微生物总数检测方法(真菌)
真菌检测方法范文
真菌检测方法范文真菌是一类微生物，分布广泛，常见于土壤、水体、植物、动物以及人体等环境中，有些真菌对人类和其他生物有害。
因此，对真菌进行检测和监测是很重要的。
下面将介绍一些常见的真菌检测方法。
1.培养法培养法是最常用的真菌检测方法之一、该方法通过将样品（土壤、水体、食品等）接种在富含营养物的培养基上，利用真菌的生长特性进行培养和分离。
首先，样品经过稀释，然后将其接种在含有葡萄糖、氮源、矿物质等的培养基上，利用不同温度和湿度条件进行培养。
培养所得的真菌会在培养皿上形成菌落，这些菌落可以用肉眼观察或利用显微镜进行进一步鉴定。
2.直接显微镜检测法直接显微镜检测法是一种快速、直接的检测方法。
样品（如食品、空气、皮肤等）经过简单处理后直接观察。
在显微镜下，可以直接观察到真菌的形态、大小、结构和颜色等特征。
这种方法不需要等待真菌生长，对于一些难以培养的真菌也是有效的。
但是，该方法不能提供详细的物种鉴定，只能确定真菌的存在。
3.PCR法PCR（聚合酶链式反应）法是一种利用DNA扩增的方法来检测真菌的存在。
该技术通过设计特异性引物（PCR引物），在反应体系中引发DNA扩增反应。
首先，提取待检样品中的真菌DNA，然后在PCR反应中将目标DNA扩增为大量可见的DNA片段。
这些片段可以通过电泳等技术进行分析和鉴定。
PCR法可以快速、灵敏地检测真菌，并提供物种水平的鉴定结果。
4.免疫学检测法免疫学检测法是一种使用特异性抗体来检测真菌的方法。
该方法通过将待检样品与特定的抗真菌抗体结合，然后将该复合物与一种可视信号（如荧光素或酶染色剂）结合。
当真菌存在时，抗体与其结合，产生荧光或颜色的变化。
这种方法可以快速、高效地检测真菌，但需要特异性的抗体和相关设备。
5.分子生物学方法分子生物学方法（如扩增子测序和全基因组测序）对于真菌检测和鉴定来说是一种非常有力的工具。
这些方法利用高通量测序技术对待检样品中的所有基因进行测序，然后通过比对数据库中的已知基因组进行比较和鉴定。
微生物菌落总数计数方法
微生物菌落总数计数方法微生物菌落总数计数方法有很多种，下面列举了其中的50种方法并对其进行详细描述：1. 胶平板法：将微生物样品通过稀释后均匀涂布在富营养培养基上，培养后统计菌落数量。
2. 液体计数法：使用专门的装置进行微生物菌落计数，例如波形计数器。
3. 膜过滤法：将微生物样品通过膜过滤器，然后将膜放到富养分培养基上进行培养和计数。
4. 容积法：将微生物样品通过稀释，然后使用容积计数器对其进行计数。
5. 水平采样法：将微生物样品通过固体培养基，然后根据采样水平进行菌落计数。
6. 微阵列计数法：使用微阵列技术进行微生物菌落计数，高通量，自动化程度高。
7. 波数计数法：通过光学检测装置对微生物样品的波数进行计数。
8. 流式细胞技术：通过流式细胞仪对微生物样品中的细胞进行计数和分析。
9. PCR技术：通过定量PCR对微生物样品中的特定基因进行定量，从而间接计算出微生物菌落总数。
10. 分光光度计法：通过分光光度计测定微生物样品中生物的光学密度，进而计算其菌落总数。
11. 过膜法：利用薄膜将微生物分布均匀后计数。
12. 电子计数法：通过电子显微镜进行微生物菌落计数。
13. 温度计数法：根据微生物在不同温度下的生长特性进行计数。
14. 荧光法：利用荧光染料对微生物菌落进行标记并计数。
15. 光学显微镜法：利用光学显微镜对微生物进行直接观察和计数。
16. 超声波法：利用超声技术将微生物分散均匀后计数。
17. 图像分析法：对微生物样品在图像上的特征进行分析，并计算菌落总数。
18. 颜色计数法：通过颜色反应对微生物菌落进行计数。
19. 电泳计数法：通过蛋白电泳对微生物进行计数。
20. 微型生物反应器法：利用微型生物反应器的特性对微生物进行计数。
21. 电化学法：通过电化学技术对微生物样品进行计数。
22. 生物传感器法：利用生物传感器对微生物进行快速计数。
23. 感光计数法：利用光敏感材料对微生物进行计数。
24. 气溶胶计数法：利用气溶胶技术对微生物进行计数。
食品微生物检验教案食品中真菌的检验（酵母菌和霉菌的检验）
第七章食品中真菌的检验（酵母菌和霉菌的检验）目的要求：掌握食品中霉菌、酵母菌总数的测定方法重点难点：菌落计数课时安排：2教学过程：一、检验程序检样→处理→稀释→平板分离培养→菌落计数→报告二、操作要点（一）采样1、粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。
小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。
2、海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。
必要时采取有疑问的样品送检。
3、谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。
（二）样品处理（稀释）1、以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。
2、用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
3、取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。
（三）培养倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。
（四）、计数报告选取菌落数10～150之间的平板进行计数。
（稀释度选择和菌落报告方式参考菌落总数的测定）小结：主要介绍了食品中酵母菌和霉菌总数的测定方法思考题：列表说明霉菌、酵母菌数的测定与菌落总数的测定有什么相同的地方和不同的地方。
微生物总数检测方法(真菌)
微生物总数检测方法（真菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基）配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升。
2. 培养条件：25℃-30℃；时间：72-96小时。
二、检测与计数方法1. 梯度稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3—5滴，分散剂可以是吐温，OP—80，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每一个稀释度瓶种应放有适量的玻璃珠，以保证菌液分布均匀）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量，mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
检测真菌的方法
检测真菌的方法真菌是一类具有菌丝体结构的生物，它们在自然界中广泛分布，并且在很多生物体中起着重要的生理作用。
然而，真菌也能够引发人类和动植物的病理反应，影响生产和健康。
因此，如何检测真菌成为了一个重要的问题。
本文将介绍几种检测真菌的方法。
一、直接镜检法该方法是直接观察病原微生物（包括真菌）的生长繁殖和形态特征。
直接镜检法简单、快速、较为经济，是常规检测方法之一。
它适用于疾病的早期诊断和病原微生物初步分类、计数等方面。
但是，该方法不能确定种属和菌株的差异，有误判的可能性。
二、培养法其原理是利用不同的培养基制备环境，为病原微生物的生长提供必要的生理和营养条件，并通过形态、生理、生化、分子生物学等特征分析，确定分离出的病原微生物属种和种属。
培养法在临床医学和食品工业中得到广泛应用。
该方法能够准确分离和鉴定真菌，但是培养时间和环境条件对结果产生影响；而且对于一些新的真菌品种，由于其生长繁殖特点和生理生化过程不同，使用的培养基种类、组成和培养条件也都需要不同的优化。
三、免疫学方法免疫学方法是运用生物学、生物技术、免疫学等学科知识的一种检测方法。
它包括免疫荧光法、免疫印迹法、酶联免疫法等。
特别是近年来的分子生物学技术进步，使免疫学方法在真菌检测中越来越得到重视和应用。
该方法准确度高、快速、灵敏性强，但目前仍有很多真菌无法检测。
四、核酸检测法该方法是通过对真菌的核酸特征进行检测，确定其属种和种属甚至公共和个体差异。
这种检测方法通常与PCR技术相结合，克服了繁琐、耗时的传统方法的缺点，可以在较短的时间内准确检测出真菌。
核酸检测法适用于疾病的早期诊断和预防，它是一种非常有效的检测方法。
总之，选择不同的检测方法应根据需要、条件、目的和实际情况进行综合考虑。
当然，随着科技的发展和现代生物技术的进步，相信真菌检测技术处理能力将会朝着完整、精准、高效和自动化的方向发展。
微生物鉴定 细菌 霉菌计数
微生物鉴定细菌霉菌计数
微生物鉴定中细菌、霉菌的计数一般采用平皿法。
这是一种常用的计数方法，包括常规法和培养基稀释法。
在采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液。
取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中（如果是培养基稀释法，则将1ml供试液均匀分注入2个或以上的平皿中）。
然后，注入15~20ml 温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，待其凝固。
通过这种方法，可以测定出供试品中的细菌、霉菌及酵母菌的菌数。
如需更多信息，建议咨询相关领域的专家或查阅相关文献。
真菌检测方法
真菌检测方法真菌是一类微生物，广泛存在于自然界中，包括土壤、空气、水体等环境中。
在生活和生产中，真菌不仅对人类和动植物健康造成威胁，还会对食品、饮用水、药品等产品质量产生影响。
因此，对真菌的检测至关重要。
本文将介绍几种常见的真菌检测方法。
首先，传统的真菌检测方法之一是培养法。
这是一种常用的方法，通过将样品接种在含有营养物质的培养基上，利用真菌在培养基上生长繁殖的特性，观察和统计培养基上的真菌数量和种类。
这种方法简单易行，对于一些真菌种类的检测效果较好，但是需要较长的培养周期，并且对于一些难以培养的真菌种类可能无法进行检测。
其次，PCR法是一种利用聚合酶链式反应（PCR）技术进行真菌检测的方法。
这种方法可以通过扩增真菌DNA或RNA的特定片段，来检测样品中的真菌数量和种类。
PCR法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速准确地进行真菌检测，尤其适用于对样品中真菌种类进行快速筛查和鉴定。
另外，生物传感器技术也被广泛应用于真菌检测领域。
生物传感器是一种利用生物元件（如酶、抗体、细胞等）与传感器技术相结合的检测方法。
通过生物元件与目标真菌的特异性反应，可以实现对真菌的快速检测和定量分析。
生物传感器技术具有检测速度快、操作简便、灵敏度高等优点，对于一些需要快速检测的场合具有很大的应用潜力。
最后，近年来，基于光学技术的真菌检测方法也得到了广泛的关注和应用。
例如，荧光显微镜技术可以通过观察样品中真菌的荧光特性来进行检测；激光散射技术则可以通过检测样品中真菌颗粒的散射光信号来实现真菌的快速检测。
这些基于光学技术的检测方法具有操作简便、检测速度快的优点，对于真菌检测领域具有重要的应用价值。
综上所述，针对不同的真菌检测需求，可以选择合适的检测方法进行应用。
传统的培养法适用于一般真菌的检测；PCR法适用于快速准确的真菌鉴定；生物传感器技术和基于光学技术的检测方法则具有快速、灵敏的特点，适用于一些需要快速检测的场合。
在实际应用中，可以根据具体的检测需求和实际情况选择合适的真菌检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
简述菌落总数检测程序
简述菌落总数检测程序
菌落总数检测程序是用来确定食品、水、空气等样品中微生物
总数的一种常见检测方法。
其主要步骤包括样品制备、稀释、接种、培养和计数等。
首先，样品制备阶段包括将样品称取并加入适当的稀释液中进
行均匀搅拌或震荡，以确保样品中的微生物能够充分分散。
接下来是稀释阶段，将样品进行系列稀释，以便于后续的菌落
计数。
通常采用10倍稀释法，即取1ml样品加入9ml稀释液，得到的新溶液再取1ml加入9ml稀释液，以此类推。
然后进行接种阶段，将适量稀释后的样品溶液分别接种到含有
适当培养基的琼脂平板上，并通过灭菌的技术将样品均匀涂布在琼
脂平板表面。
接着是培养阶段，将接种好的琼脂平板置于恒温培养箱中，让
微生物在适宜的温度下进行生长，通常培养时间为24-48小时。
最后是计数阶段，通过肉眼或者计数仪器对琼脂平板上形成的
菌落进行计数，得出菌落总数。
通常，只有直径在1-2mm之间、形态典型的菌落才会被计数。
总的来说，菌落总数检测程序通过样品制备、稀释、接种、培养和计数等步骤，能够对样品中的微生物总数进行评估，为食品、水、空气等领域的卫生安全提供重要的参考依据。
真菌检测方法
真菌检测方法真菌是一类微生物，它们在自然界中广泛存在，包括在土壤、水体、空气和生物体表面等各种环境中。
一些真菌对人类健康和环境造成了威胁，因此真菌的检测和监测显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的真菌检测方法，帮助读者更好地了解真菌检测的原理和应用。
首先，常见的真菌检测方法之一是培养法。
培养法是一种传统的真菌检测方法，通过将样品放置在含有丰富营养物质的培养基上，利用真菌在特定条件下生长和繁殖的特性，观察和鉴定真菌的种类和数量。
这种方法简单易行，可以得到较为准确的结果，但需要较长的时间，通常需要数天甚至数周才能得到结果。
其次，PCR法也是一种常用的真菌检测方法。
PCR法是一种分子生物学技术，通过扩增目标真菌的特定基因片段，从而实现对真菌的检测和鉴定。
相比于传统的培养法，PCR法具有快速、高效、灵敏度高等优点，可以在短时间内得到结果，并且可以对样品中的微量真菌进行检测，是一种非常有效的真菌检测方法。
另外，免疫学检测法也是一种常见的真菌检测方法。
免疫学检测法是利用抗体与特定真菌抗原结合的原理，通过免疫学试剂盒或免疫层析法等技术，对真菌进行快速检测和鉴定。
这种方法具有操作简便、快速、准确性高等优点，广泛应用于食品、环境、医药等领域的真菌检测中。
最后，基因测序技术也逐渐被应用于真菌检测领域。
基因测序技术可以对真菌的整个基因组进行测序，从而全面了解真菌的种类、特性和遗传信息。
这种方法能够提供更为全面和深入的真菌检测结果，对于一些复杂的真菌样品具有独特的优势，但是其成本较高，操作复杂度也较大。
综上所述，真菌检测是一项重要的工作，不同的真菌检测方法各有特点，可以根据具体的应用需求选择合适的方法进行检测。
在实际应用中，可以根据样品的特点、检测的目的和要求，综合考虑不同方法的优缺点，选择最适合的真菌检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的真菌检测方法能够对读者有所帮助，为真菌检测工作提供参考和指导。
菌落总数检测方法
菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，它可以用于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制。
菌落总数检测方法的准确性和可靠性对产品的质量和安全至关重要。
因此，了解菌落总数检测方法的原理和操作流程对于相关行业的从业人员至关重要。
菌落总数检测方法的原理是通过将待检样品进行适当稀释后，均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，然后在一定的温度下培养一定的时间，最后根据菌落的数量来计算样品中微生物的数量。
这种方法的优点是简单易行，不需要复杂的设备和技术，适用于大批量样品的检测。
菌落总数检测方法的操作流程主要包括样品的制备、琼脂平板的制备、涂布和培养、计数和结果分析等步骤。
首先，对待检样品进行适当的稀释，以确保在琼脂平板上形成可数的菌落。
然后，制备含有适当培养基的琼脂平板，并进行涂布和培养。
在培养结束后，对菌落进行计数，并根据计数结果进行样品的微生物数量统计和分析。
在进行菌落总数检测时，需要注意一些关键的操作技巧和注意事项。
首先，样品的制备和处理要严格按照相关标准和规定进行，以避免外界环境的污染。
其次，在琼脂平板的制备、涂布和培养过程中，需要严格控制温度、湿度和时间等因素，以确保菌落的正常生长和形成。
最后，在菌落计数和结果分析时，需要仔细进行，确保结果的准确性和可靠性。
除了传统的琼脂平板法外，菌落总数检测方法还有其他一些新的技术和方法。
比如，膜过滤法、光学密度法、生物发光法等，这些方法在一定的情况下可以替代传统的琼脂平板法，具有更快速、更灵敏的特点。
但无论采用何种方法，都需要严格按照相关标准和规定进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
总之，菌落总数检测方法是一种常见且重要的微生物检测方法，它对于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制起着至关重要的作用。
了解菌落总数检测方法的原理和操作流程，掌握关键的操作技巧和注意事项，对于相关行业的从业人员具有重要的意义。
希望本文所述内容能够对菌落总数检测方法有所了解，为相关行业的微生物质量控制工作提供一些帮助。
菌落总数检测方法
菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，用于评估食品、饮用水、医药制品、化妆品等产品的卫生质量。
菌落总数是指在一定条件下，一定时间内生长的微生物菌落总数，是评价样品中微生物污染程度的重要指标。
正确的菌落总数检测方法对于保障产品质量和消费者健康具有重要意义。
菌落总数检测方法主要包括表面菌落总数检测和悬浮菌落总数检测两种。
表面菌落总数检测是指将样品表面的微生物进行检测，常用的方法包括接触平板法和印记法。
接触平板法是将含有富集培养基的琼脂平板与样品表面接触一定时间，然后进行培养计数。
印记法则是将样品表面印在琼脂平板上，然后进行培养计数。
悬浮菌落总数检测是指将样品中的悬浮微生物进行检测，常用的方法包括滤膜法和涂布法。
滤膜法是通过将样品过滤到膜上，然后将膜培养计数。
涂布法则是将样品涂布在琼脂平板上，然后进行培养计数。
在进行菌落总数检测时，需要注意以下几点。
首先，样品的采集和处理应当符合相关标准和规范，避免外界环境对样品的污染。
其次，培养基的选择应当根据样品的特性和检测要求进行合理选择，以保证菌落的生长和计数准确。
此外，培养条件的控制也非常重要，包括温度、湿度、培养时间等因素，都会对菌落总数的检测结果产生影响。
最后，在进行菌落计数时，需要注意菌落的形态和颜色，避免误判。
除了传统的培养计数方法外，现代生物技术的发展也为菌落总数检测提供了新的手段。
比如，基于PCR技术的快速检测方法可以在较短的时间内对样品中的微生物进行快速检测和鉴定，大大缩短了检测周期。
另外，基于光学原理的生物传感器技术也可以实现对微生物的快速检测，具有灵敏度高、操作简便等优点。
总的来说，菌落总数检测方法是保障产品卫生质量的重要手段，正确的检测方法和操作流程对于获取准确的检测结果至关重要。
随着生物技术的不断发展，菌落总数检测方法也在不断完善和更新，为产品质量安全提供了更多的保障。
希望本文所述内容对您有所帮助，谢谢阅读！。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。
样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。
如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。
在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。
1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。
结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。
真菌检测方法
分离培养：无菌采取病料接种马铃薯琼脂培养基中，置37℃恒温箱中培养24小时，长成绒毛样菌丝，未见其它细菌生长。
经48小时培养长成白色菌落。
72小时菌落呈纽扣状，由中心向外周逐渐变深，转变成灰白色、灰绿色。
取培养物镜检可见大量球形的分生孢子。
通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。
真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。
真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。
根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部真菌，包括皮肤癣菌、孢子丝菌、念珠菌、曲霉菌、隐球菌、组织胞浆菌等。
而霉菌多为细胞真菌的一种，也为深部感染真菌，包括烟曲菌、黄曲菌、黑曲菌、土曲菌等，常发生于免疫力低下的患者，引起全身播散性感然，影响预后。
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。
目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。
在日常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长,孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌,将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。
中国药典微生物限度检查法
中国药典微生物限度检查法
中国药典是中华人民共和国国家药品监督管理局编制的用于药品质量标准和规范的权威性文献。
其中，微生物限度检查是对药物产品中的微生物污染进行评估和控制的重要环节。
中国药典中的微生物限度检查法主要包括以下几个方面：
1.检测项目：微生物限度检查主要关注细菌、真菌和酵母菌
的存在与数量。
通常会检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉
菌和酵母菌等常见微生物。
2.样品准备：样品准备过程中，要根据具体要求制备适当稀
释的样品溶液。
根据不同产品的特点和要求，可能需要使
用适当的培养基进行预处理。
3.检测方法：中国药典中提供了一系列的微生物限度检测方
法，包括涂片法、水洗法、滤膜法等。
这些方法可以根据
不同的样品类型和特性选择适合的检测方法。
4.培养和观察：按照检测方法的要求，将样品接种在适当的
培养基上，进行培养并观察一定时间。
观察期间，需要注
意各种细菌、真菌和酵母菌的生长情况。
5.计数和判定：根据培养结果，进行微生物数量的计数，并
与规定的限度标准进行比较。
根据比较结果，判定样品是
否符合微生物限度标准。
通过微生物限度检查，可以评估药物产品中的微生物污染状况，并确保其在接受者使用时的安全性。
中国药典中的微生物限度
检查法为药品质量控制提供了重要的指导和标准。
微生物限度检查——微生物总数检查
微生物限度检查——微生物总数检查微生物限度检查是一种质量控制方法，用于评估样品中微生物的数量和种类，以确保样品符合相关标准和规定。
其中的微生物总数检查是其中一个重要的组成部分，它可以帮助确定样品是否符合卫生要求和产品质量标准。
微生物总数检查是通过特定的培养基和培养条件，对样品中可能存在的细菌、霉菌、酵母等微生物进行培养和计数，以获得样品中微生物总量的信息。
该方法可以检测出不同种类的微生物，包括细菌、霉菌、酵母等，适用于各种食品、药品、化妆品等产品的质量检测。
微生物总数检查的原理是，将一定量的样品接种到特定的培养基中，在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
通过计数菌落数目，可以得出样品中微生物的总数。
一般情况下，培养基的选择和培养条件的设置需要根据不同的样品和检测目的进行调整。
微生物总数检查的流程包括以下几个步骤：1、样品处理：将待检测的样品进行适当处理，以便于接种和计数。
2、接种：将处理后的样品接种到相应的培养基中，使微生物在培养基中生长繁殖。
3、培养：将接种后的培养基放在适宜的温度和湿度条件下进行培养，一般需要一定时间，根据具体情况而定。
4、计数：在培养结束后，对培养基中的菌落数目进行计数，得出样品中微生物的总数。
5、结果分析：根据计数结果进行分析，判断样品是否符合相关标准和规定。
微生物总数检查在实际工作中的应用场景非常广泛，包括食品安全、药品质量、环境保护等领域。
在食品工业中，微生物总数检查可以用来检测食品中的细菌数量，判断食品是否符合卫生标准和质量要求。
在药品工业中，微生物总数检查可以用来检测药品中的细菌数量，确保药品的安全性和有效性。
在环境保护领域，微生物总数检查可以用来检测水体中的细菌数量，评估水体的污染程度。
总之，微生物总数检查是微生物限度检查中的重要环节，它可以为产品质量和卫生标准提供重要的依据和支持。
随着科学技术的不断发展，微生物总数检查的方法和技术也在不断改进和完善，相信在未来会发挥更加重要的作用。
微生物总数检测方法
微生物总数检测方法
传统培养法是最常用的真菌总数检测方法之一、该方法基于真菌在特
定培养基上的生长和繁殖能力进行检测。
首先，将待检样品通过合适的方
式提取，例如水质中的真菌可以通过过滤等方法进行提取。
然后，将提取
物均匀涂布在含有适宜营养物质的琼脂平板上，在一定的温度和湿度条件
下培养一段时间。
真菌在平板上形成的典型菌落可以被肉眼或放大镜观察到，然后进行计数并估算真菌总数。
虽然传统培养法操作简单、经济实惠，但该方法存在培养时间长（通常需要3-7天）、特异性差以及不能检测非
可培养的真菌等缺点。
荧光定量PCR是分子生物学方法的一种改进，也是真菌总数检测的新
一代技术。
该方法通过引入荧光探针与PCR扩增结合，实现对真菌数量的
精确定量。
荧光定量PCR的基本原理是，在扩增过程中荧光探针与目标序
列结合，产生荧光信号，通过荧光信号强度与开始时添加的真菌DNA量进
行相关计算，从而精确测定真菌总数。
荧光定量PCR技术操作简便，结果
准确可靠，而且可以同时检测多个真菌种类，具有很大的应用潜力。
总之，微生物总数检测方法，特别是真菌总数检测方法的发展在食品
行业、制药行业和环境监测等领域具有重要的应用价值。
传统培养法虽然
操作简便，但存在一定的局限性，分子生物学方法（如PCR、实时定量PCR）和荧光定量PCR技术能够克服传统培养法的缺点，并且具有快速高效、特异性强等优点，进一步提高了真菌总数检测的准确性和可靠性。
随
着技术的不断进步，相信真菌总数检测方法会越来越完善，并为相关领域
的研究和应用提供更多便利和支持。
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑶油脂类供试品
• 取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶 解，或与最少量并能使供试品乳化的无菌 聚山梨酯 80或其他无抑菌性的无菌表面 活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般 不超过 40℃（特殊情况下，最多不超过 45℃），小心混合，若需要可在水浴中进 行，然后加入预热的稀释液使成 1∶10供 试液，保温，混合，并在最短时间内形成 乳状液。必要时，用稀释液或含上述表面 活性剂的稀释液进一步 10倍系列稀释。
– 培养和计数 培养条件和计数方法同平皿计数 法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。
• 菌数报告规则
– 以相当于 1g、1ml 或10cm2 供试品的菌落数 报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1 报 告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml 或10cm2 供 试品）,或﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
微生物生长的几种检测方法
一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
1.4菌丝长度测量法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长二、微生物计数法2.1血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
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微生物总数检测方法（真菌）
一、检测用培养基配方与培养条件
1.培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基）
配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升。
2. 培养条件：25℃-30℃；时间：72-96小时。
二、检测与计数方法
1. 梯度稀释
称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3—5滴，分散剂可以是吐温，OP—80，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每一个稀释度瓶种应放有适量的玻璃珠，以保证菌液分布均匀）。
3. 加样及培养
取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别
根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数
以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：
nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）
式中：
nm —质量有效活菌数，亿/g
nv —体积有效活菌数，亿/mL
x—有效菌落平均数，个
k —稀释倍数
v1—基础液体积， mL
v2—菌悬液加入量， mL
v0—样品量，mL
m0—样品量， g
重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
所以：
①悬液中要加分散剂分散菌团；
②震荡时间也要较液态发酵产品时间长，使用旋转式摇床控制在180——200r/min，
时间为60min 。