甾体激素类药物的鉴别
药物分析-甾体激素类药物的鉴别 (2)
CH NO CN 5 Fe 4 CO
+ 2H2O
O
蓝紫色
4.有机卤素
有机氟 有机氯
呈色 茜素氟蓝 硝酸亚铈
有机破坏
Fˉ
Clˉ
硝酸—硝酸银 AgCl↓
O OH
茜素氟蓝
OH
CH2COOH
CH2N
O
CH2COOH
F- Ce
O OH O
蓝紫色
CH2COO
F
CH2N
Ce
O
CH2COO
OH
5. 酚羟基
沉淀用甲醇洗，水 洗，105 ℃干燥
缩氨基脲衍生物
m.p.约182℃
（四）UV法
1. 结构依据
△４-3-酮、苯环、其他共轭结构
240nm左右
280nm左右
2. 应用示例
曲安西龙
丙酸倍氯米松
溶剂
甲醇
乙醇
浓度
20μg/ml 20μg/ml
结果判断
在238nm处有最 大吸收
在 239nm 处 有 最 大 吸收，A为 0.57 ～ 0.60 ， 在 239nm 与 263nm 处的吸收度比值为 2.25～2.45
3、判断：以Rf值定性。
（八） HPLC法：主要用于甾体激素类药物制剂
的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松
软膏）
0.40
Ethylparaben
0.35
0.30
方法：对照品法
0.25
Propylparaben
AU
0.20
要求在含量测定
Uracil
0.15
项下记录的色谱图 0.10
中，供试品峰的tR 与对照品峰的tR一 致。
药物分析学(第十五章)甾体激素类药物分析与鉴别实验
取本品约2ml，加硫酸2ml溶解，有黄绿色荧 光，加三氯化铁试液2滴呈草绿色，再加水稀 释，则变为红色。
★ ★（二）官能团的呈色反应
利用官能团的呈色反应可区别不同的药物 ★ ★ 1.C17-α-醇酮基的呈色反应 C17-α-醇酮基有还原性，能与氧化剂四氮
唑盐反应显色。 例:(Chp中醋酸泼尼松鉴别) 醋酸泼尼松在碱性条件下与氯化三苯四氮
b. C＝C伸缩振动频率在1620～1585cm-1, （峰尖、中等）
物理常数
★ ★呈色反应
★ （一）与强酸的呈色反应（甾体母核） 与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色. 硫酸呈色反应应用最广 1)反应颜色最丰富 2)灵敏度较高 可能机制为浓硫酸与甾体的酮基质子化反
应，形成正碳离子，然后与HSO4-作用。
与硫酸显色反应
显 色 荧光 加水稀释
醋酸可的松 黄或微 带橙
每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得 到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
红外分光光度法的应用
各国药典几乎均采用红外分光光度法鉴 别甾体激素原料药物，中国药典中36种 甾体激素原料药物，其中33种采用该方 法鉴别！
鉴别方法:
例：醋酸酯类药物
R OCOCH 醇制KOH
HSO CHOH
CHCHOCOCH
香 戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
制备衍生物测定其熔点
[原理] 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、
肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，
测定其熔点进行鉴别。
[特点] 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典
药物分析甾体激素类药物的分析
（二）测定方法
分别制备供试品、对照品溶液，再分
别与异烟肼溶液反应，在420nm波长处分
别测定吸收度并计算结果。
（二）四氮唑比色法 反应原理 皮质激素C17-α-醇酮基具有还原性，
在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原
为有色甲鐕。生成的颜色随所用试剂和条 件的不同而定，多为蓝色或红色。
（三）Kober反应比色法 （一）方法原理 雌激素的含量测定，曾经广泛应用
（
C O
CH2OH
），并且多数还具α-羟基。
二、雄性激素及蛋白同化激素
（1）临床常用的雄性激素为睾丸素（睾酮） 的衍生物，如丙酸睾丸素、苯乙酸睾丸素。 （2）常用的蛋白固化激素有苯丙酸诺龙（苯 丙酸去甲睾酮）、康力龙、康复龙等。
OH
O
（1）结构特征（两种激素之共同点）：
① A环3位Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和
CH3 C O
O
（四）雌激素
临床上常用雌二醇及其各种酯和炔雌醇 及其衍生物，以及活性的雌酮、雌三醇等。 ① A环为苯环，3位上有酚羟基，10位无角 甲基； ② D环17位上有羟基或羰基，有的还有乙炔 OH 基。
HO
C3
雄性激素与 肾上腺皮质激 蛋白同化激 雌激素 孕激素 素 素 C3 ＝ O C3 ＝O C3 －OH C3 ＝O Δ4-3=O Δ4-3=O A环为苯环 Δ43=O 或Δ1，4-3＝O 有的两个 有的一个 （ C13 ）
应。
3、掌握四氮唑盐比色法的原理。 4、掌握几种含量测定方法的特定及其应用。
四、游离磷酸盐的检查
本法系利用在酸性溶液中磷酸盐中磷酸盐与 钼酸铵作用生成磷钼酸铵，再经过还原形成磷钼 酸蓝（钼蓝）在740nm处有最大吸收。
第四节含Biblioteka 测定常用方法有容量法、比色法、紫外分
甾体激素类药物分类和特点
R = -CH3 乙酸羟孕酮 R = -C5H11 己酸羟孕酮
OR
15
醋酸甲羟孕酮
• 化学名:6α-甲基-17-羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮醋酸酯 • 可以口服 结构改造 • 孕酮类化合物失活的主要途径 – 是6位羟基化、16位和17位氧化 – 或3，20二酮被还原成二醇 • 结构修饰在C6及C16位上进行 – 用烷基、卤素、双键等进行取代
O OH
O O
14
发现-炔孕酮
• 睾酮17a位引入乙炔基后，雄激素活性 减弱而显示出孕激素活性
– 且口服有效
OH
• Ethisterone的口服活性比 O
Progesterone强15倍
结构改造 口服孕激素-己酸羟孕酮
• 黄体酮引入17 a羟基并酯化，为长效孕激素 – 油剂注射一次延效1月
O
O O
甾烷
18
甾 19
20 21 18
19
雄甾烷
孕甾烷
2
甾环构型
b位取代
a位取代
H Ob
b bb R
b b
bbb R
b b
bb R
H aa a
H H O
aa
H Ob
a
H
反-反-反
顺-反-反
顺-反-顺
简介
• 甾体激素，是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物 质，具有极重要的医药价值
– 在维持生命、调节性功能、对机体发育、免疫调节、皮 肤疾病治疗及生育控制方面有明确的作用
– C-10上无甲基取代
0.855nm
OH
H
O
H
H
HH
7
Estradiol的结构改造
OH
甾体激素类药物的分析
橙红 橙红 橙
黄绿 黄绿
絮状↓玫红 ↓红色
黄→蓝绿
泼尼松龙 深红
絮状↓灰
（二） 官能团的反应
1. C17 – α – 醇酮基(还原性)
肾上腺皮质激素+碱性酒石酸铜 →Cu2O↓（红色）
2.酮基的呈色反应（C3–酮基和C20–酮基）
甾酮激素 羰基试剂 类药物
呈色
常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
液，立即检视，供试品溶液如显杂 质斑点，1不得多于2个，其颜色与对 2 照液的主斑点比较，不得更深。
限量% . % %
特点：
（1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度
接近。
（二）HPLC法（高低浓度对比法）
结构与性质
1. 肾上腺皮质激素
主要活性基团
性质
△4 – 3 – 酮
UV、与羰基试剂 反应
C17 – α – 醇酮 基
还原 性
常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他
米松等。
2.雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团
性质
△4 – 3 – 酮
UV、与羰基试剂 反应
C17 – β – 羟基
可成酯
常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。
3.孕激素
主要活性基团
性质
△4 – 3 – 酮 C17 –甲酮基 C17 –乙炔基
UV、与羰基试剂反应
与亚硝基铁氰化钠反 应
与AgNO3反应
常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。
4.雌激素
主要活性基团
A环为3–OH 苯环 C17 –乙炔基 C17 –羟基
甾体激素类药物的鉴别讲议(给学生)
药物分析综合实验III甾体激素类药物的质量分析实验一TLC分离度与灵敏度实验1．案例某制剂厂生产了一批醋酸地塞米松片，质量管理部（QA）主任转告质量分析部（QC）主任当天完成本批药物的质量检验工作，为了尽快完成任务，QC主任将本批醋酸地塞米松的质量检验分别分配给本部的检验人员，假如你刚刚毕业就被分配在本岗位工作，且要求你使用薄层色谱法独立完成本批醋酸地塞米松的鉴别和杂质检查工作，你应该怎么办？2．本企业药品标准摘选（1）分离度实验取本品细粉适量,用甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,滤过,作为供试品溶液；取醋酸地塞米松对照品,同样用甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,点于同一硅胶GF254薄层板上;另取乙酸乙酯-石油醚-丙酮（5∶8∶0.5）为展开剂,展开后,晾干,紫外灯下检视。
醋酸地塞米松结构：要求：Rf值在0.2~0.8之间，如果存在地塞米松杂质要求二者分离度大于1 （2）灵敏度实验取醋酸地塞米松对照品,用甲醇制成每1ml含0.2mg、0.1mg、0.05mg、0.025mg 的溶液, 吸取上述两种溶液各2μl,点于同一硅胶GF254薄层板上;另取乙酸乙酯-石油醚-丙酮（5∶8∶0.5）为展开剂,展开后,晾干,紫外灯下检视。
找出能观察到斑点的最低浓度值。
即为其检测灵敏度。
3．实验目的3.1 掌握薄层色谱法的基本操作与原理；3.2 熟悉薄层色谱法分离度和灵敏度的操作方法；3.3了解醋酸地塞米松合成路线与醋酸地塞米松片制剂组成。
4．思考题4.1 药品标准的理论依据①薄层色谱法的分离机制主要包括四种，在本实验中所采用的是哪种分离机制？使用薄层色谱法鉴别醋酸地塞米松片的理论依据？②斑点的确定方法有哪些？本实验中使用哪种方法？③薄层色谱法常用的硅胶有哪些种？本试验中为何使用硅胶GF254薄层板？④展开剂的选择原则是什么？⑤除了样品本身的性质之外，影响Rf值的因素有哪些？⑥Rf值与Rs（相对比移值）有何不同？4.2 仪器与试药①本试验将使用的主要仪器？②本试验测定的样品与主要试剂？4.3 操作注意事项①薄层板的铺制方法？②薄层板为何需活化，什么是“活化”？③展开剂的用量应为多少？④展开之前为何需将展开剂在层析缸内预饱和？饱和多长时间？⑤什么是“边缘效应”？⑥对样品点样的要求有哪些？4.4 讨论①本试验中在配制样品时为何需要过滤？②样品中醋酸地塞米松与杂质之间的分离度怎样计算？实验二TLC与TLCS鉴别醋酸地塞米松片1．案例某制剂厂生产了一批醋酸地塞米松片，质量管理部（QA）主任转告质量分析部（QC）主任当天完成本批药物的质量检验工作，为了尽快完成任务，QC主任将本批醋酸地塞米松的质量检验分别分配给本部的检验人员，假如你刚刚毕业就被分配在本岗位工作，且要求你使用薄层色谱法与薄层色谱扫描法独立完成本批醋酸地塞米松的鉴别工作，你应该怎么办？2．本企业药品标准摘选（1）薄层层析条件薄层板：硅胶GF254展开剂：乙酸乙酯-石油醚-丙酮（5∶8∶0.5）；展开方式：上行法；层析温度：室温；展开距离：10 cm；显色方法：紫外灯照射（2）薄层扫描条件扫描方式：单波长法；测定波长：254nm。
甾体激素类药物的分析详解
加速试验
在超常条件下进行加速试验，以 预测甾体激素类药物在短时间内 的稳定性。
长期试验
在接近实际储存条件下进行长期 试验，以确定甾体激素类药物的 有效期和储存条件。
05 甾体激素类药物的生物 活性评价
细胞水平评价方法
细胞增殖实验
通过检测药物对细胞增殖的影响，评估药物的抗增殖 或促增殖活性。
细胞凋亡实验
03 样品前处理技术
提取与纯化方法
液-液萃取法
利用样品与提取剂之间的溶解度 差异，将目标物从样品中提取出 来。常用的提取剂包括有机溶剂
、酸、碱等。
固相萃取法
利用固体吸附剂对样品中的目标 物进行选择性吸附，然后用适当 的溶剂洗脱，达到分离和纯化的 目的。常用的吸附剂包括硅胶、
氧化铝、活性炭等。
超临界流体萃取法
人体试验评价方法
临床试验
在人体中进行的药物疗效和安全性评价，包括I 期至IV期的临床试验。
生物等效性试验
比较创新药物与已上市药物的生物利用度和药 代动力学参数，以评估其生物等效性。
药物相互作用研究
探讨药物与其他药物或食物之间的相互作用，以指导合理用药。
06 甾体激素类药物的代谢 与排泄研究
吸收、分布和代谢过程
02 甾体激素类药物的分析 方法
色谱法
薄层色谱法（TLC）
利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现对甾体激素类药物的分离和鉴别。该方法具有操作简 便、快速、成本低等优点，但分辨率和灵敏度相对较低。
高效液相色谱法（HPLC）
采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂等流动相泵入装有固定相的色谱柱，实现 对甾体激素类药物的分离和分析。该方法具有高分辨率、高灵敏度、分析速度快等优点，广泛应用于甾体激素类 药物的含量测定和有关物质检查。
第十一章 甾体激素类药物的分析
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 第十一章甾体激素类药物的分析第十一章甾体激素类药物的分析一、定义和分类定义：甾体激素类药物是指具有甾体结构的激素类药物，主要包括肾上腺皮质激素和性激素。
分类：甾甾激激肾肾肾皮皮激激性激激糖皮皮激激：主主主主，抗抗，增增增增力力，可可可、地地地可力盐皮皮激激：水水水谢，主主主皮皮皮雄激激：十十十十十激，庚十十十激，甲十皮力雌激激：苯甲十雌苯苯力孕激激：黄甾皮力同同激激：苯苯十苯苯蛋蛋皮同同，用用用用二、结构特征甾体激素类药物的母体结构为环戊烷多氢菲，共有 A、 B、 C、 D 四个环。
ABCD1234567891011121314151617 10、 13 位有甲基，为雄甾烷，雄激素母体 ABCD1819 13 位有甲基，为同化激素母体 ABCD18 10、 13 位有甲基， 17 位有乙基（二个碳原子），为孕甾烷，孕激素母体 ABCD18192021 A 环位苯环， 13 位有甲基，为雌甾烷，雌激素母体 ABCD18 1、糖皮质激素结构特征 OCCH2OHOOH126911161 / 6可可可可可可可可可可可可可可可可可可可可甲可可可可1、 2 位引入双键，如泼尼松，氢化泼尼松，氟轻松，地塞米松等； 9 位引入氟：如氟轻松，地塞米松，倍他米松等； 11 位引入羟基或羰基：如泼尼松氢化泼尼松，可的松氢化可的松； 16 位引入甲基或羟基：如引入甲基, 地塞米松，倍他米松；引入羟基，曲安萘德；这些结构改变，引出一大类糖皮质激素类药物。
结构特征：○ 1 A 环 3 位羰基， 4， 5 位双键，形成共轭体系， 4－3－酮；○ 2 C 环 11 位上有扬原子，羰基或羟基（－用实线表示）；○ 3 D 环 17 位上有－羟基（用虚线表示）；○ 4 D 环 17 位上有－醇酮基（O=C-CH2OH），醇有时成酯形式存在，以醋酸酯较常见。
甾体激素性状特征
甾体激素性状特征
二、比旋度
示例 取炔诺适量，精密称定，加丙酮溶解并定量稀释制成每 1ml约含10mg的溶液，依法测定，比旋度为-37°至-32°
甾体激素性状特征
三、吸收系数
甾体激素类药物具有紫外吸收，最大吸收波长和吸收系 数可以反映药物的紫外吸收特征，具有鉴别意义。 具有α，β-不饱和酮基团的药物在240nm波长附近有最 大吸收，A环为苯环并具有酚羟基的雌激素类药物在 280nm波长附近有最大吸收
甾体激素性状特征
Байду номын сангаас
甾体激素性状特征
一、性状与溶解度
本类药物为白色至微黄色的粉末。出钠盐外，多数在三 氯甲烷中微溶至易溶，在甲醇或乙醇中微溶至溶解，在 乙醚或植物油中极微溶，在水中不溶或几乎不溶。
甾体激素性状特征
二、比旋度
甾体激素类药物多有手性碳原子，具有旋光性。 在二氧六环、三氯甲烷、丙酮或醇等溶剂中多数药物显 右旋特征。而左旋诺孕酮、炔诺酮和炔雌醇为左旋。
药物分析讲稿-第十二章 甾体激素类药物的分析
药物分析讲稿-第十二章甾体激素类药物的分析第十二章甾体激素类药物的分析桂林医学院药学-唐岩松第十二章甾体激素类药物的分析第一节基本结构与分类甾体激素类药物是一类具有甾体结构的激素类药物，是临床上一类较为重要的药物。
甾体激素类药物种类较多，但基本骨架相同，均具有环戊烷并多氢菲的母核。
其基本骨架及位次编号如下:甾体激素类药物主要包括肾上腺皮质激素和性激素两大类，性激素又分为雌性激素、雄性激素和蛋白同化激素及孕激素等。
一、甾体激素类药物的类型及结构特征大多数甾体激素类药物是由雌性激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素及肾上腺皮质激素的基本结构衍生而来的。
(一)雌性激素天然的雌性激素为雌二醇，结构如下:对雌二醇进行结构改造，得到一系列高效、长效的雌激素类药物。
《中国药典》收载的雌激素类药物有雌二醇(estradiol)、炔雌醇(ethinylestradiol)、炔雌醚(quinestrol)、戊酸雌二醇(estradiol valemte)、苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate)等。
雌激素类药物的母核有18个碳原子，A环为苯环，C3位上有酚羟基，C17位上有β-羟基，有些药物的C17-羟基形成了酯，有的药物C17位上有乙炔基(如炔雌醇)。
(二)雄性激素和蛋白同化激素天然的雄性激素为睾酮。
结构如下:雄性激素类药物的母核有19个碳原子，蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基，其母核只有18个碳原子。
A环上有?4-3-酮基，形成共轭体系，具有紫外吸收;C17位有β-羟基或由它们形成的酯(如丙酸睾酮)。
《中国药典》收载的该类药物有丙酸睾酮(testosterone propionate)、甲睾酮(methyl-testosterone)、苯丙酸诺龙(rmndrolone phenylpropionate)等。
第 1 页共 9 页第十二章甾体激素类药物的分析桂林医学院药学-唐岩松(三)孕激素天然的孕激素为黄体酮，结构如下:孕激素类药物的母核有21个碳原子，A环有?4-3-酮基;C17位有甲酮基;有的药物C17位有α-羟基或与酸形成的酯，还有的具有乙炔基。
甾体激素类药物（1）
甾体激素类药物基本结构：均具有环戊烷骈多氢菲母核。
分类： 1.肾上腺⽪质激素：⽪质酮衍⽣物，如可的松、泼尼松、地塞⽶松等。
本类药物多为C21-羟基所形成的酯类。
结构特点是具有21个C原⼦：A环：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多数有α-羟基；C10、C13：具有⾓甲基；C11：具有羟基或酮基；其它：有些⽪质激素具有Δ1，6α、9α卤素，16α羟基，6α、12α、16α、16β甲基等。
2.雄性激素及蛋⽩同化激素：甲睾酮、丙酸睾酮、⼗⼀酸睾酮等；蛋⽩同化激素有苯丙酸诺龙。
结构特点：雄性激素具有19个C原⼦；蛋⽩同化激素具有18个C原⼦（C10上⽆⾓甲基）；A环：具有Δ4-3-酮基；C17：⽆侧链，多数是⼀个β-羟基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。
3.孕激素：也称为黄体酮激素或孕酮。
典型药物为黄体酮。
中国药典收载有：黄体酮、醋酸甲羟孕酮、⼰酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制剂；醋酸氯地孕酮原料等。
结构特点：具有21个C原⼦；A环：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羟基，与醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、⼰酸羟孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。
4.雌激素：⼜称卵泡激素。
雌⼆醇、炔雌醚、苯甲酸雌⼆醇、戊酸雌⼆醇、炔雌醇原料及制剂等。
结构特点：具有18个C原⼦；A环：为苯环，C3上具有酚羟基且有些形成了酯或醚；C10：⽆⾓甲基；C17：具有β-羟基或酮基，有些羟基形成了酯，还有些具有⼄炔基。
⼝服避孕药：炔诺酮、炔诺孕酮、炔孕酮。
多数在A环上具有Δ4-3-酮基，与黄体酮和睾酮⼀致；有的在C17上具有β-羟基、α-⼄炔基或甲酮基；有的在C10上⽆⾓甲基，与雌激素相同。
鉴别试验： 呈⾊反应1.与强酸的呈⾊反应：许多甾体激素能与硫酸、磷酸、⾼氯酸、盐酸等呈⾊，其中与与硫酸的呈⾊反应应⽤较⼴。
药品名称颜⾊荧光加⽔稀释后的变化醋酸可的松黄或微带橙⽆颜⾊消失溶液澄清氢化可的松棕黄⾄红绿⾊黄⾄橙黄微带绿⾊荧光，少量絮状沉淀泼尼松橙⽆黄⾄蓝绿泼尼松龙深红⽆红⾊消失，灰⾊絮状沉淀炔雌醇深红黄绿地塞⽶松磷酸钠黄或红棕⽆某些甾体激素药物与硫酸-⼄醇或硫酸-甲醇作⽤⽽呈⾊。
药物的杂质检查甾体激素类药物的分析
显色 黄或微 带橙 橙红
橙红 橙
深红
荧光
黄绿 黄绿
加水稀释 褪色并澄 清 絮状↓玫红
↓红色 黄→蓝绿
絮状↓灰
2. 官能团的呈色反应
1 ）酮基
甾体激素分子结构中含有酮 基，如C3-酮基和C20-酮基，均 能与异烟肼、硫酸苯肼、2,4-二 硝基苯肼等碳基试剂呈色。
2） -醇酮基
皮质激素类药物分子结构中C17位上的醇酮基，具有还原性，能与氧化剂四氮 唑盐反应而呈色。
方法：
供试液 对照液
钼酸铵
还原
nm
A样 A对
A样<A对
地塞米松磷酸钠 检查 游离磷酸
精密称取本品20mg，置25ml量瓶 中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫 酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶 液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放 置30～50分钟，照分光光度法，在740 nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法 处理的吸收度比较，不得方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑 点的颜色和位置与对照品溶液 的主斑点相同。
炔诺酮 TLC图
（八）高效液相色谱法
在一定的色谱条件下，比较甾体激素供试品与 其对照品色谱峰的保留时间，可以鉴别这些化 合物。
一般方法是：规定在含量测定项下的高效液相 色谱图中，供试品峰的保留时间应与对照品峰 的保留时间一致。
第一节
甾体激素类药物的分类、 化学结构及主要理化性质
一、基本结构
1.基本骨架
2 3
C21
11 19 1
18 12
C20
17
C 13D 16
A
10
9
B
14 8
15
45 6 7
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13 17
19 1
C
9
D 16
2
A
10
B
14 8
15
3
5
7
4
6
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
鉴别方法
化学鉴别法 呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 UV
IR 色谱法 TLC
HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
H2SO4 呈色 H3PO4 （荧光）
1.供试品点样通常需做前处理（如有机溶剂提
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。 2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。 [显色方法]：多用荧光显色法或荧光淬灭法
荧光显色
高效液相色谱法
❖ 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 Ø 方法：对照品法 Ø 一般在含量测定的同时进行鉴别.
到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH
H
νCHH H
HO
γCH
3610cm
-1
ν 酚羟OH 基
3300cm1 1616cm -1
3505cm -1
νOH
醇羟基
苯C环指C纹区
1590cm1
1505cm-
黄体酮 其他甾体
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
➢ 适用：雌激素类药物。
➢ 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮
染料。
OH
OH
+ N=N
COO
苯甲酸雌二醇
SO3- H+
COO N=N
红色
S O3H
5、乙炔基沉淀反应
➢ 适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
N
HO 双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5
OCOCH2CH2
O
+NH2CNHNH2HCl
+H2O+HAc
O
苯丙酸诺龙
OH N N
C H2N
缩氨基脲m.p.178~185℃
O C O C H 2C H 3
O H
O
丙酸睾丸素
+H 2O K O H
O
m.p.150~156℃
+C H 3C H 2C O O H
❖ 硫酸呈色反应应用H最C广lO4 HCl
❖ 1）操作简便
❖ 2）反应灵敏
❖ 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
➢ 适用：肾上腺皮质激素。 ➢ 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
➢ 机理：
R C CH + AgNO3
R C CAg↓ + HNO3
NaOH滴定， 电位法指示终
点
6、水解产物的反应
➢ 适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
➢ 原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯
类药物：
ROCO 醇 C K 制 H O H
★ ★红外分光光度法
❖ [必要性] ❖ 1.许多重要的甾体激
素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。
❖ 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
❖ 1.对样品无破坏, 样品用量较少 ❖ 2.特征性极强、 信息量丰富: ❖ 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得
★紫外分光光度法
❖ [原理]： ❖ 具有C=C-C=O共轭系统， ❖ △４-3-酮 ～240nm ❖ 和C=C-C=C共轭系统， ❖ 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） ❖ 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 ❖ 如:曲安西龙 ❖ 2. 吸收度的比值法。 ❖ 如: 丙酸倍氯米松
△４-3-酮 ～240nm
要求在含量测定项下记录的色谱图中， 供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
紫外光谱褶合变换
拓展： 可视化指纹谱鉴别
褶合变换：是根据正交分析理论,对于任意一条光谱曲 线,在某个邻域内(即其中的某一小段曲线)可以用正交多 项式任意逼近,对于阶次相同的正交分量,可以通过改变 变换窗口的大小获得不同的光谱,从而在不同阶次上可 以得到一系列褶合变换光谱,相应的褶合光谱是同阶次 的导数光谱的线性组。
1
苯环的骨 架振动
黄体酮
CH3 CO
H
HH O
薄层色谱法
❖ [特点]： ❖ 简便、快速、分离效能高。 ❖ 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ❖ ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 ❖ [应用范围]： ❖ 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含
量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
Ø [方法]：对照品法
甾体激素类药 物的鉴别
演讲者：史颖超 048012126
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质,
采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
C21
18 C20
12
11
HSO CHOH
CHCHOCOC H
香 戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上： 呈蓝紫色
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机破坏 Fˉ
有机氯
Clˉ
卤素在侧链上： 加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
硝酸—硝酸银
AgCl
总结
制备衍生物测定其熔点
❖ [原理] ❖ 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、
CONHNH2 .H 2S O 4
N O2
O
O
NH N
O
CH 3
CH 3 H CH 3 H
CO NHNH2
N
HCl
黄色
+
HH O
N
室温下长
时间加热
NNHCO
N
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应
➢ 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
➢ 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。
肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 ❖ 2.利用醇碱液水解甾体酯类生成相应的母体，
测定其熔点进行鉴别。
❖ [特点] ❖ 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采
用。
HO
炔雌醇
COCl
+
KOH
CH3 CO
O C
O
+KCl+H2O
m.p.201℃
CH3 C N OH
O
黄体酮
+2HO NH2
+2H2O
C H2O CO C H3
C=O
O O
OH
+
NN
N N+
OH-
醋酸泼尼松
O
OH CH
OH C=O
OH
四氮唑盐
+
NN
NN O
H2O
+ CH3COOH
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
C ONHNH2 N O2
CO NHNH2 N