微生物菌种保藏原理与方法

微生物菌种保藏的原理和方法

微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。

2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。

3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。

4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。

二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。

（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。

（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。

（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。

（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。

2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。

（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。

（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。

（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。

（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。

3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。

（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。

（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。

（4）将混合物分装到冻干瓶中。

（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。

（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。

4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。

在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。

2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。

3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。

5菌种保藏的原理和方法

适用菌种：产孢子的真菌该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢子）后加以保存。注意：控制适当的水分。保存期：1-3年
（四）沙土管干燥保藏法
原理：低温、寡营养保藏期：4-5
℃冰箱保存期1-2年。适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产芽孢的细菌。过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
（二）穿刺保藏法
原理：低温、缺氧保藏期：
4-5℃冰箱保存期6-12个月适用菌种：各种好气性细菌液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气液体石蜡保藏法（在斜面菌种上加入灭菌后的液体石蜡）适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。
（三）固体曲保藏法
三、菌种保藏的注意事项
1 菌种在保藏前所处状态休ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体如孢子或芽胞培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能衰退）培养温度一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种进行保藏效果好

三、菌种保藏的注意事项
2 菌种保藏所用基质斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营养成分贫乏些较好；沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一些有毒物质；冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易形成有毒物质。
（五）真空冷冻干燥保藏法

原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整，然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。步骤： ①安瓿瓶的处理：灭菌 ②保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷冻干燥对微生物引起的冻结损伤。常采用脱脂牛奶或血清。 ③菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； ④冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 ℃以下）使之速冻，在低温下用真空泵抽干）保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ℃，保藏5-10年。

微生物菌种的保存

通过选种育种获得的优良菌种，在生产和保藏过程中，还会不断地产生变异，甚至衰退。

菌种保藏的任务就是在广泛收集具有优良特性的生产和科研菌种基础上，将它们妥善保管，使之不死，不杂，菌种优良性状不误退丧失。

1.菌种保藏的原理菌种保藏主要是根据微生物的生理、生化特点，人为地创造一个微环境条件，设法使微生物菌种的代谢活动处于不活泼和生长繁殖受抑制的休眠状态。

这种微环境主要是使菌种长期处于低温、干燥、无氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或中和剂等状态中。

微生物菌种在这种极端条件下，很少会发生变异，从而达到保持其纯而不死、壮而不衰的良好性状。

生产实践中常利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合其萌发、生长、繁殖的条件，可进行较长时期的保藏。

一个较好的保藏菌种方法，首先应能长期保持菌种原有优良性能不变，同时也应考虑到方法本身的经济、简便。

2.菌种保藏的方法菌种保藏的具体方法很多，其保藏原理、应用范围及优劣也各有千秋。

各种方法所适用的微生物种类和效果也有差异。

一个菌种用哪种方法保藏较好，需要根据设备和菌种的具体情况决定。

斜面低温保藏法这是一种最基本的方法，适用范围广。

具体方法是将各类微生物的菌种接种在不同成分的适宜斜面培养基上，待菌种生长丰满（也有建议稍以生长即可）后，置4.c左右的冰箱中保藏。

每隔。

每隔一定时间，一般3-6个月，需进行重新移植新鲜培养后继续保藏，如此连续不断。

引法保藏简单，存菌率高，具有一定的保藏效果。

3.半固体琼脂柱保藏法及石蜡油封保藏法此法与斜面保藏法不同小异，仅将斜面改为直立柱，培养基中琼脂量减少，接种方法由斜面划线改为接种针穿刺，待菌在穿刺线上长成后置4.c左右的冰箱中保藏。

也可加无菌石蜡油（150－170。

C烘箱灭菌1小时）覆盖，即配合使用石蜡油封保藏法，抑制生物代谢，推迟细胞老化，防止培养基水分蒸发，因而能延长菌种的保藏时间。

如果用无菌橡皮塞，则保存效果更好。

砂土管保藏法土壤是自然界各类菌种的栖居志所，这与土壤粒对微生物起保护作用和提高它们的存活率有关。

菌种保藏的原理和方法.ppt

2.沙土管干燥保藏法（略）
3.真空冷冻干燥保藏法
是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低温度下，（-18℃），快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异。一般可保存5~10年左右。
4.液氮保藏法
是适用范围最广的微生物保藏法，其保存期最长。因为液氮的温度可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃），故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
种时，先将原种制成若干管液氮菌种作为长期保藏用菌种，然后再制一批冷冻保藏菌种作为用户分发用。约经5年后，假定第一代（原种）的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一支液氮保藏原种制备大量冷冻保藏菌种，这样下去，至少在20年内，凡获得该菌种的用户，至多只是原种的第二代，从而保证了保藏菌种与分发菌种的高质量标准。
保藏斜面活化斜面来自2、复壮：使微生物活性恢复的同时，恢复其优良的生产性能。
保藏斜面平板分离（自然分离，剔除退化菌种）活化斜面
六、菌种保藏机构
菌种保藏机构的任务是：在广泛收集生产和科研菌种、菌株的基础上，把它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于交换使用的目的。国际上很多国家都设立了菌种保藏机构。
▲ I FO（发酵研究所，日本大阪. Institute for Fermentation, Osaka, Japan ） ▲ NCTC（国家典型菌种保藏中心,英国伦敦. National Collection of Type Culture. London, United Kingdom） ▲ NRRL（Northern Utilization Research and Development Division, U.S Department of Agriculture. Peoria, U.S.A. 美国农业部、北方开发利用研究部，美国皮奥里亚市）

微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。

菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。

(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。

2 原理菌种保藏的方法很多。

其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。

使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。

依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。

一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。

3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。

3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。

3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。

4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。

在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。

在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。

5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。

5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。

这种方法一船可保藏三个月至半年。

5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。

微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。

传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。

传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。

培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。

若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。

传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。

其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。

常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。

方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。

保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。

使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。

常见微生物的菌种保藏及原理

常见微生物的菌种保藏及原理微生物指的是在显微镜下可见的微小生物（如细菌、真菌等）。

由于微生物在各种环境中具有重要的应用价值，如食品加工、制药、环境修复等，因此对微生物菌种的保藏具有重要意义。

目前常见的微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。

下面将介绍这些保存方法的原理及其在微生物保藏中的应用。

一、冷冻保存冷冻保存是最常见且简单的微生物保藏方法之一、其原理是通过降低菌种的生长和代谢速度来延缓细胞死亡，从而使菌种长时间保存。

常见的冷冻保存方式有两种：低温保存和液氮保存。

1.低温保存低温保存常用的温度为-80℃。

将微生物菌种培养物加入附加剂（如甘油、蔗糖）后，迅速冷冻至-80℃，然后保存在低温冰箱中。

这种方法简单易行，并且不需要特殊仪器设备，适用于大多数微生物菌种的保存。

2.液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方法，常用温度为-196℃。

液氮保存可以在较长时间内保持微生物菌种的细胞完整性和代谢活性。

液氮保存通常需要配备专门的液氮保存设备，如液氮罐和液氮冷冻器。

虽然保存设备和条件较为复杂，但是液氮保存方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。

二、干燥保存干燥保存是通过去除菌种的水分来实现菌种长时间保存的一种方法。

常见的干燥保存方法主要有两种：常温干燥保存和真空冷冻干燥保存。

1.常温干燥保存常温干燥保存是将微生物菌种培养物均匀涂布于无菌玻璃片或滤纸上，然后在室温下进行干燥。

干燥后的微生物菌种可以直接保存，也可以以泡脱水的方式进行保存。

常温干燥保存适用于耐受干旱的微生物菌种。

2.真空冷冻干燥保存真空冷冻干燥保存是将微生物菌种培养物在真空条件下进行冷冻干燥。

首先，将菌种培养物在低温下冷冻，然后在低压下去除水分。

真空冷冻干燥保存可以保持菌种的细胞完整性和代谢活性。

这种方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。

三、液氮保存液氮保存是将微生物菌种培养物冷冻在液氮温度下进行保存的方法。

如前所述，液氮保存要求采用极低温的液氮温度（-196℃）进行保存。

菌种保藏原理

菌种保藏原理
在菌种保藏中，主要通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。

冷冻保藏是将菌株培养物中的微生物细胞在低温下迅速冷冻保存，而冻干保藏则是将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其变成干燥的状态。

冷冻保藏的原理是通过将菌株培养物中的水分迅速冷冻，使细胞内的代谢反应减缓，防止代谢产物的积累和细胞损伤。

同时，低温下的冷冻可以防止细胞内的酶活性和酸碱平衡的改变，从而减少冻存过程中的细胞死亡率。

冻干保藏的原理则是通过将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其转变成干燥的状态。

这种保藏方式主要通过冷冻干燥设备，将培养物缓慢冷冻至低温，然后将水分在低温下逐渐去除，最终形成干燥的菌株。

冻干保藏可以有效地减少冷冻过程中的细胞损伤，同时还能极大地减少微生物的营养需求和代谢活动，从而延长菌株的保存时间。

综上所述，菌种保藏的原理主要是通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。

这些方法可以有效地减少菌株的代谢活动和细胞损伤，从而保持菌株的活力和遗传特性。

实验室最常用的五种菌种保藏方法

在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。

恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。

本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。

一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。

其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。

该方法具有诸多显著优点。

低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。

低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。

操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。

在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。

常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。

制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。

将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。

在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。

低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。

然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。

二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。

常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。

沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。

该方法具有操作简便、成本低廉的特点。

在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。

菌种保藏技术—菌种保藏原理与方法

• 3、砂土管保藏法这是一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用。
• 其制作方法是，先将砂与土分别洗净、烘干、过筛(一般砂用60目筛，土用120目筛)，按砂与土的比例为(1～2)﹕1混匀，分装于小试管中，砂土的高度约1cm，以121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3次。50℃ 烘干后经检查无误后备用。也有只用砂或土作载体进行保藏的。需要保藏的菌株先用斜面培养基充分培养，再以无菌水制成108～ 1010个/ml菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥器中，在室温或4℃冰箱内保藏，后者效果更好。砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长，约1～10年。
• 1.材料和工具 • (1)菌种产芽孢细菌、形成孢子的放线菌和霉菌斜
面菌种。 • (2)培养基牛肉膏蛋白胨培养基、高氏1号培养基、
马铃薯蔗糖培养基。 • (3)试剂和器材液体石蜡、P205或CaCl2、10%HCI、
无菌水、甘油、河沙、瘦黄土(有机物含量少的黄土)。无菌试管10支、5ml无菌吸管、1ml无菌吸管、接种环、40目及100目筛子、干燥器、冰箱、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
一、斜面低温保藏法规程
1.材料和工具 • (1)待保藏菌种细菌、酵母菌、放线菌和霉菌斜面菌种。 • (2)无菌培养基试管斜面牛肉膏蛋白胨培养基试管斜面3支(保藏细菌)，麦芽汁
培养基试管斜面3支(保藏酵母),高氏1号培养基试管斜面3支(保藏放线菌)。 • (3)工具接种环、冰箱、超净工作台、恒温培养箱等。 • 2.操作 • (1)贴标签取装有各种培养基的无菌试管斜面各3支，将写有菌株名称、接种人

5菌种保藏的原理和方法

16
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方法。
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（六）液氮保藏法
原理：低温悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件菌种保藏的方法菌种保藏的注意事项菌种保藏机构
1
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一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂等方法。
2
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二、菌种保藏的方法
斜面保藏法穿刺保藏法固体曲保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻干燥保藏法液氮保藏法悬液保藏法低温保藏法
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（一）斜面保藏法
原理：低温方法：将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。一般保存期3-6个月。注意事项: 冰箱的温度；培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
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（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整，然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。

菌种保藏的方法

砂土管干燥保藏法
方法：将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管，然后接种保藏。原理：无营养，缺氧，干燥适用：产孢子的丝状真菌、放线菌；有芽孢的细菌保藏期：2-10年或更长

步骤：
沙：
河沙吸去铁质
60目筛
弃去大颗粒及杂质去除有机物
80目筛
去掉细沙
吸铁石
10％～20％的盐酸浸泡24h 水洗至中性烘干或晒干

半固体穿刺保藏法
方法：适宜半固体→培养→4℃保藏原理：缺氧、低温适用：好气性细菌，酵母等保藏期：6-12个月步骤：用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.

步骤

1安瓿管的处理
菌备用。
直径8-10mm，长度不小于100mm，洗净高压灭
2 保护剂
低分子和高分子化合物，如氨基酸、糖类、蛋白质等。常用的是脱脂奶和血清。
3 菌悬液制备
最适培养条件、生长后期。产孢子的微生物须适当延长培养时间以获得成熟的孢子。

4 冷冻干燥
5 安瓿管的保藏
4-5℃保藏
土：取地面下40～60cm非耕作层贫瘠且粘性较小的土，研碎，100目过筛，
水洗至中性，烘干。
将处理后的沙、土按质量比2∶1混合。混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中，高度为1cm左右，塞好棉塞，121℃高压间歇灭菌 2-3次，烘干备用。孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干燥→ 封口 → 4-6℃保藏

微生物的菌种保藏

培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培
养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，
垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。
— 1—
• 菌种保藏方法
微生
3.砂土管保藏法
物
将砂与土分别洗净、烘干、过筛，
的菌种
装于小试管中，砂土的高度约1cm， 121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3
保藏
次。50℃烘干后经检查无误后备用。将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子
— 1—
斜面低温保藏法操作步骤
1.斜面低温保藏法 2.固体穿刺保藏法 3.液体石蜡保藏法 4.沙土管保藏法 5.甘油保藏法
— 2—
• 菌种保藏方法操作步骤
微
生
1.斜面低温保藏法
物的菌
（1）贴标签将注有菌株名称和日期的标签贴于试管斜面的正下方。（2）接种将待保藏的菌种用斜面接种法移接至注明菌名的试管
悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也
可直接刮下孢子与载体混匀，而后置
于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰
熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥
器中，在室温或4℃冰箱内保藏。
— 1—
• 菌种保藏方法
微
生物的
4.甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本
菌种保
法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用－70℃，保藏期可达10年。
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• 菌种保藏方法
微
生物的
1.斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长
菌种保
完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保

微生物菌种保藏的原理和方法

微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在一定的条件下，以确保其持久的存活和繁殖能力。

微生物菌种的保藏可以用于科学研究、工业应用和生物资源保护等领域。

本文将介绍微生物菌种保藏的原理和方法。

微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保藏、干燥保藏和液氮冷冻保藏等。

冷冻保藏是将微生物菌种保存在低温条件下，常见的温度为-70℃或-80℃。

低温可以减缓微生物的新陈代谢过程，降低细胞内酶的活性，从而延缓细胞的老化和死亡。

冷冻保藏的关键是要使用适当的保藏液，如冻干保藏液、甘油保藏液等，以保护细胞在冷冻过程中的完整性和活力。

干燥保藏是将微生物菌种保存在无水或低水分条件下。

干燥可以通过脱水或真空干燥等方法实现。

干燥保藏的原理是通过降低细胞内水分含量，使微生物处于休眠状态，从而延缓细胞的代谢活动和老化过程。

干燥保藏的关键是要选择适当的干燥剂，如硅胶、脱水剂等，以吸附和吸收细胞内的水分。

液氮冷冻保藏是将微生物菌种保存在液氮温度下，常见的温度为-196℃。

液氮冷冻保藏的原理是通过极低的温度和极低的氧气浓度，使微生物处于极度低温和低代谢状态，从而延缓细胞的老化和死亡。

液氮冷冻保藏的关键是要使用适当的冷冻容器，如液氮罐、冷冻管等，以确保微生物菌种的长期保存。

微生物菌种保藏的方法包括冻干法、冷冻法、液氮冷冻法等。

冻干法是将微生物菌种培养物冻干后保存。

冻干法的步骤包括培养微生物菌种、制备冻干保藏液、将菌种混合冻干保藏液后冻干、密封保存。

冻干法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。

冷冻法是将微生物菌种保存在低温条件下。

冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备冷冻保藏液、将菌种混合冷冻保藏液后冷冻、保存在低温条件下。

冷冻法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。

液氮冷冻法是将微生物菌种保存在液氮温度下。

液氮冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备液氮保藏液、将菌种混合液氮保藏液后保存在液氮温度下。

菌种保藏和复苏-精简版

菌种保藏和复苏-精简版菌种的保藏与复苏⼀、菌种保藏（⼀）菌种保藏的定义菌种保藏（culture preservation）是指将微⽣物菌种⽤各种适宜的⽅法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。

菌种保藏有许多的⽅法，其共同的⽬标是把菌株的优良性状保存下来，防⽌退化、死亡或杂菌污染。

（⼆）菌种保藏的原理微⽣物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微⽣物的代谢处于最不活跃或相对静⽌的状态，才能在⼀定的时间内使其不发⽣变异⽽⼜保持⽣活能⼒。

低温、⼲燥和隔绝空⽓是使微⽣物代谢能⼒降低的重要因素，所以，菌种保藏⽅法虽多，但⼤都是根据这三个因素⽽设计的。

其中低温是保藏菌种的重要因素，也是常⽤的⼀种简单易⾏的⽅法。

在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。

在缓慢冷冻时，胞外基质⼀般较快结冰⽽形成冰晶使基质浓度增⾼，造成细胞⽔分外渗⽽⼤量脱⽔，可能使细胞死亡。

如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡，同时胞内冰晶较⼩，对细胞及原⽣质膜的损伤也较⼩，菌株不易死亡，影响也较⼩。

与低温相关的保藏⽅法，如冷冻⼲燥法、超低温保藏法等，都是利⽤低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理⽽设计的。

（三）菌种保藏的⽅法本实验室常⽤菌种保藏⽅法主要有：1.低温保藏法将菌种接种在适宜的固体或液体培养基上，待菌⽣长充分以后，转移⾄4°C冰箱中保存。

平板在4°C存放时，最好⽤封⼝膜封⼝，不能长时间存放，⼀般7-10天，最多不应超过2个星期（特殊菌株可能时间更短，如铜绿假单胞菌只能存放3天）。

此法仅⽤于⼯作⽤菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，应经灭活处理后销毁。

2.⽢油冷冻管保藏法菌种长时间冻存应放于液氮或者-80 °C冰箱，利⽤10-15%的⽢油进⾏冻存。

⽢油的作⽤：⽢油能够提⾼⽔体的粘稠度，使其冰点提⾼，防⽌细胞内部产⽣冰晶造成细胞的损害，⼀般使⽤⽢油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产⽣毒性，如果是保存带有质粒的菌种建议⽢油终浓度为8-10%，⽢油浓度太⾼会导致质粒的不稳定。

微生物菌种保藏的原理和方法

微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，以保证其长期存活和遗传特性的保持。

微生物菌种的保藏有着重要的科研意义和应用价值，可以用于微生物学研究、新药研发、环境修复等领域。

微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保存和冷冻干燥保存两种方法。

冷冻保存是将微生物菌种存放在低温环境下，通过降低菌种代谢活动的速度来保持其存活和遗传特性。

冷冻保存的主要步骤包括选择合适的保藏液、培养菌种、制备冷冻物等。

保藏液一般是由无菌培养基和一定浓度的甘油或蔗糖组成，可以提供菌种所需的养分和保护菌体免受冷冻引起的损伤。

培养菌种时需要选择处于活跃生长期的菌株，通过适当的培养条件来使其保持较高的活力。

制备冷冻物时，可以将菌株转移到保藏液中，并在超低温环境下迅速冷冻。

冷冻干燥保存是将微生物菌种冻结后，通过真空干燥的方法除去水分，将菌种转变为无水状态，以提高其耐久性和保存时间。

冷冻干燥保存主要包括培养菌种、冻干物制备和密封保存等步骤。

培养菌种的方法与冷冻保存类似，选择合适的培养基和培养条件来培养活跃菌株。

冻干物制备时，将菌株转移到含有保护剂的培养基中，并通过冻结和真空干燥的过程除去水分，形成冻干物。

最后，将冻干物密封保存，避免受潮和污染。

微生物菌种保藏在实际操作中需要注意一些关键技术和管理要求。

首先，要确保保存的微生物菌株是原始菌株的纯种，并且具有所需的遗传特性。

其次，保藏液或冻干物储存容器应该具备良好的密封性能，以防止水分的进入和菌株的污染。

另外，保存的温度应该稳定在低温，通常为-80℃或更低的温度，以保证菌株的长期存活。

此外，对于长时间保存的菌株，应定期进行复苏培养，以确保其存活和活力。

总之，微生物菌种保藏是一项重要的技术，为微生物资源的保存和利用提供了有效的手段。

通过冷冻保存和冷冻干燥保存等方法，可以长期保留微生物菌种的遗传特性和活力，为微生物学研究和应用提供了可靠的资源。

在实际操作中，应遵循正确的步骤和管理要求，以确保菌种的质量和保存效果。

简述微生物菌种保藏的原理及常用方法。

微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下以确保其长期存活和保持遗传稳定性的一种方法。

微生物菌种保藏的主要目的是为了保护菌种的遗传多样性、促进科学研究和应用开发。

微生物菌种保藏的原理主要包括两个方面：冷冻保存和冻干保存。

冷冻保存是将微生物菌种在低温条件下保存，通过冷冻剂的作用，降低菌种的代谢活动，以减缓细胞的老化和死亡速度。

冻干保存是将微生物菌种在低温下冻结，然后通过真空干燥的方法，将细胞内的水分蒸发掉，使菌种处于无水状态，以防止代谢活动和细胞死亡。

常用的微生物菌种保藏方法主要有冷冻保存、冻干保存、液氮保存和固体保存等。

冷冻保存是目前最常用的微生物菌种保存方法之一。

它的优点是操作简单、成本低廉，同时可保存多种微生物菌种。

冷冻保存一般是将微生物菌种培养至对数生长期，然后加入适宜的冷冻保护剂（如甘油、DMSO等），将菌液分装到冷冻管中，经过快速冷冻后存放在低温冰箱或液氮罐中保存。

冻干保存是将微生物菌种在深度冷冻后，通过真空干燥的方法将菌种中的水分蒸发掉，使菌种处于无水状态。

这种保存方法适用于一些对冷冻保护剂敏感的微生物菌种，如厌氧菌和放线菌等。

冻干保存的步骤包括深度冷冻、真空干燥和密封保存。

液氮保存是将微生物菌种保存在极低温的液氮中。

液氮保存的温度通常为-196℃，可以长期保存微生物菌种。

液氮保存适用于对保存温度要求极低的微生物菌种，如真菌、酵母菌等。

液氮保存需要使用专用的液氮罐，将微生物菌种培养物冷冻后迅速浸入液氮中保存。

固体保存是将微生物菌种保存在固体培养基中。

这种保存方法适用于一些微生物菌种，如细菌和酵母菌。

固体保存的步骤包括将菌种培养至对数生长期后，加入适宜的固体保护剂（如明胶、蔗糖等），均匀涂布在无菌培养基上，经过干燥后保存在低温条件下。

微生物菌种保藏的方法选择应根据菌种的特性和保存条件的要求进行选择。

不同的保存方法有其特点和适用范围，选择合适的方法可以确保菌种的长期保存和保持遗传稳定性，为科学研究和应用开发提供可靠的菌种资源。

常见微生物的菌种保藏及原理

常见微生物的菌种保藏及原理
（ห้องสมุดไป่ตู้）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要.
（二）、菌种保藏的原理
（三）、菌种保藏的方法

1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,臵于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,臵于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这一改进可使菌种的保藏期延长. 该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变异和被污染.
此法操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上,是目前被公认的最有效的菌种长期保藏技术之一.除了少数对低温损伤敏感的微生物外,该法适用于各种微生物菌种的保藏,甚至连藻类、原生动物、支原体等都能用此法获得有效的保藏.此法的另一大优点是可使用各种培养形式的微生物进行保藏,无论是孢子或菌体、液体培养物或固体培养物均可采用该保藏法.其缺点是需购臵超低温液氮设备,且液氮消耗较多,操作费用较高. 要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并且取样时一定要戴专用手套以防止意外爆炸和冻伤

工业用微生物菌种保藏的目的、原理及方法详解

工业用微生物菌种保藏的目的、原理及方法详解1、菌种保藏的目的微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。

菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。

2、菌种保藏的原理无论采用何种保藏方法，首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。

其次，应根据微生物生理、生化特点，人为地创造环境条件，使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。

这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧，另外，避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。

3、菌种保藏的方法（1）斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。

此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。

放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右，无芽孢的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。

如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4℃冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。

这一改进可使菌种的保藏期延长。

该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。

其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。

（2）石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端lcm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。

使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃高压蒸汽灭菌60～80min，再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。