细菌鞭毛染色
实验六 细菌的鞭毛染色及其运动性观察
实验六细菌的鞭毛染色及其运动性观察生物112 周泓兆1102040226一、目的1.学习并掌握细菌的鞭毛染色法；2.学习并掌握悬挂法观察细菌运动。
二、原理鞭毛只有通过特殊染色方法时，才可在普通光学显微镜下看到。
本实验采用银染法，即先利用媒染剂（本实验使用的媒染剂为鞣酸）促进银离子在鞭毛上的沉积，加粗其直径，这样就能在显微镜下看到深褐色的菌体及褐色的鞭毛。
采用鞭毛染色法可以观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，而如果只需要了解供试菌株是否具有鞭毛，则才用悬滴法较简便。
该法可直接在显微镜下通过观察细菌的运动状况来推断鞭毛是否存在。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较，强的运动力，而衰老的细菌鞭毛易脱落，因此观察时应选用幼龄细菌。
三、材料1.菌种：普通变形杆菌（Proteus vulgaris）2.染料：鞭毛染液A液，鞭毛染液B液3.其它：干净载玻片，凹玻片，盖玻片，无菌水,洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，酒精棉球，接种环，酒精灯，镊子。
四、实验步骤1.制备菌悬液：用无菌长滴管取3-5ml无菌水，沿试管壁轻轻加入普通变形杆菌斜面上，将该试管置于28℃温箱中静置10min左右。
2.鞭毛染色（1）制片：取一经洗液浸泡过的干净玻片，滴一滴菌液于玻片的一端，然后轻抬此端，使菌液缓慢流向另一端，并在空气中自然干燥固定。
（2）染色：①在涂片处滴加鞭毛染液A液染色5min②用蒸馏水充分洗净A液③用鞭毛染液B液冲去残水，再加B液于涂片处，静置1min④用蒸馏水洗净B液，自然风干（3）镜检：在涂片上滴加适量香柏油，在油镜下观察鞭毛的形态。
3.悬滴法观察细菌的运动（1）涂凡士林：取一片干净无油的盖玻片，在其四周分别用牙签涂抹少许凡士林。
（2）滴菌悬液：用经过灭菌的接种环取少量菌悬液置于盖玻片中央。
（3）盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌悬液，并轻轻盖在盖玻片上，使两者粘合在一起，然后反转凹玻片，使菌悬液恰好悬在凹槽中央。
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
鞭毛染色液(石碳酸复红法)
版本：A5 修改日期：2024.03.27 鞭毛染色液(石碳酸复红法)产品简介： 细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证，通过鞭毛染色可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
Leagene 鞭毛染色液采用石碳酸复红法，该染色法的优点是采用石碳酸复红作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 载玻片、显微镜、接种环、恒温箱操作步骤(仅供参考)：1、 配制鞭毛染色工作液：使用前按试剂(A):试剂(B)=10:1混合，即为鞭毛染色工作液，室温保存待用。
2、 在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。
3、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次。
4、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀；切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。
5、 置室温或35℃恒温箱内干燥固定。
6、 滴加鞭毛染色工作液染色。
7、 轻轻水洗，自然晾干。
8、 镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心；细菌分布少的地方，鞭毛容易观察；细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
编号 名称 DM0031 50ml DM0031 100ml Storage 试剂(A): 染色稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): 碱性品红染色液 5ml 10ml RT使用说明书 1份染色结果：菌体和鞭毛皆为红色，菌体染色较鞭毛为深。
注意事项：1、固定时不宜用火焰固定。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：12个月有效。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法目前，细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同，可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法6类，前5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸，染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂，并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀（tarandfeather）”，鞭毛直径加粗，进一步染色后即可在油镜下观察。
1.碱性复红法和副品红法1926年由Gray首创，其媒染液成分包括20%丹宁酸水溶液2.0ml，硫酸钾铝饱和水溶液5ml，饱和氯化汞水溶液2ml，3%碱性复红乙醇（95%）溶液0.4ml，临用前混合，且需过滤后方可使用。
染片时，媒染剂染色约6min，具体时间尚需在试验中摸索确定，染色液是抗酸染色Ziehl-Neelsen石碳酸复红染液，染片时需要1小片吸水纸盖在涂片上，染色3min。
由于该方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。
Leifson于1930年建立了副品红法，并于1938年和1951年两次对该方法进行了改良，称为Leifson方法。
染色试剂由3种溶液组成：A为1.5%NaCl水溶液，B为3%单宁酸水溶液，C为乙酸副品红0.9g，碱性副品红0.3g溶解于100ml95%乙醇溶液中。
使用时把等体积A和B混合，然后再加2体积C与之相混。
该试剂冷藏可保存1～2个月。
2.结晶紫法，又称Ryu法1937年由Ryu建立，1982年由Kodaka等进行了改良。
媒染剂：5%石碳酸10ml，2g单宁酸和10ml饱和硫酸钾铝。
染色剂：饱和结晶紫乙醇溶液，即12g结晶紫溶于100ml无水乙醇中。
使用时把10份媒染剂与1份染色剂混合，染色5min。
1989年，Heimbrook等使用改良的Ryu染色试剂，采用湿片技术进行鞭毛染色，虽然可以观察到细菌鞭毛，但效果不好。
Ryu染色方法优点是试剂比较稳定，目前Difco公司已经研制出该方法的商品试剂盒，但染色效果亦不甚理想.3.维多利亚蓝B法1990年由Inoue等报道日本制药株式会社ShionogiSeiyaku 研制出一种细菌鞭毛染色商品试剂盒。
3鞭毛染色和蓝细菌
（一）细菌的鞭毛染色 （枯草芽胞杆菌 ） 1、于一洁净载玻片上等分三个区域（用专用载玻片）。 2、在载玻片一端滴１滴菌悬液，倾斜载玻片，使菌悬液缓慢从一端流至另一端。 3、空气中自然干燥。 4、加染色液于第一区，3分钟后再加染色液于第二区，依次类推。 5、载玻片平置，加蒸馏水充盈，然后用洗瓶小心洗去染料，自然干燥。 镜检（100X） （二）细菌的运动性观察 （枯草芽胞杆菌 ） 直接制备枯草芽胞杆菌水浸片加盖玻片观察， 10X，40X（注意镜检时适当 缩小光圈或降低聚光器） （三）蓝细菌形态观察 制备水浸片：于一洁净载玻片上滴加蒸馏水1滴，取红萍少许，加盖玻片压 片。镜检10X，40X（光线适当减弱，注意异形胞的形态）。 四、作业 ： 1、绘制鞭毛形态图 （100X）； 2、绘制蓝细菌（ 40x）形态图
鞭毛
Bt三 细菌的鞭毛染色、运动性观察和蓝细菌的形态观察
一、实验内容与菌种 1、细菌的鞭毛染色：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis） 2、细菌的运动性观察：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis ） 3、蓝细菌形态观察： 满江红鱼腥蓝细菌（Anabaena azollae） 二、实验原理 三、实验步骤 ：
细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察
细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察摘要本实验采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。
并采用压滴法，用美蓝染色后观察细菌的运动性。
关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。
细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。
根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu氏法等多种鞭毛染色的方法。
鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛，同时可以观察细菌的运动性特征。
1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）1.1.2染色液和试剂香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。
1.1.3仪器及其他普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管，镊子，滴管，盖玻片，吸水纸等。
1.2方法及步骤1.2.1硝酸银染色法1.2.1.1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗含衣粉过的水中煮沸20min。
取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。
实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
一、实验目的：
1.学习细菌的鞭毛染色法,观察细菌鞭毛的 形态特征; 2.学习用悬滴法观察细菌的运动性.
二、实验原理：
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子 显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在 普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但 其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉 积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材
1. 菌种：培养12-16h小时的普通变形杆菌。 2. 标本片：周鞭毛（伤寒杆菌） 3. 试剂：硝酸银鞭毛染色液、生理盐水、蒸馏水、 香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 水纸、接种环，显微镜等。
四、实验方法
（一）鞭毛染色 硝酸银染色法：
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用 新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中 （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， 煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾 干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将 水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
鞭毛染色实验报告
1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。
2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。
3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。
二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。
鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。
常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。
4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。
四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。
活化后菌种备用。
2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。
3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。
用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。
将残水沥干或用B液冲去残水。
滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。
待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。
4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。
菌体为深褐色，鞭毛为褐色。
注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。
1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。
2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。
3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。
六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。
2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。
实验五细菌鞭毛染色与鞭毛类型观察
实验五细菌鞭毛染色与鞭毛类型观察一、目的要求学习掌握细菌鞭毛染色方法掌握细胞鞭毛的类型、形态及功能二、实验原理细菌的鞭毛极细，直径一般为10-20nm，超过了一般光学显微镜的分辨力，只有用电子显微镜才能观察到。
然而，鞭毛若采用特殊的染色法后，就是用普通光学显微镜也能看到鞭毛。
鞭毛染色方法的基本原理是在染色前先用媒染剂处理，让媒染剂沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材1、菌种大肠杆菌(Escherichia coli) 、枯草杆菌(Bacillus subtilis) 、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；2、仪器与材料显微镜，接种环、接种针，酒精灯与灯用酒精，火柴，洁净载玻片与盖玻片，洗瓶与蒸馏水，废液缸，擦镜纸与吸水纸，香柏油，二甲苯；3、染料A液：丹宁酸5.0g、甲醛2.0ml、FeCl3 1.5g、1% NaOH 1.0ml、蒸馏水100mlB液：AgNO3 2.0g、蒸馏水100ml四、操作步骤1、载玻片的清洗取新的载玻片以浓重铬酸钾液浸泡24h，清水洗净后再以蒸馏水洗，然后于95%的酒精浸泡，再将玻片通过火焰至玻片边缘火焰呈桔黄色为止，放于滤纸上冷却后再以95%酒精浸泡备用。
2、菌种的准备取斜面菌种在无菌条件下接种到新制备的牛肉膏-蛋白胨-琼脂培养基斜面上，30℃培养12-18小时，并重复转管培养2-3次后备用。
3、制片将浸泡于95%酒精中的载玻片取出，在酒精灯火焰上燃烧除去酒精，冷却后在一端滴加一滴蒸馏水，用无菌的接种环从取少许菌苔，在载玻片的水中轻沾几次。
将载玻片倾斜，使菌液流下，玻片上即遗留一条细菌悬浮液膜，然后平放于空气中干燥。
4、染色⑴滴加鞭毛染色液A液，染色3-5分钟；⑵用蒸馏水充分A液，使背景清洁⑶将水沥干或用B液冲去余水。
⑷滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料使不干涸，染色时间30-60S。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。
下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。
一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。
这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。
步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。
2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。
3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。
4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。
5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。
6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。
7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。
二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。
这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。
4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。
三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。
4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。
5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色一、实验目的学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。
二、实验原理细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
（本次实验用硝酸银当染色剂）三、实验器材及试剂1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。
2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。
3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、电热炉、大烧杯、洗衣粉四、实验步骤鞭毛染色——硝酸银染色法1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。
3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图五、实验结果分析1.理论结果：2.实验结果：3.铜绿假单胞菌鞭毛实验，观察结果与理论结果差异分析：油镜视野中，铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根，与理论结果的一根有所差异，其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动，导致鞭毛脱落，脱落的鞭毛附着在了菌体表面，造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。
细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察
细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察摘要：生长在某些细菌表面的纤细丝状运动器官，称为鞭毛。
采用硝酸银染色法对枯草杆菌和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在光学显微镜下观察菌体形态和菌毛的长短、数量、着生位置，得到清晰的结果。
采用压滴法观察活细菌的运动性，对其运动情况有初步了解。
关键词：鞭毛染色硝酸银染色法压滴法活细菌1前言1.1实验目的1.学习并掌握鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。
2.学习用压滴法观察活细菌的运动性。
1.2实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm,只有用电镜才能直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difo氏染色法）进行染色。
本实验采用的是硝酸银染色法。
在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。
细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。
观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强．细菌和周围的液体难以区分。
2材料与方法2.1实验器材2.1.1菌种枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
2.1.2溶液和试剂硝酸银鞭毛染液，0.01%美兰水溶液，香柏油，二甲苯，体积分数95%的乙醇。
2.1.3仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，擦镜纸，接种环，镊子，记号笔，滴管和无菌水等。
2.2实验步骤3结果与分析3.1压滴法用压滴法观察枯草杆菌的运动性，盖上盖玻片立即观察时，可以看到浅蓝色的细菌细胞。
盖玻片下里液体流动较明显，菌体随水流运动，运动方向较统一且呈直线状。
待液体稍蒸发，盖玻片下液体充分但不流动时观察，细菌的运动朝不同的方向，运动过程中可转弯；有些细菌在原地左右摆动，应为布朗运动。
实验六 细菌的鞭毛染色
（三）实验方法：
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片 将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
②水洗：在没有倾去染料的情况下，就用蒸馏水轻轻地冲去染料，否则会增加背景的沉淀。
③干燥：自然干燥。
（5）镜检 先低倍观察，再高倍观察，最后再用油镜观察，观察时要多找一些视野，不要企图在1-2个视野中就能看到细菌的鞭毛。
结果：菌体和鞭毛均染成红色。
（五）实验作业：给出鞭毛菌的形态图
④用蒸馏水洗，自然干燥。
（4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。
结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
2.改良Leifson染色法
（1）清洗玻片法同1。
（2）配制染料 见附录二（一）9。染料配好后要过滤15-20次后染色效果才好。
（3）菌液的制备及涂片
①菌液的制备同1。
②用记号笔在洁净的玻片上划分3—4个相等的区域。
③放1滴菌液于第一个小区的一端，将玻片倾斜，让菌液流向另一端，并用滤纸吸去多余的菌液。
④干燥 在空气中自然干燥。
（4）染色
①加染色液于第一区，使染料覆盖涂片。隔数分钟后再将染料加入第二区，依此类推（相隔时间可自行决定），其目的是确定最合适的染色时间，而且节约材料。
用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中，待凝固后在平板中央点接活化了3-4代的细菌，恒温培养12-16h后，取扩散菌落的边缘制作涂片。
细菌鞭毛染色及活菌运动观察
细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）2、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征二、实验简介鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。
压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。
但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。
于是，便产生了鞭毛染色法。
1958年Rhodes根据Fontana 的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
但是试剂的稳定性低，容易变质。
2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。
该法将媒染剂分为A、B两种。
A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。
这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。
三、实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
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细菌鞭毛染色
一、实验目的
学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。
二、实验原理
细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
（本次实验用硝酸银当染色剂）
三、实验器材及试剂
1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。
2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。
3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊
子、电热炉、大烧杯、洗衣粉
四、实验步骤
鞭毛染色——硝酸银染色法
1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。
3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录
枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图
铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图
五、实验结果分析
1.理论结果：
菌种名称鞭毛形态鞭毛数量鞭毛着生位置枯草芽孢杆菌纤细波浪状丝状多根周生
铜绿假单胞菌一根一端生2.实验结果：
3.铜绿假单胞菌鞭毛实验，观察结果与理论结果差异分析：油镜视野中，铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根，与理论结果的一根有所差异，其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动，导致鞭毛脱落，脱落的鞭毛附着在了菌体表面，造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。
油镜视野中鞭毛着生位置不是严格的端生而是近端生，可能是光线的折射，菌体形状的变化或菌体的平面观察无法真实反映其真实的立体形状等原因，导致实验结果与理论结果有所偏差。
六、思考题
1．除鞭毛染色法外，还有什么方法能观察到鞭毛？
答：可直接在电子显微镜下观察，电子显微镜放大倍数高，分辨率高，可以观察到鞭毛。
2．你对你所做的鞭毛染色法满意吗？如果不满意，有哪些方面需要改进？如果满意，你的成功经验是什么？
答：不完全满意，在染色时间的控制上还不够，A液、B液接触过久，使玻片上有沉淀，不利于观察；染色时间过长，鞭毛脱落现象严重，鞭毛着生观察不明显。
3．如果你发现鞭毛已与菌落脱离，请解释原因？
答：（1）可能是菌龄过大，自然脱落；
（2）操作时玻片受到较强烈的震荡；
（3）接种时接种环在玻片上反复涂抹时使之脱落；
（4）染色过久使之脱落。