ABO血型鉴定和交叉配血实验
ABO血型鉴定及交叉配血
ABO血型鉴定12应用心理学(1) 余歌子2012326670018一、目的1.学习辨别血型的方法2.观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理二、原理ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A 血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A 凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A 型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。
三、材料和方法1.材料：标准A血清，标准B血清，载玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，尖头滴管，显微镜。
2.方法：（1）在载玻片上分别滴上标准A血清和标准B血清。
（2）用75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，滴少量血与标准A血清和标准B血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（3）根据凝集现象的有无判断血型四、观察项目ABO血型鉴定五、实验结果（1）血液滴在标准A、B血清中都没有发生凝结，为O型血（2）血液滴在标准A、B血清中都发生凝结，为AB型血（3）血液滴在标准A血清发生凝结、B血清中都没有发生凝结，为A型血（4）血液滴在标准B血清发生凝结、A血清中都没有发生凝结，为B型血六、讨论及结论1.根据你自己的血型，说明你能接受何种血型的血液和输血给何种血型的人，为什么？答：O型血，可以接受O型血，可以输血给任何血型的人。
异性输血的原理：抗体稀释到一定程度时就不再凝聚抗原，就可以把有抗体血液经稀释输给有相映抗原的人。
2.在没有标准血清的条件下，如果只知1人为A型血，能否测知全班人血型，如何进行？答：可以，提取该同学的血液，制成红细胞悬液和血清，使其分别于其3.A型标准血清和B型标准血请中各自所含何种凝集素？答：标准A、B血清中分别含有抗A、B凝集素。
4.试根据父母的血型，写出后代的可能血型：。
血型鉴定与交叉配血
＋表示凝集，－表示无凝集
对抗血清的要求※
①高度特异，只能与相应的红细胞抗原发
生凝集，无非特异性凝集， ABO
血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ③高亲和力，15秒内出现凝集，其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定
②高效价，抗A血清效价在1:128以上，
④无冷凝集素。
⑤无菌。分离血清后56℃，30min灭活。
型 （2）立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 （3）观察及判断血型结果①阳性：对照管细胞沉
淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。
（4）报告方式：同生理盐水法。
注意事项
ABO 血 型 鉴 定
【注意事项】
交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明， 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
3.配血后，受血者/供血者的全部标本 须于2～6℃冰箱保存7d以备复查。
交 叉 配 血
（ 盐 水 凝 集 法 ）
【方法学评价】
本法简易、经济、快速，缺点是
仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配，不能检出不 相配的IgG血型抗体。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
查找原因。
②异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧
有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、
次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，
需查找原因
交 叉 （1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx 配 （X型）红细胞 凝集与否及强弱程度 血 （ （2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx
交叉配血试验的注意事项
ABO血型鉴定及交叉配血
血型基因位于第9对染色体上， 基因名为ABO，由A、B和O三个 等位基因控制遗传。
基因特性
ABO血 型系统
ABO血型系统中A和B基因是显性基 因，O基因是隐性基因。
各基因编码产物
O基因编码产物无酶活性
各基因编码产物
B基因编码半乳糖转移酶
各基因编码产物
A基因编码N-乙酰半乳糖胺 转移酶
根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
+
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
受检者血型
A B O AB
思考题？
ABO反定型鉴定
1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？
如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自 身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性， 则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。 2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？
1 A型
红细胞膜上只具有A抗 原
实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验七ABO血型鉴定及交叉配血实验一、实验目的通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。
二、实验原理血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。
ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。
在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。
A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。
血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。
在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。
统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。
所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。
ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。
输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。
只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。
如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
三、实验材料人外周血四、实验器材与试剂(一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。
(二)仪器显微镜、离心机。
(三)试剂标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。
五、实验操作（一）ABO血型鉴定1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。
ABO血型鉴定、交叉配血的质量控制管理
ABO血型鉴定、交叉配血的质量控制管理目的探究ABO血型鉴定结果的影响方法以及质量控制方法，探究交叉配血的质量影响因素以及质量控制管理方法。
方法从血库中随机采集试样 2 000份进行实验，初步的血型鉴定试验采用试管凝集法，鉴定之后采取交叉配血实验检验血型鉴定是否正确。
实验中所使用的血样应均为同一时间采集的并保存完好的，用以排除其他因素的干扰。
结果通过试管凝集法鉴定血型的血样，经过交叉配血之后验证，发现检验的正确率为97.35%。
在检验的血样中，血型鉴定的结果为A型血液样本占47.90%，B型血液样本占16.20%，AB型血液样本占14.90%，O型血液样本占21.00%。
结论ABO血型鉴定中存在许多应特别注意的方面，在实际操作中应严谨按照标准操作以保证检验的正确性。
标签：血型鉴定；交叉配血；质量控制；管理ABO血型分类的主要依据是人类的红细胞表面含有不同种类的抗原，根据红细胞表面所含抗原的不同将血型分为A型、B型、O型、AB型4类，其中，A型血红细胞表面只有凝集原A，而其血清中含有抗B的凝集素；对于B型血，其红细胞上含有凝集原B，与A型血不同的是，其血清中存在抗A的凝集素；AB型血的红细胞的表面含有凝集素A与凝集素B，其血清中不存在抗A或抗B 的凝集素，所以AB型血的人群可以少量接受其他血型的人群的献血；而对于O 型血的人群来说，其红细胞上既没有A种凝集素，也无B种凝集素，其血清中同时含有抗A、抗B的两种凝集素，所以O型血的人群的血可以少量输给不同血型的人，而不能接受不同血型人群的血[1]。
由于当某种凝集原遇到同种类的凝集素时会发生凝集反应，所以随意输血会导致严重后果。
交叉配血实验不仅在输入未知血型的血液之前要进行，而且在输入同种类型的血液以及再一次接受相同来源的血液时也要进行交叉配血实验，以保证输血的安全。
1 材料与方法1.1 材料来源及管理选取在2015年4月—2017年4月之间来该院进行血液检测的血液样本2 000例，供血者的年龄在17～80岁不等，保证血液质量，未受到其他污染及影响，以排除其他因素的影响。
血型鉴定及交叉配血
一、盐水介质法
原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC
抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉 眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断 是否有血型不合的情况
（一）盐水介质法
操作： 1、取两只小试管，标明主和次侧 2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴
次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴 3、混匀，离心，1000r/min,离心1min 4、观察结果：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC
中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减 轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作 用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝
集。低离子液可降低可增强抗原、抗体间的吸引
力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。
离心后加入再悬液（枸橼酸钠），可中和聚凝胺
的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷， 使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合 引起的凝集仍然存在。
Rh（D）血型鉴定
原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
浮起，观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
（二）聚凝胺介质法
原理：聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
ABO鉴定和交叉配血
ABO定型试验和交叉配血(一)血型鉴定常见问题ABO血型鉴定是即指ABH血型抗原的检测。
红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。
Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测，根据病人红细胞是否带有D抗原，分为Rh阳性和Rh阴性。
生理盐水凝集法（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。
②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。
如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
（2）凝胶微柱法是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。
血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。
此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。
②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。
③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。
凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。
④冷凝集素效价：在1：4以下。
⑤无菌。
⑥灭活补体。
注意事项1.所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。
为避免交叉污染，建议使用一次性器材。
标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。
2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。
ABO血型鉴定和交叉配血虚拟实验笔记
ABO血型鉴定和交叉配血虚拟实验笔记实验主编：王启辉，广西医科大学试验一：ABO血型鉴定（正向定型——破片法）任务一5 分请选择制备红细胞悬液需要的物品（多选）答案A 含生理盐水小试管E75%酒精F 无菌采血针H 消毒棉签L 试管架（个器材均已一次性使用为佳，做到一人一针，一人一吸管、一人一试管，不能混用避免造成交叉污染和感染，使用过的物品均应放入污物桶，不得在采血部位采血。
）任务二：1、选择需要消毒材料（5 分）采血之前请选择需要消毒的对象（多选）答案A 指端B 生理盐水小试管C 采血针D 棉球/ 棉签（采血时，要防止才学部位被感染，因此需对采血部位和所用器材进行消毒处理。
）1、消毒（5 分）请选择消毒剂（可多选）答案只有一个B 75%酒精（生理盐水不含杀菌成分，稀释红细胞使用：75%酒精是常用的外用消毒剂：308%枸橼酸钠是抗凝剂：95%酒精能将细菌表面的蛋白质膜迅速凝固进而阻止酒精进入细菌体内。
，不能很好地杀死细菌）请选择采血端：无名指请选择消毒器材：75%酒精消毒棉签（指端、采血针务必做好消毒准备，消毒部位婴自然风干后在采血，血液很容易凝集成滴，便于采血）请进行采血部位消毒，采血针取血（无菌采血针），含有生理盐水小试管任务三：1 无菌采血针菜血7.5 分生理盐水小试管2 止血2.5 分点击消毒棉签任务四选择进行血型鉴定需要的材料答案B 红细胞悬液C 抗a血清D 抗b血清G 牙签I 吸管J 记号笔K 载玻片（所用玻片、吸管等必须洁净，因为污染后可产生假凝集）任务五滴加血型鉴定抗血清（点击顺序）1、载玻片2、记号笔3、抗a血清4、抗b血清5 、红细胞悬液6、吸管7 、牙签选择最佳的能准确判定血型的观察结果时间B、5-10 分钟任务七观察结果结果顺序：（1）A凝集、B不凝集（2）A型（3）B型（4）AB型（5）O型（6）A型任务九：血型判定：四次查看完成实验→跳转实验二交叉配血试验01 制备02 交叉03 观察判定01（一）制备红细胞悬液和分离血清1. 实验前准备——任务一：选择制备红细胞悬液和分离血清需要的物品（多选）答案A 无菌注射器E 消毒棉签F 生理盐水H 碘酒L 记号笔（实验用具严格消毒，请勿污染：试管、滴管必须清洁干燥：红细胞悬液及血清须新鲜，避免发生溶血、）选择需要消毒材料（可多选）答案：A前臂B 抗凝血小试管C 静脉采血针D棉球/棉签（采血时，要防止采血部位被感染，因此需对采血部位和所用器材进行消毒处理。
ABO血型鉴定、交叉配血的质量控制
ABO血型鉴定、交叉配血的质量控制摘要：在临床治疗上，输血的重要性不言而喻，但必须坚持原则，严格进行质量控制，密切注意各操作环节以及对标本、操作者的各项要求，避免由于误输血而导致死亡事件发生，给患者及家属带来不必要的痛苦，财产的损失，产生严重的医患关系。
关键词：血型鉴定交叉配血质量控质【中图分类号】r-1【文献标识码】b【文章编号】1008-1879(2012)06-0226-02输血已成为临床上必不可少的治疗手段，输血必须输入abo同型血为原则，如输入异型血，输入的红细胞可能被迅速破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁人的生命甚至死亡；血型鉴定就是为了输入abo同型血。
交叉配血试验是输血前必须的实验步骤，主要目的是防止输血后产生溶血性反应。
因此，血型鉴定和交叉配血是保证输血的关键错施。
错误输血导致受血者死亡至今还有发生，有调查显示约半数错误发生临床区域，30%发生于实验室。
因此，医、护、检和患者及其家属密切合作，按规程操作，是减少错误、保证输血安全的关键。
1 操作时应注意1.1 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
1.2 按规定进行操作，一般先加血清然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否滴加血清。
1.3 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快过慢，以防假阴性或假阳性结果。
1.4 试剂质量符合要求，分型血清符合质量要求，不同批号间产品须作对照，用毕后放置4℃冰箱保存，以免细菌污染。
1.5 试剂红细胞以三个键康者同型红细胞混合，用生理盐水洗涤3次，以除去存在于血清的可溶性抗原，放置4℃冰箱保存，不能冰冻，试验前用标准血清和红细胞作阴性和阳性凝集对照。
1.6 igm抗a和抗b与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集的干扰，一般仍在室温（20~24℃）下进行试验，37℃可使反应减弱。
1.7 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及串钱状排列的区别。
1.8 吸管、滴管必须专用。
反应物、试管、玻片等，都要有清晰不易脱去的标签和性名等标记；操作时要仔细查对不要弄错姓名、管号，加错血清、红细胞和盐水；防止由于滴管、吸管等混乱，而造成被检者之间、血清与红细胞之间的互相污染。
实验15 血型鉴定&交叉配血
一、 ABO血型系统鉴定
（二）玻片法
抗A标准检悬液1d 竹签混匀，静置15min，观察结果： 肉眼与显微镜下观察有无凝集
一、 ABO血型系统鉴定
结果判断： eg： 抗A标准血清+RBC悬液→凝集； 抗B标准血清+RBC悬液→不凝集 结果报告： 血型正定型为： X型
一、 ABO血型系统鉴定
【原理】 ABO血型系统天然抗体（IgM）分子量大， 能在生理盐水介质中与相应RBC抗原结合 发生凝集反应，以标准血清（抗A、抗B） 鉴定红细胞上的抗原（正定型），或用标 准红细胞鉴定被见血清的抗体（反定型）。 当出现凝集时，存在与已知抗体相应抗原 或已知抗原相应的抗体。
一、 ABO血型系统鉴定
｝A型
二、交叉配血试验
【原理】 将受血者的红细胞与血清分别同供血者的 血清与红细胞混合，观察有无凝集现象 ， 来判断受血者与供血者之间配血是否相合。
二、交叉配血试验
【操作】 1、准备：①制备受血者RBC悬液 ②制备供血者RBC悬液 ③制备受血者血清 ④制备供血者血清 2、取小试管2支，分别标记主侧、次侧 3、加血清和细胞悬液： 在主侧管中分别加②和③各1滴， 在次侧管分别加④和①悬液各1滴，混匀。 4、1 000r/min离心1 min。 5、观察结果 同ABO血型正定型试管法。
血型鉴定与交叉配血试验
ABO血型输血关系
O
AB
AB
B
B
A
A
O
3、输血原则：
输血前一定要作交叉配血，防止发生输血反应；②强调同型配血；③婴幼儿禁忌异型配血；④大量输血时，还应进行献血员间的配血试验；⑤可根据病情需要选择成分输血。
安全输血标准操作程序
01
受血者在输血前必须做输血前四项检查（乙、丙、艾、梅）
三查三对：核对输血申请单病人姓名、科别、床号与血标本写的姓名、科别、床号是否相符
（二）Rh 血型系统
Rh血型能识别的抗原共43种，常见的抗原有五种，分别是D、C、E、c、e。以 D抗原的抗原性最强，故常以其存在与否定为Rh阳性或阴性，即凡含D抗原者为Rh阳性，不含D抗原者为Rh阴性。Rh 血型系统与ABO系统不同的是很少含有天然抗体，大部分是因受免疫刺激后而产生免疫抗体。
第一次输血：
B
B
anti-A
B/B、B/O
ABLeabharlann A&B---A/B
一、ABO血型鉴定
抗A血清
抗A血清
A型血
抗B血清
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抗B血清
抗A血清 B型血 抗B血清 抗A血清 抗B血清 AB型血 B型血
红细胞凝集反应和输血： 当含有凝集原A的红细胞与含有A凝集素的血清相混合时，或含有凝集原B的红细胞和含有B凝集素的血清相混合时，红细胞即可凝集成团，即凝集反应 。通常在输血时，主要考虑供血者的红细胞不被受血者的血浆所凝集。从理论上讲O型血者的血细胞不含A、B凝集原，曾被认为是可供任何型的受血者；而AB血型则可接受任何血型者的供血。通过深入研究，发现各类血型还存在亚型，情况较复杂。故现在输血，除要求同型外，在输血前，受血者和供血者的血清和红细胞之间还必需进行交叉配血试验，两方面均不发生凝集反应时，方可输血。
血型鉴定与交叉配血
血型鉴定与交叉配血试验（1）ABO血型鉴定：正反定型标准血清+被检者红细胞标准红细胞+被检者血清被鉴定的血型抗A 血清抗B 血清抗AB血清（O型血清）A型红细胞B型红细胞O型红细胞+-+-+-A型-+++--B型+++---AB型---++-O型用标准血清及标准红细胞鉴定ABO血型结果正定型反定型（2）交叉配血试验：输血前必须进行交叉配血试验，其目的主要是进一步验证供者与受者的ABO血型鉴定是否正确，以避免血型鉴定错误导致输血后严重溶血反应。
Ø交叉配血试验常采用试管法进行Ø受血者血清加供血者红细胞悬液相配的一管称为主侧Ø供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为次侧（一）ABO血型系统（一）ABO血型系统交叉配血的结果判断：Ø同型血 主侧管与次侧管均无凝集反应，表示配血完全相合，可以输血；不论何种原因导致主侧管有凝集时，则绝对不可输用。
Ø异型血 主侧管无凝集及溶血，而次侧管出现凝集，但凝集较弱，效价<1∶200，可以试输少量（不超过200ml）该型血液。
理论上可以，但实际上不允许这样做，并且做的临床实际价值不大。
配血方法的选择：ABO血型系统 Ø对无输血史及妊娠史者，可只作盐水介质凝集试验。
Ø对有反复输血史及妊娠史者，则应作间接抗球蛋白配血法。
Ø在48小时内输入5L或更多量的大量输血时，因需同时输入多名供血者的血液，因此除了进行受血者与各供血者的交叉配血外，还应坚持作供血者之间的交叉配血试验，只有相互交叉配合完全相合时才能输用。
（一）ABO血型系统一、红细胞血型系统受血者有输血史、妊娠史或短期内要大量输血时按规定要进行意外抗体的筛查4.ABO血型系统的临床意义（1）在输血上的意义Ø输血在临床上的应用颇为广泛，如严重失血或某些手术时，输血常是治疗和抢救的重要措施。
Ø为防止输血反应必须坚持同型输血。
试验三ABO血型鉴定与交叉配血
人体解剖学实验讲义制药与生命科学学院主编：王永录2008年9月目录实验一小白鼠、大白鼠及兔的解剖实验 (1)实验二人体解剖学实验 (2)实验三ABO血型鉴定与交叉配血 (4)实验四心音听诊 (9)实验五人体心电图的记录 (12)实验六人体动脉血压的测量 (16)实验一小白鼠、大白鼠及兔的解剖实验【目的】：掌握小白鼠、大白鼠及兔的基本解剖结构。
【实验对象】小白鼠、大白鼠、兔【实验器材和药品】乌拉坦、手术台、手术器械（止血钳、手术刀、动脉夹、手术剪、手术镊等）、注射器、手术线、纱布、脱脂棉等【实验步骤及观察项目】取实验动物，乌拉坦麻醉后固定于手术台，解剖。
观察以下组织器官，注意与人体组织结构的区别。
1.神经系统：中枢神经系统：脑：大脑、小脑、间脑、脑干。
脊髓。
2.骨骼肌：肌肉的构造和形态。
3.皮肤：表皮、真皮结构。
皮肤的附属器，汗腺、毛发、指甲、皮脂腺。
4.消化系统：口腔、咽、食道、胃、小肠、大肠、肛门，唾液腺、胰腺、肝及胆囊。
5.呼吸系统：鼻、咽、喉、气管、支气管、肺、胸膜及胸膜腔。
6.循环系统：心脏(心壁、心腔、瓣膜、乳头肌、腱索、冠状血管)。
7.泌尿系统：肾、输尿管、膀胱、尿道。
8.生殖系统：雌性生殖系统：卵巢、输卵管、子宫、阴道、雄性生殖系统：睾丸、输精管、精囊、前列腺、射精管。
【思考题】小白鼠、大白鼠及兔与人体结构的区别？实验二人体解剖学实验【目的】：1.了解人体主要系统器官的概貌。
对人体有一个全面的了解。
2.掌握人体各个系统主要器官的基本结构。
3.重点掌握循环系统及神经系统的基本结构和功能。
【实验对象】1 人体各组织器官模型标本。
2 人体实物标本。
【实验步骤及观察项目】观察以下组织器官：1.骨骼系统：骨的基本形态构造，骨连结的形式，关节的基本构造，骨骼组成，颅骨、脊柱、胸廓及骨盆的组成。
上肢骨，下肢骨。
2.骨骼肌：肌肉的构造和形态。
肌肉的连结与肌肉的作用。
头面肌群、胸腹肌群、腰背肌群、上下肢肌群。
生理实验二--ABO血型鉴定和交叉配血实验
生理实验二------ABO 血型鉴定[实验目的]1.观察红细胞凝集现象。
2.学习ABO 血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。
[实验原理]（一）ABO 血型的分型血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型。
ABO 血型系统有两种不同的抗原，即A 抗原、 B 抗原。
而血清中还存在对应的两种抗体，即抗A 抗体和抗B 抗体。
ABO 血型的分型是根据红细胞膜上是否存在A 抗原和B 抗原将血液分为A 、B 、AB 和O 型四类。
A 抗原与抗A 抗体相遇或B 抗原与抗B 抗体相遇时，会发生红细胞凝集反应。
当给人输入血型不相容的血液时，可发生血管内红细胞凝集和溶血反应，严重时可危及生命。
表1 ABO 血型系统的抗原和抗体血型 红细胞膜上的抗原血清中的抗体 A 型A 抗B B 型 B 抗A AB 型 A+B 无 O 型无抗A+抗B（二）ABO 血型的鉴定---正向定型常规ABO 血型的定兴包括：正向定型和反向定型。
1.正向定型是用抗A 抗体和抗B 抗体检测未知红细胞上有无A 或B 抗原；反向定型是用已知血型的红细胞检测血清中有无抗A 或抗B 抗体。
表2 ABO 正向定型 正向定型血型 B 型血清 （抗A ）A 型血清 （抗B ）O 型血清 （抗A ，抗B ）- - - O 型 + - + A 型 - + + B 型 +++AB 型一般A 型标准血清中含有抗B 抗体，B 型标准血清中含有抗A 抗体，因此可以用标准血清中的抗体与被测者红细胞反应，以确定其血型。
（三）ABO 血型的遗传由三个等位基因控制人类ABO血型系统的遗传由9号染色体上的A、B和O三个等位基因来控制。
在一对染色体上只可能出现上述三个基因的两个，分别由父母双方各遗传给子代。
三个基因可组成六组基因型。
由于A和B基因为显性基因，O基因为隐性基因，故血型的表现型仅四种。
血型相同的人，其遗传基因型不一定相同。
见表3表3 ABO血型的基因型和表现型思考题：A型、B型的父母，子女可能的血型？利用血型遗传的规律，可推知子女可能有的血型和不可能有的血型，可从子女的血型表现型来推断亲子关系。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.血型鉴定1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬液。
3.加样ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。
RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
4. 结果判断离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记01、02、03及自身对照管2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。
3.结果观察离心（2档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min内消失显微镜检查三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）4. 结果观察离心（2档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留0.1ml，轻轻混匀.肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、B、O试验红细胞悬液的制备1. 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（%）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 2.0ml（40）5 1 0.8ml（16）10 1 0.4ml（8）20 1 0.2ml（4）2. 为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。
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ABO血型鉴定和交叉配血实验
[实验目的]
观察红细胞凝集现象。
学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。
[实验原理]
ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。
同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。
不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。
对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。
但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。
[实验对象]
正常人。
[实验药品]
A型B型标准血清。
[仪器器械]
双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。
[实验方法与步骤]
1.ABO血型的鉴定：
（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。
（2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。
图6.9-1 ABO血型鉴定示意图
（3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。
2.交叉配血实验：
（1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。
红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约1 ml的小试管中，即为2%的红细胞悬浮液。
加盖备用。
（2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。
（3）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。
放置10～30 min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
如果两次交叉配血均无凝集反应，说明配血相合，能够输血。
如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。
如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。
[注意事项]
1.指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。
做到一人一针，不能混用。
使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。
2.精消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。
取血不宜过少，以免影响观察。
3.采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。
4.在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混了。
[实验结果]
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