;渗 漉筒 、大烧杯 、抽滤瓶 、布氏漏斗 、容量瓶等 。 112 药品与试剂
精密称取苦参碱的标准品 10 mg 于 10 mL 的 容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 配成 1000μg·mL - 1 的溶液 ,经 0145 μm 的微孔滤膜滤 过 ,分别进样 10 、5 、215 、1 、015 mL ,按上述色谱条件 测定 ,以峰面积对浓度 (μg·mL - 1) 进行回归 ,得回归 方程为 Y = 016169 X + 513937 , R2 = 019995 。苦参 碱浓度范围为 510～1000 μg·mL - 1时 ,峰面积与苦 参碱的浓度呈良好的线性关系 。 21313 样品溶液的制备
分别精密称取渗漉法 、温浸法和超临界萃取法 所得浸膏各约 0115 g ,用氨水调纯净的甲醇 p H = 9 左右 ,分别用该碱性的甲醇溶解浸膏 ,超声振荡提取 30 min (加入甲醇的体积不大于 10 mL ) 。将该溶液 置于离心管中 , 高速离心机离心 25 min 。取上清 液 ,加入 p H = 9 左右的甲醇溶液 ,定容于 10 mL 的 容量瓶中 ,得样品溶液 ,并对样品进行稳定性实验 、 精密度实验 、重现性实验 、加样回收率实验 ,均符合 要求 。
第
37 卷 第 4 2008 年 4 月
期
化
Technology
工 技 术 与 & Development of
开 发 Chemical
Indust ry
Vol137 No14 Ap r12008
山豆根中苦参碱不同提取方法的对比研究
梁燕明 ,郭 伟
(广西卫生管理干部学院 ,广西 南宁 530021)
014 %的盐酸 ,于 60 ℃的恒温水浴锅内加热提取 4 h 。合并提取液 。加热浓缩 ,干燥 ,制成干浸膏 ,干膏 得率为 710 %。提取工艺如图 2 所示 。
燥 ,制成干浸膏 ,干膏得率为 517 %。
表 1 超临界 CO2 萃取条件
样品序号
温度 /℃
压力 萃取时间 夹带剂流速
/ MPa
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表 2 样品的测定结果
序号
超临 界1
超临 界2
超临 界3
超临 界4
超临 界5
渗漉
温浸
苦参碱/ % 01373 01403 01361 01387 01329 01331 01298
对实验结果进行分析 ,以超临界萃取方法萃取 的苦参碱含量比渗漉法高出 01072 % ,比温浸法高 出 01105 % ,可看出 ,超临界萃取方法萃取的苦参碱 的含量要高于传统方法 。再加上超临界萃取方法清 洁卫生 ,萃取时间短 ,而传统方法操作繁琐 ,人为影 响因素过大 ,因此超临界萃取方法成为从山豆根中 萃取苦参碱的较理想的方法 。 在超临界萃取的 5 个提取条件中 ,较优的条件 为 :萃取压力 20 MPa , 温度为 50 ℃, 提取时间为 215 h ,夹带剂为 95 %的乙醇 ,夹带剂流量为 8 mL · min - 1 。 312 讨论
wenku.baidu.com
夹带剂流量计算公式丢失 ,我们通过实际测定 夹带剂泵头每一刻度处 ,单位时间内流出的夹带剂 体积 ,来测定夹带剂流量 。
在渗漉法萃取山豆根中苦参碱时 ,装筒时一定 要压平压紧 ,压在滤纸上的石子密度一定要大 ,否 则 ,药粉会悬浮于溶剂中 。
在 HPL C 法测定苦参碱含量时 ,刚开始我们依 据资料选用甲醇2水2三乙胺 ( 55 ∶45 ∶0102) 为流动 相 ,209 nm 为检测波长 。但是该条件下样品的分离 效果不好 ,而且样品在应该出苦参碱峰处出负峰 ,基 线也不够平稳 。经查阅资料 ,甲醇在紫外检测条件 下 ,在 210 nm 处有吸收 。因此 ,我们选用乙腈2水2 磷酸二氢钠适当比例为流动相 。 参考文献 :