茯苓多糖的提取分离方法研究

观察范围。
治疗感染病灶则成为提高治愈率、降低复发率的有效方法。α-2b
1.2 一般资料 共选择符合条件病例 110 例，按就诊顺序随 干扰素系一种基因重组干扰素，具有广普抗病毒作用及免疫调节
机分成二组。治疗组 55 例，其中男 38 例，女 17 例；平均年龄 功能[3]，它能增强免疫功能，其机制在于调节机体的免疫监视、防
３ 讨论
溶液浸泡，过夜。Beckman J2 - HS 离心机 6000 rpm 离心 15min，
3.1 对茯苓中多糖的提取分离还仅仅将其分为不同碱溶性多
得上清液，浓缩 3 倍，用 95%乙醇沉淀，其中上清液为提取产物 糖。应进一步分析其分子量、粘度及其单糖组成和结构特征。尤其
PC1；沉淀残渣于 120℃的热水中提取 30 分钟，6000 rpm 离心 不同分子量多糖抗肿瘤活性都可能存在差异，也有待通过进一步
当代医学 2009 年 1 月第 15 卷第 3 期总第 158 期 Contemporary Medicine,Dec.2009,Vol.15 No.3 Issue No.158
茯苓多糖的提取分离方法研究
邱绿琴 杨惊宇 吴宗彬
［摘要］ 目的 探讨茯苓多糖的提取及纯化方法。方法 将新鲜茯苓进行粉碎、脱脂、水提、碱提等步骤提取纯化茯苓多糖。结果 经过提取纯化可 以得到茯苓多糖，并不含蛋白杂质。结论 该方法简便易行，为进一步研究茯苓多糖水解特性，抗肿瘤的药理作用和制剂优化提供依据。
残渣 离心，120℃热水提取 30 分钟
茯苓多糖体］，则在动物试验中呈现了强烈的抗肿瘤作用，茯苓抗
肿瘤的作用机理是多方面的，如羧甲基茯苓多糖对癌细胞的抑制 作用是通过抑制 DNA 合成而实现的，但茯苓多糖体的主要作用 与其他真菌多糖一样能非特异地刺激网状内皮系统和血液系统 功能，促进免疫系统功能，从而提高对癌细胞特异抗原的免疫能 力，达到对癌的抵抗作用。
性别、病程均具有可比性。
寡核苷酸合成酶的活性，从而增加或诱导细胞表面主要组织相容
1.3 治疗方法 治疗组口服阿昔洛韦 0.2g，每天 5 次，连服 3 复合物抗原的表达[4]。因此，理论上干扰素对防止潜伏病毒的再次
周后改为每天 2 次，共服 2 个月；同时予以 2%利多卡因 2ml+重组 复制以及提高机体抵抗能力能发挥一定作用。国内已有较多文献
［关键词］ 茯苓多糖;提取分离
Medication & Clinical
茯苓是多孔菌科卧孔菌属的真菌，茯苓的主要成分是 β-茯苓 砜 （DMSO），发现提取产物 PC3 不溶于水，易溶于 DMSO ，在
聚糖（约占干重的 93%）和三萜类化合物如乙酰茯苓酸、茯苓酸、 0.5MNaOH 中易形成凝胶，与文献报道的茯苓多糖的物性基本吻 3β-羟基羊毛甾三烯酸。此外，还含有甲壳素、蛋白质、脂肪、甾醇、 合[3]。该产物用正丁醇，、无水乙醇，水为 315∶3∶3 溶剂为展开剂，展
２ 结果与结论
速粉碎机，索式提取器，旋转蒸发仪，抽滤瓶，真空干燥机，冰箱，
新鲜茯苓干燥粉碎，再经过脱脂、水提、稀碱提取等步骤可以
透析袋，DEAE-Sephadex(A-50) 凝胶层析柱；乙醇、丙酮、乙醚、甲 得到茯苓多搪产物。此方法简便易行，操作周期短，而单纯水煮法
酸、乙酸和 NaOH 等试剂均采用国产分析纯。
α-2b 干扰素 200 万 u 于皮损处呈放射状注射，每周 1 次，连续 2 报道并肯定了干扰素治疗尖锐湿疣和降低其复发率的功效。在治
个月（共 8 次）。对照组单纯口服阿昔洛韦，服法同治疗组。随访半 疗复发性生殖器疱疹的过程中，本观察显示阿昔洛韦联合重组 α-
年后评价疗效。
2b 干扰素局部注射能显著降低其复发率，治疗简单易行，患者乐
再用蒸馏水洗涤 2 次得提取产物 PC3，最后的残渣加入 88%甲酸 到分子量较小的具有抗肿瘤活性的 β-(1→3)葡萄糖聚糖，将进一
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
提取，用蒸馏水沉淀，得提取产物 PC4。以上四种提取产物分别用 步开发成茯苓多糖注射剂。
Sevag 法除去蛋白质和透析法纯化，精制，最后在 50℃以下用旋转
蒸发仪旋转蒸发浓缩，并真空干燥，得到 4 个粉末状产物，即淡黄
提取率较低，浓碱法提取溶液稠度大，难以进一步优化制剂工艺。
1.3 提取分离方法 取新鲜茯苓菌核去皮，室温干燥，微型高 该提取方法将为进一步研究茯苓多糖水解特性，抗肿瘤的药理作
速粉碎机均匀粉碎，至能通过 60 目筛得到茯苓粗粉。茯苓粗粉分 用和制剂优化提供依据。
别用乙醚、丙酮在索式提取器回流脱脂 4 小时，残渣用 0.9%NaCl
本文讨论的是将茯苓多糖提取分离纯化的制备工艺，为以后
上清液
残渣
DEAE-Sdphadx 离心，4℃，0.5MNaOH 提取
PC2
上清液 PC3
残渣 离心，甲酸提取，水沉
多糖进一步降解研究做先期准备。 １ 材料与方法
上清液 PC4 残渣（弃去）
1.1 材料：新鲜茯苓。
图 1 茯苓多糖的提取分离流程图
1.2 实验主要仪器及试剂 离心机(Beckman J2 - HS)，微型高
临
内有过 1 次以上生殖器疱疹病史，在外阴部有水疱或糜烂面，就 型引起，常反复发作[1]。持续或复发的原因之一与细胞免疫功能低
床
诊前一个月没接受过其他抗病毒药物治疗，合并有其他病原体感 下有关[2]。目前首选治疗药物是阿昔洛韦及其衍生物，疗效确切，
Medication & Clinical
染或有心、肝、肾、血液系统、神经系统等疾患和孕妇均不纳入本 但单独使用复发率仍较高。因而，有效地提高机体的免疫力，彻底
[4]高杰，李玉欣，于占华，等.茯苓多糖提取方法研究[J]. 吉林中医药， 2007，27(9):60.
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[2]杨正凤.万乃洛韦干扰素和胸腺脉肽治疗复发性生殖器疱疹的对 比观察[J].中国皮肤性病学杂志，2003，17（5）：327-328
[3]胡建农，α-干扰素治疗尖锐湿疣的疗效观察[J].中国皮肤性病学杂 志，1997，11（6）：190.
[4]陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].第 15 版.北京：人民卫生出版 社，2002，714-715.
院自 2004 年~2006 年间，采用口服阿昔洛韦联合局部注射重组 良反应。全部患者均无肝肾功能、血液系统、神经系统损害或其他
α-2b 干扰素治疗复发性生殖器疱疹，取得了较好的疗效，现报告 疾患出现。
如下。
３ 讨论
药
１ 资料与方法
生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒（HSV）感染所引起的一种最常
物
与
1.1 病例选择 所有病例均系我院门诊患者，就诊前 3 个月 见的性传播疾病，90%病例由 HSV-2 型引起，10%病例由 HSV-1
阿昔洛韦联合干扰素局部注射治疗复发性生殖器疱疹 临床观察
王敏
［摘要］ 目的 观察阿昔洛韦联合重组 α-2b 干扰素局部注射治疗复发性生殖器疱疹的疗效。方法 治疗组口服阿昔洛韦 0.2g，每天 5 次，连服 3 周 后改为每天 2 次，共服 2 个月，同时予以重组 α-2b 干扰 200 万 u 皮损部注射，每周 1 次，共 8 次；对照组单纯口服阿昔洛韦，服法同治疗组。结果 治疗 组和对照组复发率分别为 25.45%和 63.64%，两组比较差异有显著性（x2=16.23，P＜0.01）。结论 阿昔洛韦联合重组 α-2b 干扰素局部注射治疗复发性生 殖器疱疹疗效明显优于单独使用阿昔洛韦，能够显著降低其复发率。
[2] 沈映君. 中药药理学[M] . 第一版. 上海科技出版社,1995. 87-89.
作者单位 ５１８１３３ 深圳市宝安区中医院（邱绿琴 杨惊宇 吴宗彬）
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当代医学 2009 年 1 月第 15 卷第 3 期总第 158 期 Contemporary Medicine,Dec.2009,Vol.15 No.3 Issue No.158
［关键词］ 复发性生殖器疱疹；阿昔洛韦；α-2b 干扰素；局部注射
复发性生殖器疱疹目前尚无十分有效的根治办法，临床上常 76.36%（42/55）出现程度不等的畏寒、发热、肌痛等流感样症状，经
采用长期口服抗病毒药物来控制其复发，但疗效亦不甚理想。本 口服阿斯匹林后症状消失，均未影响治疗。对照组未出现明显不
表 1 两组生殖器疱疹患者治疗后 6 个月内复发情况比较 例
组别
例数
复发
未复发
复发率(%)
治疗组
55
14
41
25.45
对照组
55
35
20
63.64
2.2 不良反应 治疗组患者在局部注射重组 α-2b 干扰素后
[1]朱学骏，顾有守，沈丽玉.实用皮肤病性病治疗学[M]第三版.北京大 学医学出版社，2005，504.
15min，上清液通过 DEAE-Sephadex(A-50) 凝胶层析柱，分离，得 的研究来验证。
提取产物 PC2；沉淀残渣再用 0.5MNaOH 在 4℃提取，得胶状提取
3.2 我们得到的 PC3 茯苓多糖体分子量仍很大，粘度大，不
液，4℃冰箱过夜，6000 rpm 离心 15min，上清液用 10%乙酸沉淀， 利于体内吸收，也不利于制剂，需要进一步研究水解技术，以期得
1.4 疗效判定标准 6 个月内未出现皮损者为未复发，6 个月 于接受，值得临床推广。
内出现皮损者为复发。
２ 结果
参考文献
2.1 临床疗效 见表 1。
治疗组复发 14 例，复发率为 25.45%；对照组复发 35 例，复发
率为 63.64%，两组复发率比较，x2=16.23，P＜0.01，差异有显著性。
参考文献
色粉末 PC1，棕色粉末 PC2 和白色粉末 PC3、PC4。提取如图 1。 1.4 茯苓多糖的鉴定 将淡黄色粉末 PC1，棕色粉末 PC2 和
白色粉末 PC3、PC4 四种提取产物分别溶于水，溶于碱和二甲基亚
[1]中国药科大学主编. 中药辞海(第二卷)[M]. 第一版.北京:中国医药 科技出版社,1996.1272-1278.
眩悸，脾虚食少，心神不安，惊悸失眠等病症[1，2]。但近年来最受人
茯苓粗粉
药
关注的是其抗肿瘤作用。
物
茯苓中的主要成分为茯苓聚糖(Pachyman)，含量很高。茯苓聚
乙醚和丙酮脱脂 4 小时，加入 0.9%NaCl 溶液放置过夜
与
临 床
糖本身无抗肿瘤活性，若切断其所含的 β-(1→6)吡喃葡萄糖支链， 成为单纯的 β-(1→3)葡萄糖聚糖［称为茯苓次聚糖(Pachymaran)或 上清液 PC1
卵磷脂、胆碱、酶、无机元素等。茯苓药性平和，“利水而不伤正，补 开约 2 小时以氨制硝酸银试剂喷雾，于 105℃烘烤 5~10min ，显褐
而不助邪”，主要的药理作用为渗湿利尿，和胃健脾，宁心安神，抑 色斑说明该产物为多糖成分，同时以茚三酮试剂喷雾于 110℃烘
菌，增强机体抗病能力和降低血糖功效。主要用于水肿尿少，痰饮 烤 5min，不显紫斑，说明该产物不含蛋白杂质[4]。
34.34±8.56 岁；平均病程 3.65±1.45 年；对照组 55 例，男 41 例，女 御和稳定功能，使杀伤细胞 （NK）、TC 细胞的细胞毒杀伤作用增
14 例，平均年龄 33.31±9.18 岁；平均病程 3.83±1.12 年。两组年龄、 强，使吞噬细胞的活动增强，能诱导外围血液中单核细胞的 2、5-
作者单位 ４１３５００ 湖南安化 安化县人民医院皮肤科（王敏）
[3]G. Chihara, J. Hamuro, Y. Maeda, et al. Antitumor polysaccharide derived chemically from natural glucan (pachyman). Nature ，1970（225）：943 -944.