暴露式与非暴露式气管滴注方法建立小鼠急性肺损伤模型及其效果比较

合集下载

急性肺损伤动物模型建立的研究进展

Vol.41No.5May 2021上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)急性肺损伤动物模型建立的研究进展付静怡，汪雷，杨异上海交通大学附属第六人民医院胸外科，上海200233［摘要］急性肺损伤（acute lung injury ，ALI ）是指由各种因素导致的低氧性呼吸衰竭，甚至急性呼吸窘迫综合征的发生。

ALI 的发病率和病死率均很高，但其发病机制研究和治疗手段的进展不大，因此，建立动物模型来模拟ALI 十分必要。

该文收集和整理近年来关于ALI 动物模型的文献，对ALI 模型动物的选用，以及肺损伤的评估方法进行综述，为ALI 动物模型的建立提供参考。

［关键词］急性肺损伤；动物模型；动物实验［DOI ］10.3969/j.issn.1674-8115.2021.05.022［中图分类号］R332［文献标志码］AResearch progress in animal model of acute lung injuryFU Jing -yi,WANG Lei,YANG YiDepartment of Thoracic Surgery,Shanghai Sixth People's Hospital,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200233,China[Abstract ]Acute lung injury (ALI)refers to the occurrence of hypoxic respiratory failure and even acute respiratory distress syndrome caused by variousfactors.The morbidity and fatality rate of ALI are very high,but the research on its pathogenesis and treatment methods has not made much progress.Therefore,it is very necessary to establish animal models to simulate acute lung injury.In this paper,the literature on animal models of ALI in recent years is collected and summarized,and the selection of animal models of acute lung injury and the evaluation methods of lung injury are reviewed,so as to provide reference for the establishment of animal models of ALI.[Key words ]acute lung injury (ALI);animal model;animal experiment急性肺损伤（acute lung injury ，ALI ）是1994年由美国‒欧洲共识会议委员会首次提出，由多种直接或间接因素（包括但不限于感染、创伤、中毒、休克、肺炎、输血、免疫反应等）导致氧合指数（oxygenation index ，OI ）≤300mmHg （1mmHg=0.133kPa ）的概念，常常导致低氧血症性呼吸衰竭甚至急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome ，ARDS ）的发生［1-3］。

香烟暴露所致后代支气管肺发育不良大鼠模型的建立及鉴定

㊃论著㊃D O I 10 3760 c m a ji s s n 1673-436X 2018 15 011作者单位:510120广州医科大学附属第一医院广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室通信作者:王健,E m a i l j i a n w a n g1986@y a h o o c o m 香烟暴露所致后代支气管肺发育不良大鼠模型的建立及鉴定金颖康张抗抗张晨婷陈豫钦王健卢文菊ʌ摘要ɔ 目的建立一种香烟烟雾暴露的支气管肺发育不良(B P D )模型㊂方法雌雄性S D 大鼠合笼后随机分为正常对照组和香烟烟雾暴露组各2组,香烟烟雾暴露组的母鼠放置在熏烟装置进行全身暴露,每次1h,每日2次;待幼鼠出生后改为整笼全身暴露1h ,每日1次;烟熏过程中监测烟雾中的总颗粒浓度,每次10m i n ,持续监测烟雾中的O 2㊁C O ㊁C O 2浓度;正常对照组正常饲养,不予任何干预㊂记录造模过程中幼鼠的体质量增长㊁死亡率㊂在幼鼠日龄14d 时处死,取肺组织,留取支气管肺泡灌洗液(B A L F )分析细胞分类计数,H E 染色观察肺组织形态学改变,W e s t e r nb l o t 分析B P D 标志蛋白血管内皮生长因子(V E G F )㊁α7-烟碱型乙酰胆碱受体(α7-n A C h R )表达㊂结果香烟烟雾暴露组幼鼠体质量明显低于正常对照组(P <0 05),死亡率高于正常对照组㊂造模结束时香烟烟雾暴露组肺内的中性粒细胞和巨噬细胞明显升高(P 值均<0 01);肺组织出现肺泡腔变大,部分肺泡融合㊁肺泡间隔断裂增厚等表现㊂与正常对照组比较,香烟烟雾暴露组肺组织放射状肺泡计数减小,平均肺泡内衬间隔增加,V E G F 蛋白表达水平明显降低,α7-n A C h R 表达升高(P 值均<0 05)㊂结论孕期及后代香烟烟雾暴露所致肺部损伤符合B P D 病理表现,可以作为一种动物模型研究香烟暴露所致婴儿B P D 的致病机制㊂ʌ关键词ɔ 支气管肺发育不良;孕期;香烟烟雾暴露;模型基金项目:广州市人社局博士后科研启动项目(2014-2017)Ar a tm o d e l o fb r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a i n d u c e db y c i g a r e t t es m o k ee x po s u r e J i nY i n g k a n g Z h a n g K a n g k a n g Z h a n g C h e n t i n g C h e n Y u q i n W a n g J i a n L u W e n j u T h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a lo f G u a n g z h o u M e d i c a lU n i v e r s i t y G u a n g z h o uI n s t i t u t e o f R e s p i r a t o r y D i s e a s e s S t a t eK e y L a b o r a t o r y o f R e s p i r a t o r y D i s e a s e s G u a n gz h o u510120 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r W a n g J i a n E m a i l j i a n w a n g1986@y a h o o c o m ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T oe s t a b l i s ha m o d e lo fb r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a B P D i n d u c e db y c i g a r e t t e s m o k e e x p o s u r e M e t h o d s Af t e rm a t e dw i t h m a l eS Dr a t s f e m a l er a t sw e r er a n d o m l y di v i d e d i n t ot w o g r o u p s c o n t r o l g r o u p a n d c i g a r e t t e s m o k e e x p o s u r e g r o u p E x p o s u r e g r o u p we r e p u ti nf u m ig a t i o nd e v i c e f o r o n eh o u r t wi c e d a i l y u n t i l t h e p u p sw e r e b o r nw h i c hw e r e e x p o s e d f o r o n e h o u r o n c e d a i l y T h e t o t a l p a r t i c l e c o n c e n t r a t i o nw a sm o n i t o r e dd u r i n g e x p o s u r e f o r t e n m i n u t e se a c ht i m e a n dt h e c o n c e n t r a t i o n s o fO 2 C O a n d C O 2i nt h es m o k e w e r ec o n t i n u o u s l y m o n i t o r e d C o n t r o l g r o u p w a sf e d w i t h o u t a n y i n t e r v e n t i o n W e i g h t a n d m o r t a l i t y r a t eo f p u p sw e r e r e c o r d e d A t t h e 14t hd a y p u p s 'l u n gs w e r e c o l l e c t e da n dc e l l c o u n tw a s m a d e i nt h eb r o n c h o a l v e o l a r l a v a g ef l u i d B A L F H e m a t o x y l i na n d e o s i n H E s t a i n i n g w a s p e r f o r m e d t o o b s e r v e t h em o r p h o l o g i c a l c h a n g e s o f t h e l u n g s T h e e x p r e s s i o n s o f v a s c u l a r e n d o t h e l i a l g r o w t h f a c t o r V E G F a n dn i c o t i n i c a c e t y l c h o l i n e r e c e p t o r a l ph a 7 α7-n A C h R w e r e a n a l y z e db y W e s t e r nb l o t R e s u l t s T h eb o d y w e i g h t o f c i g a r e t t e s m o k e e x p o s u r e g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a nt h a to fc o n t r o l g r o u p P <0 05 a n dt h e m o r t a l i t y r a t e w a sh i gh e rt h a nt h a to fc o n t r o l g r o u p C o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p t h en u m b e r o f n e u t r o p h i l a n dm a c r o p h a ge i nB A L F i n c r e a s e d a l l P <㊃6611㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期 I n t JR e s p i r ,A u gu s t 2018,V o l .38,N o .15Copyright ©博看网. All Rights Reserved.001H Es t a i n i n g s h o w e d a l v e o l a r f u s i o n a l v e o l a r s e p t a l t h i c k e n i n g r a d i c a l a l v e o l a r c o u n t d e c r e a s e d a n d m e a n l i n e a r i n t e r c e p t i n c r e a s e d a l l P<005W e s t e r nb l o t s h o w e dV E G Fe x p r e s s i o nd e c r e a s e da n dα-7n A C h Re x p r e s s i o ni n c r e a s e d a l l P<005i nc i g a r e t t es m o k ee x p o s u r e g r o u p C o n c l u s i o n s T h e p a t h o l o g i c a lm a n i f e s t a t i o n s c a u s e db y c i g a r e t t e s m o k e e x p o s u r ed u r i n gp r e g n a n c y a n d p o s t n a t a l s t a g e a r e c o n s i s t e n tw i t hB P D w h i c hc a nb eu s e da sa na n i m a lm o d e l t os t u d y t h e m e c h a n i s m o fB P Di ni n f a n t s e x p o s e d t o c i g a r e t t e s m o k eʌK e y w o r d sɔ B r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a P r e g n a n c y C i g a r e t t e s m o k i n g e x p o s u r e M o d e lF u n d p r o g r a mG u a n g z h o u M u n i c i p a lH u m a n R e s o u r c e sa n dS e c u r i t y B u r e a u P o s t d o c t o r a lS t a r t u p F u n d2014-2017支气管肺发育不良(b r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a,B P D)是发生在新生儿尤其是早产儿的慢性肺部疾病,其病变以肺泡融合㊁数量减少㊁血管丛减少和血管增厚为特征㊂B P D是28周之前出生的早产儿第二大死因[1]㊂烟草危害是当今世界最严重的公共问题之一,大量证据表明吸烟可导致多部位恶性肿瘤及呼吸系统㊁心血管系统㊁泌尿生殖系统等多系统慢性疾病,导致生殖发育异常,还与其他健康问题的发生密切相关㊂孕期暴露在各种化学物质和环境毒素将会对胎儿肺发育和功能造成不同程度损伤,孕期吸烟相关的胎儿肺部并发症发生率可高达30%以上㊂流行病学调查和动物实验研究结果显示孕期香烟暴露可直接影响后代的肺部健康,同样也是导致儿童B P D的独立危险因素,而儿童时期B P D的发生与成人时期发生C O P D有直接关联[2-4]㊂通过详细研究香烟烟雾暴露所致B P D 的发病机制㊁病理生理过程,有助于提高社会对香烟烟雾暴露危害的认识和警惕,找到有效干预手段㊂因此,通过建立大鼠孕期香烟烟雾暴露所致后代B P D模型进行疾病研究是一种切实有效的方法㊂由于孕期香烟烟雾暴露是导致后代B P D的独立危险因素,用孕期母鼠及后代熏烟法建立B P D 模型符合此类疾病的病理生理过程,是研究香烟烟雾所致B P D最理想的建模方法㊂目前国内单独采用孕鼠香烟烟雾暴露建立B P D模型未见报道㊂在此次模型制造中,采用孕期及哺乳期母鼠及其后代香烟烟雾暴露方法建立幼鼠B P D模型,经鉴定符合B P D的病理表现,详细步骤如下㊂1材料与方法11材料选用体质量200~350g的6~8周龄S P F级健康雌雄S D大鼠60只(雌雄比2ʒ1),购自广东省医学实验中心[许可证号:S C X K(粤) 2013-0002]㊂P A B-S200被动吸烟装置,P-5L2C数字型粉尘仪(检测烟雾浓度),美国T I S空气颗粒物检测仪(检测可吸入颗粒),红梅牌香烟(焦油量13m g,烟碱量13m g),血管内皮生长因子(v a s c u l a re n d o t h e l i a l g r o w t hf a c t o r,V E G F)抗体㊁α7-烟碱型乙酰胆碱受体(n i c o t i n i c a c e t y l c h o l i n e r e c e p t o ra l p h a7,α7-n A C h R)抗体购自A b c a m公司(a b46154㊁a b208641)㊂12造模方法雌雄S D大鼠按照2ʒ1比例合笼,合笼后连续3d阴道涂片观察有无交配痕迹,将有交配痕迹的雌鼠单独放置,并随机分为正常对照组和香烟烟雾暴露组各2组(共4组,每组10只),1周以后阴道出血判定为流产㊂香烟烟雾暴露组放置在熏烟装置进行全身暴露,每次1h(烟气比约为5%)烟熏,每天2次,熏烟装置中,每周6d相当于怀孕妇女每天接受1h的香烟烟雾暴露,作为香烟烟雾暴露模型;幼鼠出生连同母鼠继续烟雾暴露,每天1次,直至幼鼠日龄14d取材(当天不熏烟),烟熏过程中监测烟雾中的总颗粒浓度,每次10m i n,持续监测烟雾中的O2㊁C O㊁C O2浓度㊂对照模型在相同的正常环境中喂养,不加任何干预㊂孕期母鼠称重,崽鼠生后当天称重(每窝称重后减去母鼠体质量计算平均值),之后隔天称重计算平均值㊂13实验方法131肺组织病理标本采集及染色部分幼鼠在出生14d麻醉后开胸取幼鼠肺组织,20c mH2O (1c mH2O=0098k P a)压力下4%多聚甲醛灌注肺组织充盈后再次放入4%多聚甲醛固定,乙醇梯度脱水,石蜡包埋切片,进行H E染色观察肺组织损伤程度㊂肺组织切片H E染色,显微镜下观察放射状肺泡计数:每组各取10张切片,每张切片随机取10个视野,计算平均值㊂平均肺泡内衬间隔:随机选取2组肺组织,20倍镜下在同一水平线,每张切片随机选取8个视野,测量时避开支气管及血管,在每个视野正中心划十字交叉线,计数单位长度交叉线的肺泡隔数,同时测出十字交叉线总长度,该指标反映平均肺泡直径大小,以总长度/肺泡隔数表示肺泡内衬间隔㊂㊃7611㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期I n t JR e s p i r,A u g u s t2018,V o l.38,N o.15Copyright©博看网. All Rights Reserved.1 32 支气管肺泡灌洗液(b r o n c h o a l v e o l a rl a v a g e f l u i d ,B A L F )中细胞分类计数将部分幼鼠麻醉后开胸,用显微剪在颈部剪开皮肤,小心暴露主气管,儿童留置针于颈部刺入主支气管,20c mH 2O 压力下生理盐水灌洗,回收,重复3次留取灌洗液,混匀裂解去除红细胞后统计细胞数,细胞沉淀涂片后进行染色并分类计数,分别计数100个细胞内巨噬细胞㊁中性粒细胞和淋巴细胞的细胞数㊂1 3 3 肺组织相关蛋白水平检测将剩余幼鼠处死开胸取肺组织,液氮冻存㊂提取肺组织总蛋白,W e s t e r nb l o t 检测B P D 血管生成标记物V E G F 和α7-n A C h R 蛋白表达水平㊂1 4 统计学分析采用S P S S16 0和G r a p h -P a d 5 0进行统计分析和作图㊂对于连续变量,首先进行K o l m o go r o v -S m i r n o v 正态性检验,若符合正态分布,以x -ʃs 表示;若为偏态分布,以中位数(四分位间距)表示㊂正态分布的连续变量采用双侧独立样本t 检验;非正态分布的连续变量采用双侧独立样本M a n n -W h i t n e y U 检验㊂所有指标以双侧P <0 05为差异有统计学意义㊂注:A ㊁B 为正常对照组;C ㊁D 为香烟烟雾暴露组图3 造模结束时2组幼鼠肺组织形态学表现 H E ˑ2002 结果2 1 2组大鼠一般情况比较相对于正常对照组,14d 实验结束时,香烟烟雾暴露组母鼠无死亡,流产率为30 0%(3/10),产幼崽45只,存活30只(66 7%);正常对照组母鼠无死亡,流产率为0 0%(0/10),产幼崽70只,存活63只(90 0%)㊂香烟烟雾暴露组母鼠失去光泽,呈现出烟熏所致枯黄,易激惹㊁暴躁;幼鼠体质量增长缓慢,明显落后于正常对照组(图1)㊂2 2 烟雾颗粒及烟气成分浓度熏烟过程中,烟雾总颗粒浓度为609~623m g/m 3,可吸入性颗粒浓度为34m g/m 3㊂持续监测熏烟箱内烟雾气体浓度,O 2浓度>20%,C O 2浓度为4000~5000p p m ,C O 浓度为500~800p pm ㊂2 3 肺泡灌洗液细胞分类计数如图2所示,造模结束时香烟烟雾暴露组肺内的中性粒细胞㊁巨噬细胞明显升高(P 值均<0 01),提示肺内存在炎症反应㊂2 4 各组肺组织形态学比较与正常对照组比较,显微镜下香烟烟雾暴露14d 后的幼鼠肺组织出现肺泡腔变大㊁部分肺泡融合㊁肺泡间隔断裂增厚等表现(图3)㊂与正常对照组比较,香烟烟雾暴露组幼鼠肺组织放射状肺泡计数减小(P <0 05),平均肺泡内衬间隔增加(P <0 05)㊂见图4㊁5㊂图1正常对照组与香烟烟雾暴露组幼鼠体质量增长曲线注:与正常对照组比较,a P <001图2 正常对照组与香烟烟雾暴露组支气管肺泡灌洗液中细胞分类计数比较㊃8611㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期 I n t JR e s p i r ,A u gu s t 2018,V o l .38,N o .15Copyright ©博看网. All Rights Reserved.2 5 各组肺组织中V E G F ㊁α7-n A C h R 蛋白水平的比较与正常对照组比较,香烟烟雾暴露组肺组织中V E G F 蛋白表达水平降低(P <0 05),α7-n A C h R 表达升高(P <0 05)㊂见图6~8㊂注:与正常对照组比较,a P <005图4 正常对照组与香烟烟雾暴露组幼鼠肺组织放射状肺泡计数比较注:与正常对照组比较,a P <005图5 正常对照组与香烟烟雾暴露组幼鼠肺组织平均肺泡内衬间隔比较注:V E G F 为血管内皮生长因子;α7-n A C h R 为α7-烟碱型乙酰胆碱受体图6 W e s t e r nb l o t 检测正常对照组与香烟烟雾暴露组肺组织中V E G F ㊁α7-n A C h R 蛋白表达3 讨论烟草危害是当今世界最严重的公共问题之一,全世界每年因吸烟导致的死亡人数高达600万,超过因艾滋病㊁结核㊁疟疾导致的死亡人数之和㊂我国是世界最大的烟草生产国和消费国㊂据调查,我国吸烟人群超过3亿,另有7 4亿不吸烟人群遭受二手烟的危害㊂每年因吸烟相关疾病致死人数超过100万,如对吸烟流行状况不加以控制,至2050年,每年死亡人数将突破300万㊂自1964年关于烟草问题的‘美国卫生总监报告“首次对吸烟危害健康问题进行系统阐述,大量证据表明,吸烟可导致多部位恶性肿瘤及呼吸系统㊁心血管系统㊁泌尿生殖系统等多系统慢性疾病,导致生殖发育异常,还与其他健康问题的发生密切相关㊂然而,公众对吸烟和二手烟暴露的危害认识严重不足,妇女及孕期妇女香烟暴露亦成为不可回避的问题㊂注:V E G F 为血管内皮生长因子;与正常对照组比较,a P <0 05图7 正常对照组与香烟烟雾暴露组肺组织中V E G F 蛋白相对表达量的比较注:α7-n A C h R 为α7-烟碱型乙酰胆碱受体;与正常对照组比较,a P <005图8 正常对照组与香烟烟雾暴露组肺组织中α7-n A C h R 蛋白相对表达量的比较B P D 是在1967首次由挪威学者R o s a n 和P o r t e r 在肺透明膜病治疗后发现遗留的肺部疾病㊂经典的B P D 的致病因素包括氧毒性㊁气压伤㊁容积伤㊁感染及其他理化因素,组织学特征包括气道㊃9611㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期 I n t JR e s p i r ,A u gu s t 2018,V o l .38,N o .15Copyright ©博看网. All Rights Reserved.上皮化生㊁气管周围纤维化及血管平滑肌增生㊂由于皮质激素治疗和通气辅助治疗策略的改变,提出新B P D 取代经典的B P D ,也称为小婴儿的慢性肺部疾病,其特点是肺泡和毛细血管发育不良,B P D的病理特点包括肺泡间隔减少和肺泡微血管丛发育失调,在显微镜下看到的是变大㊁简化㊁囊性肺泡和不规则的肺血管,肺泡间微血管数量减少,因此肺泡发育停滞/损害㊁血管生成障碍是所有B P D的共同特征[1,5-6]㊂任何程度的B P D均可导致远期不良结局,比如增加儿童时期气道高反应性,导致成年肺功能异常,甚至致使C O P D提早发生[7]㊂D i d o n等[8]认为B P D和C O P D在发病机制上存在共性㊂一些影像学研究显示,在B P D存活下来的年轻人肺组织和肺功能上呈现出C O P D样改变[8-11]㊂香烟烟雾是导致C O P D的首要因素,包括主动吸烟和二手烟雾暴露㊂研究证实,孕期香烟烟雾暴露可导致婴儿发育异常及早产,孕期直接吸烟或二手烟暴露也是早产儿发生B P D的因素之一,且暴露在香烟烟雾环境中可导致B P D患儿对感染的易感性增加而加重B P D病理改变[12-14]㊂可用于B P D研究的动物种类包括小鼠㊁大鼠㊁兔㊁羊及竹鼠,目前的各种动物模型各有优缺点,无法用一种模型解释所有B P D的病理生理过程[15]㊂人和大鼠肺组织的发育经历5个阶段:胚胎期㊁假腺管期㊁微管期㊁囊泡期㊁肺泡期㊂2个物种的肺部发育过程并不平行,大鼠孕期0周至出生后5d,相当人类胎儿的24周至足月,生后5~ 30d相当于生后36周至幼儿期[16]㊂本研究选择在大鼠孕期及子代大鼠14d内进行造模,符合孕期及生后新生儿期的时间段的香烟烟雾暴露㊂研究证明,V E G F水平与B P D的发生和严重程度相关,因正常的肺发育过程中的肺泡分化依赖于血管生成,而V E G F表达是血管生成的重要标志[17]㊂因此,本研究选用V E G F为B P D的重要评价指标之一㊂在香烟烟雾暴露B P D模型中,肺部形态学㊁V E G F表达均符合B P D的病理特点,肺泡分化障碍㊁肺泡破坏和血管生成受阻,同时模型肺组织中尼古丁受体α7-n A C h R蛋白表达上调,在大鼠动物模型上模拟出香烟烟雾是B P D诱因㊂本次研究成功制备孕期及后代香烟烟雾暴露所致的B P D,能够更好地解释B P D的香烟烟雾易感性,也可以从某些方面解释B P D的发生,甚至对不同程度B P D的治疗提供一定的方向㊂①孕母吸烟导致肺部病变的原因:越来越多的证据显示,胎儿暴露在环境毒素下,包括多环芳烃和香烟烟雾可以影响肺部发育和肺功能㊂香烟烟雾中含有3800多种已知的化学物质,其中尼古丁为其主要成分㊂而尼古丁通过兴奋神经肌肉系统中的n A C h R而发挥作用,香烟烟雾暴露诱导的胚胎早期病变所致B P D通过n A C h R发生效应,而拮抗相关的抗体有可能阻止尼古丁所致的肺部损害㊂其中中枢神经型α7-n A C h R作用广泛,参与各种中枢神经病变㊁肿瘤病变和血管病变等,同时有证据表明,α7-n A C h R参与到动脉粥样硬化等血管增殖的病理过程,也同时参与肿瘤组织中尼古丁介导的血管生长[12,18-19]㊂给恒河孕猴摄入尼古丁,其胎儿肺组织内α7-n A C h R亚单位表达水平明显增加,肺组织发育成熟受到影响,α7-n A C h R也可以抑制人气道上皮细胞的增殖,说明α7-n A C h R可以影响到肺组织的生长发育[18,20]㊂本次研究模型中同样发现肺组织α7-n A C h R水平升高,其在B P D中的详细机制还需进一步研究㊂②生后幼鼠再次香烟暴露所致的肺部问题:肺泡灌洗液提示香烟烟雾暴露幼鼠肺泡内中性粒细胞和巨噬细胞明显升高,从一定程度上提示急性和慢性炎症是B P D的原因之一㊂而香烟烟雾暴露模型除尼古丁受体相关作用机制外,炎症也可能是其中重要的机制之一㊂香烟烟雾暴露也是成人C O P D的常见原因,B P D的病理变化与成人C O P D有相似之处,并有临床研究发现幼年时期的B P D患者成年后发生C O P D几率较大,年龄提前㊂因此,可以从不同角度探索C O P D与B P D之间的共性:如在香烟烟雾C O P D模型中,二手烟可通过调节核转录因子κB(n u c l e a r f a c t o r-κB,N F-κB)的内源性抑制剂导致N F-κB水平升高,参与B P D 病理生理机制和C O P D病理生理过程[11,14];在B P D中,N F-κB也抑制成纤维细胞生长因子10 (f i b r o l d a s t g r o w t hf a c t o r-10,F G F-10)的表达,这种成纤维细胞生长因子对肺部传导气道的分支和形态发生至关重要,通过二手烟暴露,N F-κB诱导可以减少早产儿促进B P D发生的F G F-10表达㊂在成体肺中,F G F-10已被确定为一种存活因子,外源性F G F-10在小鼠中的表达降低了诱导的肺泡上皮细胞D N A损伤㊁细胞凋亡以及诱导的肺纤维化的程度,与C O P D的发生存在一定关系[21-22]㊂以上举例的香烟烟雾暴露所致的B P D的分子机制不能全面概括所有,可能涉及的分子机制及致病机制值得进一步深究㊂综上所述,依据世界流行病学调查显示,近些年我国控烟形式严峻,笔者认为香烟烟雾暴露建立的B P D模型符合临床B P D发㊃0711㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期I n t JR e s p i r,A u g u s t2018,V o l.38,N o.15Copyright©博看网. All Rights Reserved.生㊁发展的病理生理过程㊂在当前形势下,希望这一模型能够更好地为研究B P D提供帮助,以引起国家对烟草控制的力度及对妇女儿童香烟烟雾暴露问题的重视㊂参考文献1 C o a l s o nJ J P a t h o l o g y o fb r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a JS e m i nP e r i n a t o l2006304179-184D O I101053js e m p e r i2006050042 A n t o n u c c iR C o n t uP P o r c e l l a A e ta l I n t r a u t e r i n es m o k ee x p o s u r e an e wr i s kf a c t o r f o rb r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i aJ JP e r i n a t M e d2004323272-277D O I101515J P M 20040513 B u r k e H L e o n a r d i-B e e J H a s h i m A e ta l P r e n a t a la n dp a s s i v e s m o k e e x p o s u r e a n d i n c i d e n c e o f a s t h m a a n dw h e e z es y s t e m a t i c r e v i e wa n dm e t a-a n a l y s i s J P e d i a t r i c s20121294735-744D O I101542p e d s2011-21964 V o l l s a e t e r M R o k s u n d O D E i d e G E e ta l L u n g f u n c t i o na f t e r p r e t e r mb i r t h d e v e l o p m e n t f r o m m i d-c h i ld h o o d t oa d u l t h o o d J T h o r a x2013688767-776D O I101136t h o r a x j n l-2012-2029805 A b m a n S H R e c e n t a d v a n c e s i n t h e p a t h o g e n e s i s a n dt r e a t m e n t o f p e r s i s t e n t p u l m o n a r y h y p e r t e n s i o n o f t h e n e w b o r n J N e o n a t o l o g y2007914283-290D O I1011590001013436 A b m a n S H B r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a"a v a s c u l a rh y p o t h e s i s"J A mJR e s p i rC r i tC a r eM e d200116410P t11755-1756D O I101164a j r c c m 164102109111c7 M a d u r g aA M i z i k o v a I R u i z-C a m p J e ta l R e c e n ta d v a n c e si n l a t e l u n g d e v e l o p m e n t a n d t h e p a t h o g e n e s i s o fb r o nc h o p u l m o n a r yd y s p l a s i a J A mJP h y s i o l L u n g Ce l lM o lP h y s i o l201330512L893-905D O I101152a j p l u n g0026720138 D i d o n L R o o s A B E l m b e r g e r G P e t a l L u n g-s p e c i f i ci n a c t i v a t i o no f C C A A T e n h a n c e r b i n d i n g p r o t e i n a l p h a c a u s e sa p a t h o l o g i c a l p a t t e r nc h a r a c t e r i s t i co fC O P D J E u rR e s p i rJ2010351186-197D O I10118309031936001850089 B a r a l d i E F i l i p p o n e M C h r o n i c l u n g d i s e a s ea f t e r p r e m a t u r eb i r t h J N E n g l JM e d2007357191946-1955D O I101056N E J M r a06727910 C u t zE C h i a s s o n D C h r o n i cl u n g d i s e a s ea f t e r p r e m a t u r eb i r t h J N E n g lJ M e d20083587743-746D O I101056N E J M c07336211 V a n K o e v e r d e nI B l a n cP D B o w l e r R P e ta l S e c o n d h a n dt o b a c c os m o k ea n d C O P D r i s ki n s m o k e r s a C O P D g e n e s t u d y c o h o r t s u b g r o u p a n a l y s i s J C O P D2015122182-189D O I10310915412555201492217312 C o l l a c oJ M A h e r r e r a A D B r e y s s eP N e ta l H a i rn i c o t i n el e v e l si n c h i l d r e n w i t h b r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a JP e d i a t r i c s2*******e678-686D O I101542p e d s2014-250113 M a r t i n e zS G a r c i a-M e r i cP M i l l e tV e t a l T o b a c c o s m o k e i ni n f a n t sw i t hb r o n c h o p u l m o n a r y d y s p l a s i a J E u rJP e d i a t r20151747943-948D O I101007s00431-015-2491-y 14 P a t e lN T r u m p h C D B o d a s M e ta l R o l eo fs e c o n d-h a n ds m o k e S H S-i n d u c e d p r o t e o s t a s i s a u t o p h a g y i m p a i r m e n t i n p e d i a t r i c l u n g d i s e a s e s J M o lC e l lP e d i a t r2017413D O I101186s40348-017-0069-715 A m b a l a v a n a n N M o r t y R E S e a r c h i n g f o r b e t t e r a n i m a lm o d e l s o f B P D a p e r s p e c t i v e J A mJ P h y s i o l L u n g C e l lM o l P h y s i o l20163115L924-L927D O I101152a j p l u n g00355201616 O'r e i l l y M T h e b a u dB A n i m a lm o d e l so f b r o n c h o p u l m o n a r yd y s p l a s i a T he t e r mr a tm o d e l s J A m JP h y s i o lL u n g C e l lM o lP h y s i o l201430712L948-958D O I101152a j p l u n g00160201417 T h e b a u d B L a d h a F M i c h e l a k i s E D e t a l V a s c u l a re n d o t h e l i a l g r o w t hf a c t o rg e n eth e r a p yi n c r e a s e ss u r v i v a lp r o m o t e s l u n g a n g i o g e n e s i s a n d p r e v e n t sa l v e o l a rd a m a g e i nh y p e r o x i a-i n d u c e d l u n g i n j u r y e v i d e n c e t h a t a n g i o g e n e s i sp a r t i c i p a t e s i na l v e o l a r i z a t i o n J C i r c u l a t i o n2005112162477-2486D O I 10 1161C I R C U L A T I O N A H A 10554152418S e k h o nH S J i aY R a a b R e ta l P r e n a t a ln i c o t i n e i n c r e a s e s p u l m o n a r y a l p h a7n i c o t i n i cr e c e p t o r e x p r e s s i o n a n d a l t e r sf e t a l l u ng d e v e l o p m e n t i n m o n k e y s J JC l i nI n v e s t19991035637-647D O I101172J C I523219S i n g h S P G u n d a v a r a p u S S m i t h K R e t a l G e s t a t i o n a le x p o s u r e of m i c e t o s e c o n d h a n d c ig a r e t t e s m o k e c a u s e sb r o nc h o p u l m o n a r yd y s p l a s i ab l o c ke db y t h e n i c o t i n i c r e c e p t o ra n t a g o n i s t m e c a m y l a m i n e J E n v i r o n H e a l t h P e r s p e c t20131218957-964D O I101289e h p130661120 N a s t r u c c i C R u s s o Pα7n A C h R i n a i r w a y r e s p i r a t o r ye p i t h e l i a l c e l l s J C u r rD r u g T a r g e t s2012135666-67021 U p a d h y a y D P a n d u r i V K a m p DW F i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r-10p r e v e n t s a s b e s t o s-i n d u c e da l v e o l a r e p i t h e l i a l c e l l a p o p t o s i sb y a m i t o g e n-ac t i v a t ed p r o te i nk i n a s e-d e p e n d e n t m e c h a n i s mJ A mJR e s p i rC e l lM o lB i o l2005323232-238D O I101165r c m b2004-0242O C22 G u p t eV V R a m a s a m y S K R e d d y R e t a l O v e r e x p r e s s i o no ff i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r-10d u r i n g b o t hi n f l a mm a t o r y a n df i b r o t i c p h a s e s a t t e n u a t e s b l e o m y c i n-i n d u c e d p u l m o n a r yf i b r o s i s i n m i c e J A m JR e s p i rC r i tC a r e M e d20091805424-436D O I101164r c c m 200811-1794O C收稿日期2018-03-02㊃1711㊃国际呼吸杂志2018年8月第38卷第15期I n t JR e s p i r,A u g u s t2018,V o l.38,N o.15Copyright©博看网. All Rights Reserved.。

4天香烟烟雾暴露联合poly(I

doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.01.0084天香烟烟雾暴露联合poly（I：C）刺激对小鼠肺部免疫应答及干扰素表达的影响董晓飞1梁紫尧2，3范龙2，3全景羽2，3林琳2，3周颖芳1吴蕾2，3于旭华2，3（1.广州医科大学，广州 510150； 2.广州中医药大学第二附属医院，广州 510120； 3.粤港澳中医药与免疫疾病研究联合实验室，广州 510290）中图分类号Q939.91 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）01-0067-05［摘要］目的：探讨短期香烟烟雾暴露联合poly（I：C）刺激对小鼠肺部免疫应答及干扰素表达的影响。

方法：BALB/c 小鼠随机分为4组：对照组、熏烟组、poly（I：C）组和熏烟联合poly（I：C）组。

检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中总细胞数及细胞分类计数；普通光镜下观察各组细胞形态；荧光定量PCR检测肺组织细胞因子、趋化因子和干扰素及干扰素刺激基因表达。

结果：与对照组相比，熏烟联合poly（I：C）组总细胞数计数、巨噬细胞与中性粒细胞计数明显升高（P<0.05），且熏烟联合poly（I：C）组巨噬细胞计数高于poly（I：C）组；与poly（I：C）组比较，熏烟联合poly（I：C）组小鼠气道灌洗液巨噬细胞体积较大，呈圆形或不规则形，细胞质较多空泡；与对照组相比，熏烟联合poly（I：C）组小鼠肺组织中性粒细胞趋化因子CXCL1（P<0.05）、CXCL2（P< 0.01）和淋巴细胞趋化因子CCL2（P<0.01） mRNA表达升高，肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达明显升高（P<0.01），肺组织IFN-β（P<0.01）、IFN-γ（P<0.05）、MX2（P<0.01）和IP-10（P<0.01）表达显著升高，且与poly（I：C）组小鼠相比，熏烟联合poly（I：C）组小鼠肺组织CXCL2（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）和IFN-β（P<0.05） mRNA表达明显升高。

小鼠暴露式气管注射给药方式探索及对照组设置

温
州
医
科
大
学
学
报
Ｖｂ１．４７Ｎｏ６Ｊｕｎ．２０１７
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
鞫
小鼠暴露式气管注射给药方式探索及对照组设置
标差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：可采用本研究方法对小鼠暴露式气管注射水溶性药物。当研究８ｈ内的肺脏变化时对照组宜予等量０．９氯化钠溶液； ≥８ｈ时，可以设正常组为对照组。
［关键词］小鼠；气管注射；水溶性药物；对照组
ｒｏｕｇｈｌｙｅｑｕａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎｔｈｅｌｕｎｇｓｏｆｍｉｃｅａｎｄｔｏｄｅｓｉｇｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃａｌｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｅｒ－ｖｅｎｔｉｏｎｍｅａｓｕｒｅ，ｍｏｕｓｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｉｎｓｔｉｌｌｍｅｎｔｓｐｅｅｄ，ｍｉｎｉｍｕｍｖｏｌｕｍｅｔｈａｔｒｅｑｕｉｒｅｓａｎｄｍａｘｉｍｕｍｖｏｌｕｍｅｔｈａｔ
王怒静，彭传鹏，郑爽，周玲萍，徐红蕾
（１．温州医科大学第一临床医学院，浙江温卅ｆ３２５０３５；２．温卅ｆ医科大学附属第一医院呼吸内科

单侧肺精确滴注法制作小鼠单侧急性肺损伤模型的研究

单侧肺精确滴注法制作小鼠单侧急性肺损伤模型的研究姜宝珍;刘泽玉;刘星;张志红【摘要】经导管气管内滴注方法制作一种操作简捷可靠、剂量精确的小鼠单侧肺损伤模型.经导管分别滴注生理盐水(NS组)、0.05％伊文斯兰(EB组)、脂多糖(LPS 组)至小鼠左肺,6h测呼吸功能(Pehn),24 h取肺脏进行病理分析,插管成功率为100％.解剖显示EB组小鼠左肺均匀分布EB,右肺无明显异常;NS组和EB组小鼠Pehn差异无统计学意义,LPS组Pehn与NS组、EB组比较差异有统计学意义(P ＜0.001);NS组和EB组小鼠双肺病理HE染色均无明显病理学改变,LPS组小鼠肺出现严重肺损伤.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2016(051)008【总页数】4页(P1221-1224)【关键词】单侧气管滴注;伊文斯兰;脂多糖【作者】姜宝珍;刘泽玉;刘星;张志红【作者单位】安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥230022;安徽医科大学呼吸病研究所,合肥230022;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥230022;安徽医科大学呼吸病研究所,合肥230022;中国医学科学院医学动物实验研究所,北京100021;安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科,合肥230022;安徽医科大学呼吸病研究所,合肥230022【正文语种】中文【中图分类】R563.9近年来随着实用性医学研究的深入，各种疾病的动物模型更能够接近人类疾病临床表现。

急性肺损伤是创伤、急救医学不可避免的研究问题，不同类型急性肺损伤的动物模型也应运而生。

小鼠易得且廉价，其基因背景99%与人类共享［1］，因此科学家多用小鼠来制作各种疾病模型。

同样地，小鼠急性肺损伤模型也被广泛应用。

而如何精准地制作小鼠急性肺损伤模型是关键。

气管滴注方法是建立急性肺损伤模型时经常使用的手术方法之一。

而现有的国内外气管滴注方法操作［2-7］误差较大，造成造模显著的不稳定性和病变的不确定性。

LPS诱导鼠急性肺损伤模型的评价分析

LPS诱导鼠急性肺损伤模型的评价分析急性肺损伤（Acute lung injury，ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是通过干扰与肺泡毛细血管屏障有关的临床急危重症。

过去由于对ALI和ARDS机制研究不清、临床上没有针对性治疗方法，导致疾病的死亡率很高。

近年来，随着利用脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）创建ALI动物模型实验的研究的不断深入，在ALI模型的建立及其机制方面有了较新的进展，新的研究指导临床有望降低ALI和ARDS的死亡率。

本文对LPS诱导鼠急性肺损伤不同模型进行评价分析，以便广大研究者对急性肺损伤动物模型建立和研究提供进一步认识，为前临床研究提供动物实验基础。

目前，在已發表通过对急性肺损伤动物模型的实验研究中，研究人员发现活化多形核白细胞（polymorphonuclear leukocyte，PMN）在肺组织内的聚集的现象，在ALI和ARDS的发展中发挥关键作用[1-2]。

然而PMN移动到肺部不同部位引起ALI和ARDS的原理尚未完全阐明。

目前用于研究PMN与ALI和ARDS 的关系主要方法为在LPS诱导下复制肺损伤鼠模型[3-4]，来阐明LPS刺激对化学引诱物的反应增加炎症部位的PMN迁移的作用。

虽然单独使用LPS没有预先考虑存在的疾病、液体复苏或机械通气等客观条件的存在[5-6]，无法反映整体人类疾病的复杂性，但是通过对鼠肺损伤模型过程的，能够在一定程度上反映模拟体内ALI和ARDS的病理生理状态[7]，为前临床研究提供研究思路。

本文就LPS 急性肺损伤模型建立总结和分析，为前临床研究提供动物实验基础提供合适的参考。

1 LPS诱导下复制肺损伤机制内毒素模型的基础：LPS是一种糖脂，是存在于组成革兰氏阴性细菌的外膜中的极性脂质头组（脂质A）和链重复二糖[8]。

LPS大多数的生物学效应是由脂质A复制的，即使存在或不存在寡糖O抗原的影响。

急性肺损伤模型制作及不同时间点伤情变化规律

急性肺损伤模型制作及不同时间点伤情变化规律胡陈;陆红祥;曾灵;张华才;蒋建新;孙剑会;甘乐彬;刘迪;张安强;黄宏;杜娟;文大林;陈民佳【摘要】目的建立简便可行的急性肺损伤模型,观察不同时间点伤情变化规律.方法 10～12周龄C57BL/6雄鼠36只,采用随机数字表法分为生理盐水组6只和脂多糖(LPS)损伤组30只,LPS损伤组又分为损伤后3d(LPS-d3)、5d(LPS-d5)、7d(LPS-d7)、9d(LPS-d9)、11d(LPS-d11)5组,每组6只小鼠.利用鼻饲法滴注LPS,伤后3、5、7、9、11d取材,通过肺大体观察、计算肺体指数、苏木素-伊红染色(HE染色)病理评分,评估不同时间点急性肺损伤伤情变化情况.结果肺大体观察伤情变化规律表现为LPS-d3伤情最重,肝样变区域占全肺面积35％,LPS-d5、LPS-d7逐渐修复,肝样变区域占全肺面积分别为20％、9％,LPS-d9基本完全修复,双肺无块状肝样变,仅肺门处有红色块状充血,LPS-d11双肺未见明显出血改变,损伤恢复完全.肺体指数:生理盐水组(0.6±0.056),LPS-d3(1.0±0.292),LPS-d5(0.8±0.121),LPS-d7(0.8±0.153),LPS-d9(0.8±0.146),LPS-d11(0.8±0.133);病理评分:生理盐水组(0.2±0.192)分,LPS-d3(20.7±0.577)分,LPS-d5(12.3±2.646)分,LPS-d7(12.4±3.863)分,LPS-d9(3.6±1.678)分,LPS-d11(3.3±2.404)分.LPS损伤组损伤后3d肺体指数、生理盐水组与LPS损伤组损伤后不同天数病理评分比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论利用C57BL/6小鼠通过鼻饲法滴注LPS建立急性肺损伤模型简便可行,急性肺损伤模型,伤情表现为损伤后第3天伤情最重,后逐渐恢复,损伤后第11天基本恢复.【期刊名称】《创伤外科杂志》【年(卷),期】2019(021)008【总页数】5页(P601-605)【关键词】肺损伤;肺泡上皮修复;鼻饲法;脂多糖【作者】胡陈;陆红祥;曾灵;张华才;蒋建新;孙剑会;甘乐彬;刘迪;张安强;黄宏;杜娟;文大林;陈民佳【作者单位】400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;550004 贵阳,贵州医科大学;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R563.9肺脏作为可行气体交换的器官，经常遭受外界环境中微生物和毒素的损伤[1]。

小剂量多次尾静脉注射与气管内滴注博来霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究

小剂量多次尾静脉注射与气管内滴注博来霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究孟婕;彭张哲;陶立坚【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(38)12【摘要】目的：与单剂量气管内滴药模型比较，研究小剂量多次尾静脉注射博莱霉素(bleomycin，BLM)致小鼠肺纤维化的特点与差异。

方法：40只雄性ICR(Institute for Cancer Research)小鼠随机分为模型组I、模型组II和两个对照组，每组10只。

模型组I尾静脉注射10 mg/kg BLM均持续14 d；模型组II于实验第一天气管内注入5 mg/kg BLM，两对照组分别给与等量生理盐水，28 d 后处死并收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)。

检测BALF细胞总数及蛋白含量、肺系数、羟脯氨酸(hydroxyproline，HYP)，观察肺组织病理改变。

结果：1)两种给药方法均能使肺组织发生明显的炎性和纤维化反应，两模型组BALF细胞总数及蛋白含量、肺系数、HYP含量、肺间质损伤指数较两对照组均显著增加(P﹤0.01)；2)模型组I病灶主要分布在胸膜下及血管周围，模型组II 则主要分布在支气管和细支气管周围；3)模型组II病死率高于模型组I；4)模型组II BALF蛋白含量高于模型组I (P<0.05)；BALF细胞总数、肺系数、HYP含量、肺间质损伤指数两组间差异无统计学意义(P>0.05)。

结论：小剂量多次尾静脉注射与气管内滴入BLM都能成功制备肺间质纤维化动物模型，但两者纤维化形成的部位存在着一定的差异，小剂量多次尾静脉给药肺间质纤维化模型更接近特发性肺间质纤维化。

%Objective:To determine the characteristics and differences in bleomycin-induced lung ifbrosis model by repeated low-dose intravenousinjection and single dose intratracheal instillation of bleomycin. <br> Methods:Forty male ICR (Institute for Cancer Research) mice were randomly divided into a model group I, a model group II, and 2 control groups (10 mice in each group). In model group I, bleomycin was injected intravenously at 10 mg/(kg·d) for 14 consecutive days;and in model group II, bleomycin was instilled intratracheally at 5 mg/kg. The 2 control groups were given isotonic saline solution. At the 28th day, the mice were sacrificed and the bronchoalveolar lavage lfuid (BALF) was collected. The total cells and proteins in the BALF, pulmonary coeffcient, and hydroxyproline (HYP) content were determined. The pathological changes were observed by the eosin staining and Masson's trichrome staining. <br> Results:1) Both intravenous injection and intratracheal instillation of bleomycin resulted in severe and extensive inlfammation and ifbrosis inthe lungs. The total cells and proteins in the BALF, HYP content, pulmonary coeffcient and the pathological score of pulmonary ifbrosis were all signiifcantly increased in the 2 model groups (P<0.01). 2) Fibrosis was mainly under the pleura or around the vessel in model group I, and it was located near the bronehia and bronchioles in model group II. 3) The death rate was higher in the model group II than that in the model group I. 4) Proteins in the BALF were significantly higher in model group II than thatin model group I (P<0.05). There was no difference in the total cells in the BALF, the pulmonary coefficient, the HYP content, and the pathological score of pulmonary ifbrosis between the 2 groups (P>0.05). <br> Conclusion:The pulmonary fibrosis model can be successfully establishedby intravenous injection or intratracheal instillation of bleomycin, but the sites of pulmonary ifbrosis are different. The histological changes causedby the repeated low-dose intravenous injection of bleomycin is more similar to idiopathic pulmonary ifbrosis than that by the single dose intratracheal instillation.【总页数】5页(P1228-1232)【作者】孟婕;彭张哲;陶立坚【作者单位】中南大学湘雅医院呼吸科，长沙410008;中南大学湘雅医院肾内科，长沙 410008;中南大学湘雅医院肾内科，长沙 410008【正文语种】中文【相关文献】1.气管内移植人脐血间充质干细胞对博来霉素致小鼠肺纤维化的作用 [J], 郑金旭;王阳;宋萍;蒋婷;濮荔;端礼荣2.气管内滴入与雾化博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究 [J], 李伟峰;胡玉洁;袁伟锋;李理;黄文杰3.气管内注射博来霉素致小鼠肺纤维化造模方式改良 [J], 杨宇;袁晓梅;吴敏娜;许芝山;霍书华;钟根深;郭悦鹏4.博来霉素气管多次给药诱导小鼠肺纤维化模型 [J], 陈孟毅;林帅;杜朋;李程程;孟爱民5.博来霉素致小鼠肺纤维化模型的建立及生物标志物的筛选 [J], 王国辽;张洁;饶家榕;莫睿文;远立国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

香烟烟雾暴露建立肺气肿小鼠骨骼肌并发症模型的方法

香烟烟雾暴露建立肺气肿小鼠骨骼肌并发症模型的方法何伊里;何志义【摘要】目的探讨通过香烟烟雾暴露将小鼠制备成肺气肿模型,再进一步使其产生系统性炎症形成骨骼肌并发症模型的方法.方法将昆明种系雄性小鼠48只随机平均分为4组:12周正常对照组(A组),24周正常对照组(B组),12周烟雾暴露组(C 组),24周烟雾暴露组(D组).采用单纯长期香烟烟雾被动吸入方式,建立小鼠肺气肿模型.通过肺组织石蜡包埋切片,HE染色观察肺泡结构病理变化,并定量测定平均肺泡数(MAN)和平均肺泡面积量化肺气肿变化程度；进一步测量小鼠体重变化情况,通过该小鼠骨骼肌组织石蜡包埋切片,HE染色观察骨骼肌形态学及结构改变.通过肌间隙产生炎症细胞浸润,肌细胞出现形态结构上的改变,以及局部出现坏死病灶来衡量骨骼肌并发症严重程度.结果观察香烟烟雾暴露小鼠肺组织病理切片发现,肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺泡腔融合、肺组织肺大泡形成伴周围炎症细胞浸润.A组小鼠平均肺泡面积为(18860士813.2)μm2,B组为(18204士1248.4)μm2,C组为(41787.2±2310.4)μm2,D组为(51577.2士2207.2)μm2.分析发现对照组平均肺泡面积明显低于烟雾暴露组(P＜0.01).烟雾暴露组MAN比正常对照组低(P＜0.01).进一步观察同一例小鼠骨骼肌组织病理切片发现,烟雾暴露组骨骼肌组织中有周围炎症细胞浸润伴随肌细胞形态结构改变,局部性坏死病灶产生,而正常对照组无此改变.结论单纯吸烟法既可以建立肺气肿模型,也可以建立骨骼肌并发症的模型.这为模拟慢性阻塞性肺部疾病(COPD)病人出现系统性炎症,以进行相关科学研究提供了有利条件.【期刊名称】《右江医学》【年(卷),期】2012(040)002【总页数】5页(P190-193,封4)【关键词】烟雾暴露;肺气肿;骨骼肌并发症;小鼠【作者】何伊里;何志义【作者单位】广西医科大学研究生学院,广西南宁530021;广西医科大学研究生学院,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R365慢性阻塞性肺部疾病(COPD)是一种肺部慢性气道炎症性疾病，它的病理改变有气道上皮排列紊乱、部分气道上皮增生、周围炎症细胞浸润，黏液分泌增多，可见黏膜下平滑肌断裂和萎缩，肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺泡腔融合成肺大泡，气道管壁纤维化等；其主要特征为周围炎症细胞浸润和肺气肿形成等。

脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型的建立

脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型的建立王玉明【摘要】急性肺损伤是由创伤、感染、休克等诸多非心源性因素导致的一种急性、进行性呼吸障碍.该病的主要特点是出现顽固型低氧血症、促进呼吸频数升高、呼吸加重、呼吸困难、X线分析结果显示肺泡多出现弥漫性浸润等.本实验通过气管滴注脂多糖的方法建立急性肺损伤动物模型,通过HE染色观察肺组织病理学变化、测定肺组织湿干重比值(W/D)、试剂盒检测肺组织MPO活性变化及促炎性细胞因子的产生变化,以验证小鼠急性肺损伤模型是否建立成功.结果表明,脂多糖刺激显著破坏了肺脏组织结构、促进了大量炎性细胞浸润并伴有肺泡壁增厚.脂多糖可以显著提高肺湿干重比率(W/D),促进BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,并提高肺组织的MPO活性.这些结果表明,我们成功利用脂多糖建立了小鼠急性肺损伤模型.【期刊名称】《畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2016(035)006【总页数】4页(P28-31)【关键词】急性肺损伤;脂多糖;RAW264.7;核转录因子-κB;丝裂原活化蛋白激酶【作者】王玉明【作者单位】酒泉职业技术学院,甘肃酒泉735000【正文语种】中文【中图分类】S852.3本实验构建LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型，通过观察肺组织病理学变化、测定肺组织湿干重比值(W/D)、肺组织MPO活性变化及炎性细胞数量、促炎性细胞因子的产生变化，以验证小鼠急性肺损伤模型是否建立成功。

1.1 材料1.1.1 动物清洁级BALB/c小鼠(6-8周龄，体重20-23 g)，购自吉林大学白求恩医学院动物实验中心，小鼠饲养一周左右以适应新环境，给予充足的饲料和饮水。

1.1.2 主要仪器设备及生产厂家 -80℃超低温冰箱日本SANYO公司生产；低温高速冷冻离心机德国SORVALL公司生产；显微镜，奥林巴斯品牌；酶标仪美国BIO-RAD公司生产；水平离心机长沙湘麓仪器有限公司生产；XW-80A漩涡混合器上海精科实业有限公司生产；Microchemi 4.2以色列DNA BIOIMAGE SYSTERM公司生产；HPS-250生化培养箱哈尔滨市东联电子技术开发有限公司生产。

不同方式下气管内滴注脂多糖方法制作急性呼吸窘迫综合征大鼠模型

DOI:10.3877/cma.j.issn.1674⁃6880.2019.02.002基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（8170010395）；嘉兴市第一医院（启明星）资助项目（2016QMX007）；嘉兴市科技计划项目（2018AY32017）作者单位：314001浙江嘉兴，嘉兴市第一医院麻醉科1、ICU2、中心实验室6；325000浙江温州，温州医科大学附属第二医院麻醉科3；310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸科4；221002江苏徐州，徐州医科大学附属医院ICU5通信作者：杨茂宪，Email：yangmaoxian2009@ ·论著·不同方式下气管内滴注脂多糖方法制作急性呼吸窘迫综合征大鼠模型姜黎珊1姚明1杨茂宪2孔敏1邓厚盛3宦才娟4赵文静5沈辉6【摘要】目的探讨内窥镜下辅助滴注脂多糖及气管暴露法滴注脂多糖诱导急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠动物模型的差异。

方法32只Sprague Dawley大鼠分为EC组（内窥镜下辅助气管插管滴注等渗NaCl溶液）、EL组（内窥镜下辅助气管插管滴注脂多糖）、IC组（气管暴露法滴注等渗NaCl溶液）、IL组（气管暴露法滴注脂多糖），每组各8只。

记录制作动物操作时间。

滴注脂多糖24h后采集动脉测定动脉血氧分压（PaO2）及氧合指数，计算肺组织湿/干重比值（W/ D），检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量，血清中肿瘤坏死因子α（TNF⁃α）、白细胞介素6（IL⁃6），并进行弥漫性肺泡损伤（DAD）评分。

结果EC组、IC组、EL组及IL组大鼠手术操作时间分别为（212±24）、（296±53）、（233±44）、（321±56）s，四组大鼠间比较，差异有统计学意义（F=9.808，P<0.001），且与IC组和IL组比较，EC组、EL组制作动物模型的操作时间均明显缩短（P均<0.05）。

暴露式小鼠气管灌注炭黑颗粒染毒方法的优化

暴露式小鼠气管灌注炭黑颗粒染毒方法的优化蒋永红;舒涛;涂宏松;刘锐;陈倩;周婷【摘要】目的探讨灌注炭黑颗粒的浓度和体积对暴露式气管灌注小鼠存活状况的影响,从而提高染毒动物的存活率.方法将108只雄性C57BL/6(体质量16～18 g)小鼠随机分为生理盐水组,2.5、25 mg/mL炭黑颗粒(Printex90)染毒组,每组分为3个亚组,采用暴露式气管灌注法,分别一次性灌注体积为0.05、0.10、0.15mL染毒溶液,灌注24h后颈椎脱臼处死,肉眼观察小鼠肺组织的变化,镜下观察肺组织病理改变.结果当炭黑浓度为2.5 mg/mL,灌注体积为0.05 mL时,小鼠全部存活,肺组织出现充血及炎性细胞浸润,但随着灌注体积的增加,小鼠存活率下降至83.3％,肺部炎症反应逐渐加剧,支气管壁增厚;当炭黑浓度为25 mg/mL时,随着灌注体积的增加小鼠的存活率下降至66.7％,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P＜0.05),肺组织内支气管壁增厚,沉积大量的炭黑颗粒,出现较明显充血和炎性细胞的浸润.结论当炭黑颗粒浓度为2.5 mg/mL,灌注体积为0.05 mL时,小鼠存活率高,该条件可为后期开展重复剂量气管灌注炭黑颗粒的慢性毒性实验提供一定的数据参考.【期刊名称】《湖北科技学院学报（医学版）》【年(卷),期】2018(032)002【总页数】5页(P106-108,111,封2)【关键词】暴露式气管灌注;炭黑颗粒;小鼠【作者】蒋永红;舒涛;涂宏松;刘锐;陈倩;周婷【作者单位】武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;职业危害识别与控制湖北省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R965.1近年来，我国环境空气颗粒物污染日益严重，炭黑颗粒是大气颗粒物的核心组分，经呼吸道进入人体后可到达多个器官组织，除了可引起慢性支气管炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌等呼吸系统疾病外，还可导致心血管及生殖系统等多系统脏器发生病变[1-3]。

锦灯笼对于PM_(2.5)非暴露式气管滴注建立小鼠模型的治疗作用

作者简介：徐保利（1981—），男，博士，副研究员，研究方向：中药学。

E-mail:***********************通信作者：王晓波（1961—），男，博士，主任药师，研究方向：中药药剂学。

E-mail:**********************锦灯笼对于PM 2.5非暴露式气管滴注建立小鼠模型的治疗作用徐保利1, 2，于洪海3，姜玲玲2，樊　磊1，王晓波1*（1. 中国人民解放军联勤保障部队第967医院，辽宁大连 121000；2. 大连大学附属中山医院，辽宁大连 121000；3. 华电电力科学研究院有限公司东北分公司，辽宁沈阳 110171）摘要：目的　观察锦灯笼水提液对于PM 2.5非暴露气管滴注小鼠模型的治疗作用。

方法　利用非暴露气管滴注的方法建立PM 2.5小鼠模型，采用不同浓度的锦灯笼水提液灌胃治疗，以地塞米松为阳性对照药物，分组治疗后观察小鼠肺部组织HE 染色切片，白细胞计数及血常规检测结果，血清及肺部组织的炎性因子表达水平。

结果　PM 2.5非暴露滴注造成小鼠肺部炎性浸润，生理结构改变，白细胞计数结果显示肺部炎症，血清及肺部组织中的炎性因子升高；锦灯笼水提液可以减轻PM 2.5造成的肺部炎症，改善其生理结构，使白细胞计数回复正常，降低血清及肺部炎性因子的水平。

结论　锦灯笼水提液可以降低PM 2.5造成的小鼠肺部炎症，改善小鼠肺部因PM 2.5所受的损伤。

关键词：锦灯笼；PM 2.5；非暴露气管滴注法；炎症中图分类号：R285.5 文献标识码： A 文章编号：1673-6427（2020）06-28-04doi: 10.13728/j. 1673-6427. 2020. 06. 007The Therapeutic Effect of Calyx Seu Fructus Physalis on the Mouse Model with PM 2.5Non-exposed Tracheal Instillation MethodXU Bao-li 1, 2, YU Hong-hai 3, JIANG Ling-ling 2, FAN Lei 1, WANG Xiao-bo 1*(1. The 967th Hospital of Chinese People's Liberation Army, Dalian 121000, China; 2. Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University, Dalian 121000, China; 3. Huadian Electric Power Research Institute Co., LTD.Northeast Branch, Shenyang 110171, China)Abstract: Objective To observe the therapeutic effect of water extract from Physalis Calyx Seu Fructus(PCSF) on the mouse model of PM 2.5 non-exposed tracheal instillation method. Methods The PM 2.5 mouse model is established by non-exposed tracheal instillation method. Different concentrations of water extract from PCSF are used for gavage treatment, and Dexamethasone is used as the positive control drug. After group treatment, HE staining sections of lung tissues of mice are observed, white blood cell count and blood routine test results are observed, and the expression levels of inflammatory factors in serum and lung tissues are also observed. Results PM 2.5 caused inflammatory infiltration in mouse lungs and physiological structure changed. The white blood cell count show lung inflammation, and elevat levels of inflammatory factors in serum and lung tissue. Water extract from PCSF reduce lung inflammation which caused by PM 2.5, and improve its physiological structure. It also restore the white blood cell count results to the normal, and reduce serum and lung inflammatory factors. Conclusion The water extract of PCSF can reduce the lung inflammation which caused by PM 2.5, and improve the lung injury in mice.Keywords: Calyx Seu Fructus Physalis; PM 2.5; non-exposed tracheal instillation method; inflammation 锦灯笼为茄科植物酸浆Physalis alkekengi L.var. franchetii （Mast.）Makino 的干燥宿存萼或带果实的宿萼。

暴露式与非暴露式气管滴注方法建立小鼠急性肺损伤模型及其效果比较

［文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０３－０４１４－０５［收稿日期］　２０１２－０１－０４［基金项目］　国家自然科学基金资助课题（８１１０００３０）［作者简介］　苗雨丹（１９７７－），女，吉林省白城市人，讲师，医学硕士，主要从事临床解剖学方面的研究。

［通信作者］　李　波（Ｔｅｌ：０４３１－８５６１９４６６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｂｏ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）；董春玲（Ｔｅｌ：０４３１－８８７９６８２０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｃｈｕｎｌｉｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ）网络出版时间：　２０１２－０４－１７　０９：１３网络出版地址：　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２２．１３４２．ｒ．２０１１１１０１．０９１１．００４．ｈｔｍｌ暴露式与非暴露式气管滴注方法建立小鼠急性肺损伤模型及其效果比较苗雨丹１，董春玲２，刘　玲１，夏长丽１，苏　略１，李　波１（１．吉林大学白求恩医学院人体解剖学系，吉林长春１３００２１；２．吉林大学第二医院呼吸内科，吉林长春１３００４１）［摘　要］　目的：比较暴露式与非暴露式气管滴注方法建立的小鼠急性肺损伤（ＡＬＩ）模型的各种指标，确立更有效的气管滴注方法。

方法：４５只健康雄性Ｃ５７／ＢＬ６小鼠随机分为对照组、非暴露组和暴露组，每组１５只。

以脂多糖（ＬＰＳ）作为刺激物，非暴露组和暴露组小鼠分别采用非暴露式和暴露式气管滴注方法建立ＡＬＩ模型，造模后２４ｈ进行支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）生化指标检测、ＢＡＬＦ细胞分类计数、肺湿／干重（Ｗ／Ｄ）比值测定以及肺组织病理形态学观察。

结果：暴露组小鼠造模的成功率（１００％）高于非暴露组（８６．７％）。

与对照组比较，非暴露组和暴露组小鼠ＢＡＬＦ中总蛋白浓度、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性、中性粒细胞数量以及肺Ｗ／Ｄ比值显著升高（Ｐ＜０．０５）；暴露组小鼠ＢＡＬＦ总蛋白浓度、ＡＬＰ和ＬＤＨ活性、中性粒细胞数量以及肺Ｗ／Ｄ比值明显高于非暴露组（Ｐ＜０．０５）。

小鼠急性肺损伤造模条件的探究

小鼠急性肺损伤造模条件的探究罗友;吴欣瞳;庞欣欣;肖珂;彭克美;宋卉【摘要】In order to explore the building conditions of acute lung injury,healthy Kunming mice were selected,by intraperitoneal injection of cascade dose of LPS(0,2,4,6,8,10 mg/kg)to observe the mice respiratory frequency,mortality,lung W/D value and the changes of tissue structure in different conditions,and detect the expression changes of inflammation cytokine,IL-10,TNF-α,IL-1β and IFN-γ.The results showed that compared with control group,lung W/D value in 4 mg/kg LPS group significantly increased(P<0.05)and lung W/D values in 6,8 and 10 mg/kg LPS groups extremely significantly increased(P<0.01).Pathological analysis showed that 6 mg/kg LPS group appeared lung congestion,alveolar luminal and pulmonary interstitial exudation,alveolar septal thickening,and a small amount of neutrophil infiltration.8 and 10 mg/kg LPS groups appeared pulmonary congestion,alveolar and pulmonary interstitialexudation,alveolar septal thickening and neutrophil pared with control group,collagen fibers of the lung tissue in 6,8,10 mg/kg LPS group increased,and more appeared in the lung around the trachea,10mg/kg LPS group was the most obvious.The inflammatory factors in 2,4,6,8 and 10 mg/kg LPS groups had extremely significantly increased compared with control group(P<0.01).Pathological biopsy and related indicators showed that the model of mice could be successfully constructed by intraperitoneal injection of 8 mg/kg LPS for 12 h.%为探究构建急性肺损伤模型的条件,本试验选用健康昆明小鼠,经腹腔注射递增剂量脂多糖(LPS)(0、2、4、6、8、10 mg/kg),观察不同条件下小鼠呼吸频率、死亡率、肺脏干湿重比值及组织结构变化,检测炎症因子IL-10、TNF-α、IL-1β及IFN-γ在不同程度肺损伤中的表达量变化.结果显示,4 mg/kg LPS组肺脏干湿重比值显著高于对照组(P<0.05);6、8和10 m/kg LPS组肺脏干湿重比值极显著高于对照组(P<0.01).病理切片分析显示,6 mg/kg LPS组小鼠肺脏出现充血,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡隔增厚,出现少量中性粒细胞浸润;8、10 mg/kg LPS组小鼠肺脏充血明显,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡明显隔增厚,出现中性粒细胞浸润;与对照组相比,6、8、10 mg/kg LPS组肺组织中胶原纤维大量增多,且多出现在肺气管周围,10 mg/kg LPS组现象最明显.炎症因子检测分析结果显示,与对照组相比,2、4、6、8、10 mg/kg LPS组炎症因子均极显著增加(P<0.01).结合病理组织切片及相关检测指标表明,昆明小鼠腹腔注射8 mg/kg LPS并作用12 h,可成功构建急性肺损伤模型.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)008【总页数】8页(P2269-2276)【关键词】急性肺损伤;小鼠;脂多糖;肺组织【作者】罗友;吴欣瞳;庞欣欣;肖珂;彭克美;宋卉【作者单位】华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉 430070;华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉 430070;华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉 430070;华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉430070;华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉 430070;华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院,武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】S852.1急性肺损伤是肺脏的一种过度炎性反应，其发病的主要特点是发病急且严重，发病率、死亡率较高。