液质联用法测定化妆品中3种蒽醌类化合物的含量

分析物名称 定性离子对
定量离子对
驻留源自文库碰撞 时间 /s 能量 /V
417． 2 ＞ 297． 0
21
芦荟苷 417． 2 ＞ 268． 0 417． 2 ＞ 297． 0 0． 1
30
417． 2 ＞ 250． 9
38
269． 0 ＞ 240． 1
25
芦荟大黄素 269． 0 ＞ 239． 1 269． 0 ＞ 240． 1 0． 1
情况。结果表明，当用 50% 甲醇和 70% 甲醇作为提 精密度。测定结果列于表 4。
准分子离子峰响应最高。对准分子离子峰进行子 表 明，芦 荟 苷、芦 荟 大 黄 素 和 大 黄 酚 在 10 ～ 100
离子扫描，得到碎片离子信息。在确定了待测化合 ng / mL的范围内，峰面积比与进样浓度之间呈现良
物监测的母离子和子离子的基础上，对各种待测化 好的线性关系。以最低浓度峰与基线噪音峰比值
表 1 梯度洗脱程序
时间 / min
流速 / （ mL·min － 1 ）
流动相 A（水） / % （体积分数）
流动相 B（甲醇） / % （体积分数）
0． 0
0． 20
60
40
4． 0
0． 20
0
100
7． 0
0． 20
0
100
7． 1
0． 20
60
40
10． 0
0． 20
60
40
表 2 芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚的质谱参数
* 基金项目：质检公益性行业科研专项（ 编号 2012104013-2）
收稿日期：2014-02-18；修回日期：2014-03-18
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伍性，能很 好 地 与 各 种 化 妆 品 原 料 配 合，并 能 消 除 多种表面活性剂对皮肤的伤害。
目前，国内外测定芦荟蒽醌类化合物含量的常 用检测技术是薄层色谱法［3-4］、分光光度法［5］、毛细 管电泳法［6］、高 效 液 相 色 谱 法［7-10］、液 相 色 谱-串 联 质谱法［11-12］等。 已 有 很 多 关 于 芦 荟 蒽 醌 类 化 合 物 的研究报道，但是以化妆品为研究对象的报道相对 较少。由于 化 妆 品 种 类 较 多，有 些 样 品 基 质 较 复 杂，用薄层色谱法、分光光度法检测灵敏度较低，且 受干扰较大。最近几年高效液相色谱法的准确度 有了大大提高，应用较普遍。而液相色谱-串联质谱 法检测则具有更高的抗干扰能力和灵敏度。本研 究采用高效液相色谱-串联质谱仪，建立了化妆品中
析。首先，利用流动注射泵连续进样，在正离子和 定用甲醇超声提取 20 min，以获得最佳的回收率。
负离子模式下进行全扫描以选择适当的分子离子 2． 4 线性范围和检出限
峰和电离方式。结果表明：芦荟苷、芦荟大黄素、大
准确量取芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚标准储
黄酚在 负 离 子 化 模 式 下 易 形 成 一 级 特 征 离 子 峰 备液适量，用甲醇稀释成 10、20、50、80 和100 ng / mL
柱中残留的杂质，故选择梯度洗脱的方式。
声时间也是对结果影响较大的因素之一，为此对不同
2． 2 质谱条件的优化
超声时间（10、20 和 30 min） 进行了试验。试验中当
本方法采用 ESI 源和多反应监测模式对芦荟 超声 20 min 后，样品回收率已能够满足测定要求。
苷、芦荟大 黄 素 和 大 黄 酚 三 种 目 标 化 合 物 进 行 分 因此，综合考虑各种影响因素，最终样品提取方法选
近年来化妆品行业受回归大自然趋势的影响， 天然功效成分已成为国内外研究与开发的热点，芦 荟提取物作为一种具有多种功效的天然组分也已 被广泛应用。芦荟提取物为百合科植物芦荟叶的 粉末状 提 取 物。从 化 学 成 分 看，主 要 含 两 大 类 物 质：蒽醌类化合物和芦荟多糖［1］。芦荟含有的芦荟 素和芦荟 苦 素 具 有 多 方 面 美 化 皮 肤 的 效 能，在 保 湿、消炎、抑菌、止痒、抗过敏、软化皮肤、防粉刺、抑 汗防臭等方面具有一定的作用，对紫外线也有强烈 的吸收作用，可防止皮肤灼伤［2］。芦荟有很好的配
Abstract： A sensitive method for determination of three anthraquinone compounds in cosmetics by liquid chromatography tandem mass spectrometry （ LC-MS / MS ） was established． The cosmetics sample was ultrasonically extracted by methanol， then was separated and determined by HPLC-ESI-MS / MS． A linear calibration curve was obtained in the concentration range of 10 to 100 ng /mL． The linear correlation coefficients of the method were above 0 ． 99 ． The detection limit of method was 3 ng / mL（ S / N = 3 ） ． The recoveries at three levels ranged from 80 ． 4 % to 95 ． 2 % ，with the relative standard deviation （ n = 6 ） of less than 10 % ． Key words： HPLC MS / MS cosmetics aloin aloe-emodin chrysophanol
虞成华（1977—） ，男，工程师，从事食品 检测与化学分析研究。 联系电话：021-54263977 E-mail： yujason@ 163． com
建立了液相色谱-串联质谱联用测定化妆品中 3 种芦荟蒽醌类化合物含量的方法。样品经甲醇超声提取，用高效液相色 谱分离后，采用电喷雾串联质谱进行定性和定量检测。方法线性范围为 10 ～ 100 ng / mL，相关系数 r 大于 0． 99，最低检出限为 3 ng / mL（ S / N = 3） ，高、中、低 3 个浓度水平的加标回收率在 80． 4% ～ 95． 2% 之间，测定值的相对标准偏差（ n = 6） 小于 10% 。
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研究报告
香料香精化妆品 2014 年 8 月第 4 期
FLAVOUＲ FＲAGＲANCE COSMETICS August，2014，NO. 4
大黄酚在等度洗脱时，色谱峰出峰较晚，不利于检 取溶剂时，芦荟大黄素和大黄酚的回收率较低，而用
测效率的提高，并且经梯度洗脱能有效地去除色谱 无水甲醇溶解提取时，3 种物质的提取效果最好。超
称取样品约 1． 00 g 于 15 mL 具塞离心管中，加 入甲醇至近 10 mL，漩涡振荡混匀，定容至 10 mL。 水浴中超声提取 20 min，以 10 000 r / min 的转速离 心分离 10 min。上清液经孔径 0． 22 μm 的滤膜过 滤后，用液相色谱-串联质谱仪进行检测。
图 1 芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚 标准溶液的多反应监测谱图
27
269． 0 ＞ 211． 1
45
253． 2 ＞ 225． 0
28
大黄酚 253． 2 ＞ 181． 9 253． 2 ＞ 225． 0 0． 1
37
253． 2 ＞ 224． 0
30
1． 2． 2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ ESI） ；离子化模式：负
离子；喷雾电压：2 500 V；鞘气：344． 75 kPa；辅助气： 137． 9 kPa；离子传输毛细管温度：350 ℃ ；扫描模式： 多反应监测（ MＲM） ；芦荟苷、芦荟大黄酚和大黄酚 的定性定量离子对、驻留时间等质谱参数列于表 2， MＲM 谱图示于图 1。 1． 3 试验方法
香料香精化妆品 2014 年 8 月第 4 期
FLAVOUＲ FＲAGＲANCE COSMETICS August，2014，NO. 4
研究报告
3 种芦荟蒽醌类化合物含量的测定方法，并应用本 方法检测了实际样品中 3 种芦荟蒽醌类化合物的含 量，结果准确可靠。 1 试验部分 1． 1 仪器与试剂
TSQ Quantum ULTＲA 三重四级杆串联质谱仪， 美国 Thermo 公司；超声仪，美国 KUDOS 公司； GL88B 漩涡混合器，其林贝尔仪器制造有限公司产品； 高速离心机，美国 Beckman 公司；Milli-Q 超纯水发 生器，美国 Milli-Q 公司。甲醇为色谱纯，水为超纯 水。芦 荟 苷、芦 荟 大 黄 素、大 黄 酚 标 准 品 （ 纯 度 ≥95% ） 。
合物的 ESI 电喷雾电压、鞘气、辅助气、离子传输毛 为1∶ 3计算，测得最低检出限为 3 ng / mL，测定结果
细管温度等条件进行了优化。
列于表 3。
2． 3 样品前处理方法的选择
2． 5 回收率和精密度
据报道芦 荟 苷、芦 荟 大 黄 素 和 大 黄 酚 溶 于 醇，
选取三种不同基质的空白样品，按 0． 1、1． 0 和
2 结果与讨论 2． 1 液相条件的优化
试验 中 分 别 比 较 了 乙 腈-水、甲 醇-水、甲 醇0． 1% （ 体积分数） 甲酸溶液作为流动相的体系，试 验结果表明 在 这 三 种 流 动 相 体 系 下，芦 荟 苷、芦 荟 大黄素和大黄酚三种物质的色谱峰形都较好，由于 芦荟大黄 素、大 黄 酚 在 酸 性 条 件 下 稳 定 性 会 变 差， 另外考虑到试剂的毒性和经济性，最终选择甲醇-水 作为流动相体系。为了得到较满意的色谱分离度， 试验又比较了甲醇-水的不同体积比，芦荟大黄素、
也溶于丙酮、吡啶，结合文献报道中所采用的提取 10． 0 mg / kg 三个不同质量比添加芦荟苷、芦荟大黄
溶剂，本研究比较了 50% 甲醇、70% 甲醇和无水甲 素和大黄酚标准溶液，按上述检测方法测定，进行
醇等溶剂对于芦荟苷、芦荟大黄素和大黄酚的溶解 加标回收率试验，重复测定 10 次，计算其回收率和
芦荟苷、芦 荟 大 黄 素 和 大 黄 酚 标 准 溶 液 的 配 制：分别准确称取 50． 0 mg 的芦荟苷、芦荟大黄素、 大黄酚标准品于 50 mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解 并定容，制备成 1． 0 mg / mL 标准储备液。 1． 2 仪器工作条件 1． 2． 1 液相色谱条件
色谱柱：Hypersil GOLD C18 （2． 1 mm × 100 mm × 3 μm） ；柱温：30 ℃ ；进样体积：20 μL；梯度洗脱程 序列于表 1。
高效液相色谱法 串联质谱法 化妆品 芦荟苷 芦荟大黄素 大黄酚
Determination of Three Anthraquinone Compounds in Cosmetics by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry* YU Chenghua DU Ｒuyun LI Chao NIE Lei WANG Chengping （ Shanghai Institute of Quality Inspection and Technical Ｒesearch，Shanghai 200233，China）
研究报告
香料香精化妆品 2014 年 8 月第 4 期
FLAVOUＲ FＲAGＲANCE COSMETICS August，2014，NO. 4
液质联用法测定化妆品中 3 种蒽醌类化合物的含量*
上海市质量监督检验技术研究院，上海 200233 ……………… 虞成华 杜茹芸 黎 超 聂 磊 王承平
作者简介
［M-H］－ 和很强的二级特征离子峰。然后分别对喷 系列浓度标准溶液，分别取 20 μL 注入液质联用仪，
雾电压、雾化器温度、鞘气压力、辅助气压力、离子 记录 色 谱 峰 面 积，以 峰 面 积 比 （ Y） 对 进 样 浓 度 X
传输管温度和毛细管温度等质谱参数进行优化，使 （ ng / mL） 作线性回归，得线性回归方程。试验结果