医学生物学实验指导2

低倍镜找到 分裂相细胞
4n 3n 49 48 47
油镜下观察人 染色体并计数
46 45 n 性别
众数：
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⑶男女性别判断： 正常人体细胞中有46条染色体，其中22对 常染色体，1对性染色体（女性为XX，男 性为XY）。X染色体大小与C组相同，多 数Y染色体形态大小类似G组，因此在查 数一个体细胞染色体总数为46条后，查一 查G组染色体（最小的近端着丝粒染色体） 数目，即可判断出男女性别。如果有4条 G组染色体为女性细胞，如果有5条G组染 色体为男性细胞。 细致观察还可见Y染色体与G组的另4条染 色体在形态上略有区别：Y染色体两长臂 靠得很拢，几乎平行，长臂末端较齐，略 大于G组另4条染色体。
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在正常女性口腔粘膜上皮细胞中， X染色质的出现率为20％～40％， 每位同学观察20个细胞后，男女 同学交换观察标本。
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二、正常人体细胞染色体标本的观察和计数



1、实验原理 细胞的有丝分裂中期，染色体形态最为恒定和清 晰，此时每条染色体有两条染色单体借助着丝粒 彼此连接。着丝粒又称为主缢痕。它将整条染色 体分成长短不同的两个臂，分别称为长臂(q)和短 臂(p)。长短臂的端点称为端粒。有的染色体在长 短臂上还存在缩窄或浅染区称为副缢痕。在某些 染色体短臂末端有一个球形小体，称为随体。 根据着丝粒的位置不同，把人类染色体分为三种 类型：①中央着丝粒染色体②亚中着丝粒染色体 ③近端着丝粒染色体 人类体细胞中含有46条染色体，称二倍体 。

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实验内容

一、人类X染色质标本的制备和观察 二、正常人体细胞中期染色体观察 三、核型分析
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一、人类X染色质标本的制备和观察


1、实验原理 X染色质又称barr小体，是正常女性 间期细胞核中特异染色后出现的浓 染小体。 间期细胞核中，女性的两条X染色 体中，只有一条有转录活性，而另 一条则失去活性，并形成异固缩状 态的Barr小体 。
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三、正常人的核型分析
⒈实验原理：
核型：一个体细胞中的全部染色体即构成其核型。
核型分析：将待测细胞的全套染色体按照Denver体制配 对、排列后，分析确定其是否与正常核型的 异同，称为核型分析(karyotype analysis)。
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Denver体制： 世界通用的细胞内染色体组成的描述体系―Denver体制。按照各对染色体的大 小和着丝粒位置的不同将22对染色体由大到小依次编为1至22号，并分为A、 B、C、D、E、F、G共7个组，X和Y染色体分别归入C组和G组。
组 别 A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 号数 1-3 4-5 6-12 13-15 16-18 19-20 21-22 形态 大小 最大 次大 中等 中等 较小 小 最小 着丝粒位置 1、3号中央3 号亚中 亚中 亚中 近端 16号中央， 17、18亚中 中央 近端 无 无 无 有 无 无 随体 次缢痕 常见1号 无 常见9号 13号有 常见16号 无 鉴别要求 准确区分各 号 分组准确 分组正确 分组正确 分组排号准 确 分组正确 区分G组与y
医学生物学实验指导
实验二 人类X染色质、染 色体观察与核型分析
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实验目的




1.①熟悉X染色质标本的制作方法。 ②掌握X染色质的形态及统计方法。 2. ①观察人类的染色体，掌握人正常人 类体细胞染色体的形态特征和数目。 ②掌握正常人类体细胞染色体核型特 征及其分析方法和记述规范。
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2、实验方法和步骤




实验步骤： （1）先根据 Denver体制进行初步分析，将各染色 体的号数标于照片上。 （2）进行调整，然后逐个剪下并贴于实验报告纸上。 注意事项： （1）染色体要短臂朝上，长臂朝下，着丝粒贴齐。 （2）染色体不能丢，粘贴整齐，报告清洁
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取材
涂片
冲洗
甲苯胺蓝染 色1～2min 风干、镜检
冲洗
HCl10min
注 意
细胞涂片要均匀 细胞不能太少
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2、实验方法和步骤





①先用漱口液漱净口腔，再用牙签在口腔表面刮取 较深层的粘膜细胞（以不出血为宜）将细胞涂在载玻 片上，自然干燥或吹风机吹干。 ②涂好的标本放入甲醇与冰醋酸之比为3:1的固定 液中，固定15分钟，自然干燥。 ③干燥后的标本在室温下放入 5mol/L HCL溶液中 10 分钟；然后用自来水冲洗，干燥。 ④载玻片上滴数滴0.2％甲苯胺蓝染液（或AGV染 液），染色2—5分钟，自来水冲洗．晾干。 ⑤或盖盖玻片，从一侧滴一滴蒸馏水洗去浮色，在 另一侧用吸水纸吸去多余溶液。
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实验用品

1、器材：

显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯。剪刀、 镊子、培养皿、浆糊、牙签。

2、试剂：
3:1甲醇与冰醋酸固定液； 5mol/L HCL溶液； 0.2％甲苯胺蓝染液。


3、标本：
人口腔上皮细胞涂片； 人类外周血淋巴细胞染色体标本片 ； 正常男性或女性核型照片。
21、22有， 无 Y无
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人类染色体核型分析、形态特征及鉴别要求 20
2、实验方法和步骤



人类染色体剪贴 首先将照片中的染色体分裂相一个一个剪 下，按服各组染色体的特怔，将剪下的46 条染色体根据丹佛体制和鉴别要求分组、 编号，贴在实验报告纸上。 粘贴时一定要注意将短臂朝上，长臂朝下， 且每条染色体的着丝粒放在一个水平线上， 一般生从容易区分的组别配对，可按下列 顺序进行：A组一B组一D组一G组一F组 一E组一C组。 将核型分析的结果写在报告纸上。正常男 性核型应写为：46，XY；正常女性核型 应写为：46，XX。
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实验报告
实验报告
班级
1、核型分析
实验报告
实验名称 班级
1、核型分析
姓名
姓名
实验名称
2、染色体计数 2、染色体计数 ＜44 44 45 46 47 48 ＞48 n 2n 3n
Leabharlann Baidu性别
＜44
44
45
46
47
48
＞48
n
2n
3n
性别
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众数

众数
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3、观察分析



将已制好的玻片标本置低倍镜下观察，找 到延展较好的细胞后移置视野中央，转换 高倍镜或油镜下观察。 X染色质紧贴在核膜内缘，形态为一结构 致密而染色较深的结构清晰的小体。其形 状一般呈圆形、三角形或卵圆形等，直径 为1μm左右。 观察时应特别注意，凡位于细胞核中间或 核膜内缘与核中间同时出现类似X染色质 的结构，均有可能是其他核质凝集物，故 不能认为是X染色质。
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人类染色体
染色单体(chromatid) 着丝粒(centromere) 主缢痕(primary constriction) 短臂(p) & 长臂(q)
端粒(telomere)
副缢痕(secondary constriction) 随体(satellite)
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X染色质(X-chromatin)
1949 年 ， Barr 在 雌 猫 神经元细胞核发现一种浓 缩小体，在雄猫中见不到。 后来在其它雌性哺乳动物 也发现这种显示性别差异 的结构，称为性染色质 (X 染色质或Barr小体)。
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2.实验步骤

X染色质显示法
甲醇：冰乙酸固定30min 晾干
2、实验方法和步骤

⑴形态结构 油镜视野中可见每条染色体都已纵 裂为两条染色单体（又称姐件染色单 体），由一个着丝粒连系着。着丝粒 两端的部分称为染色体臂，长的一侧 称长臂（q），短的为短臂（p）。
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⑵染色体计数 计数时要找分散良好、无重叠的分裂相（最好在油镜下数）。在进行染 色体计数时，首先按该细胞的染色体的自然分布图形大致划分为2～3区然 后按顺序计算出各区染色体的实际数目，最后将各区的染色伸数目加在一 起即可求出该细胞的染色体数、为防止重数或漏数，可按镜下形态在报告 纸上画出简图，然后计数。可查一查镜检的细胞中的染色体有多少条。