胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
胡萝卜愈伤组织培养
验名称 胡萝卜的愈伤组织诱导培养 实验时间 4月至6月小组合作： 是○√ 否○一、实验预习 1、实验目的：1.1通过本次实验，能够熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。
1.2熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，同时能设计和配制胡萝卜伤组织增殖培养基。
1.3熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术；设计和配制胡萝卜细胞悬浮培养的培养基。
2、实验准备：2.1 MS 母液培养基的配置 主要实验用具和仪器：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、 MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、H 3BO 3、MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、Na 2MoO 4·2H 2O 、 CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、 Na 2-EDTA ·2H 2O 、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
2.2胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配置 主要实验用具和仪器：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用口杯、精密pH 试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、电炉、高压蒸汽灭菌锅等。
药品和试剂：MS 培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol ·L-1HCl 、1mol ·L-1NaOH2.3胡萝卜愈伤组织诱导 主要实验用具和仪器：100ml 三角瓶、500ml 搪瓷杯、25ml 量筒、10ml 和5ml 吸管、pH 试纸（5.4~7.0）、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯等。
胡萝卜愈伤组织诱导实验报告
南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导姓名：学院：专业：班级：学号：胡萝卜愈伤组织诱导实验一母液的配制与保存一、实验目的1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备1．试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2OCuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。
胡萝卜愈伤组织的诱导
植物材料表面的灭菌具体过程为
A．工作人员吸收消毒；
B．装材料的容器及玻璃棒用酒精进行表面消毒；
C．将待消毒材料浸入75%酒精中10秒，取出用无菌水冲洗；
D．倒入消毒液并计时；
E．到时（30min后）倒出消毒液；
F．倒入无菌水清洗后（依次放到3瓶无菌水中进行冲洗。
Ⅳ：植物细胞具有全能性。离体条件下，在适宜的培养基中，加入一定量的植物生长调节物，主要是细胞分裂素和生长素，使胡萝卜块根细胞脱分化形成愈伤组织。
Ⅴ:愈伤组织诱导成败的关键主要不是外植体的来源和种类而是培养条件，其中激素的种类和浓度更为重要。
Ⅵ:诱导愈伤组织常用的生长素是2,4—D，IAA,NAA等，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。其中2,4—D常能在没有任何外源细胞外源细胞分裂素存在的情况下，十分有效地促进愈伤组织的增值，它使用浓度一般在10-7—10-5mol|L。IAA,NAA，2,4—D等具有热稳定性，但IAA容易被光降解和被培养的组织中的酶氧化，因此，加在培养基中的IAA浓度应当较高（一般在1-30mg/L）,NAA不受IAA氧化酶的作用，可以在较低的浓度加在培养基中（一般在0.1-2.0mg/L）
0.025
5
4.1.1.3有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制，配
制步骤同上（具体配制见下表）
母液成分
成分
规定用量(mg/L)
扩大倍数
母液定容体积/L
称取量/mg
配1LMS培养基吸取量/ml
有机成分
甘氨酸
2.0
200
0.5
40
50
盐酸硫胺素
0.5
2
胡萝卜愈伤组织诱导
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养，并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。
先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。
关键词：胡萝卜；愈伤组织；激素一、引言19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。
1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上，大胆提出要在试管中人工培育植物。
他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性，能够发育成为完整的植物体。
这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。
1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
胡萝卜愈伤组织的培养
胡萝卜愈伤组织的培养一、实验目的1、理解胡萝卜愈伤组织培养的培养方法及条件。
2、了解培养基的成分及掌握培养基的配制方法。
3、会对外植体胡萝卜进行预处理和正确消毒。
4、能严格按照操作规程进行无菌操作。
二、实验原理在离体根培养中，首先解决外植体消毒问题，因为在自然条件下，根生长在土壤中，要进行彻底灭菌、消毒。
为了消灭这种污染源，在把植物组织接种到培养基上之前必须要进行彻底的表面消毒；内部已受到真菌或细菌侵染的组织在组织培养研究中一般都淘汰不用。
胡萝卜的肉质根，其硬度较大，容易操作，可直接用灭菌剂进行处理。
无菌操作技术室用于防止微生物进入实验室区内的操作技术。
要求：①在进行无菌操作之前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭；②操作过程中是界面与外界隔离，避免微生物的侵入。
目前，多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。
三、实验材料与用具1、器具：培养瓶、电磁炉、玻璃棒、酒精灯、解剖刀、镊子、酒精棉球（浓度为75%）、烧杯、废液缸、滤纸、玻璃棒、移液管、PH试纸2、材料：新鲜健康的胡萝卜肉质直根3、试剂、2.4-D、6-BA、大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液、蔗糖、琼脂、钙盐母液、无菌水、蒸馏水四、实验方法与步骤1、配制培养基（1）、确定配方和配制量：根据实验需要，确定配制培养基的配方。
（2）、计算各种母液和药品用量：a、确定培养基配制量b、查看MS培养基母液的扩大倍数、植物生长调节剂母液浓度c、由母液用量=培养基配方浓度/培养基母液浓度*培养基配制量植物生长调节剂母液用量=培养基配方浓度/植物生长调节剂母液浓度*培养基配制量（3）、量取：由表一的数据仔细量取相应的量并用托盘天平分别称取蔗糖、琼脂。
（4）、溶解：a、在锅内加配制量60%左右的蒸馏水，至于电磁炉加热b、加入琼脂，加热不断搅拌，待琼脂完全溶化后加入蔗糖c、将所量取的各种母液的混合液倒入锅中，搅拌均匀d、琼脂必须完全熔化，以免造成浓度分布不均匀（5）、用蒸馏水定容：a、将完全溶解、混匀后的培养基倒入烧杯中b、加蒸馏水定容至规定体积。
胡萝卜愈伤组织实验报告
北京师范大学珠海分校实验报告姓名：实验名称：胡萝卜愈伤组织的诱导学院（系、所）：工程技术学院学科专业：生物技术导师姓名：报告时间：2012.2.15—2012.3.20实验序号01实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导实验时间2012.2.15—2012.3.20实验室工程技术学院1206 1209 1．研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜（Daucus carrot），属于十字花科植物，是一种十分重要的蔬菜植物。
由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展，作为生物技术研究的理想材料，许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展，特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多。
因此继续深入研究还是很有必要的。
此外，由于市面上的胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
1.2 组织培养植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层。
薄壁组织。
叶肉组织。
胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2．实验设备与材料2.1 实验设备冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、精密pH试纸（5.4～7.0）、PH试纸（5.4～7.0）、封口膜、橡皮筋、微波炉、高压蒸汽灭菌锅、已灭菌滤纸、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、大烧杯、小烧杯、50ml三角瓶、50ml 量筒、100ml量筒、10ml和5ml还有2ml吸管、200ml定容瓶。
实验2-1胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
4 药品和试剂
▪ MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调 节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl配制体积
▪ 培养基配方设计：（1）根据培养的目的选 择一种培养基为基本培养基。（2）确定培 养基中各种激素的浓度及相对比例
▪ 配方： MS基本培养基＋ 1mg/L 2,4-D＋ 0.5mg/L 6-BA＋0.7％琼脂＋3％蔗糖
实验2 胡萝卜愈伤组织的诱导培养
▪ 实验内容：
▪ 2-1 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制 ▪ 2-2 胡萝卜愈伤组织的诱导 ▪ 2-3 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制 ▪ 2-4 胡萝卜愈伤组织的继代培养
实验2-1 胡萝卜愈伤组织诱导
培养基的配制
▪ 1 实验目的
▪ 通过本次实验，使学生进一步熟悉配制培 养基的流程及操作中应注意的事项，学会 设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导培养基配 方。
▪ 2 实验原理
▪ 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀 释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再 加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备 成符合要求的培养基。
3 主要实验用具和仪器
▪ 冰箱、普通天平、三角瓶、果酱瓶、移液 管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用 口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、 称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、棉线、 电炉、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉等。
▪ 配制体积：每小组配制0.5L，每人用100ml 三角瓶分装5瓶，每瓶约装25ml培养基。
6 胡萝卜愈伤组织诱导 培养基的配制步骤
▪ （1）药品及用具的准备 ▪ （2）培养基配制 ▪ （3）调节培养基的酸碱性至pH5.8 ▪ （4）培养基的分装 ▪ （5）培养基的灭菌 ▪ （6）无菌蒸馏水和接种工具准备
胡萝卜愈伤组织诱导
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养，并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。
先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。
关键词：胡萝卜；愈伤组织；激素一、引言19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。
1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上，大胆提出要在试管中人工培育植物。
他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性，能够发育成为完整的植物体。
这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。
1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
胡萝卜愈伤组织诱导
3、接种：左手拿装有培养基的三角瓶，接 近酒精灯，用右手揭去盖，将瓶外部在灯 焰上燎数秒钟，并旋转使充分灼烧灭菌， 右手用镊子夹取材料小片送入瓶内，平放 于培养基表面，轻按一下，使其紧密接触 培养基。每瓶3块，均匀分布，封好瓶口。 4、培养：放入25℃温箱中暗下培养一个月。
实验结果
记录时间 污染数量 外植体形态变化 愈伤组织分化情况
2、外植体材料消毒：取6—8cm长的胡萝卜一段进行以下
操作： 1）清洗：（流水冲洗）以下各步在超净台上进行； 2）将材料转入无菌烧杯或罐头瓶，加入75%酒精浸泡1—2min； 3）倒去酒精用0.1%升汞浸泡10—15min，不断搅拌； 4）倒去升汞用无菌水洗涤3—5次； 5）转入吸水纸上； 6）用解剖刀切去两端各1cm部分，将中断切成0.7cm厚的薄圆 片； 7）将圆片移至无菌的部分，用刀切去外皮和中柱部分，将形 成层切成1cm2的小片。
大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素
1）从母液中取出（移液管）所需的大量元素、微量元素、铁盐、有 机成分，注意计算清楚各种物质在所须配制总体积下的加入量，将其放 入小烧杯中； 2）在洁净的搪瓷缸里加入一定量的水（3/4）及所需要的琼脂，加热 并不时搅拌，注意防止琼脂沉底焦糊； 3）待琼脂溶解（呈透明状，即无固体条状或丝状物，均匀而透亮） 后，加入（1）中所取的各种母液及糖，并不断搅动使其混合均匀。 4）用1N HCl or NaOH 调整PH值到所须值（一般为5.8） 5）加水至所须刻度； 6）趁热将培养基分装到培养用的容器（三角瓶等）中，注意不要把 培养基黏附到瓶口或瓶口附近的内壁上，以免今后引起污染； 7）将分装好培养基的容器盖上盖子； 8）高压灭菌后取出，放于室温中冷却备用。 培养基及无菌用品的灭菌，121℃，30min。
胡萝卜愈伤组织培养实验报告
植物细胞工程-胡萝卜的组织培养姓名：物理数学狂班级：生物技术综合班学号：2019004284【实验计划】1.MS培养基母液的配置与保存、MS固体培养基的配置（准备实验）2.外植体胡萝卜愈伤组织的诱导培养（2018.10.18）3.胡萝卜愈伤组织的继代培养（2018.11.8）4.胡萝卜愈伤组织悬浮培养（2018.11.22）5.胡萝卜愈伤组织诱导生根（2018.12.1）6.观察实验结果（2018.12.13）【实验时间】2018年10月18日-2018年12月13日实验（一）MS 培养基母液的配制与保存一、实验目的1.通过MS 培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2.掌握培养基各种母液的保存方法。
二、实验原理1.MS 培养基的特点：①无机盐浓度高；②高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；③含有一定的铵盐，营养丰富；④不需要添加更多的有机附加物。
MS 按照营养水平划分为基本培养基。
2.培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质，配置培养基时，为了减少试剂称取时的工作量出现的误差，以及多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，需要预先将各种营养成分配置为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到适合的浓度。
母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。
3.需要时将配置好的母液按一定比例稀释到培养基指定浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调解物质等，制成符合要求的培养基。
三、器材与试剂1.器材：各类天平、磁力搅拌器、冰箱、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；2.试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH ，0.1-1N HCl ，配制MS 培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
四、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1.MS 大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
胡萝卜愈伤组织的培养
胡萝卜愈伤组织的培养摘要：实验中的胡萝卜的组织培养实验成功率比较低，主要体现在污染率较高和出芽率低上，在长期的实验中，有些胡萝卜的愈伤组织基本分化不出芽。
针对这一问题我们反复实验。
通过把培养出来的胡萝卜的愈伤组织进行悬浮培养后，再转接到固体培养基上，从而使得胡萝卜愈伤组织更容易分化出芽来。
并使整个过程控制在无菌条件下，现就胡萝卜组织培养的整个实验过程控制作一详细介绍。
关键词：胡萝卜；组织培养；无菌控制1.实验流程（1）实验总流程：MS母液培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配制→胡萝卜愈伤组织诱导→胡萝卜愈伤组织的继代培养→观察记录（2）无菌操作流程：实验员消毒→实验室、无菌台灭菌→实验器材的灭菌→无菌接种→消毒→实验台卫生（3）胡萝卜愈伤组织诱导培养流程：胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的分装→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基灭菌→取材及材料的消毒灭菌→接种与培养（4）胡萝卜愈伤组织的继代培养流程：器械及实验者的消毒灭菌→剥离愈伤组织诱导培养所得的愈伤组织→胡萝卜愈伤组织接种2.实验仪器及材料胡萝卜(市场购买)、超净工作台、光照培养架、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡器、打孔器、小刀、培养皿、解剖刀、镊子、植物组培试剂盒。
3.实验方法与步骤3.1胡萝卜愈伤组织的诱导①外植体消毒用清水洗干净胡萝卜直根，用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。
先用70%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钠溶液消毒10min（或用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍，再用无菌水浸泡30min），放入无菌水中漂洗2~3次，用无菌吸水纸吸干待用。
②外植体接种。
把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm的小长块(如图1a)。
生物胡萝卜实验报告
一、实验目的1. 掌握植物组织培养的基本原理和方法。
2. 学习胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和细胞悬浮培养技术。
3. 了解胡萝卜体细胞胚胎发生培养的过程。
二、实验原理植物组织培养技术是利用植物细胞的全能性，通过人工控制培养条件，使植物细胞或组织在体外发育成完整植株的技术。
胡萝卜愈伤组织诱导、继代培养和细胞悬浮培养是植物组织培养技术中的重要环节。
三、实验材料与仪器材料：- 胡萝卜- MS培养基- 营养液- 消毒剂- 玻璃器皿- 移液器- 高压蒸汽灭菌器- 恒温培养箱四、实验步骤1. 胡萝卜外植体消毒- 将胡萝卜洗净，切成小块，用70%酒精消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于MS培养基中。
2. 愈伤组织诱导- 将接种后的胡萝卜小块放入恒温培养箱中培养，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
3. 愈伤组织继代培养- 将形成的愈伤组织转移到新的MS培养基中进行继代培养。
- 继代培养过程中，每隔一段时间更换一次培养基。
4. 细胞悬浮培养- 将继代培养后的愈伤组织切成小块，接种于营养液中。
- 将接种后的细胞悬浮培养于恒温培养箱中，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
- 观察细胞悬浮培养过程中细胞生长和繁殖情况。
5. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养获得的细胞转移到新的培养基中进行胚胎发生培养。
- 观察胚胎发生培养过程中胚胎的形成情况。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导- 在适宜的培养条件下，胡萝卜小块逐渐形成愈伤组织。
2. 愈伤组织继代培养- 经过继代培养，愈伤组织数量增加，体积增大。
3. 细胞悬浮培养- 细胞悬浮培养过程中，细胞生长和繁殖良好，形成了大量悬浮细胞。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 胚胎发生培养过程中，部分细胞形成了胚胎，进一步发育成胡萝卜植株。
六、实验结论1. 通过本实验，成功诱导了胡萝卜愈伤组织。
培育胡萝卜实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导、继代增殖和细胞悬浮培养的方法。
3. 熟悉胡萝卜体细胞胚胎发生培养过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜肉质根、MS培养基、植物激素、无菌水、75%酒精、无菌滤纸等。
2. 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、显微镜、移液枪、培养皿、培养箱等。
三、实验方法1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 将新鲜胡萝卜肉质根洗净，切成小块，用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于诱导培养基（MS培养基+2,4-D 1mg/L+6-BA1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
2. 胡萝卜愈伤组织的继代增殖- 将诱导出的愈伤组织切割成小块，接种于继代培养基（MS培养基+2,4-D0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L）中。
- 在无菌条件下进行培养，观察愈伤组织的增殖情况。
3. 胡萝卜细胞悬浮培养- 将继代增殖后的愈伤组织用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（2,4-D 0.1mg/L+6-BA 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于细胞悬浮培养基（MS培养基+2,4-D 0.1mg/L+6-BA0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察细胞悬浮培养的生长情况。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养得到的愈伤组织细胞，用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（NAA 0.1mg/L+KT 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于体细胞胚胎发生培养基（MS培养基+NAA 0.1mg/L+KT0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察体细胞胚胎发生培养的生长情况。
四、实验结果与分析1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 经过诱导培养，胡萝卜小块表面逐渐出现愈伤组织，愈伤组织呈白色、半透明状，质地较软。
胡萝卜的实验报告
一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握胡萝卜组织培养的操作步骤。
3. 观察胡萝卜愈伤组织诱导、增殖、分化等过程。
4. 分析胡萝卜组织培养的实验结果，探讨影响实验效果的因素。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：胡萝卜、无菌手术刀、镊子、剪刀、无菌滤纸、无菌水、无菌培养基等。
2. 实验仪器：超净工作台、培养箱、显微镜、电子天平、移液器、培养皿等。
三、实验方法1. 胡萝卜外植体准备：将胡萝卜洗净，用无菌手术刀将胡萝卜根切成小块，每个小块约1cm×1cm，放入75%酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
2. 胡萝卜愈伤组织诱导：将消毒后的胡萝卜小块接种于MS培养基中，培养温度为25℃±2℃，光照强度为2000lx，光照时间为12小时/天。
3. 胡萝卜愈伤组织增殖：待愈伤组织形成后，将其转接到增殖培养基中，继续培养。
4. 胡萝卜愈伤组织分化：将增殖后的愈伤组织转接到分化培养基中，诱导其分化成植株。
5. 观察与记录：定期观察胡萝卜愈伤组织的生长状况，记录实验数据。
四、实验结果与分析1. 胡萝卜愈伤组织诱导：在MS培养基中，胡萝卜小块经过7天培养，部分小块开始形成愈伤组织，愈伤组织呈白色、半透明状。
2. 胡萝卜愈伤组织增殖：在增殖培养基中，愈伤组织经过10天培养，体积明显增大，颜色逐渐变深。
3. 胡萝卜愈伤组织分化：在分化培养基中，愈伤组织经过15天培养，部分愈伤组织分化出芽和叶片，形成完整的植株。
4. 影响实验效果的因素分析：（1）培养基配方：MS培养基中含有丰富的营养成分，有利于胡萝卜愈伤组织的生长和分化。
（2）外植体消毒：消毒效果直接影响愈伤组织的形成和生长，消毒时间不宜过长，以免损伤外植体。
（3）光照条件：光照强度和光照时间对愈伤组织的生长和分化有重要影响，适宜的光照条件有利于愈伤组织的形成和分化。
（4）温度：温度是影响胡萝卜愈伤组织生长和分化的关键因素，适宜的温度有利于愈伤组织的生长和分化。
胡萝卜组织培养系统实验
云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称：细胞工程实验院系：生命科学学院年级专业：2013级生物技术（国家生命科学与技术姓名：杨梦梅选课号：2015107066学号：20131070156座号：A2开课日期：2015.09 学期：2015秋季学期任课教师：吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者：杨梦梅同组实验者：赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT;继代培养 1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系；细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期（生长平台）。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension celllines of Carrots’ callusAbstract: Carrots’flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪，及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
实验2-4 胡萝卜愈伤组织的继代培养
1. 实验目的
通过本次实验，使同学熟练掌握愈伤组织继 代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范 无菌操作技术。
2.实验原理
将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥 离转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可 实现愈伤组织的增殖。
3. 主要实验用具和仪器
酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、 枪状镊子、解剖刀、酒精灯、超净工作台等。
4.药品和试剂
愈伤组织继代培养基、75％酒精。
5.实验材料
处于脱分化进程中的外植体
6.实验流程
（1）准备工作
①接种室的清洁和消毒 ②超净工作台的开机和消毒 ③剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用 培养基等的准备
④实验材料的准备（选择装有无污染的已分 化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于净工 作台上）
（2）愈伤组织继代培养
将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污 染的外植体上产生的愈伤组织剥离转接到愈 伤组织继代培养基上，放置在25 ℃全黑暗条 件下进行愈伤组织的增值培养，以获得足够 的愈伤组殖培养的操作 流程及操作过程中应注意的事项。
愈伤组织诱导结果记录统计
总接种瓶数 污染瓶数 总接种块数 污染块数
未污染瓶数
未污染块中愈伤 组织发生块数 愈伤组织发生 情况记录 污染情况及 原因分析
未污染块数
愈伤组织发生率
胡萝卜生物实验报告
一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和分化技术。
3. 学习无菌操作技术，提高实验技能。
二、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜胡萝卜肉质根。
2. 试剂：75%酒精、无菌水、氯化汞、无菌滤纸、无菌剪刀、无菌镊子、无菌试管、无菌培养皿、MS培养基母液、琼脂、蔗糖、植物激素等。
三、实验方法1. 胡萝卜外植体的消毒- 将胡萝卜肉质根洗净，用无菌剪刀切成小块。
- 将胡萝卜小块放入装有75%酒精的无菌试管中，浸泡30秒。
- 取出胡萝卜小块，用无菌水冲洗3-5次。
- 将胡萝卜小块放入装有氯化汞的无菌试管中，浸泡5分钟。
- 取出胡萝卜小块，用无菌水冲洗3-5次。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 将消毒后的胡萝卜小块接种于诱导培养基上。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中，在适宜温度和光照条件下培养。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养- 待愈伤组织长到一定大小后，将其切割成小块。
- 将小块愈伤组织接种于继代培养基上。
- 同样在适宜条件下培养。
4. 胡萝卜愈伤组织的分化- 待愈伤组织分化出芽苗后，将其转移到分化培养基上。
- 在适宜条件下培养，直至芽苗长成植株。
四、实验结果1. 胡萝卜外植体的消毒- 消毒后的胡萝卜小块表面无残留杂质，符合无菌操作要求。
2. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 经过诱导培养，胡萝卜小块逐渐形成愈伤组织。
3. 胡萝卜愈伤组织的继代培养- 经过继代培养，愈伤组织数量和体积逐渐增加。
4. 胡萝卜愈伤组织的分化- 经过分化培养，愈伤组织分化出芽苗，最终长成植株。
五、实验讨论1. 本实验中，胡萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和分化均取得了成功，说明植物组织培养技术在胡萝卜组织培养中具有可行性。
2. 实验过程中，无菌操作是关键环节。
只有严格遵循无菌操作规程，才能保证实验结果的准确性。
3. 在诱导胡萝卜愈伤组织时，培养基的成分和植物激素的种类及浓度对愈伤组织的诱导效果有较大影响。
胡萝卜愈伤组织培养实验报告
植物细胞工程-胡萝卜的组织培养姓名：物理数学狂班级：生物技术综合班学号：2019004284【实验计划】1.MS培养基母液的配置与保存、MS固体培养基的配置（准备实验）2.外植体胡萝卜愈伤组织的诱导培养（2018.10.18）3.胡萝卜愈伤组织的继代培养（2018.11.8）4.胡萝卜愈伤组织悬浮培养（2018.11.22）5.胡萝卜愈伤组织诱导生根（2018.12.1）6.观察实验结果（2018.12.13）【实验时间】2018年10月18日-2018年12月13日实验（一）MS 培养基母液的配制与保存一、实验目的1.通过MS 培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2.掌握培养基各种母液的保存方法。
二、实验原理1.MS 培养基的特点：①无机盐浓度高；②高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐；③含有一定的铵盐，营养丰富；④不需要添加更多的有机附加物。
MS 按照营养水平划分为基本培养基。
2.培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质，配置培养基时，为了减少试剂称取时的工作量出现的误差，以及多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，需要预先将各种营养成分配置为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到适合的浓度。
母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。
3.需要时将配置好的母液按一定比例稀释到培养基指定浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调解物质等，制成符合要求的培养基。
三、器材与试剂1.器材：各类天平、磁力搅拌器、冰箱、烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；2.试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH ，0.1-1N HCl ，配制MS 培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
四、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1.MS 大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
实验23 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
4
（2）植物材料的表面灭菌和接种
▪ ①操作人员洗手消毒 ▪ ②装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒 ▪ ③将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒，
取出用无菌水冲洗干净。
▪ ④倒入消毒剂（ 0.1%HgCl2 ）并计时
▪ ⑤到预定时间（20分钟）后倒出消毒液并 用无菌水清洗干净。
▪ ⑥将材料切块后接种到诱导培养基上。
▪ ① 外植体表面灭菌前的准备工作 ▪ a 接种室的清洁和消毒； ▪ b 超净工作台的开机和消毒； ▪ c 消毒溶液、无菌水、装材料的容器、解
剖刀、镊子、培养皿、计时器、待用培养 基等的准备。
3
② 实验材料的准备
▪ a 准备新鲜健康的胡萝卜肉质直根作实验 材料；
▪ b 实验材料的修整、刷洗、冲洗； ▪ c 用洗衣粉水或肥皂水浸洗后再用自来水
1
▪ 3 主要实验用具和仪器
▪ 用具：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、 枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养 皿、酒精灯等。
▪ 仪器：超净工作台、恒温培养箱
▪ 4 药品和试剂
▪ 胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75 ％酒精、0.1%HgCl2。
▪ 5 实验材料：胡萝卜肉质直根
2
6 实验流程
▪ （1）准备工作
5
（2）胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制
▪ 配方：MS基本培养基＋ 2mg/L NAA＋ 0.1mg/L 6-BA＋200mg/L水解酪蛋白＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖
▪ 配制流程：同胡萝卜愈伤组织诱导培养基 的配制
6
Hale Waihona Puke 作业▪ 详细写出胡萝卜愈伤组织诱导培养的操作 步骤。
7
胡萝卜愈伤组织诱导培养基无菌水75酒精01hgcl消毒溶液无菌水装材料的容器解剖刀镊子培养皿计时器待用培养基等的准备
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云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心
细胞工程实验实验报告
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。
关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养
胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。
同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。
1.材料和方法
1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。
1.2方法：
1.2.1愈伤组织的诱导培养
（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8
（2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）
（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；
（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；
（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶
（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况
1.2.2继代培养
从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
用记号笔标注操作者、组别和日期。
（3~4周后在相同培养基上继代培养1次）
1.2.3愈伤组织再分化的诱导
（1）培养基： MS+2，4-D 0.5mg/L+KT 0.2mg/L
（2）从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
用记号笔标注操作者、组别和日期。
适当条件下培养1-3周。
2.结果
2.1愈伤组织的诱导培养结果如下图，
通过观察，看出M1和M2均被污染长出菌，M3水清化，M4和M5褐化，均没有成功诱导愈伤组织形成，比较于小组其他同学的培养情况统计于下表：
Table 2小组诱导愈伤组织形成情况 M1
M2
M3
M4
M5
诱导率
污染率
我的 污染 污染 水清化 褐化 褐化 0% 40% 2 污染 污染 水清化 水清化 污染 0% 60% 3 污染 污染 污染 污染 污染 0% 100% 4 褐化 水清化 褐化 水清化 污染 0% 10% 5 污染 污染 污染 水清化 污染 0% 80% 6 污染 污染 污染 污染 污染 0% 100% 总计
5污染1褐化
5污染1水清化
3污染2水清化1褐化
3水清化2污染1褐化
5污染1褐化
统计后得到小组全部都是没有成功诱导愈伤组织形成，实验失败，诱导率为0。
Figure1.M1 Figure2.M2 Figure3.M3
Figure4.M4 Figure5.M5
2.2继代培养结果
因诱导愈伤组织培养失败，所以向老师取来的成功的愈伤组织继代培养，结果如下图
Figure6.初次继代培养Figure7.二次继代培养
由图片看出来初次继代培养结果良好，愈伤组织继续分化，二次继代培养结果在形态上已经变大且在组织外层透亮说明生长良好；
2.3愈伤组织再分化的诱导
再分化的结果待观察
3.讨论
3.1对于小组内诱导愈伤组织形成的培养结果全部失败，进行详细的分析，分为以下几点3.1.1大部分被微生物感染，培养基内长出大面积菌落，仔细观察有生出霉菌占大部分，有白色霉菌的孢子丝，还有淡黄色霉菌，还有粘稠的细菌菌落，分析原因有以下几点（1）首先材料来源带来的污染，材料来源不是无菌植株培养出来的，而是一般市售的胡萝卜，所带有的微生物大部分可能在消毒过程已杀死，但是在外表皮有细缝沾有的微生物未被清除，在切材料时被外层微生物污染，还有因在多次清洗消毒过程会造成材料损伤，给内部材料造成影响；
（2）培养瓶封口塑料盖用久了容易老化，密封性差造成的污染，但我们后面发现更大可能是盖子没有旋紧，因为盖子是塑料的盖上以后很容易盖歪了然后旋不动，就以为是盖紧了其实是没有旋紧，让培养过程中空气进入造成大面积污染；
（3）学生操作过程不注意细节部分，比如操作者的双手要完全伸入超净工作台，操作物品尽可能挨近工作台吹风口，在取各种无菌的器材要用灭菌镊子拿取，打开瓶口要盖子倒放在工作台酒精灯附件，而不是正扣下去，这一点也是造成污染主要原因，因盖子正扣会使盖子内部沾到工作台的微生物；
（4）操作因不熟练所以操作步骤繁琐，耗时过长，使材料或者培养基长时间暴露，因为操作环境不是完全的无菌，所以操作熟练动作快缩短时间可以减少污染；
3.1.2有水清化的现象，是不生长,不死亡,也无愈伤形成
3.1.3有褐化的现象，是不生长,组织块颜色发黑，边缘发白，大部分是已死亡；
3.2对于继代培养没有被污染，能够正常分化，在取已经形成好的愈伤组织时来源是无菌材料做的愈伤组织，所以没有形成二次污染，在材料方面没有带来污染，且操作上也没有带来污染；
4.小结
4.1实验最初是利用不同培养基中加入不同比例的激素研究不同比例激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，但由于愈伤组织诱导分化结果失败，因造成污染或是材料不分化最后结果是诱
导率为0，无法得出结论哪种激素能够促进胡萝卜愈伤组织诱导，理论上[2]，在添加2，4-D 1．0 mg／LJ,KT 0．5 mg／L的MS培养基上愈伤组织的诱导效果最好，并且愈伤组织能在相同的培养基上快速大量地增殖，其增殖速率为原体积的3～4倍／周。
4.2一一般认为，诱导外植体脱分化和器官的建成关键在于生长素和分裂素的配比。
生长素在诱导外植体脱分化产生愈伤组织中起决定性作用，而分裂素只是增加了愈伤组织的发生数量，其浓度过高反而产生负面作用，低浓度生长素2，4一D有利于胡萝卜愈伤组织的诱导，2，4一D与一定浓度的细胞分裂素KT(0．5 mg／I )配合使用则有利于愈伤组织的快速增殖；
参考文献：
[1]尹文兵[1],李丽娟[1],黄勤妮[1],李艳红[1],.胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究[J].山西师
范大学学报：自然科学版,2004,18(2)
[2]汪洪[1,2],夏鸿亮[2],李校垄[2],杨树林[1],.胡萝卜愈伤组织诱导培养的研究[J].北方艺,2012,(6)。