生物技术实验解析
生物技术的实验报告总结
一、实验背景随着科技的不断发展，生物技术已成为当今世界重要的研究领域之一。
生物技术涉及基因工程、细胞工程、酶工程等多个方面，旨在利用生物体或其组成部分进行技术创新和产品开发。
本实验旨在通过学习生物技术的基本原理和实验操作，掌握相关技术，提高学生的实验技能和创新能力。
二、实验目的1. 了解生物技术的基本原理和实验操作。
2. 掌握分子克隆、蛋白质纯化等生物技术实验方法。
3. 提高学生的实验技能和创新能力。
三、实验内容1. 分子克隆实验（1）目的：学习DNA的提取、连接、转化等分子克隆技术。
（2）原理：利用DNA连接酶将目的基因与载体连接，并通过转化将重组质粒导入宿主细胞。
（3）操作步骤：①DNA提取：取适量细胞，加入裂解缓冲液，进行细胞裂解。
②DNA纯化：利用离心柱纯化DNA。
③连接：将纯化后的目的基因与载体连接。
④转化：将连接产物转化至宿主细胞。
⑤筛选：通过PCR、酶切等手段筛选阳性克隆。
2. 蛋白质纯化实验（1）目的：学习蛋白质纯化的原理和实验操作。
（2）原理：利用蛋白质的物理化学性质，如分子量、电荷、亲和力等，通过层析、离心等方法进行纯化。
（3）操作步骤：①样品制备：取适量蛋白质样品，加入适当缓冲液。
②离心：通过离心去除细胞碎片和杂质。
③层析：利用层析柱进行蛋白质分离纯化。
④收集：收集纯化后的蛋白质样品。
四、实验结果与分析1. 分子克隆实验结果：通过PCR、酶切等手段筛选出阳性克隆，证实了目的基因已成功克隆。
2. 蛋白质纯化实验结果：通过层析、离心等方法，成功分离纯化了目标蛋白质。
五、实验讨论1. 分子克隆实验中，DNA提取和纯化是关键步骤。
实验过程中，应严格控制操作条件，确保DNA质量。
2. 在蛋白质纯化实验中，层析柱的选择和操作对实验结果有很大影响。
应选择合适的层析柱，并严格按照操作规程进行实验。
3. 实验过程中，要注意实验操作的安全性，如使用生物安全柜、穿戴防护用品等。
六、实验总结通过本次生物技术实验，我们掌握了分子克隆、蛋白质纯化等基本实验操作，提高了实验技能和创新能力。
生物技术实验报告
生物技术实验报告生物技术实验报告引言生物技术是一门涉及生物学和工程学的交叉学科，通过利用生物体的特性和生物分子的相互作用，来解决现实世界中的问题。
本实验旨在探索生物技术在实验室中的应用，以期增进对生物技术的理解和认识。
实验目的本实验的目的是通过使用PCR技术，对特定基因片段进行扩增，并通过凝胶电泳分析扩增产物。
通过这个实验，我们将学习PCR技术的原理和操作步骤，并了解如何使用凝胶电泳进行DNA分析。
实验材料和方法材料：- DNA样本- PCR试剂盒- 扩增引物- DNA电泳仪- 琼脂糖凝胶- DNA标记物方法：1. 准备PCR反应体系：将PCR试剂盒中的反应液与DNA样本、扩增引物混合。
2. 进行PCR扩增：将混合好的反应液放入PCR仪中，按照设定的温度和时间进行扩增。
3. 准备琼脂糖凝胶：将琼脂糖溶解在缓冲液中，倒入电泳仪中，等待凝固。
4. 准备样品：将PCR扩增产物与DNA标记物混合。
5. 进行电泳：将混合好的样品倒入琼脂糖凝胶槽中，进行电泳分析。
6. 分析结果：观察凝胶上的DNA条带，判断扩增是否成功。
实验结果与讨论在进行PCR扩增和凝胶电泳后，我们观察到在琼脂糖凝胶上出现了一些DNA 条带。
这些条带代表了PCR扩增产物的大小和数量。
通过比较这些条带与DNA 标记物的迁移距离，我们可以确定PCR扩增产物的大小。
在实验中，我们使用了PCR技术对特定基因片段进行扩增。
PCR技术通过利用DNA聚合酶酶的特性，在不断变化的温度条件下，使DNA链的两端进行反复扩增。
这种扩增过程可以快速产生大量目标DNA片段，从而使我们能够对其进行进一步分析。
凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，通过利用DNA的负电荷特性，在电场的作用下，使DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移。
由于DNA片段的大小不同，迁移速度也不同，因此在凝胶上形成了不同大小的DNA条带。
通过与DNA标记物的比较，我们可以确定PCR扩增产物的大小。
在本实验中，我们成功地扩增了目标基因片段，并通过凝胶电泳分析得到了相应的结果。
2019生物技术生物化学实验讲义18页
2019⽣物技术⽣物化学实验讲义18页实验⼀糖的呈⾊反应和还原糖的检验⼀、实验⽬的1.学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的⽅法。
2.了解鉴定还原糖的⽅法及其原理。
⼆、实验原理糖经浓⽆机酸处理，脱⽔产⽣糠醛或糠醛衍⽣物。
戊糖形成糠醛，⼰糖则形成羟甲基糠醛。
这些糠醛和糖醛衍⽣物在浓⽆机酸作⽤下，能与酚类化合物缩合⽣成有⾊物质。
与⼀元酚如α⼀萘酚作⽤，形成三芳⾹环甲基有⾊物质。
与多元酚如间苯⼆酚作⽤，则形成氧杂蒽有⾊物质，反应式如下：通常使⽤的⽆机酸为硫酸。
如⽤盐酸，则必须加热。
常⽤的酚类为α⼀萘酚、甲基苯⼆酚、间苯⼆酚和间苯三酚等，有时也⽤芳⾹胺、胆酸、某些吲哚衍⽣物和⼀些嘧啶类化合物等。
有⼈认为，⽤浓硫酸作为脱⽔剂时，形成有颜⾊的产物与酚核的磺化有关，见如下反应式；（⼀）糖的呈⾊反应1．Molish反应(α～萘酚反应)本实验是鉴定糖类最常⽤的颜⾊反应。
糖在浓酸作⽤下形成的糠醛及其衍⽣物与α⼀萘酚作⽤，形成红紫⾊复合物。
在糖溶液与浓硫酸两液⾯间出现紫环，因此⼜称紫环反应。
⾃由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍⽣物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜⾊近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；⽽阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进⼀步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
2．蒽酮反应糖经浓酸⽔解，脱⽔⽣成的糠醛及其衍⽣物与蒽酮(10⼀酮⼀9，10⼀⼆氢蒽)反应⽣成蓝⼀绿⾊复合物。
3. Seliwanoff反应(间苯⼆酚反应)该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
在酸作⽤下，⼰酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛。
后者与间苯⼆酚结合⽣成鲜红⾊的化合物，反应迅速，仅需20—30s。
在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。
只有糖浓度较⾼时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳性反应。
蔗糖被盐酸⽔解⽣成的果糖也能给出阳性反应。
4．Bial反应(甲基间苯⼆酚反应)戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在下，它与甲基间苯⼆酚(地⾐酚)缩合，形成深蓝⾊的沉淀物。
实验室克隆技术解析
实验室克隆技术解析实验室克隆技术是一种重要的生物技术手段，它可以通过复制和重组DNA分子，实现对生物体的复制和改造。
本文将对实验室克隆技术进行详细解析，包括克隆的原理、方法和应用。
一、克隆的原理实验室克隆技术的原理是基于DNA的复制和重组。
DNA是生物体遗传信息的载体，通过复制和重组DNA分子，可以实现对生物体的复制和改造。
克隆的原理主要包括以下几个步骤：1. DNA提取：从目标生物体中提取DNA分子，通常使用化学方法或者机械方法进行提取。
2. DNA复制：将提取到的DNA分子进行复制，通常使用聚合酶链式反应（PCR）或者细菌的DNA复制机制进行复制。
3. DNA重组：将复制得到的DNA分子与载体DNA进行重组，通常使用质粒或者病毒作为载体。
4. 转化：将重组后的DNA分子导入到宿主细胞中，使其表达目标基因。
二、克隆的方法实验室克隆技术有多种方法，常用的方法包括限制性内切酶切割、DNA 连接、转化和筛选等。
1. 限制性内切酶切割：限制性内切酶是一种能够识别特定DNA序列并切割DNA分子的酶，通过限制性内切酶的作用，可以将DNA分子切割成特定的片段。
2. DNA连接：将切割得到的DNA片段与载体DNA进行连接，通常使用DNA连接酶进行连接。
3. 转化：将连接后的DNA分子导入到宿主细胞中，使其表达目标基因。
转化的方法有多种，包括化学法、电穿孔法和冷冻法等。
4. 筛选：通过筛选方法，筛选出含有目标基因的克隆体。
常用的筛选方法包括抗生素筛选、荧光筛选和PCR筛选等。
三、克隆的应用实验室克隆技术在生物学研究和生物工程领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 基因功能研究：通过克隆技术，可以将目标基因导入到宿主细胞中，研究其在生物体中的功能和作用机制。
2. 基因工程：通过克隆技术，可以将外源基因导入到宿主细胞中，使其表达目标蛋白质，用于生物制药和农业改良等领域。
3. 基因治疗：通过克隆技术，可以将正常基因导入到患者的细胞中，修复或替代异常基因，用于治疗遗传性疾病。
生物实验报告分析
生物实验报告分析
生物实验报告的分析可以从以下几个方面进行回答：
1. 实验目的和背景：首先要描述实验的目的和背景知识，包括为什么选择这个实验课题，以及相应的相关知识和研究背景。
例如，如果实验是关于光合作用的研究，可以介绍光合作用的基本原理和在生物学中的重要性。
2. 实验设计和方法：接下来要介绍实验的具体设计和实施方法。
包括实验的步骤、所使用的设备和材料以及实验条件等。
还应该详细描述实验中的控制组和实验组的设置情况，以及每一组的处理方式。
3. 结果分析：在这一部分，要详细地介绍实验结果并进行分析。
可以使用图表、表格等形式呈现实验结果。
分析时要注意对结果进行统计学处理，比较不同组别之间的差异是否显著。
可以使用t检验、方差分析等方法进行统计学分析。
4. 结果讨论：在结果讨论中，可以从实验结果的角度对实验目的进行回答。
讨论实验结果是否支持或反驳了实验假设，以及产生的原因。
同时，还可以讨论实验中可能存在的误差和不确定度，以及如何提高实验的可靠性和准确性。
5. 结论和展望：最后，要对整个实验进行总结，并提出未来的研究展望。
总结实验的主要结果和发现，并给出相应的结论。
此外，还可以讨论可能的改进方法和未来进一步研究的方向。
除了以上几个方面，回答分析问题还可以包括实验的优点和局限性、实验的影响和应用等。
在回答分析问题时，要结合实验具体内容进行具体分析，提供充分的论据和叙述，确保回答的准确性和完整性。
生物技术实验的操作步骤与结果解读
生物技术实验的操作步骤与结果解读生物技术是一门将生物学与工程学结合的学科，广泛运用于生物医学、农业、食品科学等领域。
而对于生物技术实验来说，合理的操作步骤以及准确的结果解读是保证实验结果准确性和可靠性的关键。
一、操作步骤1. 实验前准备：包括实验所需仪器设备的检查与校准，实验用试剂和培养基的准备，以及实验环境的消毒和无菌操作等。
2. 样品处理：根据实验的具体目的，合理选择样品并进行处理。
例如，如果实验需要分析某种蛋白质的表达水平，可以选择组织样品并对其进行细胞破碎和蛋白质提取等步骤。
3. 实验操作：根据实验的要求进行实验操作。
例如，如果实验需要进行PCR扩增，操作步骤可能包括DNA提取、引物设计、反应体系的配置、PCR反应条件的设置等。
4. 仪器操作：根据实验所需使用的仪器设备进行相关操作。
例如，如果实验需要使用电泳仪进行DNA分离，操作步骤可能包括：配置电泳缓冲液、装填样品、设置电泳条件等。
5. 结果分析：根据实验所得到的结果进行分析和解读。
例如，对于PCR扩增结果，可以通过凝胶电泳进行分析，观察扩增产品的大小和带型等信息。
二、结果解读1. 数据分析：根据实验所得到的数据进行统计和分析。
例如，对于PCR扩增的结果，在凝胶电泳图上可以观察到不同大小的扩增产物带，可以通过测量带的距离来估计扩增产物的大小。
2. 数据比较：将实验所得到的数据与对照组进行比较，评估实验结果的显著性。
例如，对于蛋白质表达水平的分析，可以比较不同组织或不同处理条件下的样品，从而评估差异的显著性。
3. 结果解释：根据实验结果以及先前的研究知识，对实验结果进行解释和推断。
例如，如果实验观察到某种基因的表达水平显著上调，可以推断这个基因可能在特定生物过程中发挥重要作用。
4. 实验重复和验证：为了验证实验结果的可靠性和重复性，可以进行实验的重复和验证。
通过多次重复实验，可以进一步确定实验结果的稳定性和统计学显著性。
5. 结果报告：最后，根据实验所得到的结果撰写实验报告。
生物实验总结
生物实验总结一、实验目的通过本次生物实验，旨在加深对生物学基本概念和原理的理解，提高实验技能，培养科学思维和创新能力。
二、实验内容1. 观察植物细胞的结构和功能。
2. 分析动物细胞的结构和功能。
3. 探究细胞分裂的过程和意义。
4. 研究基因的遗传规律和表达调控。
5. 了解生物多样性和生物进化的证据。
三、实验方法与步骤1. 植物细胞观察：取新鲜植物叶片，用显微镜观察细胞结构，记录观察结果。
2. 动物细胞观察：取动物组织样本，用显微镜观察细胞结构，记录观察结果。
3. 细胞分裂实验：培养细胞，观察细胞分裂过程，记录实验数据。
4. 基因遗传实验：选择实验材料，设计杂交实验，分析遗传规律。
5. 生物多样性调查：收集生物样本，进行分类和鉴定，了解生物多样性。
四、实验结果与分析1. 植物细胞观察：观察到植物细胞具有细胞壁、叶绿体等结构，这些结构对于植物的生长和发育具有重要作用。
2. 动物细胞观察：观察到动物细胞具有线粒体、高尔基体等结构，这些结构对于动物的生理功能具有重要作用。
3. 细胞分裂实验：观察到细胞分裂过程中的染色体变化，证实了细胞分裂是生物体生长和繁殖的基础。
4. 基因遗传实验：通过杂交实验，验证了孟德尔遗传定律，进一步理解基因的遗传规律和表达调控。
5. 生物多样性调查：调查发现，生物具有丰富的多样性，生物进化理论可以解释这种多样性。
五、实验总结本次生物实验加深了我们对生物学基本概念和原理的理解，提高了我们的实验技能，培养了我们的科学思维和创新能力。
通过实验，我们认识到了生物学的重要性，更加坚定了我们投身于生物学研究的决心。
在今后的学习和研究中，我们将继续努力，为生物学的发展做出贡献。
生物检测技术实验报告
一、实验目的1. 掌握生物检测技术的基本原理和操作方法。
2. 了解常见生物分子的检测方法及其应用。
3. 培养严谨的实验态度和团队协作精神。
二、实验原理生物检测技术是指利用生物化学、分子生物学、免疫学等原理，对生物样本中的特定物质进行定性和定量分析的方法。
本实验主要涉及以下几种检测技术：1. 比色法：通过溶液颜色变化来检测生物分子，如蛋白质、糖类、脂肪等。
2. 电泳法：利用分子在电场中的迁移速率差异，对生物分子进行分离和鉴定。
3. 免疫学检测：利用抗原-抗体反应，检测生物样本中的特定蛋白质。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：离心机、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜、移液器、试管等。
2. 试剂：蛋白质标准品、糖类标准品、脂肪标准品、抗体、酶联免疫吸附剂、凝胶电泳试剂、染色剂等。
四、实验步骤1. 蛋白质检测（1）制备蛋白质样品：取适量生物组织，用组织匀浆机处理，离心取上清液。
（2）进行电泳：将蛋白质样品与凝胶电泳试剂混合，加样到电泳槽中，进行电泳分离。
（3）染色：用考马斯亮蓝染色，观察蛋白质条带。
（4）分析结果：根据蛋白质条带与标准品条带比对，鉴定蛋白质种类。
2. 糖类检测（1）制备糖类样品：取适量生物组织，用组织匀浆机处理，离心取上清液。
（2）进行比色法：将糖类样品与比色试剂混合，在特定波长下测定吸光度。
（3）分析结果：根据吸光度与标准品吸光度比对，鉴定糖类种类。
3. 脂肪检测（1）制备脂肪样品：取适量生物组织，用组织匀浆机处理，离心取上清液。
（2）进行比色法：将脂肪样品与比色试剂混合，在特定波长下测定吸光度。
（3）分析结果：根据吸光度与标准品吸光度比对，鉴定脂肪种类。
4. 免疫学检测（1）制备抗体：制备针对特定蛋白质的抗体。
（2）进行酶联免疫吸附试验：将抗体与酶联免疫吸附剂混合，加入生物样本，进行抗原-抗体反应。
（3）分析结果：根据酶联免疫吸附剂的颜色变化，鉴定生物样本中是否存在特定蛋白质。
五、实验结果与分析1. 蛋白质检测：实验中观察到蛋白质条带，与标准品条带比对，鉴定出蛋白质种类。
细胞生物学实验方法与技术
细胞生物学实验方法与技术1. 光镜观察（Light Microscopy）光镜观察是一种常用的研究细胞形态和结构的方法。
通过使用光学显微镜，可以观察到细胞的外形、细胞器的位置和结构等特征。
该技术使用涂片制备技术，将细胞固定、染色、封装在玻璃片上，然后在显微镜下进行观察。
2. 电镜（Electron Microscopy）电镜是一种高分辨率的显微镜技术，它可以观察到细胞的微观结构和细胞器。
电镜利用电子束来代替光束，通过变焦电镜透射电子显微镜和扫描电子显微镜两种类型，可以观察到更高分辨率的细胞结构。
3. 组织培养（Tissue Culture）组织培养是一种将细胞或组织从活体中分离并培养在人造环境中的方法。
这种方法常用于研究细胞生长、增殖和发育过程。
组织培养可以通过使用培养基、细胞培养皿和细胞培养箱等设备来提供细胞所需的营养和环境。
4. 免疫染色（Immunostaining）免疫染色是一种用来检测和定位蛋白质或其他分子在细胞中的位置的方法。
这种方法利用抗体的特异性结合来检测蛋白质的位置。
首先，细胞固定并渗透，然后使用特定的抗体与目标分子结合，最后通过荧光标记或酶反应等方法来观察染色的细胞。
5. 荧光显微镜（Fluorescence Microscopy）荧光显微镜是利用荧光探针来观察样品的显微镜技术。
该技术可以用来检测和可视化特定分子或结构的位置和数量。
通过对样品进行荧光染色或利用荧光蛋白表达来标记细胞的特定结构或分子，可以在荧光显微镜下直接观察到。
6. 流式细胞术（Flow Cytometry）流式细胞术是一种高通量细胞分析技术，可以快速准确地分析和计数大量的单个细胞。
该技术利用细胞标记剂和流动性流式细胞术仪器，通过激光照射细胞并检测细胞的荧光光谱，可以分析细胞表面分子的表达、细胞大小和复杂性等信息。
生物实验技术实验报告
实验名称：植物细胞质壁分离与复原一、实验目的1. 观察植物细胞质壁分离与复原现象；2. 了解植物细胞渗透调节作用；3. 掌握显微镜操作技术。
二、实验原理植物细胞在正常生理状态下，原生质层与细胞壁之间存在着一定的压力差，当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，细胞吸水膨胀；当外界溶液浓度高于细胞液浓度时，细胞失水收缩。
当细胞处于一定浓度的溶液中时，细胞膜、液泡膜以及两层膜之间的细胞质构成原生质层，原生质层具有选择透过性。
当外界溶液浓度高于细胞液浓度时，细胞失水，原生质层与细胞壁逐渐分离，发生质壁分离现象；当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，细胞吸水，原生质层逐渐恢复与细胞壁的接触，发生质壁分离复原现象。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、蔗糖溶液、蒸馏水、滴管、显微镜、载玻片、盖玻片等。
2. 仪器：酒精灯、酒精、蒸馏水、烧杯、量筒、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶，剪取约0.5cm×0.5cm的透明鳞片，放入载玻片中。
2. 用滴管滴加适量的蒸馏水于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。
3. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的正常状态。
4. 用滴管滴加适量的蔗糖溶液于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。
5. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的质壁分离现象。
6. 用滴管滴加适量的蒸馏水于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。
7. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的质壁分离复原现象。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶细胞在正常生理状态下，细胞质与细胞壁紧密相连，原生质层与细胞壁之间无空隙。
2. 当洋葱鳞片叶细胞处于蔗糖溶液中时，细胞失水收缩，原生质层与细胞壁逐渐分离，发生质壁分离现象。
3. 当洋葱鳞片叶细胞处于蒸馏水中时，细胞吸水膨胀，原生质层逐渐恢复与细胞壁的接触，发生质壁分离复原现象。
六、实验结论1. 植物细胞质壁分离与复原现象是由于细胞渗透调节作用引起的。
2. 通过显微镜观察，可以清晰地观察到洋葱鳞片叶细胞的质壁分离与复原现象。
高一生物生物技术实践试题答案及解析
高一生物生物技术实践试题答案及解析1.可以利用哺乳动物成熟的红细胞为实验材料进行的实验有①制备较纯净的细胞膜②运用差速离心法分离各种细胞器③DNA的粗提取④分离并纯化血红蛋白⑤制成细胞悬浮液进行细胞培养A．②③B．③⑤C．①④D．④⑤【答案】C【解析】哺乳动物成熟的红细胞无细胞核、细胞器等结构，可用于制备较纯净的细胞膜，分离并纯化血红蛋白，C正确。
【考点】本题考查实验的相关操作。
2.制作酸奶必需的微生物及处理方法是（）A．酵母菌，开盖B．酵母菌，密封C．乳酸菌，开盖D．乳酸菌，密封【答案】D【解析】酸奶含有乳酸，酵母菌无氧发酵生成酒精，AB错。
乳酸菌在隔绝空气下无氧发酵生成乳酸，C错，D正确。
【考点】本题考查微生物发酵相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构能力。
3.请回答下列关于微生物培养和利用的相关问题：（1）制作果酒利用的微生物是。
在制作果酒过程中，变酸的酒的表面观察到的菌膜是由大量繁殖而形成的，这种菌可在缺少糖源时，将乙醇变为，然后变为醋酸。
（2）在制作腐乳过程中，在腐乳表面往往会有一层致密的皮，这层皮实际上由微生物的形成的，对人体无害；加盐腌制，盐可以析出豆腐中的水分，同时，盐能。
（3）防止杂菌入侵，获得纯净的培养物是研究和应用微生物的前提。
在无菌技术中，操作者用酒精擦拭双手属于，对金属用具、玻璃器皿、培养基等要进行灭菌，其中，培养基只能用灭菌。
（4）若要对某种微生物进行纯化，最常用的方法是。
【答案】（1）酵母菌醋酸菌（醋酸杆菌）乙醛（2）匍匐菌丝（菌丝）抑制微生物生长（避免豆腐块腐败变质）（3）消毒高压蒸汽（4）平板划线法和稀释涂布平板法【解析】（1）制作果酒利用的微生物是酵母菌，制作果醋的微生物是醋酸杆菌，其可在缺少糖源时将乙醇变为乙醛，然后变为醋酸。
（2）在制作腐乳过程中，在腐乳表面的皮实际上由微生物的菌丝形成的；加盐腌制，盐可以析出豆腐中的水分，同时，盐还能抑制微生物生长，避免豆腐块腐败变质。
生物技术实验的操作步骤与实验设计解析
生物技术实验的操作步骤与实验设计解析生物技术实验是现代生物科学中的重要一环，通过操作和设计一系列的实验步骤，可以获得有关生物分子、细胞和生物体的相关信息。
本文将从实验设计和操作步骤两个方面，对生物技术实验进行详细解析。
实验设计：在进行生物技术实验之前，合理的实验设计是至关重要的。
一个精心设计的实验可以保证实验结果的可靠性和有效性。
下面将从以下几个方面解析生物技术实验的实验设计要点。
1.研究目的与问题：首先，我们需要明确研究目的和问题，确定实验的主要目标是什么，希望解决什么科学问题。
例如，我们可能想了解某个特定基因的表达情况，或者某种疾病相关基因的变异。
2.实验流程：在设计实验时，确定实验的流程和步骤非常重要。
从样品采集，到DNA/RNA提取，再到PCR扩增和分析，每一步都需要具体规划。
确保实验流程的合理性和操作的准确性是实验成功的关键。
3.对照组和实验组的选择：为了确保实验结果的可靠性，需要设定对照组和实验组。
对照组是不进行任何处理或与标准处理相似的组，用来与实验组进行对比。
此外，对照组还可以用于验证实验的准确性和可重复性。
4.实验检测方法：在生物技术实验中，选择适合的检测方法非常重要。
例如，如果我们想检测某个基因在细胞中的表达情况，可以选择Northern blotting、Western blotting或者定量PCR方法。
不同的检测方法有其优缺点，需要根据实验目的选择合适的方法。
操作步骤：实验操作步骤是生物技术实验中的具体过程，包括样品处理、试剂配制、仪器使用等。
下面将详细介绍常见的几个生物技术实验的操作步骤。
1. DNA提取：DNA提取是生物技术实验中常见的一步，用于获得样品中的DNA。
通常使用提取试剂盒或者自行配制DNA提取缓冲液。
具体操作步骤包括样品预处理，细胞破裂，蛋白质去除和DNA纯化等。
2. PCR扩增：PCR（聚合酶链式反应）是生物技术实验中常用的检测和扩增DNA片段的方法。
生物技术实验报告
实验名称：植物组织培养技术实验目的：1. 学习植物组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握植物组织培养的实验操作步骤。
3. 熟悉植物组织培养在植物繁殖和育种中的应用。
实验时间：2021年10月15日实验地点：生物实验室实验材料：1. 植物材料：辣椒种子2. 实验器具：超净工作台、手术刀、镊子、移液枪、培养皿、培养瓶、恒温培养箱、酒精灯、火焰消毒器等3. 试剂：MS培养基、植物激素（生长素和细胞分裂素）、琼脂、蔗糖、活性炭等实验步骤：1. 材料预处理：将辣椒种子用75%酒精消毒2分钟，再用无菌水清洗3次，最后用无菌滤纸吸干水分。
2. 胚芽诱导：将消毒后的种子接种于MS培养基中，加入适量的生长素和细胞分裂素，置于恒温培养箱中培养。
3. 菌落形成：观察胚芽诱导后的培养皿，记录菌落形成的时间和数量。
4. 生根诱导：将胚芽诱导后的植株转移到生根培养基中，加入适量的生长素，置于恒温培养箱中培养。
5. 生根观察：观察生根情况，记录生根数量和长度。
6. 移栽：将生根后的植株移栽到装有土壤的花盆中，进行常规管理。
实验结果：1. 胚芽诱导：经过2周的培养，大部分种子成功诱导出胚芽，菌落形成时间为5-7天，菌落数量为10-15个。
2. 生根诱导：将胚芽诱导后的植株转移到生根培养基中，经过2周的培养，大部分植株成功生根，生根数量为8-12条，平均生根长度为2-3cm。
3. 移栽成活：将生根后的植株移栽到花盆中，经过一段时间的适应期，植株生长良好，成活率为90%。
实验讨论：1. 植物组织培养技术在植物繁殖和育种中具有广泛的应用。
本实验通过辣椒种子进行组织培养，成功诱导出胚芽和根系，实现了植物的无性繁殖。
2. 生长素和细胞分裂素是植物组织培养中的关键植物激素。
在本实验中，通过调整生长素和细胞分裂素的浓度，可以控制胚芽和根系的生长。
3. 本实验中，辣椒种子的胚芽诱导率和生根成活率较高，说明植物组织培养技术在辣椒繁殖和育种中具有较好的应用前景。
高考生物专题：生物实验之技术实践
生物技术实践一、传统发酵技术1.果酒制作：1）原理：酵母菌的无氧呼吸反应式：C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。
2）菌种来源：附着在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培养的酵母菌。
3）条件：18-25℃，密封，每隔一段时间放气（CO2）4）检测：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。
2、果醋制作：1）原理：醋酸菌的有氧呼吸。
O2，糖源充足时，将糖分解成醋酸O2充足，缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再变为醋酸。
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O2）条件：30-35℃，适时通入无菌空气。
3、腐乳制作：1）菌种：青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉（都是真菌）。
2）原理：毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和aa ；脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3）条件：15-18℃，保持一定的湿度。
4）菌种来源：空气中的毛霉孢子或优良毛霉菌种直接接种。
5）加盐腌制时要逐层加盐，随层数加高而增加盐量，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。
4、泡菜制作：1）原理：乳酸菌的无氧呼吸，反应式：C6H12O62C3H6O3+能量2）制作过程：①将清水与盐按质量比4：1配制成盐水，将盐水煮沸冷却。
煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。
②将新鲜蔬菜放入盐水中后，盖好坛盖。
向坛盖边沿的水槽中注满水，以保证乳酸菌发酵的无氧环境。
3）亚硝酸盐含量的测定：①方法：比色法；②原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
二、微生物的培养与应用1、培养基的种类：按物理性质分为固体培养基和液体培养基，按化学成分分为合成培养基和天然培养基，按用途分为选择培养基和鉴别培养基。
2、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐P143、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
4、培养基还需满足微生物对PH、特殊营养物质以及O2的要求。
高考生物复习考点知识专题讲解37 ---生物技术实践(解析版)
高考生物复习考点知识专题讲解37 生物技术实践1．[生物——选修1：生物技术实践](15分)目前，β－胡萝卜素既可以从岩藻中提取，又可以利用微生物的发酵生产。
请回答以下问题：(1)从岩藻中提取β－胡萝卜素常用________法，在加热瓶口安装冷凝回流装置的目的是_______________________，提取的β－胡萝卜素粗品可通过________进行鉴定。
(2)利用红酵母菌发酵生产β－胡萝卜素时，首先要对操作仪器进行无菌处理，其中对培养皿进行________灭菌。
培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右才能倒平板，估计培养基温度的方法是________________________。
(3)微生物接种常采用______________法进行微生物的分离和计数，这种操作的核心是________________________________。
通过观察菌落的________、大小、颜色、隆起程度等特征对微生物进行鉴定。
【答案】(1)萃取(1分) 防止加热时有机溶剂挥发纸层析法(2)干热触摸锥形瓶不烫手(3)稀释涂布平板防止杂菌的污染，保证培养物的纯度形状【解析】(1)从岩藻中提取β－胡萝卜素常用萃取法，在加热瓶口安装冷凝回流装置的目的是防止加热时有机溶剂挥发，提取的β－胡萝卜素粗品可通过纸层析法进行鉴定。
(2)利用红酵母菌发酵生产β－胡萝卜素时，首先要对操作仪器进行无菌处理，其中对培养皿进行干热灭菌。
培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右才能倒平板，估计培养基温度的方法是触摸锥形瓶不烫手。
(3)常采用稀释涂布平板法进行微生物的分离和计数，这种操作的核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。
通过观察菌落的形状、大小、颜色、隆起程度等特征对微生物进行鉴定。
2．[生物——选修1：生物技术实践](15分)某校课外兴趣小组对某湖水中大肠杆菌的数量进行了测定。
取5支灭菌的试管，分别加入9 mL灭菌的生理盐水，编号为B1、B2、B3、B4、B5；取1 mL湖水样液加入试管B1中，混合均匀；然后从B1中吸取1 mL溶液，加入B2中，依次类推，最后从试管B5中取0.1 mL样液进行涂布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为230、242、251个。
生物技术实验报告一二三四及结果分析
生物技术实验报告一二三四及结果分析实验一：XX操作步骤及结果实验一主要目的是进行XX操作，并观察其结果。
操作步骤如下：1. 准备实验材料：XX材料 A、B、C2. 操作步骤1：XX操作13. 操作步骤2：XX操作24. 结果观察和记录：- 观察1：XX观察1结果- 观察2：XX观察2结果实验二：XX操作步骤及结果实验二的目的是进行XX操作，并观察其结果。
操作步骤如下：1. 准备实验材料：XX材料 A、B、C2. 操作步骤1：XX操作13. 操作步骤2：XX操作24. 结果观察和记录：- 观察1：XX观察1结果- 观察2：XX观察2结果实验三：XX操作步骤及结果实验三的目的是进行XX操作，并观察其结果。
操作步骤如下：1. 准备实验材料：XX材料 A、B、C2. 操作步骤1：XX操作13. 操作步骤2：XX操作24. 结果观察和记录：- 观察1：XX观察1结果- 观察2：XX观察2结果实验四：XX操作步骤及结果实验四的目的是进行XX操作，并观察其结果。
操作步骤如下：1. 准备实验材料：XX材料 A、B、C2. 操作步骤1：XX操作13. 操作步骤2：XX操作24. 结果观察和记录：- 观察1：XX观察1结果- 观察2：XX观察2结果结果分析通过对生物技术实验一二三四的操作和观察，可以得出以下结论和分析：1. 实验一的结果表明XX操作可以导致XX效果。
2. 实验二的结果显示XX操作对XX现象有明显影响。
3. 实验三的结果表明XX操作可以改变XX性质。
4. 实验四的结果指出XX操作可以加速XX反应。
根据以上结果分析，我们可以推断XX操作在生物技术方面具有广泛的应用前景，并可能对实际生产产生积极的影响。
总结：本实验报告通过实验一二三四的操作和结果观察，简要分析了XX操作对生物技术的影响。
这些结果可为进一步的研究和应用提供理论和实践基础。
【同步训练】《生物技术》(解析版)
8.25生物技术一、单选题1．青霉素是一种常用的药物，与制作青霉素有关的真菌是（）A．酵母菌B．霉菌C．青霉D．曲霉【答案】C【分析】有的真菌是有害的，有的真菌是有益的，如青霉菌可以生产青霉素。
【详解】细菌和真菌可以引起多种疾病，但是有些真菌却可以产生杀死某些致病细菌的物质，我们把这些物质叫抗生素，如青霉素就是一种普遍使用的抗生素，它是由青霉菌产生的能杀死或抑制某些病菌的特殊物质，可以治疗多种疾病，青霉属于真菌，因此ABD错误，C正确。
故选C。
2．下列不属于生物防治实例的是（）A．用杀螟杆菌对付三化螟B．用七星瓢虫对付棉蚜虫C．用粘蝇纸的毒素对付苍蝇D．用灰喜鹊对付松毛虫【答案】C【分析】生物防治就是利用生物来防治病虫害。
生物防治常用的方法有以菌治虫、以虫治虫和以鸟治虫等；它利用了生物物种间的相互关系，以一种或一类生物抑制另一种或另一类生物。
它的最大优点是不污染环境，是农药等非生物防治病虫害方法所不能比的。
【详解】A．“用杀螟杆菌对付三化螟”、B．“用七星瓢虫对付棉蚜虫”、D．“用灰喜鹊对付松毛虫”，都属于生物防治，ABD不符合题意。
C．“用粘蝇纸的毒素对付苍蝇”属于化学防治，C符合题意。
故选C。
3．利用微生物可以生产食品和药物。
下列微生物与产品对应错误的是（）A．霉菌—制酱B．酵母菌—酿酒C．醋酸菌—制泡菜D．青霉—青霉素【答案】C【分析】微生物的发酵在食品、药品等的制作和生产中具有重要的作用，如制馒头、做面包、酿酒等要用到酵母菌，制酸奶和泡菜要用到乳酸菌，利用青霉能提取出青霉素，利用甲烷菌能制沼气，利用曲霉可以用来酿酒和制作酱、酱油、腐乳等。
【详解】A．制酱要用到霉菌，霉菌发酵把有机物分解成氨基酸等物质，利于人体的吸收和提高食品的鲜度，A正确。
B．酵母菌在无氧的条件下，分解葡萄糖产生酒精和二氧化碳，可用来酿酒，B正确。
C．制作泡菜要用到乳酸菌，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜具有特殊的风味，还不破坏菜的品质，制醋要用到醋酸菌，醋酸菌发酵能产生醋酸，C错误。
生物学的实验技术
生物学的实验技术生物学是一门基础科学，通过实验技术的应用来探索和研究生物的结构、功能和相互关系。
在生物学实验中，实验技术的选择和运用对于实验结果的准确性和可靠性都起着至关重要的作用。
本文将介绍一些常用的生物学实验技术，以及它们在不同领域中的应用。
一、细胞培养技术细胞培养是生物学研究中广泛应用的一项技术。
通过细胞培养，可以观察和研究细胞的生命周期、生长特性和相互作用等。
在细胞培养中，我们需要准备培养基和培养器具，以及细胞的来源和处理方法。
常见的细胞培养技术包括原代细胞培养和细胞系的建立。
1. 原代细胞培养原代细胞培养是指从组织中直接提取并培养的细胞。
它可以为后续的实验提供原始的细胞材料。
在原代细胞培养中，我们需要先对组织进行消化和分离，然后将细胞置于含有适当培养基的培养皿中。
定期更换培养基可以确保细胞的生长和扩增。
2. 细胞系的建立细胞系是从原代细胞培养中建立起来的，可以连续、稳定地传代的细胞群。
建立细胞系的关键是细胞的转染和选择。
常见的转染方法包括转染质粒、病毒和RNA干扰等。
通过筛选和鉴定，可以获得具有特定性状或功能的细胞系，为后续的实验提供可靠的细胞模型。
二、分子生物学技术分子生物学技术是用于研究生物分子结构、功能及其相互关系的一系列实验技术。
它们广泛应用于基因组学、转录组学和蛋白质组学等领域的研究。
1. PCRPCR（聚合酶链反应）是一种通过体外扩增DNA片段的技术。
它具有高度特异性和灵敏性，可以在短时间内扩增目标DNA序列。
在PCR实验中，我们需要设计引物、选择合适的酶和缩合剂，并进行反应体系的优化。
PCR在基因检测、基因克隆和疾病诊断等方面有广泛的应用。
2. 基因测序基因测序是确定DNA序列的过程，它对于理解遗传信息和基因功能至关重要。
目前常用的测序技术包括Sanger测序和高通量测序。
在测序实验中，首先需要提取DNA样品并进行文库构建，然后使用测序仪器进行序列反应和信号测量，最后通过数据分析和序列比对来获得DNA的序列信息。
现代生化技术实验讲义(生物08)
实验一牛乳中酪蛋白的提取及其含量测定一、实验目的1、掌握等电点法提取蛋白的基本原理及基本操作；2、掌握双缩脲法测定蛋白含量的基本原理及基本操作。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
在乳制品加工或成品中，酪蛋白含量是一个常需测定的指标。
常用于测定酪蛋白的方法是先将酪蛋白在等电点沉淀，再用凯氏定氮法测定。
本实验采用双缩脲法测定酪蛋白。
其原理为：蛋白质含肽键，肽键在碱性溶液中可与铜离子形成紫红色化合物，在540nm波长处有最大吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关。
三、材料与试剂市售牛奶10mg/ml酪蛋白标准溶液（用0.1MNaOH配制）0.1M NaOH溶液、0.2M pH4.6的HAc－NaAc缓冲液双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）1.5g，加水100ml，加热助溶；另称取酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O）6.0g、碘化钾5g溶于500ml水中。
两液混匀后，在搅拌下加入10%NaOH 300ml，后用水稀释至1000ml，贮存于塑料瓶中。
此液可长期保存，若瓶底出现黑色沉淀则需重新配制。
四、操作步骤1、牛乳中酪蛋白的等电点沉淀用量筒量取25ml牛乳置50 ml 烧杯中，水浴加热至40℃，在搅拌下慢慢加入到已预热至40℃的等体积的0.2 M pH 4.6的HAc－NaAc缓冲液中，混匀，冷却静置30min沉淀酪蛋白后，3000r/min离心15 min，弃上清液，收集沉淀。
关于生物技术综合实验报告
关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生：学号：同实验者：谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。
γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。
GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。
实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1. 了解真核生物RNA提取的原理；2. 把握Trizol提取的方式和步骤。
二、实验原理Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解进程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。
TRIzol 的要紧成份是苯酚。
苯酚的要紧作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚取得释放。
苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
%的8－羟基喹啉能够抑制RNase，与氯仿联合利用可增强抑制作用。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，致使细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。
用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。
三、实验材料1. 材料甘薯叶片，品种为徐薯182. 试剂①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处置留宿后高压灭菌；②Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％乙醇；⑤TBE缓冲液；⑥上样缓冲液3. 仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架四、实验方式1. 将叶片掏出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充割裂解；2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手猛烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相；3. 4℃12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰凉的异丙醇，室温放置15 min；4. 4℃12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000 rpm离心2 min，弃上清；6. 室温放置10 min晾干沉淀；7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保留；8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。
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实验一酵母细胞的固定化1.实验目的掌握酵母细胞的固定化方法。
2.原理利用固定包埋法将酵母物细胞用物理的方法包埋在载体之中。
这种方法既操作简单，又不会明显影响生物活性，是比较理想的方法，目前应用最多。
其理想的固定化载体应是应对微生物无毒性，传质性能好，性质稳定，不易被生物分解，强度高、寿命长，价格低廉等。
通常选用海藻酸钙、角叉藻聚糖、聚丙烯酰胺凝胶、光硬化性树脂、聚乙烯醇等。
3.试剂和仪器设备鲜酵母、海藻酸钠、无水氯化钙，烧杯、尼龙布、注射器带7号平针头、搅棒、恒温水浴、试管、分光光度计4.实验步骤（1）称取海藻酸钠0.75g于100mL烧杯中，加25mL蒸馏水搅匀，在沸水浴中溶胀15min，得A液。
（2）取一个50mL烧杯，加入鲜酵母5g和25 mL馏水，搅匀，得B液。
（3）待A液冷却后，将B液与A液混合，用尼龙布过滤，得C液。
（4）称取2.2g无水CaCl2，溶解于200 mL蒸馏水中。
（5）用注射器带7号平针头将C液垂直注入CaCl2溶液中制备固定化细胞，固化30min，过滤、洗涤，称重。
5.实验数据及其处理记录固定化酵母细胞的质量。
固定化酵母细胞的质量为：0.75g6.问题讨论如何验证固定化酵母细胞的催化能力？(1)观察制作的凝胶珠的颜色和形状如果制作的凝胶珠颜色过浅，呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定化的酵母细胞数目较少。
如果形成的凝胶珠不是圆形或者椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败。
（2）观察发酵的葡萄糖溶液利用固定酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生很多气泡，同时会闻到酒味。
（3）检查凝胶的黏性和弹性。
思想感悟经过这次酵母细胞的固定化实验，我不仅掌握了酵母细胞的固定化方法，同时也通过对注射器的使用，明白了固定化细胞时，针头应垂直于液面且保持较近的距离，同时注射时速度应相应提高，以保证自液面下落的固定化酵母直径较小，因为缓慢低价会导致在流出针头时，由于黏弹力会使液体聚集形成较大的液滴，而快速注射形成水流则会避免该现象。
实验二蛋白的酶解及水解度的测定1．实验目的通过本实验，要求掌握酶水解蛋白质和测定水解度的原理，并掌握蛋白质水解度的测定方法。
2．原理（1）蛋白质酶水解.蛋白质的酶法水解就是利用蛋白水解酶在一定条件下对蛋白质分子进行催化水解，使蛋白质大分子降解成不同链长的小分子。
与酸碱催化的水解反应相比，它的反应条件温和，副反应少，水解效率高。
酶水解蛋白质主要受温度、pH值、加酶量、底物浓度及反应时间的影响。
根据不同的蛋白水解酶及底物情况，可设定不同的水解条件进行反应，作比较后，选择最佳的反应条件。
（2）水解度测定方法当蛋白质中的肽键全部被水解生成氨基酸时，则水解度为100％，没有被水解时，其水解度为0。
由于蛋白质水解时每裂解一个肽键就生成一个-NH2和一个-COOH基，因此，在测定蛋白质水解度时，只要定量的测定新生成的-NH2和-COOH基的量就可以计算出h值，这样就可以算出蛋白质的水解度。
常见的测定水解度的方法有甲醛固定法、茚三酮法、三硝基苯磺酸法(TNBS)、三氯乙酸法和pH-STAT法。
本试验采用茚三酮法测定蛋白质的水解度，其原理如下：茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氢、脱羧反应生成氨，茚三酮、反应产物氨和还原性茚三酮共同反应，生成紫色化合物。
利用化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
3.试剂和仪器设备(1) 材料：地鳖酶解液(2) 试剂：10％NaOH 溶液、标准L-亮氨酸（固体）、1％SDS溶液、0.2125M的磷酸缓冲溶液（pH8.2）、茚三酮、KIO3、0.1N的HCl溶液、Arazyme蛋白酶(5000U/g)(3) 仪器设备：粉碎机、磁力搅拌机，pH计、离心机、旋转式恒温振荡器、紫外可见分光光度计、分析天平、电子秤、移液管（1mL、10mL）4．实验步骤：⑴试剂的配制① 0.5mmol/L甘氨酸标准储备液制备：准确称取37.53mg甘氨酸定容至1000mL容量瓶中，于0℃条件下保存备用；甘氨酸标准使用液制备: 分别吸取上述溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于试管中，用蒸馏水补足至1mL，相当于0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mmol/L；②碘酸钾KIO3稀释液制备：称取1.0g碘酸钾溶于蒸馏水中并稀释至300mL，再加入200mL95%乙醇溶液，混匀备用；③茚三酮显色剂制备：称取0.5g茚三酮，用95%乙醇溶解并定容至100mL，此溶液在低温条件下用棕色试剂瓶可保存两周。
④ pH 5.4，2mol/L醋酸缓冲液：A 2mol/L醋酸 20mL冰醋酸加入到173mL蒸馏水中，混匀；B 2mol/LNaAc 50gNaAc用305mL蒸馏水溶解，混匀；用A将B调节到pH 5.4。
⑵原料处理选取干地鳖虫或榨油后的水分含量低，用粉碎机以60目过筛对原料进行粉碎。
⑶加水调酸：每次取粉碎好的原料5.0g放入250mL的三角瓶中，按料水比1：20加蒸馏水到三角瓶中，将料液混匀。
用10％NaOH溶液调节料液的pH值到8.2，混匀。
⑷酶解：向已调pH值的料液中加入Arazyme蛋白酶0.3000g，将三角瓶置入旋转式恒温振荡器内，在37℃、150r/min进行酶解。
⑸灭酶：水解1小时后，取出三角瓶在80℃下灭酶15min。
⑹离心分离：5000r/min下离心10min，倒出上清液即水解液，稀释20倍备用。
⑺水解度的测定：①标准曲线的制定：取25mL磨口具塞比色管6支，分别加入甘氨酸标准溶液1.0mL，再向各管分别加入pH5.4 2mol/L醋酸缓冲液，茚三酮显色剂各1.0mL，再向各管中加入蒸馏水，使各管的总体积为5.0mL，摇匀、盖塞、在沸水浴中加热15min后，取出，用冷水冷却15min，再向各管中加入5.0mL KIO3稀释液并摇匀，30min后于570nm测其吸光度。
标准曲线的绘制：y=2.6409x-0.0544R2=0.9322②测定水解液的水解度：取水解液1.0mL，再向各管分别加入pH5.4，2mol/L 醋酸缓冲液，茚三酮显色剂各1.0mL ，再向各管中加入蒸馏水，使各管的总体积为5.0mL 摇匀、盖塞、在沸水浴中加热15min 后，取出，用冷水冷却15min ，再向各管中加入5.0mLKIO 3稀释液并摇匀，30min 后于570nm 波长处测其吸光度。
5.实验数据及其处理水解度（Degree of hydrolysis,DH ）是指蛋白质中的肽键被水解的百分数，其计算公式为：DH= h / h tot ×100% 令x=0.563 y=1.43H= =1.91mmol/gh - 蛋白质水解后每克蛋白中被裂解的肽键的毫摩尔数（mmol/g ﹒蛋白质） h tot - 每克原料蛋白中肽键的毫摩尔数（mmol/g ﹒蛋白质）据实验结果表明，大豆蛋白（Soy protein ）, 酪蛋白（Casein ），明胶蛋白（gelatin ）中肽键的毫摩尔数各为7.75，8.0，11.1mequiv/g ，而花生蛋白或花生粕蛋白中肽键的毫摩尔数，到目前还没有实验结果的推荐值。
但是，利用一种底物进行酶解，选择最佳反应条件时，h tot 是固定不变的，产生变化的是根据不同反应条件下水解后每克蛋白中被裂解的肽键的毫摩尔数。
所以，本实验可以用h 来表示蛋白质水解程度。
据测定，干地鳖虫蛋白质含量在60%以上，以60%计；花生粕的蛋白质含量为39.752%，计算时以40%来计算。
(参考Adler-Nissen, Determination of the Degree of Hydrolysis of Food Protein Hydrolysates by Trinitrobenzensulfonic acid ,1977)6．问题讨论⑴ 以花生粕作为水解原料的意义在哪里？充分利用花生压榨制油后的资源，而且花生粕蛋白质营养价值高,含量高达40%.氨基酸配比合理，富含人体必须氨基酸。
⑵ 在国内食品加工中常用的蛋白质分解酶是什么？ 胃蛋白酶，凝乳酶，胰蛋白酶、组织蛋白酶⑶ 从韩国引进的高效蛋白质分解酶Arazyme 的特点是什么？Arazyme 酶是蜘蛛肠道中分离出的共生微生物所分泌的一种高效金属蛋白酶。
1*401*100310*43.13-特点：蛋白分解能力，更有效的分解动植物蛋白质，耐受高温，低温、较宽的PH范围；具有一定的抗菌活性；有高效率的催化能力，具有高度专一性，作用条件较温和，生物效应是瞬时的。
⑷本实验中的注意事项是什么？1.实验中要用具塞比色管的目的是为了加热时确保安全。
2.使用醋酸缓冲液是为了给显色反应创造环境。
3.花生粕的蛋白质含量为39.752%，计算时以40%来计算思想感悟经过这次蛋白的酶解及水解度的测定实验，我不仅学到了酶水解蛋白质和测定水解度的原理，还学到了蛋白质水解度的测定方法。
蛋白的酶法水解就是利用蛋白水解酶催化水解，使蛋白质大分子降解成不同链长的小分子。
而测定其水解度则需要依靠茚三酮法，生成的紫色化合物在570nm下测定的光密度，得出氨基酸的含量。
另外，绘制标准曲线时，为了获得更为准确的标准线，需要舍去误差较大的数据，为今后的实验数据处理积累了经验，而使用醋酸缓冲液创造显色环境也为提供了一定的参考。
实验三酶解物肽含量的测定1.实验目的随着对多肽生理功能认识的深入，多肽的提取及含量的测定也具有重要的意义。
本实验主要目的是掌握利用BCA法测定肽含量的方法及原理。
2．实验原理二价铜离子在碱性条件下可以被蛋白质分子中的肽键还原成一价铜离子，一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。
两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。
该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
3.试剂和仪器设备（1）原料和试剂原料：地鳖虫酶解物或花生粕酶解物，BCA蛋白质定量试剂盒，蒸馏水试剂：①0.9% NaCl：称取2.25gNaCl，用蒸馏水定容至250mL；②0.5mg/mL BSA标准液移取2.5mL 5mg/mL的BSA标准品，加入0.9%NaCl稀释至25mL，既得0.5mg/mL的BSA标准液；③稀释酶液：取地鳖酶解液（工艺同实验三）加入，加入等体积的10%TCA混匀，静置10min，3000rpm离心15min，取上清液，稀释10倍，备用。
（2）仪器设备恒温水浴锅、分光光度计、pH计、移液枪、分析天平、秒表或定时钟。
4.实验步骤：（1）将试剂A摇匀，用10mL移液管移取10mL试剂A到小试剂瓶中，用移液枪向其中加入200uL的试剂B（即试剂A与试剂B的量要满足A:B=50:1）,充分混匀。