丙酮酸含量测定

丙酮酸含量测定

一、目的：丙酮酸是一种重要的中间代谢物。通过本实验掌握测定植物组织中丙酮酸含量的原理和方法，增加对代谢的感性认识。

二、原理：植物样品组织液用三氯乙酸除去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与 2,4- 二硝基苯阱反应，生成丙酮酸一 2 ， 4 一二硝基苯踪，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色深度可用分光光度计测量。与同样处理的丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。

三、仪器、试剂、材料

1、1.5 mol/L NaOH

2、 8% 三氯乙酸

3、 0.1% 2,4 一二硝基苯肼 4 、丙酮酸标准液

5、.材料大蒜的鳞茎。

四、操作步骤

1、.植物材料提取液的制备

称取 0.5—1g大蒜于研钵内加适量 8% 三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用 8% 三氯乙酸洗入 25ml 容量瓶，定容至刻度。塞紧瓶塞，振摇提取，静置 30min 。取约 10ml 匀浆液离心（ 4000 r/min ） 10min ，上清液备用。

2、标准曲线制作（略）

3、.组织液中丙酮酸的测定

取 1. 0ml 上清液于一刻度试管中，加 2ml 8 ％三氯乙酸，加 1.0ml 0.1％2.4 －二硝基苯肼液，摇匀，再加 5.0 ml 1.5mol/L, NaOH 溶液，摇匀显色，10min 后在 520 nm 波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得测定管的丙酮酸含量。

五、结果处理

丙酮酸含量（mg/g鲜重）=A*V*稀释倍数/样品重(g)*1000

式中， A 为在标准曲线上查得的丙酮酸的微克数。 V为提取液体积。

六、注意事项

1. 所加试剂的顺序不可颠倒，先加丙酮酸标准液或待测液，再加 8% 三氯乙酸，最后加 1.5mol/ L NaOH 。

2 .应反应 10min 后再比色。