甾体激素类药物的鉴别

13 17
19 1
C
9
D 16
2
A
10
B
14 8
15
3
5
7
4
6
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
鉴别方法
化学鉴别法 呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 UV
IR 色谱法 TLC
HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
H2SO4 呈色 H3PO4 （荧光）
1
苯环的骨 架振动
黄体酮
CH3 CO
H
HH O
薄层色谱法
❖ [特点]： ❖ 简便、快速、分离效能高。 ❖ 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ❖ ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 ❖ [应用范围]： ❖ 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含
量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
Ø [方法]：对照品法
HSO CHOH
CHCHOCOC H
香 戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上： 呈蓝紫色
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机破坏 Fˉ
有机氯
Clˉ
卤素在侧链上： 加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
硝酸—硝酸银
AgCl
总结
制备衍生物测定其熔点
❖ [原理] ❖ 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、
到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH
H
νCHH H
HO
γCH
3610cm
-1
ν 酚羟OH 基
Leabharlann Baidu
3300cm1 1616cm -1
3505cm -1
νOH
醇羟基
苯C环指C纹区
1590cm1
1505cm-
N
HO 双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5
OCOCH2CH2
O
+NH2CNHNH2HCl
+H2O+HAc
O
苯丙酸诺龙
OH N N
C H2N
缩氨基脲m.p.178~185℃
O C O C H 2C H 3
O H
O
丙酸睾丸素
+H 2O K O H
O
m.p.150~156℃
+C H 3C H 2C O O H
CONHNH2 .H 2S O 4
N O2
O
O
NH N
O
CH 3
CH 3 H CH 3 H
CO NHNH2
N
HCl
黄色
+
HH O
N
室温下长
时间加热
NNHCO
N
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应
➢ 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
➢ 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。
❖ 硫酸呈色反应应用H最C广lO4 HCl
❖ 1）操作简便
❖ 2）反应灵敏
❖ 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
➢ 适用：肾上腺皮质激素。 ➢ 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
甾体激素类药 物的鉴别
演讲者：史颖超 048012126
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质,
采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
C21
18 C20
12
11
1.供试品点样通常需做前处理（如有机溶剂提
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。 2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。 [显色方法]：多用荧光显色法或荧光淬灭法
荧光显色
高效液相色谱法
❖ 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 Ø 方法：对照品法 Ø 一般在含量测定的同时进行鉴别.
C H2O CO C H3
C=O
O O
OH
+
NN
N N+
OH-
醋酸泼尼松
O
OH CH
OH C=O
OH
四氮唑盐
+
NN
NN O
H2O
+ CH3COOH
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
C ONHNH2 N O2
CO NHNH2 N
黄体酮 其他甾体
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
➢ 适用：雌激素类药物。
➢ 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮
染料。
OH
OH
+ N=N
COO
苯甲酸雌二醇
SO3- H+
COO N=N
红色
S O3H
5、乙炔基沉淀反应
➢ 适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 ❖ 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，
测定其熔点进行鉴别。
❖ [特点] ❖ 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采
用。
HO
炔雌醇
COCl
+
KOH
CH3 CO
O C
O
+KCl+H2O
m.p.201℃
CH3 C N OH
O
黄体酮
+2HO NH2
+2H2O
要求在含量测定项下记录的色谱图中， 供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
紫外光谱褶合变换
拓展： 可视化指纹谱鉴别
褶合变换：是根据正交分析理论,对于任意一条光谱曲 线,在某个邻域内(即其中的某一小段曲线)可以用正交多 项式任意逼近,对于阶次相同的正交分量,可以通过改变 变换窗口的大小获得不同的光谱,从而在不同阶次上可 以得到一系列褶合变换光谱,相应的褶合光谱是同阶次 的导数光谱的线性组。
★ ★红外分光光度法
❖ [必要性] ❖ 1.许多重要的甾体激
素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。
❖ 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
❖ 1.对样品无破坏, 样品用量较少 ❖ 2.特征性极强、 信息量丰富: ❖ 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得
➢ 机理：
R C CH + AgNO3
R C CAg↓ + HNO3
NaOH滴定， 电位法指示终
点
6、水解产物的反应
➢ 适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
➢ 原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯
类药物：
ROCO 醇 C K 制 H O H
★紫外分光光度法
❖ [原理]： ❖ 具有C=C-C=O共轭系统， ❖ △４-3-酮 ～240nm ❖ 和C=C-C=C共轭系统， ❖ 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） ❖ 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 ❖ 如:曲安西龙 ❖ 2. 吸收度的比值法。 ❖ 如: 丙酸倍氯米松
△４-3-酮 ～240nm