(动物传染病学实验课件)8 血凝和血凝抑制试验
合集下载
血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)ppt课件
3
1.2 血凝类型： (1) 可逆转型 血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，
病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清 液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆 的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的 血凝素后，可再与该血凝素发生凝集。 如天花、鼠疫等病毒。
4
(2) 不可逆转型 血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特殊处
2.1采血 用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡， 可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与 阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。 2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃 上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分 钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过 程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过 5天。 2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离 心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管 中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的PBS，用吸管反复吹吸使PBS与红 细胞混合均匀。 2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mLPBS， 混合均匀即可。
11
2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
1.2 血凝类型： (1) 可逆转型 血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，
病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清 液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆 的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的 血凝素后，可再与该血凝素发生凝集。 如天花、鼠疫等病毒。
4
(2) 不可逆转型 血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特殊处
2.1采血 用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡， 可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与 阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。 2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃 上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分 钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过 程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过 5天。 2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离 心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管 中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的PBS，用吸管反复吹吸使PBS与红 细胞混合均匀。 2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mLPBS， 混合均匀即可。
11
2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
实验四血凝和血凝抑制试验课件
02
实验材料
实验器材
01
02
试管
用于血样的采集、分离和反应 。
吸管
用于吸取试剂和血样。
03
离心机
用于血样的分离。
04
显微镜
用于观察血凝现象。
实验试剂
生理盐水
用于稀释血样和作为反应介质 。
抗血清
用于血凝抑制试验，针对特定 病毒或细菌。
凝血酶
促使血液凝固的酶。
抗凝剂
如肝素，防止血液凝固。
实验样本
出了抗体滴度与病毒滴度之间的关系。这一发现有助于评估抗体治疗效
果和制定抗病毒治疗方案。
05
注意事项与安全须知
实验安全须知
01
实验操作应在专业人员 的指导下进行，确保安 全。
02
实验过程中应穿戴实验 服和防护眼镜，避免意 外伤害。
03
实验器材应保持清洁， 避免交叉污染。
04
实验废弃物应按照规定 进行处理，避免对环境 和人体造成危害。
血凝抑制试验
利用抗体与相应抗原结合后，抑 制红细胞发生凝集的现象。
实验步骤
准备试剂和器材：包括抗 原、抗体、红细胞、生理 盐水等。
制备不同浓度的抗原溶液。
取适量红细胞，加入不同 浓度的抗原溶液中，观察 红细胞是否发生凝集。
记录实验结果，分析数据， 得出结论。
对于血凝抑制试验，先加 入抗体，再加入抗原溶液， 观察红细胞是否发生凝集。
实验结果
实验结果一
实验结果三
血凝试验中，不同稀释度的病毒液与 红细胞混合后，红细胞迅速凝结成块， 形成明显的血凝现象。
通过比较不同稀释度的病毒液与加入 特异性抗体后的血凝抑制情况，可以 得出抗体滴度与病毒滴度之间的关系。
血凝与血凝抑制实验 PPT
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝 素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种 凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝 反应。
病
毒
红
颗细粒胞源自2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入 特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其 血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或 血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制， 称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
5、结果判定
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
血凝效价测定
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即 50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集；
1、概 述
ND是由ND病毒（Newcastle disease Virus, NDV） 引起的高度接触性和高度毁灭性的急性败血性传 染病。
❖1926年首先发生于印尼，同年发现于英国新城 ❖我国1928年有该病记载 ❖是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一 ❖被国际兽疫局（OIE) 列为A类传染病
别名： 新城疫、亚洲鸡温、伪鸡瘟
抗原
抗体
I am late！
四、实验材料
1、血凝板（2人/块） 2、新城疫阳性血清 3、被检血清（1份） 4、1％红细胞悬液 5、稀释液 6、移液器（50ul, 2人/把） 7、枪头
五、实验方法与结果判定
实验八病毒的血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验
病毒的血凝（HA）及血 凝抑制（HI）试验
华南农业大学兽医学院微生物教研室
[目的要求]
1.理解病毒HA和HI试验的原理
2.掌握HA和HI试验的操作方法、结果判 定并了 解其实用价值。
［实验原理］
❖ HA:许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞 的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。HI:血凝现象可以被 特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血 清学试验，称为血凝抑制试验。
100%抑制红血球凝集的血清最大稀释度为血凝抑制价。表中的血凝抑制价为1:128 判定标准：HI血凝抑制价小于或等于8×（3㏒2）判为阴性；等于16×（4㏒2）为可 疑，需复检；大于或等于32×（5㏒2）为阳性。
结果判定：
待病毒对照(11孔)孔出现红细胞100%凝（++++）， 而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可 进行结果观察。
❖ HA
HI
❖ 通过HA-HI实验可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知 病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量
试管法❖ 实验方法微量法[实验材料]
1. 96孔 “V”形微量反应板，移液器，枪头，振 荡 器。
2. 生理盐水，1% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城 疫阳性血清，新城疫阴性血清，待检鸡血清。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一 个血凝集单位。
二、血凝抑制（HI）试验
1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。 例128÷4＝32即 1毫升（抗原）+31毫升（生理盐水）即成。其1个单位抗原孔的红血球 必须达到100%凝集。
华南农业大学兽医学院微生物教研室
[目的要求]
1.理解病毒HA和HI试验的原理
2.掌握HA和HI试验的操作方法、结果判 定并了 解其实用价值。
［实验原理］
❖ HA:许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞 的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。HI:血凝现象可以被 特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血 清学试验，称为血凝抑制试验。
100%抑制红血球凝集的血清最大稀释度为血凝抑制价。表中的血凝抑制价为1:128 判定标准：HI血凝抑制价小于或等于8×（3㏒2）判为阴性；等于16×（4㏒2）为可 疑，需复检；大于或等于32×（5㏒2）为阳性。
结果判定：
待病毒对照(11孔)孔出现红细胞100%凝（++++）， 而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可 进行结果观察。
❖ HA
HI
❖ 通过HA-HI实验可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知 病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量
试管法❖ 实验方法微量法[实验材料]
1. 96孔 “V”形微量反应板，移液器，枪头，振 荡 器。
2. 生理盐水，1% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城 疫阳性血清，新城疫阴性血清，待检鸡血清。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一 个血凝集单位。
二、血凝抑制（HI）试验
1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。 例128÷4＝32即 1毫升（抗原）+31毫升（生理盐水）即成。其1个单位抗原孔的红血球 必须达到100%凝集。
血凝和血凝抑制实验课件PPT
7
抗原效价测定
12345
67
8
9
10
11 12
2 4 8 16 32 64 128 ×××× × × ×
生 25 25 25 25 25
理 盐 水
抗 25 25 25 25 25
原
生
理 25 25 25 25 25
盐 水
红 25 25 25 25 25
细 胞
结 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ 果 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋
2021/3/10
3
2021/3/10
4
实验原理
1、HA原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地 使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的 现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应（红细胞 不流淌）。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
2021/3/10
5
2、HI原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这 种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细 胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑 制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
3、每孔再次加入生理盐水25ul
4、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul
5、在振荡器上振荡均匀后，放于室温（20-25°C） 下静置30分钟，或2-8℃45-60分钟，红细胞对照孔 呈纽扣状时判定结果。
6、结果判定。将反应板倾斜60°，观察红细胞有无
泪滴状流淌，完全凝集无泪珠状流淌（100%）的最
2高021/稀3/10 释倍数为抗原血凝价。
6、 振荡，放于室温静置30分钟，或2-8℃45-60分钟； 7、 结果判定。以完全抑制的4个单位抗原的最高稀释倍数为该
血凝和血凝抑制
稀释度 2 4 8
16 32 64 128 256 、、 、、 弃
PBS
25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 X
25
待检血 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 x 清
4HA血凝 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
加25ulPBS缓冲液 2.在第1孔内加入血凝素25ul，混匀后吸出25ul加入第
2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推
至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。 3.在1-12孔均加入25ul的生理盐水。 4.在每孔内加入25ul1%的鸡红细胞悬液，震荡，室温静止感
作15-30min，每5min观察一次结果。 5.计算血凝效价，稀释使成为四价备用．
3.在1-12孔内均加入“四价”血凝素25ul，震荡后，室
温静止作用40min。
4.在1-12 孔内均加入1%的鸡红细胞悬液25ul，震荡，
室温30min。
5.观测结果，记录实验数据．
a
13
血凝抑制试验结果判定
• 测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
• 病毒对照孔：凝集
• RBC对照孔：无自凝
a
12
血凝抑制试验步骤
1.取96孔V型反应板1块置于水平实验台上，
在第1排1-10孔内加入25ul PBS缓冲液，第11孔不加。
第12孔加25ul PBS缓冲液。
2.在第1孔内加入被检血清25ul，混匀后吸出25ul加入第
2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推至第
10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。
血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)
B
11
2、HI试验可用于发病禽群的诊断
鸡、鸭、鹅规模化养殖中虽进行相关疫病疫苗的免疫，但往往有部分家 禽由于各种原因免疫力水平达不到要求，因而造成某些传染病的流行。 由于免疫禽群发病时临床症状和病变不典型，给确诊带来困难。采用HI 试验对鸡群中禽流感、新城疫等抗体进行测定，依据抗体滴度的高低和 离散性有助于诊断。 例如：经新城疫活苗加灭活苗免疫过的鸡群，新城疫抗体水平平均为 7Log2～8Log2，最高为10Log2。而新城疫感染鸡群中HI抗体部分高 达11Log2～13Log2；就抗体分布而言，鸡新城疫免疫鸡群抗体水平呈 正态分布，HI抗体在10Log2以上者仅占10％以下，4Log2以下者在1 ％以下。而感染了新城疫强毒并出现发病的鸡群，HI抗体中10Log2以 上者占25％以上，而4oLg2以下者在10％～30％之间。因此，依据禽 群的抗体水平高低和分布，结合临床症状和病、死鸡的剖检变化，可诊 断禽群是否患有新城疫或禽流感等。
2.1采血 用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡， 可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与 阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。 2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃 上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分 钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过 程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过 5天。 2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离 心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管 中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的PBS，用吸管反复吹吸使PBS与红 细胞混合均匀。 2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mLPBS， 混合均匀即可。
血凝和血凝抑制实验参考课件
2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水以 2000~3000r/min，5~10min离心3-5次。
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液， 上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心 弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
血凝素（HA） 柱状
7
刺突：亚型特异性抗原，易变异
血凝素（HA） 柱状
2
血凝素（HA，从H1—H15):呈柱状 功能：
①吸附细胞：与细胞上受体结合,使病毒 侵入细胞
②凝集多种动物的红细胞（血凝试验） ③具抗原性：其抗体能中和病毒---中和抗体
抑制血凝（血凝抑制试验）
8
2
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
2
血凝试验：某种病毒的血凝素， 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集，叫做血凝试验，也称直接血 凝反应，利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
目的：测定病毒的血凝效价，采用 一定的病毒量，通常采用4个血凝 单位
9
2
血凝试验（HA)原理：
10
血凝抑制试验（HI）原理
+
+
？
2
病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现
象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。
11
主要实验器材：
2
○普通离心机
微量振荡器
微量移液器
96孔血凝反应板
12
禽用采血器
2
试验主要试剂： 标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液（阿氏液） 四单位抗原 生理盐水（PBS液）
3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液， 上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心 弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
血凝素（HA） 柱状
7
刺突：亚型特异性抗原，易变异
血凝素（HA） 柱状
2
血凝素（HA，从H1—H15):呈柱状 功能：
①吸附细胞：与细胞上受体结合,使病毒 侵入细胞
②凝集多种动物的红细胞（血凝试验） ③具抗原性：其抗体能中和病毒---中和抗体
抑制血凝（血凝抑制试验）
8
2
三、血凝与血凝抑制实验（禽流感和鸡新城 疫）
用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体和滴 定该特异性抗体的水平。
2
血凝试验：某种病毒的血凝素， 能使鸡、鹅或人的红细胞发生凝 集，叫做血凝试验，也称直接血 凝反应，利用这种特性设计的试 验称血凝试验 (HA) 。
常见于正粘病毒、副粘病毒和某 些黄病毒、痘病毒等。
目的：测定病毒的血凝效价，采用 一定的病毒量，通常采用4个血凝 单位
9
2
血凝试验（HA)原理：
10
血凝抑制试验（HI）原理
+
+
？
2
病毒的悬液中加入特异性抗体，红细胞的凝集现
象被抑制，称为红细胞的血凝抑制。
11
主要实验器材：
2
○普通离心机
微量振荡器
微量移液器
96孔血凝反应板
12
禽用采血器
2
试验主要试剂： 标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液（阿氏液） 四单位抗原 生理盐水（PBS液）
《动物传染病实验》课件：3 血凝和血凝抑制试验
生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μ/l / 1%红细胞 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
只 有 红 细 胞 对 照 为 “ -” 时 试 验 结 果 方 可 成 立 。 血 凝 滴 度 以 “完全凝集”为终点，作为血凝价的终点，即一个血凝单位。 一个血凝单位是指使红细胞发生完全凝集的病毒悬液的最高 稀释倍数（1:2n）。
实验二 血凝和血凝抑制试验
Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI
2012－10－26
一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、操作步骤 五、结果判定
一、实验目的
理解血凝试验和血凝抑制试验的原理 熟练掌握血凝试验和血凝抑制试验的操
4. 手工震荡，37℃静置30-40min后观察结果。 5. 病毒血凝价结果观察（血凝价是1：？）。
凝集效价：能使血球产生完全凝集（ 红细胞发生完全 凝集）的病毒最高稀释度为病毒的凝集效价。可反映病 毒的相对含量。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cell Cell
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每 孔加入25μl。
5. 手工震荡，在37℃静置20~30min后观察结果。 6. 结果判定（血凝抑制价是1：2n？，被检血清
为阴/阳性）。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Virus Cell
只 有 红 细 胞 对 照 为 “ -” 时 试 验 结 果 方 可 成 立 。 血 凝 滴 度 以 “完全凝集”为终点，作为血凝价的终点，即一个血凝单位。 一个血凝单位是指使红细胞发生完全凝集的病毒悬液的最高 稀释倍数（1:2n）。
实验二 血凝和血凝抑制试验
Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI
2012－10－26
一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、操作步骤 五、结果判定
一、实验目的
理解血凝试验和血凝抑制试验的原理 熟练掌握血凝试验和血凝抑制试验的操
4. 手工震荡，37℃静置30-40min后观察结果。 5. 病毒血凝价结果观察（血凝价是1：？）。
凝集效价：能使血球产生完全凝集（ 红细胞发生完全 凝集）的病毒最高稀释度为病毒的凝集效价。可反映病 毒的相对含量。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cell Cell
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每 孔加入25μl。
5. 手工震荡，在37℃静置20~30min后观察结果。 6. 结果判定（血凝抑制价是1：2n？，被检血清
为阴/阳性）。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Virus Cell
《动物传染病实验》课件：3 血凝和血凝抑制试验
生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μ/l / 1%红细胞 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
只 有 红 细 胞 对 照 为 “ -” 时 试 验 结 果 方 可 成 立 。 血 凝 滴 度 以 “完全凝集”为终点，作为血凝价的终点，即一个血凝单位。 一个血凝单位是指使红细胞发生完全凝集的病毒悬液的最高 稀释倍数（1:2n）。
实验二 血凝和血凝抑制试验
Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI
2012－10－26
一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、操作步骤 五、结果判定
一、实验目的
理解血凝试验和血凝抑制试验的原理 熟练掌握血凝试验和血凝抑制试验的操
型？
血清HI效价≤31og2为阴性;＝41og2为可疑;≥51og2为阳性
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每 孔加入25μl。
5. 手工震荡，在37℃静置20~30min后观察结果。 6. 结果判定（血凝抑制价是1：2n？，被检血清
为阴/阳性）。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Virus Cell
稀释倍数
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
（一）血凝试验（HA）
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入25μl生理盐水。 2. 在第1孔中加入25μl病毒抗原，反复吸取混匀后
吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混 匀后弃25μl；最后两孔（11、12）为红细胞对 照。
只 有 红 细 胞 对 照 为 “ -” 时 试 验 结 果 方 可 成 立 。 血 凝 滴 度 以 “完全凝集”为终点，作为血凝价的终点，即一个血凝单位。 一个血凝单位是指使红细胞发生完全凝集的病毒悬液的最高 稀释倍数（1:2n）。
实验二 血凝和血凝抑制试验
Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI
2012－10－26
一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、操作步骤 五、结果判定
一、实验目的
理解血凝试验和血凝抑制试验的原理 熟练掌握血凝试验和血凝抑制试验的操
型？
血清HI效价≤31og2为阴性;＝41og2为可疑;≥51og2为阳性
4. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每 孔加入25μl。
5. 手工震荡，在37℃静置20~30min后观察结果。 6. 结果判定（血凝抑制价是1：2n？，被检血清
为阴/阳性）。
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Virus Cell
稀释倍数
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210
（一）血凝试验（HA）
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入25μl生理盐水。 2. 在第1孔中加入25μl病毒抗原，反复吸取混匀后
吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混 匀后弃25μl；最后两孔（11、12）为红细胞对 照。
(动物传染病学实验课件)8 血凝和血凝抑制试验
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
10 RBC RBC
HA试验的原理图
血凝试验结果判定
++++
+++
++
+
-
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集（-）Fra bibliotek血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
10 RBC RBC
HA试验的原理图
血凝试验结果判定
++++
+++
++
+
-
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集（-）Fra bibliotek血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
Virus Cell
血清
25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl /
/
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
血凝抑制试验结果判定
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
HI试验的原理图
三、实验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota） 接种鸡胚、收获尿囊液制备。
2. 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝， 以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充 分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使 用。
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
五、结果判定
血凝价是1:2？； 血凝抑制价是1:2？； 被检血清为阴还是阳性?
≥1:24为阳性 血凝抑制价 ＜1:22为阴性
10 RBC RBC
1:210
50 50 50 50 弃 5/0μl / 50 50 50
（二）血凝抑制试验（HI）
1. 1~11孔加入25μl生理盐水; 2. 第1孔加待检血清25μl，倍比稀释至第10孔; 3. 1~11孔加25μl 4个血凝单位的病毒悬液; 4. 1~12孔中每孔加入1%的红细胞50μl; 5. 震荡后置37℃25~30min观察结果; 6. 红细胞凝集100血凝和血凝抑制试验的原理。 实验操作步骤和结果判定。
血凝试验结果判定
++++
+++
++
+
-
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
Virus Cell
血清
25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl /
/
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
血凝抑制试验结果判定
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
HI试验的原理图
三、实验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota） 接种鸡胚、收获尿囊液制备。
2. 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝， 以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充 分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使 用。
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
五、结果判定
血凝价是1:2？； 血凝抑制价是1:2？； 被检血清为阴还是阳性?
≥1:24为阳性 血凝抑制价 ＜1:22为阴性
10 RBC RBC
1:210
50 50 50 50 弃 5/0μl / 50 50 50
（二）血凝抑制试验（HI）
1. 1~11孔加入25μl生理盐水; 2. 第1孔加待检血清25μl，倍比稀释至第10孔; 3. 1~11孔加25μl 4个血凝单位的病毒悬液; 4. 1~12孔中每孔加入1%的红细胞50μl; 5. 震荡后置37℃25~30min观察结果; 6. 红细胞凝集100血凝和血凝抑制试验的原理。 实验操作步骤和结果判定。
血凝试验结果判定
++++
+++
++
+
-
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd