藻毒素检测方法

藻毒素检测方法

原理：

样品中的微囊藻毒素与微囊藻毒素酶标记物竞争结合数量有限的抗体结点。

测试孔中包被有抗免IgG，用于捕获加入的免抗微囊藻毒素抗体，微囊藻毒素酶标记物和样品中的微囊藻毒素竞争结合数量有限的抗体结点，抗体与测试板中包被抗免IgG结合。

注意：颜色与微囊藻毒素的含量成反比。

较深的颜色=较低的浓度

较浅的颜色=较高的浓度

所需仪器：

仪器型号规格生产厂商大致价格数量

酶标仪及连带电

脑Bio-rad 680型30000-40000

1台

洗板机Bio-rad 1575 32000 1台移液器Acura（范围：20~200μl）1881 1支八通道精密移液

器Acura（范围：20~200μl）4993

1支

一次性移液器吸

头

（50μl、100μl）恒温培养箱37℃

分析实验室专用

纯水机超纯水或去离子水(符合分析实验室用水国家标准GB6682一级水)

试剂盒

美国Beacon微囊藻毒素

定量检测试剂盒

3600 所需其它实验材料：

PE手套、封口膜（保鲜膜）、振荡器（96孔板振荡器）

步骤：

1．将所有试剂及样品置于室温下。

2．从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。3．稀释100倍浓缩清洗液为1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸馏水。

4．吸取50μl酶标记物到微孔板的每个孔中。

5．吸取50μl标准，阴性对照，样品到对应微孔中，必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取，避免交叉污染。

6．加入50μl抗体溶液到每个小孔中。

7．快速震荡使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振荡器上震荡孵育，从而达到在孵育期间持续震荡的效果。

8．37℃孵育30分钟。

9．孵育完后，去掉封口膜将微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗完全充满微孔，震荡后倒掉，重复四次，总共五次洗板。在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干。10．每个微孔中加入100μl底物溶液。

11．盖上小孔并37℃孵育30分钟。

12．按照加底物的顺序每孔中加入100μl停止液。停止液为1 N盐酸，需小心操作。13．450nm下读板，如果酶标仪有双波长，可同时测605或650nm双波长。

14．如果酶标仪可以处理数据，可用半对数线性或4参数曲线拟合，如果为手动计算，则可按照以下部分进行。