酶联免疫吸附反应ELISA

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酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。

(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。

2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。

2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab 的解离程度与K值有关。

酶联免疫吸附试验 elisa原理

酶联免疫吸附试验 elisa原理酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的实验室技术，用于检测生物分子如蛋白质、抗体、荷尔蒙和病毒等。

ELISA技术基于抗原和抗体的特异性结合，通过酶标记物和底物的反应来检测分子的存在或浓度。

ELISA技术的原理可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA 和夹心ELISA等几种。

其中，间接ELISA是最常见的类型，下面将详细介绍其原理和步骤。

一、间接ELISA的原理间接ELISA利用抗体与抗原的特异性结合来检测分子的存在或浓度。

该方法需要用到两种抗体：第一种是特异性抗体，用于检测目标分子；第二种是酶标记抗体，用于检测第一种抗体的结合情况。

具体步骤如下：1. 将抗原溶液加入微孔板中，并在室温下孵育一定时间，使抗原吸附于微孔板表面。

2. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的抗原和杂质。

3. 加入一定浓度的非特异性蛋白质，如牛血清蛋白或奶粉，以防止非特异性结合。

4. 加入一定浓度的特异性抗体，使其与抗原结合。

5. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的抗体和杂质。

6. 加入一定浓度的酶标记抗体，使其与第一种抗体结合。

7. 将微孔板洗涤干净，以去除未结合的酶标记抗体和杂质。

8. 加入底物，使酶标记抗体产生颜色反应。

9. 测量吸光度，来确定目标分子的存在或浓度。

二、间接ELISA的优缺点间接ELISA具有以下优点：1. 可以检测极低浓度的分子，如病毒和荷尔蒙。

2. 可以同时检测多个样本。

3. 可以检测多种类型的生物分子，如蛋白质、抗体、荷尔蒙和病毒等。

4. 可以使用多种酶标记抗体，如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）和过氧化物酶（POD）等。

5. 可以使用多种检测方法，如发光、荧光和色谱法等。

间接ELISA的缺点包括：1. 检测过程需要多个步骤，比较繁琐。

2. 需要特异性抗体和酶标记抗体，成本较高。

3. 受到非特异性结合的影响，可能会出现假阳性结果。

三、间接ELISA的应用间接ELISA广泛应用于医学、生物学、生物工程和食品安全等领域。

酶联免疫吸附实验 (ELISA)

酶联免疫吸附实验(ELISA)1.实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。

借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。

待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

2.实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－D－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。

常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。

由于酶催化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。

酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。

氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm 纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。

高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。

用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。

ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

酶联免疫吸附试验结果

酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。

本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。

一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。

当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。

此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。

如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。

根据特定抗体标记的物质进行检测。

直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。

二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。

在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。

之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。

三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。

在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。

如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。

竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。

四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。

在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。

如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。

间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。

总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。

酶联免疫吸附法elisa

酶联免疫吸附法elisa
酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测生物样本中特定分子（例如蛋白质、抗原、抗体等）的存在和浓度。

ELISA技术基于免疫学原理，结合酶与底物的相互作用，通过测量酶的活性来间接或直接检测目标分子。

ELISA通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA 等不同类型。

直接ELISA是将待测样本直接加入包含特异性抗体的微孔板孔中，使目标分子与固相抗体形成复合物，然后添加特异性酶标记的二抗，使其与复合物结合。

最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。

间接ELISA首先将待测样本加入包含特异性抗原的微孔板孔中，使目标分子与固相抗原形成复合物，然后添加特异性酶标记的二抗，使其与复合物结合。

最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。

竞争ELISA是将已知浓度的抗原与待测样本中的抗原竞争结合到固相抗体上，然后添加酶标记的二抗，通过测量酶活性来判断待测样本中的抗原浓度。

夹心ELISA先将特异性抗体固定在微孔板孔上，待测样本中的抗原结合到固相抗体上，然后再加入酶标记的二抗，使其与抗原形成复合物，最后加入底物，通过酶催化反应产生可量化的信号。

ELISA技术广泛应用于医学、生物学、疫苗研发、食品安全等领
域，可以快速、准确地检测目标分子的存在和浓度，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

实验二_酶联免疫吸附实验(ELISA)

实验二酶联免疫吸附实验（ELISA）一、实验目的熟练掌握ELISA 技术二、实验原理酶联免疫吸附实验（ELISA）是目前应用最多的免疫酶技术，它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从而简化了分离步骤，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体。

实验方法包括间接法、夹心法及竞争法。

为了检测抗原可用夹心法。

将特异性抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯制成的小管、小盘或小孔）上，然后加被测溶液，倘样品中有相应抗原，则与抗体在载体表面形成复合物。

洗涤后加入酶标记的特异性抗体，后者通过抗原也结合到载体的表面。

洗去过剩的标记抗体，加入酶的底物，在一定时间内经酶催化产生的有色产物的量与溶液中抗原含量成正比，可用肉眼观察或分光光度计测定。

为了检测抗体可用间接法。

使抗原吸附于载体上，然后加入被测血清，如有抗体，则与抗原在载体上形成复合物。

洗涤后加酶标记的抗球蛋白（抗抗体）与之反应。

洗涤后加底物显色，有色产物的量与抗体的量成正比。

本实验使用的乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒是采用双抗原夹心法检测抗-HBs，即采用纯化HBsAg 包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs 时，该抗-HBs 与包被HBsAg 结合并与酶结合物形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP 复合物，加入TMB 底物产生显色反应，反之则无显色反应。

三、实验仪器和试剂1、仪器设备：微量移液器、恒温箱2、试剂和材料（1）蒸馏水（2）人血清样品（3）乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒四、实验步骤和注意事项1、实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30 分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20 稀释。

2、加待测标本：加入待测标本每孔0.05 毫升，并设抗-HBs 阳性对照2 孔，抗-HBs 阴性对照2 孔，空白对照1 孔。

（试剂使用前应摇匀，并弃去1-2 滴后垂直滴加，注意均匀用力）3、加酶结合物：每孔0.05 毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30 分钟。

两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验(ELISA)与聚合酶链式反应(PCR)

两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验(ELISA)与聚合酶链式反应(PCR)病毒检测是现代医学和生物技术领域中的一项重要工作。

在流行病学调查、个体健康监测、疫苗研究等方面都起着重要作用。

酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)是两种常见的病毒检测方法，它们各有优势和局限性。

本文将从原理、应用、优势和局限性等方面比较这两种检测方法，以便有助于人们更好地理解和运用它们。

一、原理比较1.酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA是一种高灵敏度的免疫学检测技术，其原理是利用抗体与抗原特异性结合的原理进行检测。

ELISA通常包括固相法与液相法两种基本类型，其中固相法主要分为间接法、夹心法和竞争法等。

在ELISA 检测中，首先将待检测的抗原或抗体固定在微板上，然后用特异性的酶标记的抗体与待检的抗原结合，通过添加底物使其发生化学反应，生成可定量检测的颜色产物。

从而达到检测目的。

2.聚合酶链式反应(PCR)PCR是一种核酸检测技术，是通过不断重复DNA片段的变性、退火和延伸等步骤，从少量DNA样本扩增出大量特定DNA序列，从而实现对某一位点的检测。

PCR主要包括端点PCR和实时荧光定量PCR两种类型。

其中端点PCR通过测定与被扩增DNA片段有关的产物形成与否，判断所需的DNAs是否存在。

而实时荧光定量PCR通过监测实时PCR反应过程中荧光强度变化，来实现对DNA分子产物的检测和定量。

二、应用比较1.酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA广泛应用于临床诊断、感染病原体检测、肿瘤标志物测定等各个领域。

在临床诊断中，ELISA可用于检测艾滋病病毒、流感病毒、肝炎病毒等病原体，也可用于检测一些特定的生化指标，如抗体、抗原、激素等。

此外，ELISA还广泛应用于生物技术领域，如免疫学研究、疫苗制备、抗体药物检测等。

2.聚合酶链式反应(PCR)PCR技术主要用于检测和鉴定病原体、遗传病基因突变、肿瘤标志物等。

免疫酶联免疫吸附实验报告

免疫酶联免疫吸附实验报告一、引言免疫酶联免疫吸附实验（ELISA），是一种常用于检测抗原或抗体的方法。

该实验利用酶的特异性反应来定量或定性测定目标物在样品中的存在量。

本实验旨在通过免疫酶联免疫吸附实验检测目标抗原的存在。

二、实验材料和方法 1. 实验材料 - ELISA板：含有特异性抗体的孔板 - 样品：待测的抗原溶液 - 阻断缓冲液：用于防止非特异性结合 - 洗涤缓冲液：用于洗涤ELISA板 - 特异性抗原抗体：用于与目标抗原结合 - 辣根过氧化物酶标记的二抗：与特异性抗原抗体结合 - 底物溶液：用于酶的反应产生可测量的产物2.实验方法•准备ELISA板：加入特异性抗体溶液并孵育，以使其在孔板上固定•添加阻断缓冲液：加入阻断缓冲液，以防止非特异性结合•加入样品：将待测样品加入孔板，并孵育使其与特异性抗体结合•洗涤：用洗涤缓冲液洗涤孔板，以去除未结合的物质•添加辣根过氧化物酶标记的二抗：加入与特异性抗原抗体结合的辣根过氧化物酶标记的二抗，使其与目标抗原结合•洗涤：用洗涤缓冲液洗涤孔板，以去除未结合的物质•加入底物溶液：加入底物溶液，并孵育使酶反应发生•反应停止：加入反应停止液，以停止酶反应•测量吸光度：使用ELISA阅读器测量吸光度，得到结果三、实验结果与讨论本实验使用ELISA方法成功检测到了目标抗原的存在。

在测量吸光度的过程中，我们发现样品中目标抗原与特异性抗体发生特异性结合，而其他非特异性的物质则被洗涤缓冲液去除。

根据实验结果，我们可以通过吸光度的数值判断样品中目标抗原的含量或存在与否。

通常情况下，吸光度数值越高，说明目标抗原的含量越高。

需要注意的是，在进行ELISA实验时，实验操作的准确性和仪器的稳定性对结果的准确性有重要影响。

因此，在实验过程中，我们应严格控制实验条件，并对仪器进行校准。

四、实验结论免疫酶联免疫吸附实验是一种有效的检测目标抗原的方法。

通过特异性抗体与待测样品中的目标抗原结合，再通过酶的特异性反应，我们可以通过测量吸光度来判断目标抗原的存在与否。

两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验(ELISA)与聚合酶链式反应(PCR)

两种常见病毒检测方法的比较：酶联免疫吸附试验（ELISA）与聚合酶链式反应（PCR）病毒是以细胞为宿主，并以该宿主细胞的代谢作为生存依据的生物。

由于其微小的体型和嗜生特性，病毒常常会潜伏在人体内多年，甚至终身不愈。

而这种情况会带来许多的健康问题以及社会问题。

因此了解病毒的相关信息是非常重要的。

对于病毒检测来说，酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链式反应（PCR）是常见的方法。

本文将分析这两种方法的优缺点，以此帮助我们更好地了解它们的应用及其适用范围。

一、酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常见的病毒检测实验方法，适用于多种病原微生物、细胞因子及荷尔蒙的检测。

其操作简单、灵敏度高、准确性较好，并且适用范围较广。

ELISA包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式，其具体步骤如下：1.将待检物质加入到已知化合物（即抗原或抗体）涂覆的孔板上；2.孔板中的化合物与待检物质结合（如果是抗原与待测抗体结合），形成复合物；3.孔板洗涤去除未结合的化合物；4.添加检测标签（如酶）标记的二抗（即特异抗体），与复合物结合；5.孔板再次洗涤去除未结合的标记化抗体；6.加入显色试剂使结合的酶反应产生颜色。

ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等。

ELISA的优点：1.ELISA方法灵敏度较高，能够检测到低浓度的病毒。

2.操作简单、快速、适用范围广泛。

3.具有良好的灵敏度和特异性。

4.ELISA试剂盒的制备和多孔板处理过程已成规模化生产，价格也逐渐变得负担得起。

ELISA的缺点：1.ELISA方法很难检测出病毒的亚型。

2.在复杂的样品里，ELISA方法可能出现假阴性或假阳性结果。

3.ELISA方法不适用于大型的病毒颗粒,或者是样品中含有被病毒感染的细胞。

二、聚合酶链式反应（PCR）PCR方法是在1983年由Mullis发明的一种可以扩增DNA序列的技术。

该技术对于病毒检测来说具有极高的灵敏度，能够在非常短的时间内扩增目标DNA序列，并对其进行探测和测量。

酶联免疫吸附实验ELISA

设备的选择与使用
ELISA实验的主要设备包括酶标板、加样器、洗板机、酶标仪等。
使用洗板机时需要注意洗涤液的更换，以保证实验结果的可靠性。
选择质量可靠的酶标板和加样器，保证实验结果的准确性。
使用酶标仪时需要注意波长和光路的调整，以及标准曲线的制作。
ELISA实验注意事项
在实验过程中需要注意操作环境的清洁，避免污染。
灵敏度
通过放大信号和提高灵敏度，ELISA实验可以实现对低浓度样本的检测，如病毒、细菌、细胞因子等。
ELISA的应用
02
ELISA实验步骤
实验开始前，需要清洗实验室器具并消毒，确保实验过程无污染。
清洗与消毒
器材准备
试剂准备
准备实验所需的各种器材，如酶标板、吸管、移液器等。
根据实验方案准备所有必需的试剂，包括酶标抗体、待测样本、标准品等。
酶标记二抗
加入底物溶液，在酶的作用下，底物发生化学反应，产生颜色变化，通过测量颜色变化可以实现对目标分子的定量或定性分析。
底物显色
特异性检测
ELISA实验可以用于特异性检测一种抗原或抗体，排除其他干扰因素的影响。
定量分析
通过加入不同浓度的标准品和未知样本，绘制标准曲线，可以实现对未知样本的定量分析。
调整抗原浓度，以提高抗体结合效率。
合理选择样本
选择具有代表性的样本，避免使用不适当或污染的样本。
控制温育时间
合理安排温育时间，以获得最佳的抗体抗原结合效果。
确定最佳的检测波长
选择最佳的检测波长，以获得最大的光吸收值。
选择合适的洗涤液
选择洗涤液的浓度和pH值，以去除未结合的物质。
应用拓展实例分享
ELISA被广泛应用于多种疾病的诊断，如感染性疾病、自身免疫性疾病和癌症等。

酶联免疫吸附试验

▲ 因此，双波长比色测定具有能排除由微孔板本身、板孔内标本的非特异性吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色干扰的优点。
酶联免疫吸附试验
四、全自动酶免工作站
1、加样模块 2、孵育模块 3、洗板模块 4、读数模块 5、控制模块（软件）
医院计生站疾控中心
全自动--从加样、孵育、洗涤到数据处理打印报告都由仪器自动完成；无污染--直接使用原样本试管和原试剂瓶，消除生物污染和试剂污染；高效率--一次性处理样本量大；
酶联免疫吸附试验
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）概述
▲ 基本原理：抗原抗体的特异性结合以及抗SA）概述
酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。
从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
抗体：是由抗原刺激动物的免疫系统后，由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
酶结合物：酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。
（药品冷藏箱（2~8℃））结果分析
吸光度测量
孵育
加入终止液
酶联免疫吸附试验
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程
例：饲料中黄曲霉毒素B1的检测
天平
粉碎机
电动振荡器
移液器
酶联免疫吸附试验
离心机
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作流程

酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附试验ELISA一种酶联免疫技术。

用于检测包被于固相板孔中的待测抗原（或抗体）。

即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。

酶联免疫吸附试验（以下简称ELISA）:是酶免疫测定技术中应用最广的技术。

其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。

常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。

此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。

因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。

目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。

1•辣根过氧化物酶（HRP）过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最咼，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%）,分子量约40000,约由300个氨基酸组成，等电点为pH3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH5左右。

此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。

酶联免疫吸附法实验步骤

酶联免疫吸附法实验步骤
酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测特定的抗原或抗体。

以下是一般的酶联免疫吸附法实验步骤：
1. 准备实验材料和试剂：包括抗原、抗体、控制样品和待测样品等。

2. 预处理样品：将待测样品加入适当的缓冲液，如PBS（磷
酸盐缓冲液）进行稀释和预处理。

3. 涂布抗原：将抗原溶液加入到孔板的孔中，并尽量避免产生气泡。

4. 孵育：将孔板放置在温度适宜的湿润箱中，孵育一段时间，使抗原与孔板表面结合。

5. 洗涤：将孔板倒置并轻轻敲打使液体排尽，然后用洗涤缓冲液（如PBS-T）冲洗孔板孔中的未结合的物质。

6. 加入第一抗体：将稀释好的第一抗体加入到孔板孔中，与抗原结合。

7. 洗涤：重复第5步，洗涤孔板孔中的未结合的第一抗体。

8. 加入酶标记的第二抗体：将酶标记的第二抗体加入到孔板孔
中，使其与第一抗体结合。

9. 洗涤：重复第5步，洗涤孔板孔中的未结合的酶标记的第二抗体。

10. 加入底物：加入染色底物，使酶催化底物发生颜色反应。

11. 反应停止：通过加入停止溶液，停止酶的催化作用，阻止底物继续反应产生颜色。

12. 测量吸光度：使用酶标仪或光度计，测量样品孔板中的吸光度。

13. 数据分析：根据吸光度值，分析样品中的抗原或抗体的浓度或相对含量。

以上是一般的酶联免疫吸附法实验步骤，具体的步骤可能会根据实验目的和试剂的不同有所调整。

酶联免疫吸附试验(ELISA)

前两种方法主要用于测定抗体和大分子抗原，适用于临床诊断上，而竞争法事测定小分子抗原的方法，因而尤其适用于食品分析。
ELIZA 方法图示
间接法
“Indirect” ELISA
The steps of "indirect" ELISA follows the mechanism below: 1. A buffered solution of the protein antigen to be tested for is added to each well of a microtiter plate, where it is given time to adhere to the plastic through charge interactions. 2. A solution of non-reacting protein, such as bovine serum albumin, or casein is added to block any plastic surface in the well that remains uncoated by the protein antigen. 3. Then the serum is added, which contains a mixture of the serum donor's antibodies, of unknown concentration, some of which may bind specifically to the test antigen that is coating the well. 4. Afterwards, a secondary antibody is added, which will bind any antibody produced by a member of the donor's species (for example, an antibody produced in a mouse that will bind any rabbit antibody). This secondary antibody often has an enzyme attached to it, which has no effect on the binding properties of the antibody. 5. A substrate for this enzyme is then added. Often, this substrate changes color upon reaction with the enzyme. The color change shows that secondary antibody has bound to primary antibody, which strongly implies that the donor has had an immune reaction to the test antigen. This can be helpful in a clinical setting, and in R&D. 6. The higher the concentration of the primary antibody that was present in the serum, the stronger the color change. Often a spectrometer is used to give quantitative values for color strength

酶联免疫吸附试验 elisa实验小结

酶联免疫吸附试验 elisa实验小结酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测和测定某种特定分子（如蛋白质、抗体、细胞因子等）在样本中的存在量。

ELISA具有高灵敏度、高特异性、简便快速的特点，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物检测等领域。

ELISA实验基本原理是利用酶标记的二抗或底物与待检测物相互作用，经过一系列的反应和洗涤步骤，最终通过检测酶的活性来确定待检测物的存在量。

ELISA实验通常包括固相法和溶液相法两种类型。

固相法ELISA实验是最常见的一种方法。

首先，在微孔板或其他固定平台上涂覆抗原或抗体，形成固定层。

然后，加入待检测样本，经过一定的时间和条件，待检测物与固定层发生特异性结合。

接下来，加入酶标记的二抗或底物，经过反应和洗涤步骤，使酶与固定层结合。

最后，加入底物溶液，酶与底物发生反应产生显色物质，通过测量显色物质的光密度来确定待检测物的存在量。

溶液相法ELISA实验则是将待检测物和酶标记的二抗或底物在溶液中进行反应，然后通过洗涤步骤和显色反应来检测酶的活性。

溶液相法相较于固相法更为简便快速，但灵敏度和特异性较低。

ELISA实验的关键步骤包括：样品的制备和稀释、试剂的配制和保存、孔板的涂覆、样品的孔板加样、洗涤步骤、酶标记试剂的加入、显色反应、结果的测量和分析等。

在进行ELISA实验时，需要严格控制实验条件，避免污染和误差的产生，确保实验结果的准确性和可靠性。

ELISA实验在生物医学研究中有着广泛的应用。

例如，在疾病的早期诊断中，ELISA可用于检测特定蛋白质或抗体的存在，帮助医生确定疾病的类型和严重程度。

在药物研发中，ELISA可用于测定药物在体内的代谢产物或药物与靶点的相互作用。

此外，ELISA还常用于病原微生物的检测和病毒抗体的筛查等领域。

总结来说，ELISA是一种重要的实验方法，可广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

酶联免疫吸附测定法elisa

酶联免疫吸附测定法elisa酶联免疫吸附测定法（ELISA）的原理酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种广泛用于生物医学研究和诊断的免疫分析技术。

ELISA 的原理基于抗原抗体特异性结合的原理，通过标记酶的抗体来检测目标抗原或抗体。

ELISA 的种类根据检测方法的不同，ELISA 可分为以下几种类型：直接 ELISA：将待测样品直接加入固定在微孔板上的抗原或抗体上，然后用标记酶的抗体检测。

夹心 ELISA：微孔板固定一层捕获抗体，待测样品通过捕获抗体与检测抗体结合，然后用标记酶的抗体检测。

竞争性 ELISA：待测样品与标记抗原竞争结合固定在微孔板上的抗体，标记抗原和待测样品结合量成反比。

ELISA 的步骤ELISA 的主要步骤包括：抗原或抗体固定：将待测抗原或抗体固定在微孔板上。

样品孵育：将待测样品加入微孔板，进行孵育。

洗涤：去除未结合的样品。

添加标记抗体：加入标记酶的抗体，再次孵育。

洗涤：去除未结合的标记抗体。

底物反应：加入底物，酶促反应产生有色产物。

终止反应：加入终止液，停止酶促反应。

测量吸光度：测量有色产物的吸光度，吸光度与样品中抗原或抗体浓度成正比。

应用ELISA 具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点，广泛应用于以下领域：诊断：检测传染性疾病（如艾滋病毒、乙肝）、自身免疫疾病（如类风湿性关节炎）、癌症标志物等。

研究：研究抗原抗体相互作用、免疫应答、药物开发等。

食品安全：检测食品中的残留农药、抗生素等。

环境检测：检测水体或土壤中的污染物。

注意事项进行 ELISA 时需要注意以下事项：抗体的特异性和亲和力：使用的抗体必须具有高特异性和亲和力，以确保准确的检测结果。

样品准备：样品应经过适当的处理，去除干扰物质，以获得准确的结果。

优化条件：ELISA 反应条件（如孵育时间、温度）应经过优化，以获得最佳检测灵敏度和特异性。

背景信号：应使用阴性对照进行检测，以去除背景信号的影响。

质量控制：应使用已知浓度的标准品进行质量控制，以确保检测结果的准确性和可重复性。

酶联免疫吸附试验名词解释

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量测量体液或组织中特定抗原或抗体的存在。

以下是对ELISA的各个部分和步骤的解释：酶联（Enzyme-Linked）：ELISA利用酶的特性将目标分子（抗原或抗体）与检测信号相关联。

常用的酶有辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）和碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，AP）。

这些酶可以催化底物的反应，产生可定量测量的光学信号。

免疫（Immuno）：ELISA利用抗原和抗体之间的特异性免疫反应。

在ELISA中，试验板的表面被覆盖或固定上特定抗原或抗体，以捕获待测样本中的目标分子。

吸附（Sorbent）：试验板表面上固定的抗原或抗体能够吸附或结合待测样本中的特定抗体或抗原。

这种特异性结合是ELISA测量的基础。

试验步骤：ELISA通常包括以下步骤：捕获：将特定抗原或抗体固定在试验板表面，使其能够与待测样本中的目标分子结合。

样本加入：待测样本（例如血清、尿液或细胞上清）被加入试验板孔中，与固定的抗原或抗体发生特异性结合。

洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合的物质，以减少背景信号。

探针加入：添加与目标分子特异性结合的酶标记抗体或抗原，与待测样本中的目标分子进一步结合。

洗涤：再次进行洗涤步骤以去除非特异性结合的物质。

底物加入：加入适当的底物，允许酶催化反应，生成可测量的光学信号。

读数：通过光度计或荧光检测器测量底物反应产生的光学信号强度，从而确定目标分子的存在和数量。

ELISA在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域广泛应用。

它可以用于检测病原体感染、抗体水平测定、药物浓度测定等多种应用。

ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简便和可扩展性的优点。

酶联免疫吸附实验ELISA

酶联免疫吸附实验ELISA
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再加入酶标识抗原或抗体, 也经过反应而结合在固相载体上。此时固相上酶量与标本中受检
物质量呈一定百分比。加入酶反应底物后, 底物被酶催化成为有色产物, 产物量与标本中受检物质量直接相关, 故可依据呈色深浅进行定性或定量分析。因为酶催化效率很高, 间接地放大了免疫反应结果, 使测定方法到达很高敏感度。
酶联免疫吸附实验ELISA
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2.1.2 包被方式将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。
换言之, 包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合, 靠是蛋白质分子结构上疏水基团与固相载体表面疏水基团间作用于。这种物理吸附是非特异性, 受蛋白质分子量、等电点、浓度等影响。
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惯用检验方法为: 以一定浓度人IgG（普通为 10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数平均值。全部单个读数与全部读数均数之差，应小于10%。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫吸附实验ELISA
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1. ELISA原理 ELISA基础是抗原或抗体固相化及抗原或抗
体酶标识。结合在固相载体表面抗原或抗体仍保
持其免疫学活性, 酶标识抗原或抗体既保留其免疫学活性, 又保留酶活性。
酶联免疫吸附实验ELISA
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在测定时, 受检标本（测定其中抗体或抗原）与固相载体表面抗原或抗体起反应。用洗涤方法使固相载体上形成抗原抗体复合物与液体中其它物质分开。