第七章体液蛋白质检验
《体液蛋白质检验》PPT课件
• 营养监测:
前白蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、铁蛋白
• 出 / 凝血疾病:
纤维蛋白原、AT3、纤溶酶原
• 贫血:
触珠蛋白、转铁蛋白、铁蛋白、可溶精性选P转PT铁蛋白受体
3
检验学部属于蛋白质的实验项目
生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋
白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋 白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2 、 β 、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙 蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。
蛋白质的分离
透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离心
血浆蛋白质的分类
精选PPT
8
3、血浆蛋白质的分类
• 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白
质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－
球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维 蛋白原、γ－球蛋白。
精选PPT
10
根据生理功能分类：
精选PPT
11
二、一些临床常检测血浆蛋白质
1、白蛋白（albumin , Alb)
肝实质细胞合成，分子量66 458，
半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 在肝细胞中没有贮存。
•
分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽，
分子量66458，含17个二硫键（—S—S—），不含糖的组分。
精选PPT
28
7、 1抗胰蛋白酶（1-AT）
• 是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量 为5.5万，P1值4.8，含有10%-12%糖。在醋酸纤维薄膜 或琼脂糖电泳中泳动于α1区带，是这一区带的主要组分。 区带中的另2个主要组分；α1-酸性糖蛋白含糖量特别高， α1-脂蛋白含脂类特别高，因此蛋白质的染色都很浅。
《临床检验基础》课程教学大纲
《临床检验基础》课程教学大纲课程编号：课程名称：临床检验基础英文名称：Clinical Laboratory Science课程类型：专业课必修考试总学时：100 学分：5.0 理论课学时：54 实验课学时：46适用对象：医学检验专业本科学生一、课程的性质和地位临床检验基础是医学检验专业的一门重要专业课，他运用形态学、生物化学、微生物学、免疫学和寄生虫学等实验技术，通过显微镜、理学、化学、微生物学以及自动化仪器等检验方法，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等进行简捷而准确的检测，将所获得的结果，作为疾病的诊断、治疗观察病情或预后判断依据。
临床检验基础是一门高度综合性的应用科学，与临床医学各项检查有广泛而密切的联系，是医学检验中最常用的部分。
二、教学环节和教学方法临床检验基础的教学环节包括课堂讲授、实验、考试等。
其中课堂是通过教师对指定教材部分章节讲解，结合多媒体课件，对板书和细胞形态结构的图示以及启发式教学方法的启用。
实验是教师在实验室里指导学生通过观察实物标本、挂图图谱等，教学手段加强电化教学、多媒体实物教学，要求学生进行细胞绘图，强化记忆，各种方法学要进行比较，并在教学过程中让学生尽早到医学检验室轮流进行学习，使之更好的配合好理论教学。
三、教学内容及要求第一章血液标本的采集和血涂片的制备第一节血标本采集【掌握】血液标本的类型及抗凝剂的选择。
【熟悉】熟悉采血的方法。
思考题：1、常用抗凝剂各自有什么特点和用途？2、血液检验有哪些标本类型及其应用范围？3、如何保证合格的血液涂片质量？4、wright染色依据何原理？如何保证染色质量？第二节血液标本采集质量保证【掌握】血标本采集对检验结果的影响因素。
【熟悉】血液标本保存与处理。
【了解】患者采血的要求。
第三节血涂片制备与染色【掌握】血涂片的制备、血涂片的染色。
【熟悉】血涂片染色原理。
【了解】瑞氏染色染料的组成。
第二章血液一般检验第一节红细胞检查【掌握】红细胞计数方法学的应用；血红蛋白的测定方法学（重点HICN）法；网织红细胞计数原理及临床意义。
蛋白测定、电泳
（五）染料结合法
• 考马斯亮蓝常用于需更高呈色灵敏度的蛋 白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等 的蛋白质，
• 优点：简便、快速、灵敏 • 缺点：不同蛋白质与染料的结合力不一 致，且试剂对比色杯有吸附作用。
（六）紫外吸收法
• 测定原理：蛋白质中的色氨酸、酪氨酸 的共轭双键，在280nm处有一吸收峰。 • 尿酸和胆红素在280nm附近有干扰，不 适合血清、尿液等组成复杂的蛋白质溶 液测定
表3-2
三种比色法和紫外分光光度法测定蛋白质的比较
灵敏度
化学干扰程度 不同蛋白质
快速性和
(最低测定值)
间的误差
复杂性
双 缩脲 100μg 酚试剂 1μg 考马斯亮蓝 1μg 紫外分光光度 10μg
中等 严重 低 较严重
小 大 大 大
快速简单 较复杂 快速简单 快速简单
表3-6
方 法 1．凯氏定氮法
• 用于较纯酶、免疫球蛋白等蛋白质测定
（六）紫外吸收法
• 生物样品也常混有核酸，核酸最大吸收峰为 260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而 测定蛋白质可采用两个波长的吸光度予以校 正. • 蛋白质浓度（g/L）＝1.45A2800.74A260nm。
（六）紫外吸收法
• 优点： 操作简便、快速，线性 20-100mg/l 灵敏度高(较双缩脲法约10倍)， 样品少，且无需处理可直接测定 样品可全部回收，特别适用于来源不 便，成本较高的微量蛋白的定量。 • 缺点:不适用成分复杂的蛋白
免疫透射浊度法如图3－23所示
（四）比浊法
• 优点 操作简便、灵敏度高
• 缺点 准确性差、各种蛋白质形成的浊度有
较大差异，影响因素多，包括加入试剂的
手法、混匀技术、反应温度等。 • 一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度 较低的样品
脑脊液检验讲解
【质量保证】 ★ 病理情况下，脑脊液常含有细菌或细
胞，故应在采集标本后及时进行测定；如 果不能及时处理，应加适量防腐剂并低温 保存，以抑制细菌和细胞代谢对葡萄糖的 消耗，防止假性减低
★脑脊液新鲜出血与陈旧性出血鉴别
项目 外观 易凝性 离心后上清液 红细胞形态 上清液隐血试验 白细胞计数
新鲜性出血 浑浊 易凝
无色透明 无变化
多为阴性 不增高
陈旧性出血 清亮、透明
不易凝
红色、黄褐色或柠檬色
皱缩 阳性
继发性或反应性增高
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35
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（2）黄色： ①陈旧性蛛网膜下腔出血。 ②化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎。 ③重症黄疸。
★
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（2）蛋白质定量试验 脑脊液蛋白定量检查主要方法有磺基水杨
酸-硫酸钠比浊法、双缩脲法和染料结合法。
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★
53
54
★
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2．葡萄糖检查 葡萄糖含量高低与血糖浓度、血- 脑脊液
屏障的通透性、葡萄糖的酵解程度有关。健康 人脑脊液葡萄糖含量仅为血糖的50%～80%
[参考值] 腰椎穿刺：2.5～4.4mmol/L； 小脑延髓池穿刺：2.8～4.2mmol/L； 脑室穿刺：3.0～4.4mmol/L。
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【检测方法】测定方法与血清葡萄糖定量方 法相同：葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法。
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▪ 【方法学评价】氧化酶法中一些还原性物 质可产生竞争性抑制作用，造成测定结果 偏低，使反应的特异性减低。
己糖激酶法基本不受溶血、高脂血、黄 疸、尿酸、维生素C及药物的干扰，特异 性和准确性均高于葡萄糖氧化酶法。
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二、脑脊液的主要功能 1、保护脑和脊髓免受外力震荡损伤； 2、调节颅内压力； 3、提供中枢神经系统营养物质并运出其代谢
第七章体液检查第一节脑脊液检查
• 7．髓鞘碱性蛋白测定
• 【检测原理】髓鞘碱性蛋白（MBP）是神经组织独 有的蛋白质，是脑组织实质性损伤的特异性标记，也是
反映神经细胞有无实质性损伤的灵敏指标，其含量高低
与损伤范围、病情的严重程度相关。
•
•
【参考区间】＜4μg/L。
【临床意义】MBP增高是髓鞘遭到破坏的近期指标，
存在胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离（蛋白质明显增 高，细胞正常或轻度增高）称为Froin-Nonne综合征。
• 4．比重
• 【参考区间】腰椎穿刺：1.006～1.008； 脑室穿刺：1.002～1.004；小脑延髓池穿刺： 1.004～1.008。 • 【临床意义】比重增高常见于各种颅 内炎症；比重减低见于脑脊液分泌增多。
• 3．氯化物 关。
脑脊液氯化物含量与血氯浓度、酸碱
度、血-脑脊液屏障通透性和脑脊液蛋白质含量有
•
【检测原理】氯化物测定方法与血清氯化物
测定方法相同，常用方法有硝酸汞滴定法、硫氰
酸汞比色法、离子选择电极法、电量分析法等。
• 【方法学评价】常用脑脊液氯化物测定的方
法学评价见表7-10。
• 【质量保证】 • ①电量分析法：如试剂含有杂质，可影响电 流效率。可用纯试剂进行空白校正，并通过预电
• （2）蛋白质定量检查：脑脊液蛋白定量检 查主要方法有磺基水杨酸-硫酸钠比浊法、 双缩脲法和染料结合法。 • 【方法学评价】脑脊液蛋白质定性检 查的方法学评价见表7-6。脑脊液蛋白质定 量检查的方法学评价见表7-7。
• 【参考区间】①定性：阴性或弱阳性。②定量： 腰椎穿刺：0.2～0.4g/L；小脑延髓池穿刺：0.1～
解除去杂质。
• ②电极法：氯电极使用一段时间后，电极上
体液蛋白质检验
第八章
体液蛋白质检验
人类白蛋白分子
1
本章内容概要： 本章内容概要：
第一节 概述 第二节 体液蛋白质测定
2
第一节 概
机体蛋白质：
述
含量 种类 功能
机体主要的生物大分子
体液蛋白质的检测： 体液蛋白质的检测：
疾病发生
体液蛋白质
异常
3
一、血浆蛋白质的组成、功能及分类 血浆蛋白质的组成、
种类： 种类：500种 种
9
临床意义 PA降低常见于： PA降低常见于： 降低常见于 营养不良（敏感指标） 营养不良（敏感指标） 肝功能不全（敏感指标） 肝功能不全（敏感指标） 比白蛋白更敏感
急性炎症、恶性肿瘤、 急性炎症、恶性肿瘤、创伤等 炎症 肾炎
10
白蛋白（ALB） （二）白蛋白（ALB）
生物学特性：肝细胞合成但不储存，半衰期为15生物学特性：肝细胞合成但不储存，半衰期为15-19 天，是 15 血浆中含量最多的蛋白质，占总蛋白的40% 60%。585个aa残 40%－ 血浆中含量最多的蛋白质，占总蛋白的40%－60%。585个aa残 基构成的单链多肽， 17个二硫键 MW=66458，pI=4－5.8， 个二硫键， 基构成的单链多肽，含17个二硫键，MW=66458，pI=4－5.8， 7.4时带负电 时带负电。 pＨ7.4时带负电。 生理功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗 生理功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗 ）， 透压和正常p 透压和正常pＨ值。 测定方法： 测定方法：详见第二节 参考值：35g/Ｌ 参考值：35-55 g/Ｌ 临床意义： 临床意义：详见第二节
《体液蛋白质检验》课件
调节生理功能
调节蛋白可以调节机体的生理 功能，如激素、生长因子等， 影响生长发育和新陈代谢。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
免疫作用
免疫蛋白能够抵御外来病原微 生物的侵害，维持机体免疫平
衡。
蛋白质的结构和性质
氨基酸组成
蛋白质由20种不同的氨基酸组 成，通过肽键连接形成多肽链
。
二级结构
多肽链通过特定的折叠方式形 成二级结构，如α-螺旋、β-折 叠等。
蛋白质相互作用分析
通过分析蛋白质之间的相互作用，揭 示蛋白质在细胞内的功能和调控机制 。
蛋白质序列分析和结构预测
蛋白质一级结构分析
对蛋白质的氨基酸序列进行分析，了解蛋白质的基本组成和特性 。
蛋白质二级结构预测
利用算法和统计模型预测蛋白质的二级结构，有助于理解蛋白质的 功能和稳定性。
蛋白质三级结构预测
蛋白质提取过程中需要注意避 免蛋白质的降解和交叉污染， 以保证蛋白质的完整性。
蛋白质的分离
蛋白质分离是利用不同蛋白质在物理、化学性质上的差异，将混合蛋白质分离开的 过程。
常用的蛋白质分离方法包括：凝胶电泳、色谱技术等。
蛋白质分离过程中需要选择合适的分离介质和条件，以保证蛋白质的纯度和回收率 。
蛋白质的纯化
监测病情
蛋白质检验可以监测病情的发展和治疗效果。例如，慢性 肝炎患者可以通过蛋白质检验了解肝脏功能状况，评估治 疗效果。
指导治疗
蛋白质检验的结果可以帮助医生制定和调整治疗方案。例 如，对于肾病患者，蛋白质检验的结果可以帮助医生判断 是否需要调整饮食或药物治疗方案。
蛋白质检验的基本概念和原理
基本概念
紫外吸收法
利用蛋白质在紫外光下的吸收特 性进行定量，准确度高，但受干 扰因素较多。
《生物化学检验》课程标准(检验)
乐山职业技术学院《生物化学检验》课程标准课程名称：生物化学检验适用专业：医学检验技术专业适用阶段：专科适用类型：普专类开设学期：第四学期总课时数：90（每课时45分钟）学分：6分一、课程定位（一）课程性质《生物化学检验》是一门由分析化学、生物化学、电子计算机技术和临床医学等学科相互结合，逐渐形成的理论性与实践性较强的交叉学科，是高等医学检验专业的一门主干学科和必修课程。
国际临床化学和实验医学联合会（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）将生物化学检验定义为“对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用”。
它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。
因此，《生物化学检验》是一门应用各种技术和方法分析机体健康和疾病时，体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科，它在医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位。
（二）制定依据和思路该课程是依据医学检验技术专业工作任务的临床生物化学检验工作项目设置的。
其总体设计思路是，以工作任务为中心组织课程内容，并让学生在完成具体项目的过程中学会完成相应工作任务，构建相关理论知识，发展职业能力。
课程内容突出对学生职业能力的训练，理论知识的选取紧紧围绕工作任务完成的需要来进行，同时又充分考虑了高等职业教育对理论知识学习的需要，并融合了相关职业资格证书对知识、技能和态度的要求。
项目设计以理论与实践相结合为线索来进行。
教学过程中，要通过临床与教学合作，校内实训基地建设等多种途径，充分开发学习资源，给学生提供丰富的实践机会。
本课程是医学检验的核心课程之一，在教学中要紧抓“检验技术”和“临床应用”两条主线，才能在实践中加深对各项检测技术的基本原理、标准和要求的理解，才能够运用所学的知识和技能，熟练解决岗位中的常见问题，培养学生发现问题，解决问题和技术创新的能力，逐步成长为合格的医学检验技师。
体液蛋白质检验(生物化学检验课件)
（一）血浆蛋白质的分类 1. 根据分离方法分类
盐析法：（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液） 分为清蛋白和球蛋白(最简单)
醋酸纤维素薄膜电泳：6种
分
电泳法 (实用)
琼脂糖凝胶电泳：13种 聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种
第七章
体液蛋白质检验
教学目标 OBJECTIVES
知识目标
✓ 简述血浆蛋白质的组成、功能及分类。 ✓ 认识血清总蛋白和、白蛋白、纤维蛋白原的测定方法和原理。 ✓ 归纳急性时相反应蛋白的概念、种类和临床意义。
能力目标
✓ 描述血浆中主要蛋白质的来源、功能和临床意义。 ✓ 描述常见相关疾病蛋白质水平的典型变化特征。
(六) α2-巨球蛋白(α2-MG，AMG)
合成部位：肝细胞和单核吞噬细胞系统合成 理化性质：分子量最大的蛋白质，625-800KD 生理功能：是血浆中主要的蛋白酶抑制剂，能与蛋白水解酶 （如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋 白酶）结合而抑制这些酶的活性
临床意义 ①低蛋白血症（如肾病综合症）时升高，可能是一种代偿机制以 保持血浆胶体渗透压 ②妊娠及口服避孕药时升高 ③新生儿及儿童比成人高2-3倍，是保护作用，抗衡较高浓度的 蛋白酶
生理功能 ①急性时相反应主要蛋白：急性炎症时升高，与免疫防御功能 有关 ②可结合利多卡因和普萘洛尔（心得安），急性心肌梗死时 AAG作为急性时相反应升高，可干扰药物剂量的有效浓度
临床意义 ①作为急性时相反应指标：风湿病，恶性肿瘤，心肌梗死和组 织坏死时增高；一般增加3-4倍 ②随糖皮质激素而增加，包括内源性的Cushing综合征和外源 性强的松、地塞米松等药物治疗时；雌激素使其降低。 ③营养不良，肝严重损伤、肾病综合征、胃肠道疾病致蛋白严 重丢失等情况下AAG降低 ④AAG升高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的诊断指标之一 参考范围：0.25-2.0g/L
第七章 体液与酸碱平衡紊乱的生物化学检验资料
卫生部“十二五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材四川大学华西医学中心李贵星一、概述二、体液与酸碱平衡紊乱的主要检测指标三、体液及酸碱平衡紊乱检测指标的临床应用♦掌握：水平衡的概念和水平衡紊乱的类型，低钠血症、高钠血症、低钾血症、高钾血症的概念，常用酸碱平衡紊乱诊断指标的意义和各型酸碱平衡紊乱的判断，血气、钠、钾、氯测定的方法学原理与评价，血气分析标本的采集要求。
♦熟悉：体液电解质的分布特点，水、钠、钾平衡紊乱的特点和常见原因，血气分析的质量保证。
♦了解：酸碱平衡的调节，血气分析在呼吸功能判断上的应用。
第一节概述一、水平衡二、水平衡紊乱三、电解质平衡及其紊乱四、酸碱平衡及其紊乱一、水平衡体液:体内存在的液体。
正常成人体液占体重的60％体液以细胞膜为界分为：（1）细胞内液（intracellular fluid，ICF）占40％（2）细胞外液（extracellular fluid，ECF）占20％A. 血浆5％B. 细胞间液（interstitial fluid）15％各部位体液之间受机体生理机制的调节处于动态平衡体液的组成➢水➢溶解于其中的物质——电解质、小分子有机物和蛋白质等。
电解质：体液中存在的离子，具有维持体液渗透压、保持体内液体正常分布的作用，参与机体重要的生理和生化过程二、水平衡紊乱脱水水肿原因:总体水的变化，或水分布有差异，水摄入和排出不相等，不能维持平衡。
水平衡的调节机制1. 水平衡的调节中枢下丘脑。
2. 调节途径通过口渴中枢、抗利尿激素（antidiuretic hormone,ADH）以及肾三大环节完成调控。
3. 水摄入血浆晶体渗透压升高、血管肾张素Ⅱ增多、生活习惯等刺激下丘脑的渴觉中枢，引起口渴而增加水摄入量；摄入量到一定程度后，渴饱满中枢兴奋，口渴感受消失。
4. 水的排出主要依赖于ADH、醛固酮和肾脏等。
（一）脱水（Dehydration ）♦脱水：由于水摄入过少和/或水丢失过多而引起细胞外液减少。
《体液蛋白质检验》课件
汇报人：
目录
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01
体液蛋白质检验概述
02
体液蛋白质的分类和 特点
03
体液蛋白质的检测指 标和临床意义
04
体液蛋白质检测的方 法和技术
05
体液蛋白质检验的质 量控制和标准化
06
添加章节标题
体液蛋白质检验 概述
定义和意义
体液蛋白质检验：通过检测体液中的蛋白质含量和种类，了解人体健康状况和疾病诊断的一种方 法。
检验方法
生化检验：通过 酶联免疫吸附试 验（ELISA）、 免疫荧光法等方 法检测蛋白质含 量
免疫学检验：通 过免疫电泳、免 疫印迹法等方法 检测蛋白质种类 和含量
质谱分析：通过 质谱分析法检测 蛋白质的种类和 含量
基因测序：通过 基因测序法检测 蛋白质的基因序 列和表达水平
体液蛋白质的分 类和特点
白蛋白：反映肝脏合成功能，降低可能 与肝病、营养不良有关
球蛋白：反映机体免疫功能，升高可能 与感染、炎症有关
尿蛋白：反映肾脏功能，升高可能与肾 病有关
血清蛋白电泳：检测血清中各种蛋白质 的含量和比例，有助于诊断某些疾病
血清蛋白免疫固定电ห้องสมุดไป่ตู้：检测血清中各种蛋 白质的含量和比例，有助于诊断某些疾病
临床意义
自动化检测流 程：样本采集、 样本处理、检 测分析、结果
报告等
自动化检测优 势：提高检测 效率、减少人 为误差、降低
检测成本等
体液蛋白质检验 的质量控制和标 准化
质量控制
样本采集：确保样本的完整性和准确性 检测方法：选择合适的检测方法和设备 检测环境：确保检测环境的清洁和稳定
检测人员：培训和考核检测人员的专业 技能和操作规范
2014临床检验基础(医检)教学大纲
《临床检验基础》教学大纲一、课程基本信息课程名称：临床检验基础课程编码：49023A02课程类别：专业教育必修课适用专业：供医学检验技术本科用开课学期：11课程学时：总学时 112 学时（其中理论课 56 学时，实验课 56 学时）课程学分：7.0先修课程：组织学与胚胎学、生理学、诊断学、生物化学并修课程：临床寄生虫学检验、临床血液学及检验、临床微生物检验、内科学、临床概论课程简介：一、性质临床检验基础，借助先进的检测技术，对来自离体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行理学、化学、病原学和显微镜形态学的检查，以简便、快速的检测结果，基本满足临床检验医学筛检疾病的需求。
二、临床检验基础的任务1．为疾病诊断和鉴别诊断提供实验室筛检或确诊的客观依据如将血液分析仪和显微镜检查有机结合，可提供全血细胞数量和质量(形态)众多的参数和红细胞、血小板、白细胞异常的最基本的实验诊断信息。
例如，白细胞(中性粒细胞)数量增高和血沉增高，支持急性心肌梗死的诊断，可与心绞痛鉴别；显微镜发现病原体，是确诊感染性疾病的依据。
2．为疾病疗效监测和预后判断提供动态变化依据尿液蛋白质检测对于肾脏疾病患者的病情估计、网织红细胞计数对于进行化学疗法和放射疗法的患者或贫血患者的骨髓功能，判断均具有可靠而实际的指导作用。
3．为预防疾病提供检测依据从标本中检出寄生虫，可对感染人群进行必要的治疗和(或)隔离，防止疾病的传播和传染。
4．为科学研究提供检验医学基本数据、基本检验方法和操作技能。
二、课程教育目标理论授课以讲授本课程在临床医学中的位置和特点，发展概况和当代特点建立运用检验医学的正确观点，以基本知识、基本理论和基本技能为重点，讲课讲透大纲中应掌握的内容。
实验课以基本技能训练为重点。
通过实验、示教使学生能够掌握正确的实验操作方法和各种仪器的正确使用，对实验注意事项、计算、结果判断、质量控制和报告方式有全面了解。
通过到临床检验科参观见习，让同学了解目前检验医学已发展为全面自动化。
血浆血清体液蛋白质组学
expertise
straightforward
• Showed biases for high Mr
• process is simple
• Can be used to ID posttrans. modifications
proteins and against certain types and classes of proteins
41有可预测性常用预测值predictivevaluepv表示包括阳性预测值ppv和阴性预测值npv能有效地用于临床疾病的分型检测方法可实现标准化易于掌握和推广应用具有非创伤性适合于高通量分析费用适当75petricoin等用疏水型芯片结合并分离了卵巢癌患者血浆相关蛋白在肿瘤和健康血清之间发现了5个差异明显的蛋白质峰它们共同构成卵巢癌诊断模型用该模型对肿瘤和健康人血浆进行盲筛该模型诊断肿瘤的敏感性为100特异性为95血清血浆蛋白组学研究的实例76li等选用金属离子鳌合芯片结合并分离乳腺癌血浆蛋白发现3个乳腺癌特异的差异蛋白峰
Protein digests
Results
Auto MS/MS detection
BioWorks data base search
Tandem MS spectra
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Shotgun:Advantages & Disadvantages
Advantages
Disadvantages
பைடு நூலகம்
• Alleviate some limitations • Requires more handling for
有效抑制的酶
缺点
PMSF（很常用，使用 浓度为1mM）
多肽水解蛋白抑制剂， 如： 1. 亮肽素leupeptin 2. 抑肽素pepstatin 3. 抑肽酶aprotinin 4. 苯丁抑制剂bestain
临床免疫学检验-第七章 体液平衡与酸碱平衡
三、血中的氧
氧的运输
血标本中 ctO2=O2Hb + cdO2 O2Hb是O2可逆地结合在红细胞中血红素的Fe2+上 1摩尔血红蛋白结合1摩尔O2 。 一升血中含血红蛋白浓度为9.3mmol/L(150g/L)
所有血红蛋白都结合O2时，可携带9.3 mmol/L O2 。
三、血中的氧
血红蛋白
HbA（正常成人基因产物）能结合O2 病态血红蛋白没有能力与O2结合：
渗透压
血浆中主要渗透物质:Na+、Cl-、葡萄糖和尿素计算：
mOsm/kg(水)=1.86(Na+[mmol/L])+葡萄糖[mmol/L]+尿素 [mmol/L]+9
*: 9 代表血浆中其他渗透物质:K+、Ca2+和蛋白质等 参考值: 275～300mOsm/kg（水）
第二节 体液平衡紊乱
一、水平衡紊乱 二、钠平衡紊乱 三、钾平衡紊乱
一、钠、钾测定
标本要求
钾标本 血浆与血清钾有什么差别 溶血 冷藏 孵育
钠标本 脂血标本
一、钠、钾测定
钠、钾测定方法
原子吸收分光光度法（AAS） 火焰光度法（FES） 离子选择电极法（ISE） 分光光度法 临床实验室常采用的是FES、ISE和分光光度法
一、钠、钾测定
火焰光度法
发射光谱法，被推荐为参考方法 样本用含有锂或铯的溶液稀释 被丙烷气雾化后燃烧 通过各滤光片，被光检测器接收 Li+ 或Cs+作为内标准与Na+、K+比较
一、血液气体特性
仪器校准
校准气体含有15% O2、5% CO2、其余是N2 。 摩尔分数（F）分别为0.15、0.05和0.80。 混合气体在37℃用水蒸汽饱和后（模拟病人血液 或肺泡气），送入仪器测定室（37℃）校准仪器计算 可得校准气体PO2=105 mmHg；PCO2 =35 mmHg 。
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视黄醛结合蛋白
转铁蛋白
触珠蛋白
血色素结合蛋白
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➢2.功能分类法
➢蛋➢➢➢（ 白（白酶2酶2））、、蛋蛋白白酶酶抑αα抑22制--制巨巨物物球球：：蛋蛋包包白白括括等等αα6611-种种-抗抗以以胰胰上上蛋蛋白白酶酶、、αα11--抗抗糜糜蛋 ➢（3）血清酶类：血浆固有酶如LCAT等 ➢➢（组3织）细血胞清少酶量类释：放血的浆细固胞有内酶酶如L细CA胞T破等裂而进入血循环 ➢的组细织胞细内胞酶少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循
mg
g
➢来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂
➢血浆蛋白质的功能
❖ ①营养作用，修补组织蛋白; ❖ ②维持血浆胶体渗透压：主要是白蛋白； ❖ ③作为PH缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质； ❖ ④运输作用：作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、
药物等的载体； ❖ ⑤体液免疫防御系统：作为免疫球蛋白与补体等免疫分子； ❖ ⑥催化作用：酶的本质； ❖ ⑦代谢调控作用；作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织
➢纤维蛋白原
➢醋酸纤维素薄膜
➢➢+-
➢7
7
2.电泳分类法
➢➢醋纤醋膜纤电膜泳电或泳琼或脂琼糖脂电糖泳电：泳5：个5成个
分 ➢成清分蛋白清蛋白
➢
ααα球121球球蛋球蛋蛋白蛋白白白
➢是临床实验室 α2球常蛋白用的β球血蛋浆蛋白
白质 电泳方法
γ
➢ βγ分球球辨蛋蛋率白白高时：可有7个成分 有β1
和β2 α2中也可有两条
1
测定APP的临床意义
帮助监测炎症的发生、变化和观察治疗反应， 尤其是那些升高最早和最多的蛋白质
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二、血清蛋白质电泳组分的临床分析
➢➢血血浆浆蛋蛋白白质质和和血血清清蛋蛋白白质质有有何何不不同同？？
血血浆浆：：为为生生理理状状况况
➢➢血血清清：：为为常常用用检检测测标标本本
➢3
0
（一）血清蛋白质电泳的正常组分及其含量
环的细胞内酶
➢（4）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等 ➢（4）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素 等➢（5）凝血蛋白类 ➢➢（（56））凝免血疫蛋球白蛋类白类 ➢➢（（67））免补疫体球蛋蛋白白类类
➢（7）补➢➢体还还蛋有有白许许类多多种种类类的的蛋蛋白白质质未未被被认认识识
➢（二）血浆蛋白质的功能
❖ 负向APP多作为营养蛋白，此时合成减少，可为合成正向 APPs提供更多的氨基酸原料。
1
APR的时相
❖ C-反应蛋白：首先升高 ❖ α1-酸性糖蛋白：12小时内也升高 ❖ α1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4和纤维蛋白原然后
升高 ❖ C3和铜蓝蛋白：最后是升高 ❖ 通常在2～5天内这些APPs达到最高值
急性时相反应蛋白(acute phase reactive protein， APP)：对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化 的血浆蛋白质。 增加的蛋白质称为正向APP
下降的蛋白质称为负向APP
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➢机体哪些情况会出现急性时相反应？
➢急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染性肾炎
➢急性非特异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关
白：
9.8％～18.2％
γ球蛋白： 9.8％～18.2
蛋白酶； ❖ ⑧参与凝血与纤维蛋白溶解；：除Ⅳ因子外均可。
6
血浆蛋白质的分类
➢盐析法：白蛋白/球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）
➢分离方法
➢醋酸纤维素薄膜电泳：6种➢分➢电泳法： ➢琼脂糖凝胶电泳：13种 ➢聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种
辨 率 增
➢SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种 高
➢➢--
节炎、风湿性心脏病等
➢急性心肌梗死
➢恶性肿瘤
➢手术、创伤
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APR的机制
❖ 炎症损伤部位释放的细胞因子，包括白介素、肿瘤坏死 因子α和β、干扰素以及血小板活化因子等， 引发肝细 胞中上述蛋白质合成量的改变。
❖ 正向APP是机体防御机制的一个部分，如： 增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性 触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的Hb C反应蛋白等可活化补体
➢ 1. 作为运载蛋白
➢生
➢ 2. 组织蛋白酶抑制物
物
➢ 3. 在血浆中起催化作用的酶
➢化
➢ 4. 参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素 学
➢ 5. 参与凝血与纤维蛋白溶解
➢ 6. 组成体液免疫防御系统（Ig与补体 ）
➢ 所有血浆蛋白质能
➢
维持血浆胶体渗透压
➢（三）影响血浆蛋白质浓度的因素
➢1. 急性时相反应
➢第七章 体液蛋白质检验
➢
人类白蛋白分子
1
本章内容概要：
➢第一节 概述 ➢第二节 体液蛋白质测定
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本章教学要求：
➢1、掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白
质（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和 白蛋白的测定方法和原理。
➢2、熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和
纤维蛋白原的测定方法。
➢3、了解其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊
液蛋白的检测 。
3
第一节 概述 一、血浆蛋白质的分类和功能 二、血清蛋白质电泳组分的临床分析 三、血浆蛋白质及其异常 四、其他体液蛋白质
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一、血浆蛋白质的分类和功能
➢（一）血浆蛋白质的组成、功能及分
类
组成：
➢种类：1000种
500种
200种
➢含量：μg
急性时相反应（acute phase reaction，APR）： 血浆蛋 白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应。
此时许多蛋白质：如α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、 铜蓝蛋白、 C4、C3、纤维蛋白原和C-反应蛋白等浓度显著升高或升高， 而少数蛋白质如前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。
➢醋纤膜或琼脂糖电泳正常区
带
➢扫描图
谱
➢区带图
谱
➢醋纤膜电泳正常百分含
量
➢清蛋白： 57％～68％ α1球 ➢清蛋白： 57％～68％
蛋白：1.0％～5.7％ α2球蛋白 α：1球4.9蛋％白～：111..02％％～β5球.7蛋％白：
α2球蛋白：47.9％％～～1131％.2％γ球蛋
β球蛋白： 7％～13％
➢分辨率高时：可有7个成分
➢➢ 聚丙有烯β1酰和胺β凝2 胶电泳： 可以分
➢ 出3α02多中种也蛋可白有质两条
➢聚丙烯酰胺凝胶电泳： ➢ 可以分出30多种蛋白质
➢3.功能分类法
➢（1）运输载体类
血浆脂蛋白：包括CM、VLDL、LDL、HDL等
前清蛋白与清蛋白
甲状腺素结合球蛋白
皮质素结合球蛋白
类固醇激素结合球蛋白