微生物菌种保藏原理与方法

3干燥保藏法
砂土管保藏法—产生芽孢的细菌及形成孢子的 霉菌和放线菌。 方法：处理砂土 装沙土管 制备菌液 加孢子液 干燥 收藏 恢复培养 明胶片保藏法—细菌 制备菌悬液 制备菌液 制备蜡纸 加菌液 干燥 收藏 恢复培养
3干燥保藏法
硅胶保藏法—丝状真菌。 方法：制备硅胶 制备菌液 加菌液 干 燥 收藏 恢复培养 麸皮保藏法—产孢子的丝状真菌。 制备麸皮培养基 培养菌种 干燥 收藏 恢复培养
1.2半固体穿刺保藏法
贴标签 穿刺接种：将菌种直刺入直立柱中央 培养：同传代保藏法 收藏：待菌长好后，用浸有石蜡的无菌软木塞 或橡皮塞代替面塞并塞紧，置4 ℃冰箱中保藏， 保藏0.5~1年。
1.3石蜡油封法
石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超过总体 积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后在40 ℃温箱中放置2 周或置105~110 ℃烘箱中烘2h，除去石蜡油中的水分。 培养 加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中，加入量 以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约1cm为宜。 收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种管直立 放置于4 ℃冰箱中。 放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌及不 产芽孢细菌可保1年。
1 简易保藏法
定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。 优缺点：操作简单，可随时观察菌种生长状况， 但较费时费力，因经常移植传代，微生物物易 发生变异。
1.1斜面传代保藏法
贴标签：菌种 菌株 接种日期 接种：对数生长期后期 成熟的孢子 培养： 细菌—37℃，18~24h 酵母—28~30 ℃ ，36~60h 放线菌和丝状真菌—28 ℃ ，4~7d 收藏：管口面塞用牛皮纸包扎，或用融化的固 体石蜡封棉塞后置4冰箱保存。
4冷冻真空干燥保藏法
该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥和添 加保护剂等多种有利条件，是微生物代谢处于 相对静止状态。 该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、 （除少数不产孢子或只产生丝状体真菌外）、 酵母菌及病毒的保藏。 该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一般可 达10~20年），存活率高，是目前最有效的菌 种保藏方法之一。
2 甘油保藏法
保护剂： 40%左右的甘油 机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入细胞， 使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由于强烈脱水 及胞内形成冰晶而引起的破坏。 保藏温度：-20 ℃左右或-70 ℃ 特点:操作简单，保藏期长，保存期间取样测试方 便，在基因工程中常用于保存含质粒的菌株，一 般可保3~5年。
2 甘油保藏法
方法步骤： 无菌甘油的制备：80%的甘油在121℃灭菌 20min 保藏培养物的制备：活化 纯化 性能检测 制备 菌种培养物 保藏菌悬液的制备：液体法 菌苔法 -20 ℃保 藏 快速冷冻；乙醇-干冰 液氮 超低温保藏：-70 ℃ 一般细菌、酵母保存期为 3~5年。
3 干燥保藏法
基本原理：将微生物赖以生存的水分蒸发掉， 使细胞处于休眠和代谢停滞状态，从而达到较 长期保藏的目的。低温条件下，保藏期可达数 年至十几年之久。 砂土管保藏法、明胶片保藏法、硅胶保藏法、 麸皮保藏法
1 常用的简易保藏法： 斜面传代保藏法、半固体穿刺保藏法（适用 于细菌和酵母菌）、石蜡油封法 2 甘油保藏法 3 干燥保藏法 4 真空冷冻干燥保藏法 5 液氮超低温保藏法
1 简易保藏法
基本原理：利用低温来抑制微生物生命活 动。 通常将在斜面或半固体培养基上生长良好 时培养物直接放到2~10 ℃冰箱中保藏，当 培养基营养物质消耗殆尽后再重新移植到 新的 培养基上，故又称定期移植保藏法或 传代培养保藏法。
4冷冻真空干燥保藏法
安瓿管
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5液氮超低温保藏法
将菌种保藏在超低温（-196℃~-150 ℃ ）的液 氮中，可降低变异率和长期保持原种的性状。 对于冷冻干燥保藏法或其他干燥保藏有困难 的微生物，如支原体、衣原体及难以形成孢 子的小霉小型藻类或原生动物都可用本法长 期保存，这是当前保藏菌种最理想的方法。 保护剂：20%甘油或10%二甲基亚砜（DMSO）
微生物菌种保藏的原理与方法
菌种保藏基本原则
保藏菌种时首先要选择它们的休眠体，如分生孢 子、芽孢等，并创造一个低温、干燥、缺氧、避 光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能较长 时间维持其休眠状态。 对于不产孢子的微生物，也要使其新陈代谢处于 最低水平，又不会死亡，从而达到长期保藏的目 的。
常用菌种保藏方法