微生物第17章_PPT幻灯片

运送
• 针筒运送法
• 无氧小瓶运送法
• 标本充盈运送法 • 组织块运送法
• 厌氧袋运送法
• 棉拭运送法 • 注意：送到实验室应在20-
30分钟内处理完毕，不超过 2小时，标本不宜冷藏。
厌氧菌－－标本观察和涂片镜检
• 肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带 血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等）
• 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法，镜检发现染色不均，形态奇特 者常为厌氧菌的表现。如两端钝圆着色 深，中间着色浅，不均匀，有空泡，长 短不一的革兰阴性杆菌常为脆弱类杆菌。
厌氧菌－－标本接种
• 每份标本至少应接种在3个血琼脂平板，分 别放于有氧、无氧和含5%-10%CO2环境 中培养。
• 仅要求厌氧菌生长，还应接种一种或几种 选择性培养基抑制其他细菌生长。同时应 接种一支液体培养基增菌。
• 为了便于在混合培养物中发现厌氧菌，一 般将标本分3区划线接种于平板上，在1、2 区交界处贴一张含5ug/片的甲硝唑纸片， 如周围出现抑菌圈则表明有厌氧菌存在。
厌氧菌－－常用培养基
• 非选择性培养基：强化血琼脂平板（BAP） 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生 素K
• 选择培养基 七叶苷胆汁平板（BBE）－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板（KVLB）－－培养产 黑色素普雷沃菌 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌 卵黄平板（EYA）和兔血平板－－产气荚膜梭菌。
厌氧菌－－分离培养
• 初代培养： 厌氧培养48h，放线菌则延长至72-96 小时。
• 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试 验，每个菌落接种2个平板，分别进行需 氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不 生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定
厌氧菌－－鉴定
• 菌体形态： • 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 • 药敏鉴定试验：
厌氧菌－－厌氧培养法
• 厌氧罐培养法 • 厌氧器袋法 • 厌氧手套箱法 • 疱肉培养法 • 厌氧罐培养法具有设备简单、操作方便、所占
空间小等优点，是目前国内普遍采用的方法； 厌氧气袋法简便易行，携带方便，尤其适合床 边接种和基层医院使用；厌氧手套箱是目前国 际上公认的厌氧菌培养的最佳设备。但耗气量 大，适用于大量培养。
厌氧菌
• 概念: 是一大群在有氧条件下不能生长， 必须在无氧环境条件下才能生长繁 殖的细菌。
厌氧菌
特点:
• 1 种类多。厌氧菌分为芽胞厌氧菌和无芽胞厌氧菌两大类。 前者只有一个菌属，即梭状芽胞杆菌属，共有100多个种； 后者有40多个菌属，300多个种和亚种。
• 2 分布广。在正常人体的皮肤以及所有与外界相通的腔道如 口腔、上呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道等的黏膜上均有大量 厌氧菌寄居。除梭状芽胞杆菌能以芽胞的形式在自然界长期 存活外，绝大多数厌氧菌存在于人和动物体内，与需氧菌、 兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，并且在种类和数量上 占绝对优势，如在结肠中，厌氧菌与需氧菌或兼性厌氧菌的 比例为1000:1，即厌氧菌占结肠细菌的99.9%。
2、微需氧菌： 在低氧压（5～6％）生长最好，氧压大于
10％对细菌有抑制作用。 3、耐氧菌：
在厌O2环境中生长良好，在空气环境中，在 新鲜配制的固体培养基表面微弱生长。
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（二）厌氧生长的机制：
2、缺乏细胞色素和细胞色素氧化酶： 细胞色素和细胞色素氧化酶氧化还原
电势很高。有氧条件下才能氧化培养基中的 营养物质，产生能量，维持细菌生长繁殖， 厌氧菌没有这些酶类，故不能在有氧条件下 生存。
(2)分泌特殊的分泌物。分泌物有腐败性恶 臭、呈脓性并含有坏死组织。
(3)感染部位多在近黏膜处。尤其是人体腔 道等黏膜部位有破损或炎症形成的感染。
(4)长期使用氨基糖苷类抗生素治疗无效的、 新近有流产史以及胃肠道手术的感染。
厌氧菌感染的临床及细菌学特征
(5)深部外伤，如枪伤、人被动物咬伤后的 继发感染、深而窄的创伤感染。
• 3 感染可发生于人体的各个部位，遍及临床各科。在临床厌 氧菌感染中，内源性感染多于外源性感染；由无芽胞厌氧菌 引起的感染多于芽胞厌氧菌的感染；混合感染多于单纯厌氧 菌感染。
一) 根据厌氧菌对氧的敏感程度，可将厌氧菌 分为三类：
1、专性厌氧菌（obligate anaerobe）： 在降低氧分压的条件下才能生长。
厌氧菌感染的条件
• 局部组织缺氧或氧化还原电势降低、机 体免疫功能下降；
• 皮肤黏膜的创伤和局部黏膜屏障作用的 破坏；
• 血管压迫，肿瘤压迫。 • 厌氧菌的外毒素、内毒素、荚膜及各种
酶； • 需氧菌或兼性厌氧菌的混合感染； • 共生菌提供的必需生长物质等
厌氧菌感染的临床及细菌学特征
(1)感染的局部有气体产生。多数厌氧菌能 在感染的局部产生气体，组织严重肿胀和 坏死，皮下有捻发音。
• 模式菌：酪氨酸菌(C.butyricum)。 • 本菌属细菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、人和
动物肠道以及腐败物中。多为腐物寄生菌，少数为致 病菌，能分泌外毒素和侵袭性酶类，引起人和动物治 病。 • 临床上有致病性的梭状芽孢杆菌主要是某些厌氧芽孢 杆菌（anaerobic sporeforming bacilli）,如破伤风 梭菌(C.tetani)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)、肉毒 梭菌(C.botulinum)和艰难梭菌（C.difficile）等，分 别引起破伤风、气性坏疽、食物中毒和伪膜性结肠炎 等
(6)常规血培养呈阴性的细菌性心内膜炎， 并发脓毒性血栓性静脉炎的感染。
(7)分泌物直接涂片染色，有厌氧菌形态特 征者；或直接镜检有细菌，常规培养却 阴性；液体及半固体培养基深部有细菌 生长。
厌氧菌－－标本采集与送检
采集
• 部位恰当
• 正确采集
• 避免污染
• 严格厌氧
• 及时送检
• 采集时须注意：标本不应 被正常菌群污染，应尽量 避免接触空气，标本采集 后应尽快送检，避免标本 干燥。
卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属 多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链 球菌 • 生化反应 • 气相色谱技术
第一节 梭状芽胞杆菌
• 包括一大群厌氧或微需氧的粗大芽孢杆菌。革兰染色 阳性，芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌 体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状，故得名。
• 梭状芽孢杆菌属由130种细菌造成，DNA的GC比为 22%~54%。