免疫组化操作注意事项
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实验修复时间：2分钟，5分钟。 实验结果：基本一致。来自百度文库
有论文报道，修复时间过长，加重组织切片出现脱片现象。
3、过氧化氢的阻断时间
①3%过氧化氢灭活时间短点，10分钟左右。
②0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般30分钟。 经过脱色素的切片，在加过氧化氢阻断时，需要观察切片，防止脱片。
4、PBS缓冲液的时间问题
①新配置的PBS在完全溶解后1小时后再使用，PH值稳定。 ②未使用完的PBS需密闭放置。
注意：
1 、广口瓶放置长时间后，PBS的水分蒸发后，盐分增高。冬季暖 气开放，湿度降低，将增加水分蒸发。注意切片上的PBS不可过少，易干 片，出现薄雾状盐渍。
2、增强剂孵育后的 PBS冲洗时间适当延长为佳，增强剂贴服切片的 能力长，易形成水膜，影响二抗的滴加。 5、一抗的孵育时间 ①温度37℃，孵育1-2小时。 ②温度4℃，恒温过夜。 ③室温（30℃），孵育3小时。（上午11时至下午2时）。 6、二抗的孵育时间 ①试剂2（黄色瓶，增强剂）室温20分钟。 ②试剂3（红色瓶，二抗）室温30分钟。
三、注意事项时间
1、脱蜡时间
基本步骤等同HE染色的脱蜡，时间可适当延长。防止切片带入丁点蜡， 修复液高温会熔化蜡，让蜡浮于修复液液面，提出切片后在切片面形成 肉眼不可见的蜡膜，隔断抗体进入组织。 10、8、3、3、2、1、1
2、修复时间 现行操作步骤：EDTA修复2分钟。
实验项目:Ki-67、P53、ER、PR。
7、DAB的显色时间
DAB指导孵育时间为10分钟。 注意： ①滴加DAB显色液后需要观察切片的显色进程，显色成浓棕色后及时 自来水阻断，防止显色过重，着色点不清。 8、苏木素复染 苏木素复染以淡染为基本原则，切不可过重，放苏木素颜色过重，覆 盖核阳指标抗体（Ki-67）的阳性部位。 新苏木素复染10秒，旧苏木素复染30秒为佳。
免疫组化操作注意事项
一、组化的基本步骤
1、石蜡切片脱蜡至水（自来水）。 2、蒸馏水洗（浸泡）。 3、根据即用型一抗的具体要求进行分类修复： 一、修复液的种类 ①EDTA(PH8.0/9.0) ②柠檬酸 ③消化酶（胃酶、胰酶...）
④不修复
二、修复方式 ①高温高压修复 ②微波修复
③水浴修复
4、EDTA（PH8.0）高温高压修复，2分钟。 5、3%过氧化氢， 室温孵育 10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 6、PBS 浸泡 2分钟 x3次。（浸泡6分钟） 7、滴加 一抗 即用型工作液，室温孵育3小时或 4 ℃ 过夜。 8、PBS 冲洗，2分钟 x3 次。 9、滴加扩增剂工作液（即用型二抗套装，试剂2，黄色瓶）， 37 ℃ 孵 育 20 分钟。
10、PBS 冲洗，4分钟 x3 次。 11、滴加 二抗 即用型工作液， 37 ℃ 孵育 30 分钟。 12、PBS 冲洗，2分钟 x3 次。 13、DAB显色剂显色 10分钟（DAB 或 NBT/BCIP）。
14、自来水阻断，苏木素复染，脱水，透明，封片。
二、影响组化结果的条件
一、抗体浓度
二、温度 三、时间
有论文报道，修复时间过长，加重组织切片出现脱片现象。
3、过氧化氢的阻断时间
①3%过氧化氢灭活时间短点，10分钟左右。
②0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般30分钟。 经过脱色素的切片，在加过氧化氢阻断时，需要观察切片，防止脱片。
4、PBS缓冲液的时间问题
①新配置的PBS在完全溶解后1小时后再使用，PH值稳定。 ②未使用完的PBS需密闭放置。
注意：
1 、广口瓶放置长时间后，PBS的水分蒸发后，盐分增高。冬季暖 气开放，湿度降低，将增加水分蒸发。注意切片上的PBS不可过少，易干 片，出现薄雾状盐渍。
2、增强剂孵育后的 PBS冲洗时间适当延长为佳，增强剂贴服切片的 能力长，易形成水膜，影响二抗的滴加。 5、一抗的孵育时间 ①温度37℃，孵育1-2小时。 ②温度4℃，恒温过夜。 ③室温（30℃），孵育3小时。（上午11时至下午2时）。 6、二抗的孵育时间 ①试剂2（黄色瓶，增强剂）室温20分钟。 ②试剂3（红色瓶，二抗）室温30分钟。
三、注意事项时间
1、脱蜡时间
基本步骤等同HE染色的脱蜡，时间可适当延长。防止切片带入丁点蜡， 修复液高温会熔化蜡，让蜡浮于修复液液面，提出切片后在切片面形成 肉眼不可见的蜡膜，隔断抗体进入组织。 10、8、3、3、2、1、1
2、修复时间 现行操作步骤：EDTA修复2分钟。
实验项目:Ki-67、P53、ER、PR。
7、DAB的显色时间
DAB指导孵育时间为10分钟。 注意： ①滴加DAB显色液后需要观察切片的显色进程，显色成浓棕色后及时 自来水阻断，防止显色过重，着色点不清。 8、苏木素复染 苏木素复染以淡染为基本原则，切不可过重，放苏木素颜色过重，覆 盖核阳指标抗体（Ki-67）的阳性部位。 新苏木素复染10秒，旧苏木素复染30秒为佳。
免疫组化操作注意事项
一、组化的基本步骤
1、石蜡切片脱蜡至水（自来水）。 2、蒸馏水洗（浸泡）。 3、根据即用型一抗的具体要求进行分类修复： 一、修复液的种类 ①EDTA(PH8.0/9.0) ②柠檬酸 ③消化酶（胃酶、胰酶...）
④不修复
二、修复方式 ①高温高压修复 ②微波修复
③水浴修复
4、EDTA（PH8.0）高温高压修复，2分钟。 5、3%过氧化氢， 室温孵育 10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 6、PBS 浸泡 2分钟 x3次。（浸泡6分钟） 7、滴加 一抗 即用型工作液，室温孵育3小时或 4 ℃ 过夜。 8、PBS 冲洗，2分钟 x3 次。 9、滴加扩增剂工作液（即用型二抗套装，试剂2，黄色瓶）， 37 ℃ 孵 育 20 分钟。
10、PBS 冲洗，4分钟 x3 次。 11、滴加 二抗 即用型工作液， 37 ℃ 孵育 30 分钟。 12、PBS 冲洗，2分钟 x3 次。 13、DAB显色剂显色 10分钟（DAB 或 NBT/BCIP）。
14、自来水阻断，苏木素复染，脱水，透明，封片。
二、影响组化结果的条件
一、抗体浓度
二、温度 三、时间