乙肝病毒血清学检测方法进展与比较

乙肝病毒血清学检测方法进展与比较

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所导致的一种在全球广泛流行的传染病，全世界HBsAg携带者有3.5亿人。据世界卫生组织报道，全球每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国属HBV感染高流行区，流行病学调查，一般人群的HBsAg阳性率为7.18%[1]，因此乙型肝炎病毒的检出对于乙肝的各项防治工作至关重要。

目前临床用于乙型肝炎病毒血清免疫学标志物检测的方法、试剂很多，各具特点，如用于定性的胶体金方法（GICA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）；用于定量的则有化学发光法（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）等。本文就乙肝病毒血清学检测方法介绍及对比综述如下：

一乙肝病毒血清血检测方法研究进展

1、GICA

GICA，全称是胶体金免疫层析法（gold immuno chromatographic Assay），其优点是快速、不需仪器设备、单份测试成本低，但由于其只能进行定性检测且灵敏度较低，比较适合急诊和基层医疗机构作检测诊断。

2、ELISA

ELISA，全称是酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosor-bent assay），主要优点是经济，成批检测时间短，检测率高、不需要特殊仪器而且操作简单试剂容易保存，在我国被广大基层医院普遍应用。但由于它只能进行定性测定或半定量测定，且特异性不强、线性范围小、易产生钩状现象，故ELISA在对敏感性要求极高的血站及手术室等不适用。

3、TRFIA

TRFIA，全称是时间分辨荧光免疫分析法（time resolved fluoroim-munoassay），它是近年来发展起来的一种无污染、高灵敏度的免疫标记技术，以三价稀土离子作为示踪物，应用时间延迟技术消除标本中的非特异性荧光以提高灵敏度，再加上其特有的荧光解离增强技术使有效荧光增强，使其适用于生物学及医学的超微量分析度。但由于其检测时间较长，标本消耗量大，只适用于成批检测，不适于单份样本操作[3]。

4、CLIA

CLIA，全称是化学发光法（chemiluminescence immunoassay），它主要是使用固相性载体为顺磁性微粒，该种微粒直径为2.8μm，因微粒体积小，和相同体积的塑料珠相比其表面积增大，所以扩大了反应面积。同时因标志物循环利用，

增强了发光的强度和时间，提高了检测的灵敏度。其优点是检测时间短，灵敏度与特异性高，逐渐在我国大、中型综合性医院中开展。CLIA因需配套的仪器设备与试剂，其检测成本高，难以在基层医院开展。

二乙肝病毒血清学检测方法比较

1、精密度和灵敏度

GICA 检测线的显色速度及强度与HBsAg的含量成正比。强阳性样品5分钟内即可显色。弱阳性样品10分钟内也可显色，静置30分钟可保证达到最高灵敏度。在国外较好的金标试纸在检测HBsAg灵敏度可接近ELISA。

ELISA半定量的精密度为批内变异≤8.23%，最大日间变异≤16.69%；其灵敏度在检测HBsAg时为：0.5ng/ml。

TRFIA在检测乙肝两对半时灵敏度如下：HBsAg ：0.2ng/ml；HBsAb：40mIU/ml；HBeAg ：0.5 NCU /ml；HBeAb：4 NCU /ml ；HBcAb：0.2 NCU /ml。TRFIA批内变异系数均小于10%。

CLIA最后测定的是光子的量，其敏感度在检测乙肝两对半时如下：HBsAg ：0.05ng/ml；HBsAb：0.5 mIU/ml；HBeAg ：0.3 NCU /ml；HBeAb：1.3NCU/ml ；HBcAb：0.06 NCU /ml。国内有文献报道采用化学发光法检测乙肝病毒学5种血清血标志物最小批内精密度为2.90%，最小批间精密度为6.04%[8]。

2、线性范围

CGIV 只能进行定性检测，不能测出线性范围；ELISA半定量检测方法线性范围比较窄，其检测HBsAg的线性范围是0.5～4.0ng/ml；TRFIA的线性范围在检测HBsAg时为0.2-300ng/ml。CLIA的线性范围为最宽，在检测HBsAg时为0.05-1000ng/ml，可以较为准确地反映HBsAg在血清中的含量。

三各种检测单位的解读

乙肝病毒血清学检测方法中TRFIA 、CLIA可用于定量检测，但因检测采用的单位不同，给临床医生和患者正确解读检验报告并将检验報告结果用于诊疗带来困难。常用的单位包括ng/ml、mIU/ml、NCU/ml、PEIU/ml、S/CO值等。

ng/ml表示每毫升中含有的纳克数，常在检测HBsAg的浓度时使用。因HBsAg为抗原，在HBsAg定量检测时只有国际单位IU/ml和ng/ml等单位可以与其转换，其转换关系是1IU=0.5ng。

mIU/ml表示每毫升中含有的毫单位数，常在检测HBsAb的浓度时使用。

NCU/ml 英文全称是national clinical unit，是国家卫生部临检中心单位

（Nation health laboratory center units），定义是使用国际上公认的一流公司的试剂盒检出原血清中某物质的最低含量称为1NCU/ml。常在检测HBeAg和HBeAb 等浓度时使用。它与质量浓度单位ng/ml并没有直接的换算关系，也不能与国际单位IU/ml换算。

PEIU/ml是基于Paul-Ehrlich-Institute标准（联邦血清与疫苗管理局标准），是德国制定的一个国家标准，常在检测HBeAg和HBeAb等浓度时使用。S/CO 值中的S表示样本（sample），CO表示临界值（cut off）。临界值CO一般定在阴性对照物的 2.1倍，即CO = N×2.1，如果阴性光密度值为0.05，CO = 0.05×2.1=0.105。S/CO≥1判为阳性，S/CO<1判为阴性。在定量检测中S/CO值的大小表示超出临界值的倍数，例如S/CO值为356，即阳性值大于临界值356倍。

NCU/ml、PEIU/ml、mIU/ml均为相对定量单位，且它们之间因受检测试剂的影响，所以它们之间不存在换算关系。

综上所述，我们发现不同的乙肝病毒检测方法各有其优缺点，如传统的ELISA在检测乙肝血清病毒时存在灵敏度欠佳，线性范围窄、对低浓度乙肝血清病毒检测存在漏诊情况，所以如何针对病人情况选择最好的乙肝血清病毒检测方法至关重要；其次不同乙肝病毒检测方法间的单位无明确换算关系，有时对于低浓度乙肝血清病毒病人仍需多种检测方法同时进行以综合判断病人病情。

参考文献

[1]等.实用内科学

[2]李君、陈娟等.慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA与HBeAg、HBeAb含量的关系. [J]东南大学学报.2004.23（4）：250-252

[1]张秀明、熊继红、杨有叶等. 2011年. 临床免疫学检验质量管理与标准操作程序. 人民军医出版社

[2]刘锡光、祁自柏、熊诗松等. 1998年第二版.病毒性肝炎实验诊断学. 人民卫生出版社

[3]乔艳红.乙肝病毒表面抗体TRFIA方法的建立及其应用[J].标记免疫分析与临床.2007，14（1）：24-26

[4]杜锦池. 时间分辨荧光技术在乙型肝炎两对半检测中的应用研究[J].中国医药指南.2013，11（7）：202-204

[5]龙绍芬. 乙肝两对半定量检测结果分析[J].实验与检验医学.2012，30（2）：187-188