(动物传染病学实验课件)8 血凝和血凝抑制试验

一、Biblioteka Baidu验目的
血凝和血凝抑制试验的原理。 实验操作步骤和结果判定。
血凝试验结果判定
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血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
10 RBC RBC
1:210
50 50 50 50 弃 5/0μl / 50 50 50
（二）血凝抑制试验（HI）
1. 1~11孔加入25μl生理盐水; 2. 第1孔加待检血清25μl，倍比稀释至第10孔; 3. 1~11孔加25μl 4个血凝单位的病毒悬液; 4. 1~12孔中每孔加入1%的红细胞50μl; 5. 震荡后置37℃25~30min观察结果; 6. 红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
HI试验的原理图
三、实验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota） 接种鸡胚、收获尿囊液制备。
2. 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝， 以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充 分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使 用。
3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
五、结果判定
血凝价是1:2？； 血凝抑制价是1:2？； 被检血清为阴还是阳性?
≥1:24为阳性 血凝抑制价 ＜1:22为阴性
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
Virus Cell
血清
25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl /
/
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
血凝抑制试验结果判定