白血病患者FLT3基因第二酪氨酸激酶结构域点突变分析
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4 Huang G, Shigesada K, Ito K, et aLeabharlann Baidu. D imerization w ith PEBP2β p ro2 tects RUNX1 /AML1 from ubiquitin2p roteasome2mediated degradation. EMBO J, 2001, 20: 7232733.
5 Castill LH, W ijmenga C, W ang Q , et al. Failure of embryonic hema2
topoiesis and lethal hemorrhages in mouse embryos heterozygous for a knocked2in leukem ia gene CBFβ2MYH11. Cell, 1996, 87: 6872696. 6 Kanno Y, Kanno T, Sakakura C, et al. Cytop lasm ic sequestration of the polyomavirus enhancer binding p rotein 2 related PEBP2 /CBFβ2 SMMHC fusion p rotein inhibits PEBP2 /CBF2mediated transactivation. Mol Cell B iol, 1998, 18: 425224261. 7 Lutterbach B , Hou Y, Durst KL , et al. The inv ( 16 ) encodes an
acute myeloid leukem ia 1 transcrip tional corep ressor. Proc Natl Acad Sci U S A , 1999, 96: 12822212827. 8 Castilla LH , Garrett L, Adya N , et al. The fusion gene Cbfb2MYH11 blocks myeloid differentiation and p redisposes m ice to acute my2 elomonocytic leukem ia. Nature Genetics, 1999, 23: 1442146.
Fm s样酪氨酸激酶 3 ( Fm s2like tyrosine kinase 3, FLT3)属于 Ⅲ型受体酪氨酸激酶 ( RTK) ,与其配 体 ( FL )在造血干 /祖细胞的增殖和分化中起重要的 调节作用 。 FLT3受体与其他 Ⅲ型 RTK受体有共同 的结构特征 :胞外区有 5个 Ig样结构域 ,胞内区含 1 个近膜结构域 (JM ) 、2个被激酶插入结构域 ( KI)分 开的 酪 氨 酸 激 酶 结 构 域 ( tyrosine kinase domain, TKD )和 1个 C末端结构域 [ 1 ] 。当配体与 RTK的细 胞外结构域结合时 , RTK二聚体化 ,使激酶结构域 的活化环 ( activation loop , A 2loop )构象发生改变 ,酪 氨酸残基磷酸化 ,从而与多种胞浆蛋白作用 ,介导细 胞内信号传导 ,导致细胞增殖和活化 。当 FLT3 基 因突变时 ,可导致非配体依赖性磷酸化 ,提示 FLT3 突变与白血病发生相关 [ 2 ] 。我们前期研究了 FLT3 基因发生在 JM 区的突变型 2内部串联重复 ( internal tandem dup lication, ITD )在白血病患者中的发病情 况 ,显示 FLT32ITD 阳性的急性髓系白血病 (AML ) 患者外周血白细胞数高 , 疗效差 [ 3 ] 。近年国外研究 发现 ,在 FLT3基因第 2个 TKD 的 A 2loop 也存在一 种点突变 ,同样与急性白血病的发生密切相关 。我 们拟对此组白血病患者的 FLT32TKD2 点突变及其 临床相关性进行初步探讨 。
D etection of po in t m uta tion a t second tyrosine k ina se doma in of FL T3 gene in acute m yelo id leukem ia WAN G L i2hong, WAN G M in, ZHOU Chun2lin, CHEN S en, ZHAN G X in2w ei, X IN G Ha i2yan, WAN G J ian2 x iang. S ta te Key L abora tory of Experim en ta l Hem a tology, D epa rtm en t of C lin ica l Hem a tology, Institu te of He2 m a tology and B lood D iseases Hospita l, CAM S and PUM C, T ian jin 300020, Ch ina
(收稿日期 : 2004207209)
·336·
中华血液学杂志 2005年 6月第 26卷第 6期 Chin J Hematol, June 2005, Vol 26, No. 6
leukem ia (ALL ) , 2 acute hybrid leukem ia (AHL ) , 17 myelodysp lastic syndrom s (MDS) and 7 chronic my2 elogenous leukem ia in blast crisis (CML 2BC) was screened by polymerase chain reaction ( PCR ) and gel e2 lectrophoresis for FLT32TKD point mutations. Results Among AML patients, FLT32TKD point mutation ( FLT32TKD + ) rate was 6. 3% (9 /143) , an incidence significantly lower than that of internal tandem dup li2 cation ( ITD ) mutation (37 /143, 25. 9% , P < 0. 01). According to the FAB classification, FLT32TKD point mutation was found in 3 /53 of M2 , 3 /40 of M3 , 2 /23 of M5 and 1 /2 of M6 subtypes. Two patients showed both ITD and TKD mutations. No FLT3 2TDK mutation was found in 25 ALL , 2 AHL , 17 MDS and 7 CML 2BC patients. Sequence analysis showed that one of the mutations occurred at codon 835 of FLT3. The substitution of the first nucleotide T for G of D835, resulted in D835Y, a m issense mutation. The p resence of TKD muta2 tions was related neither to age, sex, nor to WBC counts, the marrow blast percentages, and CR rates for in2 duction therapy. Conclusion The incidence of FLT32TKD + is significantly lower than that of ITD mutation. FLT32TKD mutations may occur alone or together w ith ITD mutation. In contrast to FLT32ITD mutation, TKD mutations were not associated with leukocytosis or low comp lete rem ission rate. 【Key words】 Gene, FLT3 ; DNA mutation analysis; Leukem ia
中华血液学杂志 2005年 6月第 26卷第 6期 Chin J Hematol, June 2005, Vol 26, No. 6
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·论著 ·
白血病患者 FLT3基因第二酪氨酸激酶 结构域点突变分析
王莉红 王敏 周春林 陈森 张新伟 邢海燕 王建祥
【摘要 】 目的 研究 FLT3基因酪氨酸激酶结构域 ( TKD )点突变与急性白血病的关系及临床意 义 。方法 采用 PCR结合限制性内切酶酶切及序列测定 ,检测 143例急性髓系白血病 (AML ) 、25例 急性淋巴细胞白血病 (ALL ) 、2例急性杂合细胞白血病 (AHL ) 、17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 7 例慢性粒细胞白血病 2急变期 (CML 2BC)患者骨髓单个核细胞中 FLT3 基因外显子 20 中的 TKD 点突 变 ,分析其临床相关性 。结果 143例 AML患者中 9例 (6. 3% )存在 FLT32TKD 点突变 ( FLT32TKD + ) , 阳性率显著低于 FLT3基因内部串联重复 ( ITD )突变 ( 25. 9% , P < 0. 01) 。 FLT32TKD +存在于 AML 2 M2 (3 /53) 、M3 (3 /40) 、M5 ( 2 /23 ) 、M6 ( 1 /2 )亚型中 。 2 例 FL T32TKD + 患者同时存在 FLT32ITD 突变 , M2、M3 各 1例 。在 25例 ALL、2例 AHL、17例 MDS和 7例 CML 2BC患者中未检测到 FLT32TKD + 。测 序分析显示 TKD 点突变累及密码子 D835,未改变 FLT3的开放式阅读框架 ,为错义突变 。D835的第 1 个核苷酸 G被 T替换 ,即 D835Y。 FLT32TKD +组和 FLT32TKD - 组在性别 、年龄组成 、白细胞计数 、骨髓 原始细胞比例及化疗缓解率方面差异无统计学意义 。结论 AML 患者中 FLT32TKD 点突变的阳性率 显著低于 FLT32ITD。 TKD 点突变累及密码子 D835,为错义突变 。 TKD 点突变可单独存在 ,也可与 ITD 同时存在 。与 FLT32ITD 相比 , TKD点突变与高白细胞无关 。 【关键词 】 基因 , FLT3 ; DNA突变分析 ; 白血病
参考文献
1 肖志坚 ,郝玉书. 转录因子 PEBP2 /CBF与白血病. 国外医学输血 及血液学分册 , 1998, 21: 77280.
2 肖志坚 ,郝玉书 ,钱林生 ,等. 急性髓系白血病 M4Eo八例特点分析. 中华血液学杂志 , 1995, 16: 477.
3 van Dongen JJM , Macintyre EA , Gabert JA , et al. Standardized RT2 PCR analysis of fusion gene transcrip ts from chromosome aberrations in acute leukem ia for detection of m inimal residual disease. Leukem ia, 1999, 13: 190121928.
Correspond ing au thor: WAN G J ian2xiang 【Abstract】 O bjective To evaluate the p revalence of a novel FLT3 activating mutation in tyrosine kinase domain ( TDK) in acute leukem ia patients and its clinical imp lication. M ethods Genom ic DNA
from bone marrow mononuclear cells of 143 cases of acute myeloid leukem ia (AML ) , 25 acute lymphocytic
基金项目 :国家杰出青年基金资助项目 (30025019) ;国家自然科学基金资助项目 (30370593) 作者单位 : 300020 天津 ,中国医学科学院 、中国协和医科大学血液学研究所 、血液病医院 实验血液学国家重点实验室 通信作者 :王建祥
5 Castill LH, W ijmenga C, W ang Q , et al. Failure of embryonic hema2
topoiesis and lethal hemorrhages in mouse embryos heterozygous for a knocked2in leukem ia gene CBFβ2MYH11. Cell, 1996, 87: 6872696. 6 Kanno Y, Kanno T, Sakakura C, et al. Cytop lasm ic sequestration of the polyomavirus enhancer binding p rotein 2 related PEBP2 /CBFβ2 SMMHC fusion p rotein inhibits PEBP2 /CBF2mediated transactivation. Mol Cell B iol, 1998, 18: 425224261. 7 Lutterbach B , Hou Y, Durst KL , et al. The inv ( 16 ) encodes an
acute myeloid leukem ia 1 transcrip tional corep ressor. Proc Natl Acad Sci U S A , 1999, 96: 12822212827. 8 Castilla LH , Garrett L, Adya N , et al. The fusion gene Cbfb2MYH11 blocks myeloid differentiation and p redisposes m ice to acute my2 elomonocytic leukem ia. Nature Genetics, 1999, 23: 1442146.
Fm s样酪氨酸激酶 3 ( Fm s2like tyrosine kinase 3, FLT3)属于 Ⅲ型受体酪氨酸激酶 ( RTK) ,与其配 体 ( FL )在造血干 /祖细胞的增殖和分化中起重要的 调节作用 。 FLT3受体与其他 Ⅲ型 RTK受体有共同 的结构特征 :胞外区有 5个 Ig样结构域 ,胞内区含 1 个近膜结构域 (JM ) 、2个被激酶插入结构域 ( KI)分 开的 酪 氨 酸 激 酶 结 构 域 ( tyrosine kinase domain, TKD )和 1个 C末端结构域 [ 1 ] 。当配体与 RTK的细 胞外结构域结合时 , RTK二聚体化 ,使激酶结构域 的活化环 ( activation loop , A 2loop )构象发生改变 ,酪 氨酸残基磷酸化 ,从而与多种胞浆蛋白作用 ,介导细 胞内信号传导 ,导致细胞增殖和活化 。当 FLT3 基 因突变时 ,可导致非配体依赖性磷酸化 ,提示 FLT3 突变与白血病发生相关 [ 2 ] 。我们前期研究了 FLT3 基因发生在 JM 区的突变型 2内部串联重复 ( internal tandem dup lication, ITD )在白血病患者中的发病情 况 ,显示 FLT32ITD 阳性的急性髓系白血病 (AML ) 患者外周血白细胞数高 , 疗效差 [ 3 ] 。近年国外研究 发现 ,在 FLT3基因第 2个 TKD 的 A 2loop 也存在一 种点突变 ,同样与急性白血病的发生密切相关 。我 们拟对此组白血病患者的 FLT32TKD2 点突变及其 临床相关性进行初步探讨 。
D etection of po in t m uta tion a t second tyrosine k ina se doma in of FL T3 gene in acute m yelo id leukem ia WAN G L i2hong, WAN G M in, ZHOU Chun2lin, CHEN S en, ZHAN G X in2w ei, X IN G Ha i2yan, WAN G J ian2 x iang. S ta te Key L abora tory of Experim en ta l Hem a tology, D epa rtm en t of C lin ica l Hem a tology, Institu te of He2 m a tology and B lood D iseases Hospita l, CAM S and PUM C, T ian jin 300020, Ch ina
(收稿日期 : 2004207209)
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中华血液学杂志 2005年 6月第 26卷第 6期 Chin J Hematol, June 2005, Vol 26, No. 6
leukem ia (ALL ) , 2 acute hybrid leukem ia (AHL ) , 17 myelodysp lastic syndrom s (MDS) and 7 chronic my2 elogenous leukem ia in blast crisis (CML 2BC) was screened by polymerase chain reaction ( PCR ) and gel e2 lectrophoresis for FLT32TKD point mutations. Results Among AML patients, FLT32TKD point mutation ( FLT32TKD + ) rate was 6. 3% (9 /143) , an incidence significantly lower than that of internal tandem dup li2 cation ( ITD ) mutation (37 /143, 25. 9% , P < 0. 01). According to the FAB classification, FLT32TKD point mutation was found in 3 /53 of M2 , 3 /40 of M3 , 2 /23 of M5 and 1 /2 of M6 subtypes. Two patients showed both ITD and TKD mutations. No FLT3 2TDK mutation was found in 25 ALL , 2 AHL , 17 MDS and 7 CML 2BC patients. Sequence analysis showed that one of the mutations occurred at codon 835 of FLT3. The substitution of the first nucleotide T for G of D835, resulted in D835Y, a m issense mutation. The p resence of TKD muta2 tions was related neither to age, sex, nor to WBC counts, the marrow blast percentages, and CR rates for in2 duction therapy. Conclusion The incidence of FLT32TKD + is significantly lower than that of ITD mutation. FLT32TKD mutations may occur alone or together w ith ITD mutation. In contrast to FLT32ITD mutation, TKD mutations were not associated with leukocytosis or low comp lete rem ission rate. 【Key words】 Gene, FLT3 ; DNA mutation analysis; Leukem ia
中华血液学杂志 2005年 6月第 26卷第 6期 Chin J Hematol, June 2005, Vol 26, No. 6
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·论著 ·
白血病患者 FLT3基因第二酪氨酸激酶 结构域点突变分析
王莉红 王敏 周春林 陈森 张新伟 邢海燕 王建祥
【摘要 】 目的 研究 FLT3基因酪氨酸激酶结构域 ( TKD )点突变与急性白血病的关系及临床意 义 。方法 采用 PCR结合限制性内切酶酶切及序列测定 ,检测 143例急性髓系白血病 (AML ) 、25例 急性淋巴细胞白血病 (ALL ) 、2例急性杂合细胞白血病 (AHL ) 、17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 7 例慢性粒细胞白血病 2急变期 (CML 2BC)患者骨髓单个核细胞中 FLT3 基因外显子 20 中的 TKD 点突 变 ,分析其临床相关性 。结果 143例 AML患者中 9例 (6. 3% )存在 FLT32TKD 点突变 ( FLT32TKD + ) , 阳性率显著低于 FLT3基因内部串联重复 ( ITD )突变 ( 25. 9% , P < 0. 01) 。 FLT32TKD +存在于 AML 2 M2 (3 /53) 、M3 (3 /40) 、M5 ( 2 /23 ) 、M6 ( 1 /2 )亚型中 。 2 例 FL T32TKD + 患者同时存在 FLT32ITD 突变 , M2、M3 各 1例 。在 25例 ALL、2例 AHL、17例 MDS和 7例 CML 2BC患者中未检测到 FLT32TKD + 。测 序分析显示 TKD 点突变累及密码子 D835,未改变 FLT3的开放式阅读框架 ,为错义突变 。D835的第 1 个核苷酸 G被 T替换 ,即 D835Y。 FLT32TKD +组和 FLT32TKD - 组在性别 、年龄组成 、白细胞计数 、骨髓 原始细胞比例及化疗缓解率方面差异无统计学意义 。结论 AML 患者中 FLT32TKD 点突变的阳性率 显著低于 FLT32ITD。 TKD 点突变累及密码子 D835,为错义突变 。 TKD 点突变可单独存在 ,也可与 ITD 同时存在 。与 FLT32ITD 相比 , TKD点突变与高白细胞无关 。 【关键词 】 基因 , FLT3 ; DNA突变分析 ; 白血病
参考文献
1 肖志坚 ,郝玉书. 转录因子 PEBP2 /CBF与白血病. 国外医学输血 及血液学分册 , 1998, 21: 77280.
2 肖志坚 ,郝玉书 ,钱林生 ,等. 急性髓系白血病 M4Eo八例特点分析. 中华血液学杂志 , 1995, 16: 477.
3 van Dongen JJM , Macintyre EA , Gabert JA , et al. Standardized RT2 PCR analysis of fusion gene transcrip ts from chromosome aberrations in acute leukem ia for detection of m inimal residual disease. Leukem ia, 1999, 13: 190121928.
Correspond ing au thor: WAN G J ian2xiang 【Abstract】 O bjective To evaluate the p revalence of a novel FLT3 activating mutation in tyrosine kinase domain ( TDK) in acute leukem ia patients and its clinical imp lication. M ethods Genom ic DNA
from bone marrow mononuclear cells of 143 cases of acute myeloid leukem ia (AML ) , 25 acute lymphocytic
基金项目 :国家杰出青年基金资助项目 (30025019) ;国家自然科学基金资助项目 (30370593) 作者单位 : 300020 天津 ,中国医学科学院 、中国协和医科大学血液学研究所 、血液病医院 实验血液学国家重点实验室 通信作者 :王建祥