植物显微技术实验报告

植物显微技术实验报告

田祎

风园10-2

090344108

植物显微技术实验报告

09044108 风园10-2班田祎实验目的：

1.接触初等的植物显微技术和组织化学，并初步了解。

2.了解石蜡制片法的操作步骤及各种药品各使用，了解木材切片制片的操作步骤。

3.操作显微照相，并掌握暗室冲洗照片的基础步骤

4.木材切片的制作

实验内容：

一、石蜡制片法

1、材料固定：将材料迅速杀死固定来保持其原有成分性质、位置，所以将材料用刀片截取成适当大小的块。立即投入FAA固定液中，再进行抽气处理，以使固定液渗入材料。固定好的材料要经过水或酒精洗2--3次。

2、脱水：材料经不同浓度的酒精，渐次脱去组织中的水，一般从50%酒精→70%酒精→85%酒精→95%酒精→100%酒精，每一级间隔2小时。酒精用量为材料3-5倍。

3、透明：材料从纯酒精中出来后经过1/2二甲苯+1/2纯酒精（2小时）过渡到纯二甲苯中透明两小时。

4、浸蜡：将盛有材料的小杯中放入少量二甲苯、并加些蜡屑，再将小杯放入38度左右的温箱中过夜，第二天将材料换入纯蜡中以后每过4小时换一次纯蜡，总共换三次。

5、包埋：将融化的石蜡连同材料一并倾入小纸盒中，用热针迅速将材料排齐，然后平放入冷水中使其凝固，动作一定要迅速，否则石蜡浸慢了会出现结晶，切片易碎。

6、切片：注意刀要锋利，并将刀和蜡块的位置调整好。

7、贴片：要梅氏蛋白贴剂粘片。注意载玻片一定要干净粘贴剂涂得要合适而且蜡片的背面和载玻片相贴。

8、染色封片：粘贴好的切片经一至数天干燥后进行脱蜡、复水、染色、脱水、透明封片等步骤。染色程序：石蜡切片→二甲苯中脱蜡（5分钟）→1/2二甲苯1/2纯酒精→100%酒精（2 分钟）→95%酒精（2分钟）→85%酒精（2分钟）→70%酒精（2分钟）→50%酒精（2分钟）→蒸馏水（2分钟）→0.5%高碘酸钾（10分钟）→自来水（5分钟）→蒸馏水（2 分钟）→锡夫试剂（20分钟）→漂洗液3次，每次2分钟→自来水（5分钟）→蒸馏水（2分钟）→萘酚黄S染色（2--10分钟）→蒸馏水（2分钟）→叔丁醇，两次，每次2分钟→二甲苯透明（5分钟）→树胶封片。

二、木材切片

1．材料的选择

作木材切片时可选用新鲜的木质枝条或茎，也可选干燥的木材，但必须注意以下各点：

(1)年龄适中而具有代表性；

(2)表面光滑，粗细均匀(枝条)；

(3)硬软一致，无腐坏现象；

(4)选取边材而勿选心材，因心材中含多量的树脂、油类等，往往使制成的切片模糊不清；

(5)必须分清横切、切线切和半径切的三个切面。

2．材料的处理

(1)分割

木质枝条可分割成3cm长之小段，茎或干燥木材则应分割成长方体的小块，其大小应不超

过切片机夹物部口径的大小(约长2cm，宽、高各1.5cm)。

(2)空气的抽除

将木质枝条或木块投入冷水中加热煮沸，20～30min后取出，立即浸入冷水中，然后再煮沸，反复进行几次后，材料即沉入水底，此时即表示空气已全部除去。

(3)软化将已除去空气的材料，浸入甘油酒精中二三天（不同的材料，软化的时间不同，其具体程度要试切后才能确定）。

3．制片

(1) 切片：将软化好的木块夹在切片机上进行切片。每切完一片后，用毛笔在材料上和刀刃上加水，然后把切好的片子移入盛水的小培养皿中（70%酒精）保存。

(2) 染色：将培养皿中的水倒去，滴入1%的番红水溶液1--3小时。

用自来水冲去红色染料，再用蒸馏水洗一下。

(3) 脱水：依次换入50%酒精、70%酒精、85%酒精，每次间隔2--5分钟。

(4) 复染：将材料从酒精中取出，用吸管将1%固绿溶液滴在材料商，0.5--1分钟后，用95%的酒精冲去材料上多余的固绿溶液。

(5) 分色：用滴管将酸酒精（90%酒精，滴入数滴盐酸）滴在材料上，约20--30秒钟，再用95%的酒精冲洗1--2次。

将材料放入100%的酒精中脱水5分钟。

(6) 透明：100%酒精与二甲苯等量混合中5分钟，二甲苯中5分钟。

用光学树脂胶封藏。

三、显微摄影

显微镜及实体解剖镜拍照：

1、装入胶片，盖好后盖

2、空拍2-3次检查

3、黑白：把照明光源的电压提高到6V以上，使用绿色滤光镜。彩色：把照明的色温调整到胶片规定的色温上。

4、决定拍摄标本的部位调整光阑到明亮适度，

5、对焦，进行曝光拍摄。

交卷冲洗：取出胶卷，在暗袋或暗室中将胶卷正确放入显影罐内，按照说明时间，依次加入显影液、定影液。进入暗室冲洗黑白照片，使相片感光后依次放入显影液，定影液，清水。之后压干，剪好相片，冲洗完成。

实验体会：

近些年来，随着电子显微镜的不断发展和制片技术的逐步提高，植物显微技术作为植物学专业的一门基础课程，显得越来越重要。但长期以来，由于实验室硬件条件的限制，植物显微技术实验未能得到很好开展。目前，很多农林院校大多主干课程的教学或实验都用到植物显微技术的一些基本实验知识和实验技能。因此，为了加强和培养药用植物专业学生的实际动手能力，掌握植物显微技术的基本技能和操作方法，也为了我们日后的实验打好一个基础，学习植物显微技术显得非常必要。

这几天的实验印象最深的就是组化染色，木材制片，亲自洗黑白照片和制作石蜡切片。

我们进行了组化染色和木材切片。在组化染色实验中，因为有很多要用蒸馏水的步骤，在实验到一半时，我就把步骤弄错了，导致了实验又从头开始，一个上午的准备都白做了，真是懊悔呀！惨痛的事实教育了我，实验真的要步步的细心做，不能有丝毫的马虎和急躁！

在做组化染色的切片和木材切片时，都是要用天然树胶封片，但是树胶流动的速度很慢，所以盖玻片也要随之很小心的慢慢盖上。对于我这样的急性子，真的是种考验呀！即使