百日咳疫苗免疫后的抗体检测方法

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百日咳实验室诊断标准

百日咳实验室诊断标准引言：百日咳是一种由百日咳杆菌引起的传染病，主要通过飞沫传播。

由于百日咳症状多变、病程长，并且可能与其他呼吸道感染混淆，因此确诊百日咳需要依赖实验室诊断标准。

本文将为您介绍百日咳实验室诊断标准的详细内容。

一、病原学检测：1. 咽拭子采集及培养：采集咽拭子进行百日咳杆菌的培养。

培养结果呈阳性，能够证实百日咳杆菌的存在。

2. PCR检测：采用聚合酶链反应技术，检测咽拭子中百日咳杆菌的特异性基因。

若PCR结果呈阳性，可确诊百日咳感染。

二、血清学检测：1. 抗百日咳抗体检测：通过血清学检测，测定患者体内针对百日咳杆菌的特异性抗体水平变化。

常见的检测方法包括ELISA和免疫荧光法等。

2. IgA抗体测定：通过测定患者血清中的百日咳IgA抗体水平，以及抗百日咳抗体滴度，从而判断患者是否感染百日咳。

三、特殊检测方法：1. 纤维支气管镜检查：通过纤维支气管镜检查，可观察到百日咳引起的支气管粘膜炎症状况。

此项检查特异性较高，但操作较为复杂。

2. 细菌毒力因子检测：通过检测百日咳杆菌产生的毒力因子，如百日咳毒素等，可以进一步确认百日咳感染。

四、诊断根据：根据上述实验室检测结果，结合患者的临床症状及流行病学史，可以进行百日咳的确诊。

1. 临床症状：百日咳的典型症状包括持续的咳嗽、咳出稠厚的白色或黏液状痰，呼吸困难等。

但部分患者可能仅表现为轻度咳嗽，并有可能与其他呼吸道感染混淆。

2. 流行病学史：百日咳主要通过飞沫传播，因此密切接触患者或流行病区的历史对于诊断具有重要意义。

结论：百日咳是一种需要依靠实验室检测来确诊的传染病。

通过病原学检测、血清学检测以及特殊检测方法，结合患者的临床症状和流行病学史，可以准确判断患者是否感染百日咳。

在实际诊断过程中，医生需要综合各项检测结果做出最终诊断，并及时对患者进行治疗，以减少疾病的传播和并发症的发生。

百日咳疫苗在青少年和成人中的免疫效果评估

百日咳疫苗在青少年和成人中的免疫效果评估百日咳（Pertussis），又称为百日咳病，是由百日咳杆菌引起的一种呼吸道传染病。

百日咳可引起长时间持续的咳嗽发作，严重时可能导致呼吸困难、肺部感染以及并发症如肺炎、脑炎等。

该疾病主要对婴儿和幼儿造成威胁，但成人和青少年也可能受到感染，传播给未接种疫苗的婴幼儿。

为了预防百日咳的传播和减轻患者症状，百日咳疫苗的广泛接种成为一项重要的公共卫生措施。

本文将对百日咳疫苗在青少年和成人中的免疫效果进行评估。

百日咳疫苗主要有两种类型，一种是百日咳细胞百白破联合疫苗（DTaP），用于婴儿和幼儿接种；另一种是百日咳成人无细胞百白破疫苗（Tdap），用于成人和青少年接种。

这两种疫苗的主要成分是对百日咳杆菌的毒素或外膜蛋白的抗原，能够激活人体的免疫系统，并产生特异性的免疫应答。

接种疫苗后，人体会产生抗百日咳的抗体和免疫记忆细胞，从而在接触到百日咳病原体时迅速产生保护性的免疫应答。

研究表明，百日咳疫苗在青少年和成人中具有良好的免疫效果。

根据美国疾病控制和预防中心（CDC）的数据，接种Tdap疫苗后，青少年和成人的百日咳感染风险显著降低。

根据一项针对14至18岁美国青少年的研究，疫苗接种后的第一年，百日咳的发病率降低了77%。

此外，成人接种百日咳疫苗对于保护婴儿和幼儿免受感染也非常重要。

因为成人可能是未接种疫苗的婴儿和幼儿感染百日咳的主要来源，他们接种疫苗后不仅自身受益，还能够减少传播给婴幼儿的风险。

然而，尽管百日咳疫苗在青少年和成人中的免疫效果被广泛认可，但疫苗的保护效果可能会随时间的推移而减弱。

一项追踪研究发现，在接种Tdap疫苗后的4至6年内，免疫效果逐渐下降。

这意味着接种者可能需要定期接种以保持持久的免疫保护。

此外，疫苗的保护效果在个体之间可能存在差异，部分人可能对疫苗产生较弱的免疫应答。

因此，定期进行免疫效果评估，以及改善疫苗的免疫原性和持久性，是保持人群免疫水平的关键。

人百日咳(PT)酶联免疫分析

人百日咳（PT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

96T使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中百日咳（PT）表达。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人百日咳（PT）表达。

用纯化的人百日咳（PT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中百日咳（PT）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的百日咳（PT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人百日咳（PT）的存在与否。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。

然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

抗体检测方法都有哪些

抗体检测方法都有哪些
抗体检测方法常用的有以下几种：
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：在试验中，将待检测抗体与特定抗原结合，然后通过标记抗体的酶来检测抗体的存在。

该方法广泛应用于许多领域，包括医学诊断和科学研究。

2. 免疫荧光法：使用特定荧光标记的抗体来检测抗体与抗原的结合。

当抗体与抗原结合时，荧光信号被激活，可以使用荧光显微镜观察。

3. 免疫印迹法（Western blot）：通过将待检测抗体与蛋白质混合，然后通过电泳将混合物分离出不同的带，再用特定抗体探测特定的带，从而确定抗体的存在与否。

4. 中和试验：将抗体与病原体或毒素混合，观察它们是否可以相互中和。

这种方法常用于研究抗体对病原体的保护作用，以及对疫苗的效果评估。

5. 聚合酶链反应（PCR）：通过扩增特定的DNA序列来检测是否存在特定的抗体。

这种方法通常用于检测病原体或其他生物分子的存在。

6. 微阵列技术（Microarray）：通过将大量特定抗原固定在固定基质上，然后与待检测抗体反应，从而快速同时检测多个抗体。

7. 化学发光法：将特定化学物质标记的抗体与待测样品中的抗体反应，然后通过检测化学发光信号来确定抗体的存在与否。

这种方法常用于高通量筛选和体外诊断。

百日咳实验室诊断方法比较_pdf

及血清标本，采用分离培养、ＩＳ４８１ＰＣＲ及百日咳毒素（ＰＴ）ＩｇＧ定量酶联免疫吸附］式验（ＰＴ－ＩｇＧ）检测百日咳鲍特菌感染，并应用ＳＰＳＳ１６．０软件分析结果。结果１４８例临床疑似病例中实验室诊
断病例１００例，其中３例百日咳鲍特菌分离培养阳性，８８例ＩＳ４８１ＰＣＲ阳性，３４例ｐＴｏｌｇＧ阳性，
ａｓｓａｙ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ
日咳鲍特菌分离培养、特异性ＰＣＲ及血清ＰＴ－ＩｇＧ检测，并分析确诊百Ｅｔ咳病例的实验室检测结果。
材料与方法
百日咳是由百日咳鲍特菌引起的儿童急性传染病，我国在实施计划免疫后，其发病率快速下降至目前的报告发病率＜１／１０万。然而在全球较多疫苗高覆盖率的发达国家甚至一些发展中国家，百Ｅｔ咳的发病呈现增多趋势，这一现象被称为“百Ｅｔ咳重现”［Ｉ－３］０目前百日咳实验室诊断主要依靠病原学诊断、鼻咽拭子ＰＣＲ检测以及血清百日咳毒素ＩｇＧ（ＰＴ－ＩｇＧ）检测，而我国对百日咳的实验室检测尚未普及。为此本研究针对临床疑似百日咳病例采用百
ｃａｓｅｓ
１００ｏｕｔｏｆｔｈｅ１４８
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ｗｅｒｅｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｌｙｃｏｎｆｉｒｍｅｄ．
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ｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅ，ｔｈｒｏｕｇｈｃｕｌｔｕｒｅ，ＰＣＲ
ｐｅｒｔｕｓｓｉｓｔｏｘｉｎＩｇＧｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．２２
ｗｅｒｅｂｏｔｈＰＣＲａｎｄｐｅｒｔｕｓｓｉｓｔｏｘｉｎＩｇＧｐｏｓｉｔｉｖｅ．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＩＳ４８１ＰＣＲ．ｄａｙｓｆｒｏｍｔｈｅｏｎｓｅｔｏｆｓｙｍｐｔｏｍｓ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄｒｅｓｕｌｔｓｏｆＰＴ－ＩｇＧｗｉｔｈｔｈｅｄａｙｓｆｒｏｍｏｎｓｅｔｏｆ１）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＳｉｎｃｅｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｃｕｌｔｕｒｅｏｎｐｅｒｔｕｓｓｉｓｗａｓｌＯＷ，

百日咳PT、FHA和Prn血清抗体检测方法的建立及验证_613

3.2准确度
在未接种百日咳疫苗的0-3月健康婴儿血清中分别添加已知的抗PT抗体167.5 IU/ml（或抗FHA抗体65IU/ml，抗Prn抗体分别为32.5IU/ml），再进行ELISA检测，每种抗体至少检测10份样品，计算抗PT（或FHA和Prn）抗体含量，根据公式（回收率（%）=测得值/真实值×100%）最后得出回收率。
Key words:Pertussis, ELISA, Quantitatively analysis, Acellular pertussis vaccine
百日咳是由百日咳杆菌引起的一种严重急性呼吸道传染病，传染性较强，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见，是严重威胁人类健康的主要传染病之一[1]。百日咳毒素（pertussis toxin, PT）、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA）和百日咳粘附素（pertactin, Prn）是百日咳杆菌生产过程中产生的生物活性物质,与百日咳杆菌粘附和定居在宿主呼吸道的上皮细胞、引起患者临床症状有关，是百日咳杆菌致病的重要毒力因子[2]。同时PT、FHA和Prn还具有较强的免疫原性，能刺激机体免疫系统产生特异的保护性抗体，至今，已被世界上很多国家作为无细胞百日咳疫苗的组成成分[3]。本实验目的是建立定量检测抗PT、FHA和Prn抗体的酶标免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法，并进行方法学验证，应用于无细胞百日咳疫苗临床试验免疫原性评价，为无细胞百日咳疫苗的质量控制、百日咳诊断和流行病学研究提供物质基础。
4精密度
重复性试验结果显示抗PT、FHA和Prn抗体三种检测ELISA方法的平均批内变异系数（CV）分别为9.99%、11.01%和9.00%，平均批间变异系数分别为11.555.1与国外同类方法比较

百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)

百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】条型：100人份/盒（25人份/筒×4）【预期用途】本产品用于体外定性检测人血清、血浆或全血样本中的百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体。

适用于百日咳杆菌感染的辅助诊断，检测抗百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体。

百日咳是由革兰氏阴性的百日咳杆菌引起的呼吸道传染病，主要表现为迁延数周的咳嗽，以有吸气性“尾声”的剧烈阵发性痉咳为特征，婴幼儿的临床表现最为严重。

百日咳的病原体为百日咳鲍特菌，是一种小的、营养需求苛刻的革兰氏阴性球杆菌，专门附着在人呼吸道的粘膜层。

有时，其他传染源，尤其是副百日咳鲍特菌，也可引起百日咳样疾病。

鲍特氏菌属可因环境条件改变而发生表型变化，毒力因子的表达也可不同。

这些因子包括百日咳毒素（PT）、丝状血凝素（FHA）、百日咳粘着素（PRN）、菌毛（FIM）2型和3型、腺苷酸环化酶毒素（ACT）、气管细胞毒素（TCT）、脂低聚糖和百日咳鲍特菌内毒素。

虽然百日咳的发病机制尚不完全清楚，但FHA、PRN和菌毛可帮助细菌粘附在宿主细胞上，PT、TCT和ACT可使细菌破坏上皮层，并躲避宿主的免疫系统。

这些都是重要的致病因素。

百日咳的病原体仅在发病早期患者的鼻咽部可以检出，经9～10 天（范围：6~20 天）的潜伏期，患者出现卡他症状（包括咳嗽）。

1～2周内，出现阵发性痉挛性咳嗽，并带有特征性的鸡鸣样尾音。

典型表现是夜间咳嗽特别严重，咳后常伴有呕吐。

在婴幼儿中，百日咳可引发呼吸暂停和发绀，但可无咳嗽；在青少年和成人中，非特异性的、经久不愈的咳嗽可能是惟一的临床表现。

疾病的卡他期、阵发期和恢复期可持续数月。

虽然大部分临床上可辨别的百日咳病例发生在1～5 岁的儿童，但报告的严重病例和死亡病例主要发生于出生后数周或数月。

在大龄儿童、青少年和成人中，由于其病程常常不典型，通常未被辨识为百日咳。

测抗体的方法

测抗体的方法
1. 免疫组化法（Immunohistochemistry，IHC）：将标记有特定抗体的染色剂与组织样本中的目标抗原结合，通过显色或荧光等方式观察抗原的存在和定位。

2. 免疫荧光法（Immunofluorescence，IF）：使用荧光标记的
抗体与组织样本中的抗原结合，通过荧光显微镜观察抗原的存在和定位。

3. 酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）：将目标抗原与固相载体结合后，使用特异性抗体进
行检测，通过底物的酶反应生成显色或荧光信号来定量测定抗体的含量。

4. 免疫印迹法（Western Blot，WB）：通过将蛋白质样本经SDS-PAGE电泳分离后，将目标蛋白迁移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白结合，通过显色剂检测抗体和蛋白质的结合情况。

5. 流式细胞术（Flow Cytometry）：将荧光标记的抗体与单个
细胞或细胞悬液中的目标抗原结合，通过流式细胞术仪器检测细胞的荧光强度和分布，分析抗体的亲和力和细胞表面蛋白的表达情况。

6. 中和试验（Neutralization Assay）：用抗体与病原微生物进
行体外中和反应，观察抗体对病原微生物感染能力的抑制作用。

以上仅为常用的几种测量抗体的方法，具体的方法选择要根据研究目的和实验条件来确定。

百日咳的检测

花季少年咳嗽不止：原来是百日咳来自美国波士顿哈佛大学医学院的Wessels 医生等报道了一例百日咳引起的咳嗽，发表在近期的NEJM 杂志上。

患者为16 岁男孩，春季末因咳嗽于呼吸科就诊。

3 周前，患者出现咳嗽和鼻塞，症状持续，无发热和寒颤。

接受盐酸非索非那定治疗后，症状无改善。

3 天前，患者出现夜间咳醒，咳嗽剧烈，咳嗽后出现呕吐和呼吸困难。

遂于外院急诊就诊，行体格检查时，患者无呼吸窘迫，体温 37℃，血压 152/87mmHg，脉率 107 次 / 分，呼吸频率为 18 次 / 分，呼吸周围空气时血氧饱和度为 100%。

咽后壁可见鹅卵石样改变，悬雍垂位于正中，扁导体无肿大，无脓性分泌物。

鼻塞，鼻粘膜湿润，双侧鼓膜后可见大量渗出物。

呼吸音清，未闻及干湿啰音。

余体查未见异常。

诊断为过敏性鼻炎引起的上气道咳嗽综合征（鼻后滴流），予以氟替卡松鼻喷雾剂和苯佐那酯（200mg，一日3 次）治疗。

次日，患者咳嗽依然存在，再次因剧烈咳嗽而咳醒，咳嗽持续约 10 分钟，期间呕吐 2 次，并再次到外院就诊。

患者无胸痛、发热、盗汗或体重减轻。

体查时患者状态良好，无咳嗽。

体温为 36.8℃，血压15,1/87mmHg，脉率 93 次 / 分，呼吸频率为 18 次 / 分，呼吸周围空气时血氧饱和度为 97%。

轻度鼻塞，咽后部可见红斑，余体查未见异常。

胸片正常。

疑诊支气管痉挛。

疑诊格鲁布喉炎，遂采用地塞米松治疗和沙丁胺醇雾化。

建议患者到儿科门诊就诊。

随后两天咳嗽持续，无间歇。

就诊前的一晚，患者出现两次剧烈咳嗽，随后吸气出现呛声。

本次就诊当日，患者到学校上课。

患者咳嗽时出现鼻衄，咳嗽时患者被呛到。

患者无头痛和听力下降，胸痛，非咳嗽时无呼吸困难，无腹痛、腹泻和便秘。

患者有收缩压升高，BMI 指数偏高。

无规律用药史。

儿童时期按时接种疫苗，包括 5 次百白破（DTaP）疫苗，4 次流感嗜血杆菌 B 型疫苗，3 次乙肝疫苗，和 2 次麻疹 - 流行性腮腺炎 - 风疹疫苗（婴幼儿时期），还有 2 次流脑疫苗（分别在 11 岁和 16 岁时），1 次吸附百日咳疫苗、白喉和破伤风类毒素混合疫苗（Tdap），1 次人类乳头瘤病毒疫苗（16 岁时），无肺炎球菌或流感疫苗接种史，无药物过敏史。

百日咳检查方法

百日咳检查方法
1.临床意义
百日咳是一种由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，自从广泛实施百日咳菌苗免疫接种后,本病的发生率已经大为减少。

百日咳的临床特征为咳嗽逐渐加重，呈典型的阵发性、痉挛性咳嗽，咳嗽终末出现深长的鸡啼样吸气性吼声，病程长达2～3个月，故有百日咳之称。

2.检查方法：
2.1.白细胞计数
卡他期及痉咳期末可见外周血白细胞计数明显增高，可达（20～50）×109/L，分类中淋巴细胞占0.60～0.80，无幼稚细胞。

如有继发感染时，淋巴细胞即相对减少。

2.2.细菌培养
卡他期及痉咳早期使用鼻咽拭子，或用咳碟法收集标本，用薄-姜氏（B-G）培养基做细菌培养，可获得阳性结果。

2.3.荧光抗体染色法检查
用鼻咽拭子涂片，用荧光标记的特异性抗体染色，在荧光显微镜下检查病原体有快速诊断的优点，但本法特异性稍差，仅作辅助诊断之用。

2.4.血清学检查
做双份血清凝集试验及补体结合试验，如抗体效价递升可予确诊。

近年有用酶联免疫吸附试验测定免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白A（IgA）抗体，对早期诊断有所帮助。

也有用单份恢复期血清凝集抗体1：320效价作为阳性诊断值者。

2.5.细菌特异性核酸检测
可使用DNA聚合酶链式反应技术（PCR）法扩增细菌特异性核酸，据报道此法特异性及敏感性均较好。

百日咳检验标准

百日咳检验标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：百日咳是一种由百日咳杆菌引起的传染病，其主要特征是剧烈的咳嗽发作。

为了确诊和治疗该疾病，需要进行百日咳检验。

百日咳检验是通过检测患者的呼吸道样本中是否含有百日咳杆菌来进行的,有效的百日咳检验标准对于及早发现和治疗该疾病至关重要。

百日咳检验的标准主要包括症状、检测方法和结果解读。

首先是症状，百日咳的典型症状包括剧烈的咳嗽发作、呼吸困难、发热和喉咙疼痛等。

如果患者出现这些症状，应及时就医并进行百日咳检验以确认诊断。

其次是检测方法，目前常用的百日咳检验方法主要包括血清学检测、痰样本检测和鼻咽拭子检测。

血清学检测是通过检测患者的血液中是否含有百日咳抗体来诊断该疾病，痰样本检测是通过检测患者的呼吸道痰液中是否含有百日咳杆菌来诊断，鼻咽拭子检测是通过对患者的鼻咽拭子进行PCR检测来诊断。

这些方法各有优劣，医生应根据患者的具体情况选择合适的检测方法进行检验。

最后是结果解读，百日咳检验的结果通常分为阳性和阴性两种。

阳性结果表示患者的呼吸道样本中含有百日咳杆菌，确诊为百日咳；阴性结果表示患者的呼吸道样本中不含有百日咳杆菌，暂时排除百日咳。

需要注意的是，百日咳检验结果可能受多种因素影响，包括样本采集的时间、样本处理的方法以及检测方法的准确性等，因此在解读结果时应谨慎对待。

百日咳检验标准对于确诊和治疗百日咳起着至关重要的作用。

医生和患者都应遵循相关标准和建议，及时进行检验和治疗，以保障患者的健康和安全。

希望通过不断的科研和实践，能够提高百日咳检验的准确性和有效性，为预防和控制这一传染病做出更大的贡献。

【2000字】百日咳是一种由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，其典型症状是剧烈的阵发性咳嗽，咳嗽时常伴随呼吸困难、喘息、呕吐和面部充血等症状。

患者经常在夜间发作并呈现发作性，继续数周至数月，所以称之为“百日咳”。

百日咳主要通过飞沫传播，易在咳嗽处传播给他人，尤其对婴幼儿等免疫力低下的人群具有较高的致病性和传染性。

百日咳菌苗免疫力水平测定两种统计方法的比较

百日咳菌苗免疫力水平测定两种统计方法的比较陈平纡　梁玉珍　范晓昌　何长民(卫生部兰州生物制品研究所,兰州　730046)提　要　利用生物统计软件对兰州生研所12年间生产的147批百日咳菌苗原液的免疫力进行质反应平行线测定分析(平行线法),并与《中国生物制品规程》95版中Wilson-Wo rcester法(W-W)比较,结果表明,质反应平行线测定法的各剂量反应百分率落在经验区间内;ED50可信限区间为0.016～0. 014;相对效价95%可信限区间为0.775～0.655。

按合格、不合格、复试三个水平对147批百日咳菌苗的免疫力进行了分析与评价。

并以中国百日咳菌苗免疫力试验用参考品为对照,对待检菌苗的稳定性及实验一致性进行了质量检测,计得总体回归系数分别为1.5879(x2=60.90)和1.3849(x2=163.24);总体ED50分别为0.014和0.015;待检菌苗总体相对效价0.714,两法的ED50值间及相对效价值间存在很好的相关性(r=0.8376及r=0.9940)。

关键词　质反应平行线测定法　Wilson-Worcester法　免疫力　百日咳菌苗分类号　R378.4+2C omparative Studies on the Immunity of Pertussis Vaccine by Two Statistical Analysis Methods　Chen Pingyu,Liang Y uz hen,Fan X iaochang,et al.(Lanzhou I nstitute of Biological Products,Lanzhou730046)A bstract　T he Immunity of147lots pertussis vaccine had been evaluated by probability method and Wil-son-Worcester method.T he results shows that the ED50and relative Immunity between the two statistical analysis mathods were ralative eath other.Key words　Probit parallel line assay　Wiloso n-Wo rcester method　Immunity　Per tussis vaccine 百日咳菌苗是用于计划免疫的制品之一,目前我国使用的免疫力水平统计分析和评价方法是传统的Wilson-Worcester法〔1〕,日本国早在80年代初期已经使用质反应平行线测定法〔2,3〕,在实用中后法较前法更为精确、全面。

百日咳疫苗免疫后的抗体检测方法

中国计划免疫 2001 年 6 月第 7 卷第 3 期
治疗最佳时期。目前, 关于如何确定为百日咳临床病例是根据
WHO 所规定的指标, 具体条件是连续咳嗽 \21 天, 并具备下列条件的 1 种或多种: a) 鲍特氏百日咳菌培养阳性; b) PT 或 FHA IgG 抗体明显增高; c) 与经培养确定为百日咳的病人接触[ 9~ 10] 。根据 WH O 所规定的指标, 我们认为, 在临床极难采集标本并培养出百日咳菌的实际条件下, 选择测定 PT 或 FHA IgG 抗体明显增高的办法, 是目前判定百日咳病人和确定免疫人群保护力水平的唯一选择。同时, 我们的研究结果表明: 连续咳嗽 \21 天的疑似百日咳病人血清标本中, 抗 PT 和抗 FHA 抗体以及抗 AGGs抗体水平并不平行; 接种过 DPT 的人群抗 AGGs 抗体水平不高, 不能反映出体内是否具有抗百日咳杆菌感染的保护力水平; 因此, 测定百日咳抗 PT 、抗 FHA 特异性抗体是目前可用于临床诊断的最有效的方法。我们的实验证明: 采用 ELISA 诊断试剂盒测定百日咳特异性抗体的敏感性和准确性都高于常规凝集试验, 而且操作方便, 可快速获得结果, 应在百日咳临床诊断和免疫接种后的效果调查中使用。
Establishment of an ELISA Diagnostic Kit for Detecting Specific Antibodies of Pertussis HOU Q-i ming, LIANG Ya-wen, ZHANG Lu-min, et al. N ati onal Inst it ute f or t he Cont rol of Phar maceutical and Biological Pr oduct s, Beij ing 100050, Chi na.

抗体检测的方法

抗体检测的方法抗体检测是一种常见的生物学实验技术，用于检测特定目标抗体的存在和浓度。

以下是关于抗体检测的10种常用方法的详细描述：1. 免疫荧光抗体检测：该方法利用荧光标记的二抗与目标抗体结合，通过荧光显微镜观察荧光信号的强度和位置来确定目标抗体的存在与否。

2. 醒葡聚糖柱层析法：该方法利用柱层析技术，将混合溶液中的目标抗体与醒葡聚糖介质上的特异性配体相互作用，从而实现目标抗体的分离和富集。

3. 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)：ELISA方法是通过抗体与酶标记的二抗的特异性结合，然后通过底物与酶催化产生颜色或荧光等信号来检测目标抗体的存在与浓度。

4. 蛋白微阵列技术：该方法利用固相载体上固定一系列已知抗体，与样品中的抗原结合形成复合物，然后通过荧光或化学反应等检测方式来鉴定目标抗体。

5. 聚合酶链式反应 (PCR)：PCR方法结合了抗体和核酸技术，利用特异性引物扩增目标抗体的基因序列，通过PCR产物的数量可以间接反映目标抗体的存在与浓度。

6. 原位杂交技术：通过将荧光或放射标记的探针与目标抗体的基因序列互补结合，通过显微镜观察和成像来确定目标抗体的表达和定位情况。

7. 免疫胶体金标记检测：该方法利用胶体金作为信号标记，通过金颗粒的聚集或散射来检测目标抗体的存在与浓度。

8. 免疫电泳技术：通过将复合抗体与电泳膜上的特定天然或合成抗原相互作用，来检测目标抗体的迁移和浓度。

9. 免疫流式细胞术：该方法将荧光标记的抗体与细胞表面的目标抗体特异性结合，通过流式细胞仪检测荧光信号的强度来分析细胞中目标抗体的存在与浓度。

10. 免疫组织化学方法：通过将荧光或酶标记的抗体与组织切片中目标抗体结合，通过组织切片显微镜观察荧光或颜色信号的强度和位置来确定目标抗体的存在与表达情况。

抗体检测步骤

抗体检测步骤一、样本采集1. 确认采集样本的类型，包括血液、尿液、唾液等。

2. 选择适当的采集时间，如早晨空腹、随机等。

3. 准备采集设备和容器，确保清洁、无菌、干燥。

4. 遵循无菌操作原则，避免交叉感染。

5. 正确采集样本，记录样本标识和采集时间。

二、样本处理1. 将采集的样本进行离心，分离出血清或细胞成分。

2. 如果需要，对样本进行稀释、过滤或浓缩。

3. 将处理后的样本分装到适当的容器中，并标记清楚。

4. 根据检测方法的要求，选择适当的存储条件，如冷藏或冷冻。

三、抗体检测方法选择1. 根据检测目的和要求，选择适合的抗体检测方法。

2. 了解所选方法的原理、优点和局限性。

3. 选择合适的试剂和设备，确保质量和有效性。

4. 根据方法要求，设置实验条件和参数。

四、数据分析1. 按照实验设计要求，对采集的样本进行测试和记录数据。

2. 采用统计方法对数据进行处理和分析，包括描述性统计和推断性统计。

3. 根据数据分析结果，绘制图表或制作报告。

4. 对数据进行分析和解释，提供相应的结论和建议。

五、结果解释1. 根据数据分析结果，解释样本中抗体的性质和特点。

2. 结合临床病史和流行病学资料，对结果进行解读。

3. 提供相应的诊断和治疗建议。

4. 对结果进行解释和说明，确保准确性和可靠性。

六、质量控制1. 在整个实验过程中，进行严格的质量控制，确保数据的准确性和可靠性。

2. 对试剂、设备、实验环境等进行质量检查和维护，确保符合实验要求。

3. 对实验数据进行审核和校对，确保准确无误。

4. 对不合格的样本进行重新采集和处理，保证数据的可靠性。

七、实验室安全1. 实验室应遵循安全操作规程，确保实验人员的人身安全和环境安全。

2. 对实验室进行定期清洁和消毒，保持整洁和卫生。

3. 对废弃物进行分类处理和处置，防止交叉污染和环境危害。

4. 对实验室设备进行检查和维护，确保设备安全可靠。

5. 提供相应的急救设备和药品，以应对可能发生的意外事故。

抗体检测方法

抗体检测方法抗体检测是一种常见的实验室技术，用于检测人体内特定抗体的存在和水平。

抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别和中和病原体，是人体抵抗疾病的重要组成部分。

在临床诊断和疾病监测中，抗体检测方法被广泛应用。

一、ELISA法。

ELISA法（酶联免疫吸附实验）是一种常用的抗体检测方法。

它利用固相酶标记的抗原或抗体与待测样品中的抗体结合，再通过酶底物的反应产生可测量的信号。

ELISA法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，广泛应用于临床诊断和生物医学研究中。

二、免疫荧光法。

免疫荧光法是一种利用荧光染料标记的抗体来检测待测样品中特定抗体的方法。

在免疫荧光显微镜下观察，可以通过荧光信号来判断抗体的存在和分布情况。

免疫荧光法具有高灵敏度、高特异性和定量性好的特点，被广泛应用于自身免疫性疾病、传染病和肿瘤等领域。

三、免疫印迹法。

免疫印迹法（Western blot）是一种检测蛋白质的方法，也可以用于检测特定抗体的存在。

通过将待测样品中的蛋白质经过电泳分离，然后转移到膜上，再与特异性抗体结合并通过化学发光或染色来检测特定抗体的存在。

免疫印迹法具有高灵敏度和高特异性，被广泛应用于蛋白质相互作用、疾病诊断和药物研发等领域。

四、流式细胞术。

流式细胞术是一种高通量的细胞分析技术，也可以用于检测细胞表面的特定抗体。

通过将待测细胞与荧光标记的抗体结合，然后通过流式细胞仪进行检测和分析。

流式细胞术具有高灵敏度、多参数分析和高通量的特点，被广泛应用于免疫学研究、临床诊断和药物筛选等领域。

五、PCR法。

PCR法（聚合酶链式反应）是一种检测DNA或RNA的方法，也可以用于检测病原体引起的抗体。

通过特异性引物和酶的作用，可以扩增和检测待测样品中的特定基因序列。

PCR法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点，被广泛应用于传染病和遗传病的诊断、病原体检测和基因表达分析等领域。

六、蛋白质芯片技术。

蛋白质芯片技术是一种高通量的蛋白质分析技术，也可以用于检测特定抗体。

百日咳疫苗接种后如何监测抗体水平

百日咳疫苗接种后如何监测抗体水平百日咳，又称百日咳病毒感染，是一种传染性很强的呼吸道疾病。

为预防百日咳疾病的发生，疫苗接种是最有效的措施之一。

然而，人体接种疫苗后产生的抗体水平并不是一劳永逸的，需要进行定期监测，以便了解抗体水平是否能够维持在有效的范围内。

一、抗体水平监测的重要性百日咳疫苗接种后，人体免疫系统会产生抗体，以应对感染百日咳细菌的威胁。

然而，随着时间的推移，人体对百日咳的免疫力会逐渐减弱，抗体水平也会下降。

为了保证个体和群体的免疫防御能力，需要经常监测抗体水平，及时采取补充疫苗或其他措施。

二、百日咳抗体水平监测方法1. 血清学检测：通过检测患者血清中特异性抗体的水平来判断免疫状态。

一般常用的检测方法有酶联免疫吸附试验法（ELISA）、中和试验法等。

这些方法通过血液样本的收集和实验室检测，可以准确测定患者体内的抗体浓度，从而评估免疫状态。

2. 基于流行病学调查的监测方法：通过调查特定人群疫苗接种率、发病率等指标，了解群体免疫水平。

通过了解百日咳疫苗接种率以及发病情况，可以初步判断抗体水平是否处于安全范围。

三、抗体水平监测的建议时机1. 接种后即时监测：在婴儿接种百日咳疫苗后，一般会在接种后2至4周内进行抗体水平的检测。

这可以评估疫苗接种后是否产生了足够的抗体反应。

2. 定期监测：在接种百日咳疫苗后，建议每隔2至3年定期监测一次抗体水平。

这可以帮助医生和个体了解百日咳免疫保护是否需要进行补充接种或其他干预措施。

3. 特殊情况监测：对于一些特殊人群，如医务人员、儿科医生、婴幼儿家庭成员等，由于与百日咳病毒接触的机会较多，建议更频繁地进行抗体水平监测，以确保其免疫保护的有效性。

四、抗体水平较低的应对措施当抗体水平低于安全范围时，可以考虑以下措施来提高个体和群体的免疫力：1. 补充疫苗接种：根据抗体监测结果，医生可以酌情决定是否需要进行补充疫苗接种，以增强免疫力。

个体需要密切关注医生的建议，并及时进行疫苗接种。

百日咳ELISA检测操作规程

百日咳（毒素、血凝素、粘附素）ELISA双抗夹心操作规程1试剂（试剂配方见附录）1.1包被液：1M PH9.6碳酸盐缓冲溶液1.2洗液：含0.05%Tween-20的1×PBS溶液（PBST）1.3封闭液：含1%小牛血清的0.01M PH7.4磷酸盐缓冲溶液1.4样品稀释液：PBS(0.01M,PH7.4)1.5TMB底物液A、底物液B1.6终止液：2M硫酸溶液2设备/仪器2.1酶标板：2.2电热恒温培养箱：上海福玛DPX-927213-22.3酶标仪：Molecular Devices Versa Max2.4洗板机：BioTek ELx4053操作步骤3.1包被：用1M，PH9.6碳酸盐缓冲溶液将包被抗体稀释至包被浓度，100uL/孔，4℃孵育过夜或37°孵育1小时。

3.2封闭：清空酶标板，洗液洗2次；加封闭液200uL/孔，4℃孵育过夜或37°孵育1小时后洗液洗2次，备用。

3.3样品及阴性对照品预稀释：将待检测的PT,FHA,Prn原液用原倍0.01M,PH7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至所需浓度，阴性样品使用原倍0.01M, PH7.4磷酸盐缓冲溶液。

3.4加样：将上述稀释好的样品振荡混匀，100ul/孔，每稀释度两个平行，阴性样品使用原倍PH7.4磷酸盐缓冲溶液，100ul/孔。

37℃孵育60分钟。

洗液洗2次。

3.5一抗血清：用0.01M PH7.4PBST将抗PT/FHA/Prn血清洗液洗2次。

3.6二抗：使用0.01M,PH7.4磷酸盐缓冲溶液按说明书倍数稀释，每孔加100uL，37℃孵育60分钟。

洗液洗4次。

3.7显色：每孔加底物液A和底物液B各50uL，室温避光静置5-20min。

3.8终止：每孔加终止液50uL，450nm处检测各孔的吸光度。

附录：1：1M，PH9.6碳酸盐缓冲液配制方法：无水碳酸钠3.18g/L，NaHCO3碳酸氢钠5.68g/L。

2：洗液PBST配制方法：10×PBS：0.1M的Na2HPO4·12H2O+1.5M的NaCl，PBST：原倍PBS+0.05%Tween。