蒽酮-硫酸法测残糖含量

微生物残糖实验

生物工程专业：综合大实验报告书学生姓名：范振辉学号：3092106230班级：生工2092专业：生物工程指导教师：葛老师2013 年1月10号安徽工程大学实验报告书学生姓名：范振辉学号：3092106230 专业班级：生工2092实验类型：□验证□综合□设计□创新实验日期：1.8~1.10 实验成绩：一、实验目的三、实验原理3.1 培养基配制3.2厌氧发酵培养3.3培养液pH测定3.4微生物生长曲线测定3.5培养液残糖测定四、材料与方法4.1 原料、药品以及仪器设备4.2分析测定方法五、实验结果与分析六、讨论七、参考文献八、要求1.遵守实验室纪律，保持实验室卫生，每天实验结束后将实验室彻底打扫，离开实验室时保证水、电的安全，并注意关闭窗，门。

2.实验态度严肃，认真，实验前要对实验所用仪器、设备的使用方法和注意事项弄清楚，熟悉实验方法，购买所需原料、试剂，配制所需的溶液，实验前后认真清洗仪器设备。

3.实验采用分组方式，实验内容按任务书要求完成，如更改必须在指导教师同意下进行。

4.严格按照工艺流程和工艺参数进行操作；5.值班时定时取样，按标准分析方法，进行认真测定；填好试验纪录表，试验数据真实。

6.对原始记录进行必要的分析、整理。

包括实验数据与理论值的比较，产生误差的原因及减小误差的方法，实验故障原因的分析等。

总结试验结果，认真完成综合实验报告并附原始记录表，用打印纸打印装订。

一培养基配制1原理本实验采用的是纳豆菌，纳豆菌属于细菌。

一般采用葡萄糖蛋白胨液体培养基用于种子培养和发酵培养。

其中葡萄糖为主要碳源，蛋白胨为氮源，酵母膏、NaCl，KH2PO4，K2HPO4作为无机盐，为微生物提供钾，磷，镁，钠离子等。

培养基配好后，用稀酸或稀碱将pH调至所需酸碱度或自然pH。

2仪器与设备三角烧瓶，烧杯，玻璃棒，分析天平，牛角匙，pH计，高压蒸汽灭菌锅，废报纸，纱布和麻绳等。

3培养基配方1）种子培养基配制培养基配方如下：葡萄糖0.5g蛋白胨0.5g酵母膏0.25g水50mlpH 7.02）发酵培养基配制培养基配方如下：葡萄糖30g蛋白胨7.5gNaCl 7.5gK2HPO4 6gKH2PO4 3g水1500mlpH 7.04操作步骤1）称量2）熔化3）调pH4）分装5）包扎6）灭菌二厌氧发酵培养1原理厌氧微生物在自然界中分布广泛，种类繁多，作用也日益引起人们的重视。

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。

在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在652nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

Cri-J。

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

无花果可溶性糖含量测定

无花果可溶性糖含量测定作者：苏云婷潘世会来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：為了建立一个可靠且高效的测定方法，专门用于测量不同成熟度无花果中的可溶性糖含量，深入探索并精确改进蒽酮-硫酸比色法。

根据研究目的，针对性优化了显色时间、蔗糖标准液浓度与冷却比色时间，建立了可用于无花果果实可溶性糖含量测定的蒽酮-硫酸比色法。

实验结果显示，最佳显色时间为10 min，最佳蔗糖标准溶液浓度为100 μg·mL-1，最佳冷却比色时间为20 min。

回归方程y=0.005x+0.153 4（R2=0.998 2）。

通过检测不同成熟度的无花果，发现糖度变化趋势与可溶性糖含量变化趋势一致，可溶性糖含量可作为无花果产品质量控制指标。

关键词：无花果；可溶性糖；蒽酮-硫酸比色法Method for Determination of Soluble Sugar Content in FigSU Yunting1， PAN Shihui2*（1. Weihai Vocational College， Weihai 264200， China; 2. Shandong University， Weihai 264209， China）Abstract： In order to establish a reliable and efficient assay specifically for measuring the soluble sugar content in figs of different ripenesses， the anthone-sulfate colorimetric method was explored in depth and precisely improved. According to the purpose of the study， the color development time， the concentration of sucrose standard solution and the cooling colorimetric time were optimized， and an anthone-sulfate colorimetric method was established for the determination of soluble sugar content in fig fruit. The experimental results showed that the optimal color development time was 10 min， the optimal concentration of sucrose standard solution was 100μg·mL-1， and the optimal cooling colorimetric time was 20 min. The regression equationy=0.005x+0.153 4 （R2=0.998 2）. By detecting figs with different ripeness， it was found that the change trend of sugar content was consistent with the change trend of soluble sugar content， and the soluble sugar content could be used as a quality control index for fig products.Keywords： fig; soluble sugar; anthrone-sulfuric acid colorimetry可溶性糖在水果和蔬菜中的重要性是显而易见的，主要由单糖和寡糖组成。

蒽酮_硫酸法测定板栗多糖含量

河北科技师范学院学报第24卷第2期,2010年6月Journa l of H ebe iN o rm al U niversity of Science&T echno l ogy V o l.24N o.2June2010蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量李润丰,常学东,狄小丽(河北科技师范学院食品科技学院,河北秦皇岛,066600)摘要:采用蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量并对其测定条件进行优化。

结果表明,蒽酮硫酸法测定板栗多糖的适宜操作条件为:加入2g/L蒽酮硫酸溶液4mL,在沸水浴中加热3m i n,自来水冷却40m i n后在10 m i n内于波长600n m下读取吸光度。

蒽酮硫酸溶液需要现配现用。

多糖含量控制在0.02~0.06g/L之间为宜。

蒽酮硫酸法测定板栗多糖含量的精密度实验RSD值为0.792%,平均加样回收率为107.2%,R SD值为4.6%。

用本方法测定板栗中多糖含量为12.67%。

关键词:板栗多糖;蒽酮硫酸法;测定中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:1672 7983(2010)02 0054 06板栗是中国栽培最早的果树之一,约已有2000~3000年的栽培历史。

板栗营养价值很高,甘甜芳香,含淀粉51%~60%,蛋白质5.7%~10.7%,脂肪2.0%~7.4%,多糖、粗纤维、胡萝卜素、维生素A、B、C及钙、磷、钾等矿物质,可供人体吸收和利用的养分高达98%。

栗果具有养胃健脾、补肾强筋、活血止血之功效,因而又具有较高的医疗保健价值,深受国内外消费者的青睐[1]。

目前,板栗作为一种营养价值高又具有重要的养生保健功能、药食两用的果中珍品,其营养和保健价值还远未得到有效开发、利用。

因而充分运用现代科学技术手段对板栗的营养保健功能的物质进行系统分析,对功能成分进行提取和开发,使之商品化、产业化,生产理想保健食品,进行深加工和新产品研究,提高附加值,具有重要的意义,开发应用前景将十分广阔[2、3]。

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。

二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。

其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。

本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。

蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。

三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。

2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。

该试剂不能久贮，宜用前配制。

100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。

四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。

3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。

随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。

蒽酮-硫酸比色法测定甘草残渣中多糖含量

３实验结果与分析
３１标准曲线的绘制．
２实验方法
２１甘草多糖的提取．
分别量取葡萄糖标准溶液００１０２０３０４、．、．、．、．、
精密称取提取过甘草酸后的甘草残渣５，０ｇ石油醚回流脱脂２ｈ回收石油醚，渣挥干溶剂后用，残
２２溶液的配制．２２１标准溶液的配制．．
甘草是临床常用中草药材之一，药用根，其性甘、，平具有补气健脾、热解毒、清润肺止咳之功效。甘草中的有效药用成分很多，甘草酸、如甘草多糖、甘草黄酮等＿ｌＪ。本实验为提高甘草的利用率，从提取过甘草酸后的甘草残渣中提取出了药用价值较高的水溶性甘草多糖，并采用蒽酮一硫酸比色法［其２１对
３ｉ，０ｎ过滤合并滤液，ｍ减压浓缩至１０ｍ，５Ｌ用氯仿萃取多次，以除去蛋白质，过滤后，滤液加入９％乙５
醇使乙醇含量达８％，置过夜，淀多糖并过滤，０静沉滤饼依次用无水乙醇、酮、醚多次洗涤，丙乙干燥，
线，图１见。由图１看出，００５７００５８ｍ／可在．－．ｅｍＥ范围０４
收稿日期：０００ — ３２１—５２
８％乙醇浸泡３ｈ于８０，０℃下加热１，滤，药渣ｈ过将用１５０ｍＬ蒸馏水浸泡过夜，然后于９００℃温浸提取１，再用５０ｍＬ蒸馏水于９ｈ００℃重复温浸提取

常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定

常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。

测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。

测定步骤如下:1. 标准曲线的制作1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。

1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡1.3标准曲线制作编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 00.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）010 20 30 40 50 60注:1 2为一个重复，以此类推｡取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm 处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

多糖含量测定的几种不同方法比较

多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要：本文综述了多糖含量测定的几种常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。

并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。

这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考，并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。

关键词：多糖；含量；测定；方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words：polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides，PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。

资料多糖含量测定的各种方法优缺点

苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。

再以比色法测定。

二、试剂1、浓硫酸：分析纯，%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。

5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取、、、、、、及，各以蒸馏水补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm 测光密度，以水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。

最后一次将残渣一起到入离心管。

注意：总的溶液不要超出10毫升。

（既不要超出离心管的容量）。

2）离心，转速3000转/分钟，共三次。

第一次15分钟，取上清液。

后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。

最后滤液保持18毫升左右。

3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

4）定容取样。

水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。

定容至25毫升的容量瓶中。

吸取ml的样品液，以蒸馏补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。

蒽酮法测定可溶性糖方法

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

试剂管号01，23,45,67,89,10 100µg.1-1蔗糖00.20.40.60.81/ml水/ml2 1.8 1.6 1.4 1.21蔗糖量/µg020*********2．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

3．可溶性糖的提取将样品从冰箱中取出，称取0.20－0.30 g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

资料-多糖含量测定的各种方法优缺点

苯酚-硫酸法测多‎糖含量一、原理多糖在硫酸‎的作用下先‎水解成单糖‎，并迅速脱水‎生成糖醛衍‎生物，然后与苯酚‎生成橙黄色‎化合物。

再以比色法‎测定。

二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚‎（分析纯重蒸‎馏试剂）加20克水‎使之溶解，可置冰箱中‎避光长期储‎存。

3、6%苯酚：临用前以8‎0%苯酚配制。

（每次测定均‎需现配）4、标准葡聚糖‎（Dextr‎a n,瑞典Pharm‎a cia）或分析纯葡‎萄糖。

5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TC‎A加85克‎水使之溶解‎，可置冰箱中‎长期储存。

6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TC‎A加475‎克水使之溶‎解，可置冰箱中‎长期储存。

7、6mol/L 氢氧化钠：120克分‎析纯氢氧化‎钠溶于50‎0ml水。

8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲‎线准确称取标‎准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于‎500ml‎容量瓶中，加水至刻度‎，分别吸取0‎.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水‎补至2.0ml，然后加入6‎%苯酚1.0ml及浓‎硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置2‎0分钟以后‎于490n‎m测光密度‎，以2.0ml水按‎同样显色操‎作为空白，横坐标为多‎糖微克数，纵坐标为光‎密度值，得标准曲线‎。

2、样品含量测‎定1）取样品1克‎（湿样）加1ml 15%TCA溶液‎研磨，再加少许5‎％TCA溶液‎研磨，倒上清液于‎10毫升离‎心管中，再加少许5‎％TCA溶液‎研磨，倒上清液，重复3次。

最后一次将‎残渣一起到‎入离心管。

注意：总的溶液不‎要超出10‎毫升。

（既不要超出‎离心管的容‎量）。

2）离心，转速300‎0转/分钟，共三次。

第一次15‎分钟，取上清液。

后两次各5‎分钟取上清‎液到25毫‎升锥形比色‎管中。

最后滤液保‎持18毫升‎左右。

3）水浴，在向比色管‎中加入2毫‎升6mol‎/L 盐酸之后摇‎匀，在96℃水浴锅中水‎浴2小时。

黄精临方炮制的成分变化

黄精临方炮制的成分变化作者：刘骏李波刘兴文来源：《医学食疗与健康》2019年第08期[摘要]目的探讨黄精采用不同方法炮制后对其成分的影响。

方法采用蒽酮-硫酸法测定黄精多糖含量。

热浸法测定醇溶性浸出物。

薄层色谱法分析成分变化。

结果黄精经临制后。

多糖含量降低。

多糖含量由高到低分别为黄精片，九制黄精，酒黄精，制黄精;同时炮制后。

制黄精浸出物降低。

酒黄精、九制黄精浸出物略有升高。

浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精;薄层色谱分析表明各炮制品鼢无明显差异。

结论黄精临方炮制后。

多糖含量降低;浸出物含量酒黄精及九制黄精略升高。

其他成分的变化有待于进一步深入研究。

[关键词]黄精;黄精多糖;浸出物;炮制;薏酮-硫酸法;热浸法;薄层色谱法[中圖分类号]R283 [文献标识码]A [文童编号]2096-5249（2019）14-281-03黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll。

etHemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red。

或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。

按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。

黄精为临床常用补益药，归脾、肺、肾经，其性味甘平，具有补气养阴，健脾润肺，益肾的功效，用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴等病症。

生黄精具有麻味，生品服用时，口舌麻木，刺激咽喉。

接触过生黄精或其汁液的皮肤会产生瘙痒的感觉，久闻其生味，有刺目之感，故多炮制后入药。

通过炮制，一方面可制其毒副作用，消除麻味，减轻对咽喉的刺激性，糖性变浓烈，口感好，利于服用;另一方面，黄精经炮制后转变药性，利于有效成分积累，可提高黄精的临床疗效，增强药物补脾润肺，益肾的作用。

至清末，黄精的炮制方法多达十余种，但以蒸煮法为主，现代的炮制方法中又增加了加辅料蒸等不同的工艺方法。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0123456标准葡萄糖溶液/mL00.20.40.60.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.00.8在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

1 / 2在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之阳早格格创做一. 真验本理糖类正在较下温度下可被浓硫酸效率而脱火死成糠醛或者羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱火缩合，产死糠醛的衍死物呈蓝绿色.该物量正在620 nm处有最大吸支，正在150 µg/mL范畴内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很下的敏捷度，糖含量正在30 µg安排便能举止测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：粗稀称与蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无火葡萄糖置于五氧化两磷搞燥器中，12hr后粗稀称与100mg，用蒸馏火定容至100ml；其余器材：分解天仄、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器战兴液缸等.三. 支配步调葡萄糖尺度直线的创制与7支具塞试管，按下表数据粗稀配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度搞2-3个沉复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏火/mL正在每支试管中坐时加进蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后所有置于沸火浴中加热15min.与出，赶快浸于冰火浴中热却15min.正在625nm波少下以第1管为空黑，赶快测定其余各管吸光值.以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，画制尺度直线.样品的测定将样品溶液糖浓度安排到测定范畴，透彻吸与2mL置于搞燥净净试管中，正在每支试管中坐时加进蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后所有置于沸火浴中加热15min.与出，赶快浸于冰火浴中热却15min，每个浓度搞2-3个沉复.正在625nm波少下赶快测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度直线，由样品溶液吸光值估计百般品溶液中糖的浓度，并估计其糖含量.四. 注意事项该法的特性是险些可测定所有的碳火化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有鳏糖类战多糖类，包罗淀粉、纤维素等（果为反应液中的浓硫酸可把多糖火解成单糖而爆收反应），所以用蒽酮法测出的碳火化合物含量，本量上是溶液中局部可溶性碳火化合物总量.正在不需要粗致区分百般碳火化合物的情况下，用蒽酮法不妨一次测出总量，省来许多贫苦，果此，有特殊的应用价格，但是正在测定火溶性碳火化合物时，则应注意切勿将样品的已溶解残渣加进反应液中，可则会果为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂爆收反应而减少了测定缺面.分歧的糖类与蒽酮试剂的隐色深度分歧，果糖隐色最深，葡萄糖次之，半乳糖、苦露糖较浅，五碳糖隐色更浅，故测定糖的混同物时，常果分歧糖类的比率分歧制成缺面，但是测定简单糖类时则可预防此种缺面.。

蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之五兆芳芳创作一. 实验原理糖类在较低温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL规模内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷枯燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：阐发天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.三. 操纵步调样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定规模，精确吸取2mL置于枯燥洁净试管中，在每支试管中立即参加蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于滚水浴中加热15min.取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做23个重复.在625nm波长下迅速测定各管吸光值.按照葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计较各样品溶液中糖的浓度，并计较其糖含量. 四. 注意事项该法的特点是几近可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（因为反响液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而产生反响），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有需要细致划分各类碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣参加反响液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂产生反响而增加了测定误差. 不合的糖类与蒽酮试剂的显色深度不合，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混杂物时，常因不合糖类的比例不合造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差.。