细胞工程

细胞工程学复习资料

一、名词解释

1、细胞工程按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。

2、接触抑制由于细胞的移动而互相靠近发生接触时，细胞不再移动的现象。其实质是由于细胞接触而抑制细胞运动的现象。

3、密度抑制当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分的减少，代谢产物的增多。细胞因营养的枯竭和代谢物的影响而导致细胞分裂停止的现象。

4、无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。

5、原代培养即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。

6、传代培养当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代培养。

7、饲养细胞也称滋养细胞，是一层经过射线照射或丝裂霉素C作用后失去分裂能力，供其他细胞附着的细胞层。

8.细胞系原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。

9.细胞株从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选购方法,由单细胞增殖形成的细胞群.

10.单克隆抗体技术又称为杂交瘤技术: 单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。

11.外植体把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官。

12.愈伤组织脱分化的细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性、松散的细胞团。是植物细胞体外再生的第一步，关键一步。

13.继代培养指培养组织在培养基上生长一段时间后，营养物质枯竭，水分散失，并已积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养。14脱分化：分化的细胞在一定条件下，可以转变为胚性状态，重新获得分裂能力。

15再分化：是脱分化后的分生细胞在一定的条件下，重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株。

16组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。其核心是有种子细胞核生物活性材料构成的三维空间复合体。

17顶体反应是指精子在进入卵丘细胞后由精子头部释放顶体小泡中的内含物，有助于精子穿过透明带的反应过程。

18胚胎发育阻滞是指体外受精的早期胚胎在体外发育中，往往会停止在某一阶段不在发育，这种现象及胚胎发育阻滞。

二、填空题

1、以细胞工程为基础，发展派生出了不少以工程冠名的新领域，如组织工程、胚胎工程、染色体工程等

2、动物细胞工程实验室的设置严格要求无菌环境，避免微生物及其它有害因素的影响。一

般分为六个工作方面：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。

3、理想的无菌操作室应划分为更衣间、缓冲间及操作间。

4、植物的细胞工程实验室设置特有光照培养室、试管苗培养的温室、移植驯化室。

5、实验室的生物安全保护必须有房租致病性微生物扩散的制度和人体防护措施。即包括物理性防护和制度性防护。其中物理性防护包括隔离的设备、实验室的设计及实验实施三方面。

6、玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。其中浸酸的组成是重铬酸钾、浓盐酸、蒸馏水。

7、根据离体细胞在体外生长时是否贴壁的性质，将其分为贴壁型和悬浮型两类。贴壁型细胞包括上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形型细胞。

8、无血清培养基包括基础培养液及添加成分两大部分。

9、组织细胞的分离方法主要为机械法和消化法。机械法包括离心、切割、机械分散等方法；消化法包括胰蛋白酶、胶原酶、螯合剂消化法。

10、培养方法包括组织块培养法、单层细胞培养、悬浮细胞培养。

11、细胞的复苏冻存基本原则是慢冻快融。

12、细胞的运输方法有贴身运输、冰瓶运输、液氮罐运输。

13、胚胎发育的基本过程有生殖细胞的发生、受精、卵裂、囊胚的形成、原肠胚的形成、中胚层及体腔的形成、胚层分化。

14、人工种子包埋方法：A干燥包埋法 B 液胶包埋法C 水凝胶法

15、人工种子的组成：人工种皮、人工胚乳、体细胞胚。

16、幼胚培养中，常见的生长方式有胚性发育、早熟萌发、愈伤组织。

17、器官的发生和胚状体形成是愈伤组织再分化形成植株的两个途径。

三、简答题

1、超净工作台的分类？它们的特点（原理）各是什么？

答：超净工作台分为侧流式和外流式两类。

原理：侧流式净化后的空气从气流由左侧或右侧通过工作台面流向两侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，从而形成气流屏障以保持工作区无菌。

外流式使净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作区，但如进行有毒物质的实验操作则对操作者不利，外流式多为开放式方便取放实验物品。

2、倒置显微镜的使用优点？电热干燥箱使用注意事项？

答：（1）倒置显微镜的使用优点：可以从培养皿的下方检查培养物，减少观察对细胞生产的影响。

（2）电热干燥箱使用注意：①消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而致玻璃器皿损坏，应该等候温度自然下降至100℃以下方可打开。②电热干燥时温度不宜过高，过高的温度可导致包裹的纸或棉花烧焦，从而影响细胞的生长。

3、细胞培养室常见的消毒方法有哪些？

答：消毒的方法分为物理灭菌法（紫外线、电离辐射、湿热、干热、过滤）和化学消毒法（各种化学消毒剂）

4、如何实现无菌操作技术及其关键流程？

答：无菌操作技术是细胞体外培养的基本技术，也是最易被感染的。因此，防止污染是决定细胞培养成败的关键。无菌概念和无菌操作必须贯穿整个培养过程的始终。

（1）实验器具和材料的准备

根据实验要求，将所需要的实验器具和材料准备好，以合适的方法进行消毒和灭菌。

（2）培养室和超净工作台的消毒