植物总多酚常用的含量测定方法有Folin

植物总多酚常用的含量测定方法有Folin- Ciocalteu 法, 酒石酸亚铁法, 普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。

1.福林试液的配制：
取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml与盐酸10ml,置200ml 烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。

滤过,滤液作为贮备液。

置棕色瓶中,于冰箱中保存。

临用前，取贮备液 2.5ml，加水稀释至10ml，摇匀，即得。

用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取3.0mL 到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。

加入福林－薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。

每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。

取样品溶液1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。

反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。

2. 酒石酸亚铁比色法。

其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。

用分光光度法测定其含量。

茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g,加水溶解定容至250mL,混匀,即为每毫升含1mg提取纯品的标准溶液(mg/mL) 。

茶多酚的含量。

茶多酚标准曲线的绘制。

分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL 于4 个50mL 容量瓶中,各加水至10mL,再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7. 5的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用1㎝比色皿,以空白试剂作参比,于波长540nm处测定吸光度(A) ,绘制出标准曲线。

实验十七食品中多酚类物质的提取与含量测定
一、实验原理
多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。

多酚类物质
含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、
乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。

由以上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），不同
的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。

常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有: 酒石酸亚铁比色法、FD
法、FC 法、普鲁士蓝法等。

其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。

酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生
成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。

测定总多酚时所
用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿
茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸
作标准物较合适。

二、实验材料、试剂与仪器
材料：茶叶；
仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；
试剂：
（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.00g酒石酸钾钠
(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；
（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4·12H2O和5.00g NaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。

三、操作步骤
（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用
标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。

为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为
7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。

（二）样品总多酚的提取
准确称取1.0g磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水
浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至
100mL。

（二）样品多酚提取液的多酚总量测定
吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁
溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。

同是以蒸馏水代替样品提
取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm比色皿在540nm波长处测定吸光
度。

四、计算
式中：A540—样品提取液的吸光度；
T—样品提取液的总体积（mL）；
V—测定时吸取样品液的体积（mL）；
W—称取样品的质量（g）；
7.826—吸光度为1.00时,茶多酚含量的经验值(mg/mL)。