微生物显微观察样品的制备和观察
《微生物学》课程学习指南
《微生物学》课程学习指南微生物学是研究微生物在一定条件下的形态结构，生理生化、遗传变异及其微生物的进化、分类、生态等生命活动规律及其应用的一门学科。
由于微生物（包括病毒）是最简单的生命体而又具有高等生物的基本生命过程，是研究生命现象的基本模式生物，并在人类的生存和社会发展中起着不可替代的作用，生命科学中的许多重大发现、重大理论和技术的突破和证实大多来自对微生物的研究，因此微生物学已经成为几乎所有生命科学研究的基础。
今天的学生，如果不懂得、不熟悉微生物学，不掌握微生物学的基本技能，想要学好其它生命科学专业课程是不可想象的。
微生物学课程也因此成为综合性大学和师范院校生物学系及医、药、农、林、食品等有关专业的必修专业基础课。
本课程由54学时的理论教学和54学时的实验教学二个相对独立的部分组成。
其中理论教学将指定教材中15章的内容融汇为12讲，使学生通过学习微生物的形态结构、生理生化、生长繁殖、遗传变异、生态分布、传染免疫、分类鉴定以及微生物与其他生物的相互关系及其多样性，在工、农、医等方面的应用，了解该学科的发展前沿、热点和问题，牢固掌握微生物学的基本理论和基础知识，了解微生物的基本特性及其生命活动规律，为今后的学习及工作实践打下宽厚的基础。
微生物学实验的主要任务是使学生在理论课学习的基础上，将理性知识与感性认识实现有机结合，牢固掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术。
使学生在学习结束后具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能，并使他们综合能力与创新意识有全面的提高。
这里只介绍理论课教学的重点和学习要求理论课教学一共54学时，由12章组成，每章的学习重点或者学习要求用蓝色字体标注第一章绪论（4个学时）一、武汉大学“微生物学”课程的建设与发展二、本学期的教学安排三、微生物与我们（简要了解微生物与人类生活的关系）四、微生物的发现和微生物学的建立与发展（重点掌握巴斯德、柯赫对微生物学建立与发展的贡献，同时了解其他著名科学家的工作）（一）微生物的发现（二）微生物学的奠基1.巴斯德2.柯赫（三）微生物学发展过程中的重大事件（四）20世纪的微生物学（五）微生物学在生命科学发展中的重要地位（重点）1．微生物是生物学基本理论研究中的理想实验对象2．对生命科学研究技术的贡献3．微生物与“人类基因组计划”（五)我国微生物学的发展（六）21世纪微生物学展望五、微生物的类群及特点（简要了解微生物的基本特征）第二章纯培养和显微技术（3－4个学时）第一节微生物的分离和纯培养（整个课程学习的最重要内容之一，重点掌握在各种条件下分离并获得微生物的纯培养的方法及原理、为什么说无菌技术和纯培养技术是微生物学研究与应用的基础）一、无菌技术（重点，结合实验课相关内容学习）1. 微生物培养的常用器具及其灭菌2. 接种操作二、用固体培养基分离纯培养（重点）1. 稀释倒平板法2. 涂布平板法3. 平板划线法4. 厌氧微生物的分离三、用液体培养基分离纯培养（了解）四、单细胞（孢子）分离（了解）五、选择培养分离（重点）1. 利用选择平板进行直接分离2. 富集培养六、二元培养物（了解二元培养物的概念，它虽然由二种生物构成，但也是微生物纯培养的一种形式）第二节显微镜和显微技术（结合实验课内容掌握各种显微镜的基本原理和样品制备技术）一、显微镜的种类及原理1. 普通光学显微镜2. 暗视野显微镜3. 相差显微镜4. 荧光显微镜5. 透射电子显微镜6. 扫描电子显微镜7. 扫描隧道显微镜二，显微观察样品的制备（结合实验课内容及显微镜的原理，这部分内容在理论课上可以省略不讲）第3章微生物类群与形态结构（10－11个学时）本章由教材上的第二章第三节、第三章第一节，以及第十三章的部分内容组成第一节细菌一、一般形态及细胞结构（一）个体形态与排列（细了解菌的形态有哪些，如何通过实验区分细菌的正常和异常形态）（二）大小（三）细胞的结构（）1、细胞壁（重点）2、细胞膜（重点）3、细胞质和内含物（应知道有哪些内含物及其最基本的生物学意义，比如说，贮藏物，能够举例就可以，不必将所有的全部背下来）1）概念2）贮藏物3）磁小体4）羧酶体5）气泡6）载色体7）核糖体8）质粒4、核区（nuclear region or area）5、特殊的休眠构造——芽胞（重点掌握芽胞的基本特性和耐热机制，为什么可以利用伴胞晶体作为生物杀虫剂。
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
实验一显微镜的使用及微生物形态的观察
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验总结
01 实验目的
掌握显微镜的使用方法
掌握显微镜的基本操作
包括调整焦距、照明调节、移动载玻片等。
了解显微镜的保养和清洁
定期清洁显微镜，保持其良好的工作状态。
熟悉不同倍率下的观察效果
04
原生动物属于真核生物，根据形态和运动方式可分为鞭毛虫、变形虫、 纤毛虫等。
微生物在自然界中的作用和意义
分解有机物
微生物在自然界中起到分解有机物的作用，将动 植物残体和排泄物等有机物分解成简单的无机物 ，如二氧化碳和水，为其他生物提供营养。
促进植物生长
一些微生物能够促进植物的生长和发育，如根瘤 菌能够与豆科植物共生形成根瘤，为植物提供氮 素营养；菌根真菌能够与植物根系形成共生关系 ，为植物提供磷素营养等。
03 实验步骤
显微镜的准备
01
02
03
清洁显微镜
使用柔软的湿布擦拭显微 镜的表面，确保显微镜干 净无尘。
检查显微镜部件
确保显微镜的目镜、物镜、 载物台等部件完好无损， 没有损坏或松动。
调整光源
打开显微镜的光源，确保 光源亮度适中，没有闪烁。
样本的制备
选择样本
选择要观察的微生物样本，如细菌、藻类、原生 动物等。
详细地观察。
观察和记录微生物形态
观察记录
在观察过程中，注意记录不同微生物的形态特征，并 绘制简单的显微镜图像或使用相机拍摄记录。
分析结果
根据观察记录，分析微生物的种类、数量和分布情况， 并得出实验结论。
整理器材
实验结束后，清洁并整理好显微镜和相关器材，以便 下次使用。
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
第2章 微生物的纯培养和显微技术
荧光显微镜
荧光：荧光素吸收紫外线会转放出可 见光，这就是荧光 荧光显微技术：把标本用不同的荧光 素作标记，在荧光显微镜下，经 过紫外线照射，标本会在黑暗背 景下表现出有光亮的物体。使标 本更便于观察。
透射电子显微镜
用电子波代替光源，最短波长的可见光 λ=450nm；而电磁波的波长最短可以达到 λ=0.005nm。所以，电镜的分辨率远高于光 学显微镜。
通冰箱冷冻室保存。
干燥保藏——砂土管保存法和冷冻真空干燥
保藏法
纸片保藏法、薄脉保藏法、寄主保藏法等
第二节 显微镜和显微技术
决定显微观察效果的两个重要因素：
分辨率：指能辨别两点之间最小距离的 能力 反差：指样品区别于背景的程度
一、显微镜的种类及原理
普通光学显微镜
光学显微镜的分辨率(最小分辨距)：
D=0.5λ/n sinθ
式中λ为光源波长； n为玻片到物镜介质的
折射率； θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜 的直径和工作距离。 n sniθ叫作数值孔径。不 同介质的折射率：空气为n=1.0 ；水n=1.33；香 柏油n=1.55。因此，油镜的分辨率高。
暗视野显微镜
暗视野显微镜利用特殊聚光器实现 给样品斜射照明，由样品反射或折射的
非细胞型微生物：病毒、类病毒、朊病毒
一、细菌和古生菌
•细菌的形态和排列
形态：球状—球菌，杆状—杆菌，螺旋状——螺菌和 弧菌。 排列：单个、成对、链状、成簇 特殊形态的细菌 如柄细菌有柄、菌丝、附器等 球衣菌有衣鞘 支原体无细胞壁，只有细胞膜，故柔软形态多变 有些细菌不同生长阶段具有不同形态：如放线菌 形成营养菌丝、气生菌丝和孢子丝。 细菌的形态也受环境条件的影响，培养时间、培 养温度等均能引起形态的改变。
微生物制片显微观察及检测技术
革兰氏染色图解
革兰氏染色试剂
步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上
步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上
步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层
步骤4：风干
步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定
步骤6：结晶紫染色1分钟
步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片
步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗
低倍镜操作方法
1.两眼从侧面注视 低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒 自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破 玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止； 2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦螺旋，使 镜筒徐徐上升，直到看清物象为止； 3. 再用微调焦螺旋调至清晰。 注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察显微镜时 ，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物镜的危险。因此， 用细调焦螺旋调节视野使其更清晰
微生物检测技术介绍
检测技术的重要性
一、微生物检验技术介绍
微生物检测
传统筛选系统 免疫凝集/免疫沉淀实验 Mini VIDAS筛选系统 实时荧光定量PCR 革兰氏染色镜鉴 按照标准进行 传统的生化反应鉴定 API试剂条 菌鉴定国际金标准
微生物鉴定
半自动细菌鉴定仪 （ATB Expression）
(二)细菌的革兰氏染色步骤
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗 →干燥→观察
1 ．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单 染色的相同。 2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4 ．斜置载玻片，滴加 95 ％乙醇脱色，至流出的乙醇不 现紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用 低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细 胞的颜色。
微生物制片显微观察及检测技术
微生物制片显微观察及检测技术微生物是一类不能看见的生物体，它们很小、很微弱。
为了观察和检测微生物，科学家们开发出了多种显微观察和检测技术。
本文将介绍一些常用的微生物制片技术及显微观察和检测技术。
微生物制片技术主要是将微生物样本制备成薄片以便进行显微观察。
常用的制片技术包括固定、包埋和切片。
固定是将微生物样本中的细胞或细菌固定在载玻片上，常用的方法有热固定、酒精固定和甲醛固定等。
包埋是将固定的微生物样本包裹在固体介质中，通常用于切片前的处理，常用的方法有冰冻包埋和石蜡包埋。
切片是将包埋的微生物样本切成薄片，常用的方法有冷冻切片和石蜡切片。
显微观察技术是利用显微镜观察微生物样本的细节和特征。
常用的显微观察技术包括光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是利用光线通过样本并经过透镜放大观察，主要适用于观察细菌、真菌、原生动物等较大的微生物。
电子显微镜是利用电子束通过样本并经过电磁透镜放大观察，主要适用于观察细菌、病毒等较小的微生物。
电子显微镜分为扫描电子显微镜和透射电子显微镜两种，扫描电子显微镜适用于表面观察，透射电子显微镜适用于内部观察。
检测技术是用于检测微生物样本中的特定组分或特定物质。
常用的检测技术有免疫荧光检测法、酶联免疫吸附检测法和聚合酶链反应检测法等。
免疫荧光检测法是利用荧光染料标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显微镜观察荧光信号来检测微生物样本。
酶联免疫吸附检测法是利用酶标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显色反应来检测微生物样本。
聚合酶链反应检测法是利用特定的引物和酶来扩增微生物样本中的特定基因片段，通过电泳分析来检测扩增产物。
除了上述的微生物制片技术、显微观察和检测技术，还有一些其他的辅助技术可以提高微生物观察和检测的效果。
例如，染色技术可以通过染色一些特定物质来突出显示微生物样本中的细节和结构。
常用的染色技术有普鲁士蓝染色、格拉姆染色和伊汀染色等。
荧光标记技术可以通过标记荧光染料来突出显示微生物样本中的特定组分。
显微镜观察微生物形态的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除显微镜观察微生物形态的实验报告篇一：微生物实验报告：微生物形态观察实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。
二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。
细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。
球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。
杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。
螺旋菌分为弧菌和螺菌。
除此之外，还有一些特殊形态的细菌。
2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。
鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。
菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。
芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。
可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。
比如吸器、假根、子实体。
4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。
链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。
当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。
微生物检验操作步骤
微生物检验操作步骤1.样品收集：根据检验目的选择合适的样品，如食品样品、水样、医疗器械等。
正确采集样品，避免样品受到污染。
2.样品制备：将收集到的样品进行处理，以适应后续的检验步骤。
例如，对食品样品进行均质处理、稀释等。
3.样品接种：将处理后的样品接种到含有合适培养基的培养皿或培养瓶中。
根据不同的微生物类型和检验目的，选择适当的培养基。
4.培养条件设置：根据微生物的生长特点，设置适当的培养条件，包括温度、湿度、氧气含量等。
常见的培养条件是37℃下的静态培养。
5.培养皿封闭：将培养皿或培养瓶盖封闭，避免外部的污染物进入。
可以使用透明胶带或铝箔密封。
6.培养：将已封闭的培养皿或培养瓶放入恒温培养箱中进行培养。
培养的时间因微生物的生长速度不同而不同，通常为24小时至7天。
7.观察：在培养过程中，定期观察微生物的生长状况。
可以在显微镜下观察细菌的形态、颜色、大小等特征，并记录下来。
8.制备涂片：当微生物生长到一定程度时，将培养皿中的细菌涂抹到玻璃片上。
涂片可以用于后续的染色和显微观察。
9.染色：选择合适的染色方法对涂片进行染色，以便更清晰地观察细菌的形态。
常用的染色方法包括革兰染色和抗酸染色。
10.显微观察：在显微镜下观察染色后的涂片，注意细菌的形态、排列方式、胞内结构等细节特征。
根据观察结果，确定微生物的种类。
11.计数：根据涂片的观察结果，使用细菌计数板或其他方法对微生物的数量进行估计。
通常会进行稀释和培养后计数。
12.结果分析：根据观察和计数结果，判断微生物是否符合相应的标准。
根据检验目的，确定微生物的种类和数量，判定样品是否合格。
13.结果报告：将检验结果整理成报告，包括微生物的种类和数量等信息。
报告应准确明确，便于评估和决策。
14.结束处理：检验完成后，对实验室设备进行清洁和消毒处理，避免细菌的传播和污染。
同时，将培养出的微生物进行适当的处理，如灭菌或安全处置。
以上是微生物检验的一般操作步骤，不同类型的微生物检验可能存在一些差异，具体操作步骤应根据实验方法和检验目的进行调整。
微生物检验技术项目七微生物染色及显微形态观察技术
二、染色技术
【报告内容】 1.简述普通光学显微镜的构造及工作原理； 2.简述普通光学显微镜的使用过程及保养方法； 3.分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的 金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的状态，包括在三 种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和 总放大率。
二、染色技术
任务7-2细菌的染色及形态结构观察
Thank you
二、染色技术
任务7-3 酵母菌、霉菌的染色及形态结构观察
7-3-1酵母菌的形态观察 【任务验收标准】 1.了解自然存在的酵母菌及其形态结构、出芽生殖方式 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。
二、染色技术
【任务完成条件】 1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝 酵母(Candida tropicalis)斜面菌种； 2.PDA培养基 3. 0.05％美蓝染色液(以pH 6.0的0.02mol/L磷酸缓冲 液配制)、碘液、0.04％的中性红染色液； 4.显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环等。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌 的活体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任 务。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活 体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任务。
二、染色技术
【工作任务】 1.细菌荚膜染色制片的制作及观察； 2.细菌芽孢染色制片的制作及观察。
二、染色技术
【任务指导】 （一）细菌的荚膜染色 1.负染色法 2.湿墨水法 3.干墨水法
微生物实验教案05(5)厦门大学 微生物 考研电子教案
实验一光学显微镜----油镜的使用一、实验目的1 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术2 了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。
二、实验材料和用具细菌三型的染色装片、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。
三、操作步骤(一)观察前的准备1．将显微镜置于平稳的实验台上。
2．调节光源。
(二)低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。
(三)高倍镜观察眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。
再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。
不要移动装片位置，准备用油镜观察。
(四)油镜观察1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。
在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。
2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。
3．将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。
如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。
仔细观察并绘图。
4．再次观察提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。
重复观察时可比第一次少加香柏油。
(五)镜检完毕后的工作1．移开物镜镜头。
2．取出装片。
3．清洁油镜。
4．擦净显微镜，将各部分还原。
四、注意事项1．使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。
2．下降镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边观察边下降镜头的错误操作，以免压碎玻片而损坏镜头。
第二章--微生物的纯培养和显微技术
第二节 显微镜和显微技术
一、显微镜的种类及其原理 二、显微观察样品的制备 三、显微镜下的微生物
几个基本概念：
一、显微镜的种类及原理
1.普通光学显微镜（复式显微镜）
机械装置: 镜座、支架、载物台、调焦螺旋等 光学系统: 物镜、目镜、聚光镜等
使用油镜时加镜油的目的: (1)增加照明亮度 (2)增加显微镜的分辨率
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线 照射后可激发荧光；另有一些物质本身虽 不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗 体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧 光显微镜就是对这类物质进行定性和定量 研究的工具之一
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荧 光 显 微 镜 观 察
5、 透射电子显微镜（transmission electron microscope, TEM)
原理：用一束电子作为它的能源，电子的波长很短，能够 检测极细微的物体，如病毒和分子。
应用：通过细胞超薄切片，观察细胞内部的详细结构如细 胞膜、细胞核等。（可放大几万倍）
6、 扫描电子显微镜（scanning electron microscope, SEM)
原理：类似于电视或电传真照片。即利用电子“探针”，在 样品表面进行“扫描”，激发样品表面放出二次电子，二次电子由 探测器收集，并转变为光信号。
光学显微镜
光学理论依据
德国理学家Ernst Abbe，在19世纪70年代建立的 在Abbe的公式中，两物体之间的最小可分辨距 离被称为最小距离（d）
最小距离=0.5/nsin= 0.5/NA
分辨率（R) ∝ 1/d
分辨率(最小可分辨距离)=0.5λ∕ n sinθ = λ∕2NA
波长与分辨率
高压蒸汽灭菌锅
2、接种操作
接种工具： 白金or镍铬合金接种针/环
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
生物样品的扫描电镜制样干燥方法
生物样品的扫描电镜制样干燥方法一、本文概述扫描电子显微镜（SEM）是一种广泛应用于生物学、医学、材料科学等领域的高分辨率显微成像技术。
在生物学研究中，SEM被用于观察和分析各种生物样品的超微结构，如细胞、组织、微生物等。
然而，生物样品的电镜制样过程复杂且精细，其中干燥环节尤为关键，因为不当的干燥方法可能导致样品结构变形、失真，甚至破坏。
因此，本文旨在探讨和总结生物样品扫描电镜制样过程中的干燥方法，包括各种方法的原理、优缺点以及应用注意事项，以期为提高生物样品SEM分析的准确性和可靠性提供参考和指导。
二、生物样品扫描电镜制样概述扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种用于观察和研究材料表面微观形貌和组成元素分布的强大工具。
在生物学领域，SEM常被用于研究生物样品的微观结构和形态，如细胞、组织、微生物等。
然而，由于生物样品往往含有大量水分，且结构复杂、易变形，因此在SEM制样过程中，干燥方法的选择和应用至关重要。
生物样品的扫描电镜制样过程一般包括前处理、固定、脱水、干燥、镀金等步骤。
其中，干燥是制样过程中的关键步骤之一。
干燥不当可能导致样品变形、结构破坏、微生物活性丧失等问题，从而影响后续的观察和分析。
因此，选择适合的干燥方法对于保证生物样品SEM制样的质量至关重要。
目前，常见的生物样品干燥方法包括自然干燥、临界点干燥、冷冻干燥等。
自然干燥方法简单易行，但可能导致样品变形和微生物活性丧失；临界点干燥通过控制温度和压力，避免样品在干燥过程中发生收缩和变形，适用于一些对结构要求较高的样品；冷冻干燥则通过在低温下将样品中的水分升华，从而避免样品在干燥过程中发生变形和破坏，适用于一些对微生物活性要求较高的样品。
在实际操作中，应根据样品的性质和研究目的选择合适的干燥方法，并结合其他制样步骤，如固定、脱水、镀金等，以确保制样质量和后续观察的准确性。
随着技术的不断进步，新型的干燥方法和技术也在不断发展，为生物样品SEM制样提供了更多的选择和可能性。
显微标本制作的一般原理及步骤(精)
1.1 涂片法
• 主要用于血液、精液、尿、痰、微 生物等不能切成薄片的液态材料， 可在载玻片上涂成单层细胞，再经 固定，脱水，染色等手段制成永久 标本。演示
1.2 铺片法
• 主要用于动植物组织的表皮层观察。 可活体取待观察动植物组织，用尖 镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载 玻片上。 如: 洋葱表皮细胞的铺片制 备。演示
• 但在经过固定，脱水，透明，包埋等手续后就可把材料切成 较薄的片子，再用不同的染色方法以显示不同细胞组织的形 态及其中某些化学成份含量的变化，就可以在显微镜下清楚 地看到其中不同的区域组分状态。切片也便于保存，所以是 教学和科研中常用的方法。
一、实验原理
• 生物显微制片方法 非切片法：涂片，铺片，压片，磨片，整装片 切片法：石蜡切片法，火棉胶切片法，冰冻切片法
• 尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适 于切片；
• 增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时 增加媒染作用和染色能力； 固定液同时是防腐液，使材料不致变质腐败。
2.3 脱水
• 脱水过程的作用是用一种既能与水又能与透明液混 合的液体来逐渐置换样品中游离的水。
• 现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水。 脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。
2 常用试剂
• 2.2 常用脱水剂：酒精，正丁醇，叔丁醇，丙酮等
• 2.3 常用透明剂：二甲苯，甲苯，氯仿，丁香油等。
• 2.4 常用粘贴剂
• 明胶粘贴剂
明 胶 1g 蒸馏水 石碳酸 2g 甘 油 蛋白粘贴剂
100ml 15ml
新鲜蛋清 25 ml 甘 油 25 ml 石炭酸 0.5 g • 2.5 包理剂：石蜡，火棉胶，明胶等。 • 2.6 封固剂：阿拉伯树胶，加拿大树胶。
微生物学[第二章微生物的纯培养和显微镜技术]山东大学期末考试知识点复习
![微生物学[第二章微生物的纯培养和显微镜技术]山东大学期末考试知识点复习](https://img.taocdn.com/s3/m/f4c8d7e6102de2bd9705880d.png)
第二章微生物的纯培养和显微镜技术一、要点提示1．由于微生物个体微小，在绝大多数情况下对微生物的研究、利用都是使用其群体，称为培养物。
由于一般情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，因此从混杂的天然微生物群中分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的最重要的环节之一。
采用稀释涂布或平板划线技术在琼脂平板上得到微生物的单菌落是最常用的纯种分离手段，而在分离、转接及培养微生物纯培养时防止被其他微生物污染的无菌操作技术是进行微生物学研究的基础，并广泛地被其他学科和生产实际所利用。
2．通过分离纯化得到的微生物纯培养物，必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不死亡、不会因发生变异而丢失重要的生物学性状、不会被其他微生物污染或因自身泄漏而污染环境，否则就无法真正保证微生物研究和应用工作的顺利进行。
传代培养、冷冻真空干燥保藏、低温冰箱保藏及液氮保藏是通常使用的微生物菌种保藏技术。
3．微生物个体微小，通常必须通过显微镜才能观察到其个体形态，而进行显微观察时，分辨率和反差是决定显微观察效果的两个最重要的因素。
它们与显微镜的特性有关，也取决于样品的制备与观察技术。
无论是光学显微镜还是电子显微镜，其设备和技术发展迅速，应用面越来越广泛和深入。
4．在显微镜下微生物的大小与形态千差万别，丰富多彩，是区分不同微生物和对其进行分类、鉴定的重要依据之一。
二、重点、难点剖析1．无菌技术是最基本的微生物学实验操作技术，其核心是无菌概念的建立，以及正确而严格地按实验教材和实验课的要求，掌握在各种情况下的具体应用原则和操作规范。
2．分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的基础。
获得纯培养的方法有固体培养基分离、液体培养基分离和单细胞挑取3大类(表2-1)，其中用固体培养基获得单独的微生物菌落是最常用、最基本的方法。
此外还有活细胞或活体分离法，如噬菌体和动植物病毒纯培养的分离等。
3．保证所用菌种性状的稳定是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。
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三、实验器材
四、实验内容与步骤
实验四 微生物显微观察样品的制备与观察 （三）放线菌的观察 一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
实验四 微生物显微观察样品的制备与观察 （四） 霉菌的形态观察 一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
实验报告要求
1、使用油浸系物镜应特别注意什么？ 2、绘出观察到的细菌形态图 （标明物镜种类、总放大倍数等） 3、绘图表示你所看到的放线菌的形态结构 4、绘图表示你所看到的霉菌的形态结构
• 学习并掌握油镜的原理和使用方法
黄曲霉的孢子囊
孢子丝：菌丝成熟时，大部分气生菌丝分化成孢子丝，孢子丝形 态多样，由成串分生孢子组成
霉 菌
基内菌丝：伸展于培养基的表面和内部 气生菌丝：在基内菌丝上，伸展于空间 繁殖菌丝：产生孢子
放线菌的观察 倒平板
划线接种 培养5-7天 印片法 制玻片标本 切块 放置于载玻片 印片 热固定（可免） 石炭酸复红染色 观察
微生物学实验
实验四
微生物显பைடு நூலகம்观察样品 的制备与观察
（一）显微镜油浸系物镜的的原理和 用法 （二）细菌的形态观察 （三）放线菌的形态观察 （四）霉菌的形态观察
实验四 微生物显微观察样品的制备与观察 （一）显微镜油浸系物镜的的原理和用法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
实验四 微生物显微观察样品的制备与观察 （二）细菌的形态观察 一、实验目的 二、实验原理
油镜观察（普 通光镜）
放线菌的观察 倒平板 铺无菌玻璃纸
划线接种 玻璃纸法 培养5-7天 制玻片标本 观察
霉菌的观察 倒平板
划线接种 培养5-7天 制玻片标本 压片法（水浸片法） 观察 加盖玻片 载玻片 乳酸石炭酸棉兰 镊子取样 打散菌丝
• 载片培养法(用于放线菌和霉菌) 1.准备湿室 2.倒薄层培养基 3.接种 4.盖盖玻片 5.固定盖玻片 6.加保湿剂 7.培养 8.观察
步
祝
你
进
• 显微镜油浸系物镜的的原理
分辨率=λ/2NA NA=n*sinθ
• 显微镜油浸系物镜的用法 1.准备 2.显微观察 低倍镜观察
高倍镜观察
油镜观察 3.显微镜用毕后的处理 • 特别注意的问题
放 线 菌
基内菌丝：伸展于培养基的表面和内部，菌丝色淡、较细。 气生菌丝：在基内菌丝上，伸展于空间，颜色较深，菌丝较粗。
1、观察细菌基本形态染色装片（演示） 2、观察杆菌形态染色装片（演示） 3、用压滴法观察活菌 4、用悬滴法观察活菌 5、观察链霉菌形态染色装片（演示） 6、用印片法或玻璃纸法观察细黄链霉菌的形态 7、观察曲霉、面包霉、青霉、匍枝根霉形态染色 装片（演示）
8、用压片法或载片培养法观察黑曲霉的形态
• 复习普通光学显微镜的结构、各部分的功 能和使用方法