agilent高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

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制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。

二、适用范围

本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。

三、职责

QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。

四、程序内容

4.1仪器配置

本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。

4.2操作前的准备

色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。

4.2.2 供试溶液的配制供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

4.3仪器的操作

4.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30秒后，各部件进入待机状态，指示灯为橘黄色，启动完成。

→梯度泵→柱温箱→检测器的状态，橘黄色为未就绪状态，绿色为空闲状态，粉色为进样状态，蓝色为运行状态，红色为出错状态。

显示所有数据：即打开运行样品时所有记录运行状态的数据图谱。

平铺数据：即将所有运行状态图谱平铺。

重叠数据：即将所有运行状态图谱重叠。

4.4色谱条件的设定及数据采集操作过程

一模块图标中的控制来开或关。把泵上的Purge阀逆时针松开，调流速为3.0ml/min,启动泵，系统开始排气泡，直到管线内（由容器瓶到泵出口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所用流动相通道中无气泡为止，调流速为1.0ml/min，再把Purge 阀顺时针旋紧。

“与泵和进样器一致”使柱温箱温度一致，单击确定进入下一画面。

“最大压力限度”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子，单击确定进入下一画面。VWD检测器参数的设定

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉成三角框，选择合适的响应时间，如〉0.1min（2秒响应时间）。点击确定进入下一画面。

参数设定检测波长：一般选择最大吸收处的波长，最多可同时检测8个波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，通常情况下用100nm作为缺省值。可以根据所需保存光谱图的张数最多同时设定5个通道采集信号，无需采集光谱时应将“存储”设在“无”，若做峰纯度检测或优化求知的样品检测条件，建议选择“全部”。峰宽（响应时间）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝：窄时，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。根据检测波长选择氘灯或钨灯。

“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名。如“test”，单击确定。

到右边的框中，点击确定。（如同时检测两个信号，则重复1、2

话框，输入样品信息：样品总体名称，数据路径中为将数据保存在规定文件夹中，在样品名称项中输入样品名称，未知样品运行次数项中输入样品瓶数，在每次运行重复次数输入进样针数，单击确定进入下一对话框，在样品瓶项中输入第一个样品瓶的位置，在样品架上放入样品瓶，在进样量选项中选择使用方法，然后单击确定。出现一个有样品瓶数的序列，将每一个样品名称都区别开来，以防保存数据时将相同名称的数据覆盖掉，将序列保存在规定文件夹中，在运行队列中进行提交。

。

“停止时间”进行适当的调整，可使主峰出完并与使杂质峰出完。

4.6图谱数据的处理

择分析。

任何颜色，在数据结果中单击鼠标右键选择报告属性将需要的积分参数选入，如理论塔板数，分离度等。在报告结果中就会出现应保存的结果。

4.5关机操作

各部件开关，断开电源。

4.6 注意事项：

μm或更细的膜过滤)。

4.6.2 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

4.6.3 不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.6.4 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

4.6.5 每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

4.6.6 C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

4.6.7 堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查

并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。4.6.8 气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

4.6.9 要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

周期和持续时间）或单次清洗，点击确定，注意溶剂不能干涸。

4.7 仪器维护

4.7.2 10%甲醇水的更换：夏天使用周期不得过3天，冬天不得超过一个星期。

4.7.5仪器发生故障时应及时向管理员汇报，并及时处理。不能处理时应及早报修。