铜绿假单胞菌检验原始记录

铜绿假单胞菌检验

3. 结果报告
根据蓝色或绿色菌落的计数和确证性试验的
结果，计算每250mL水样中的铜绿假单胞菌数量，结果以CFU/250mL计。生融合而可能影响计数的精确度。
受到严重污染或培养时间过长时，菌落会产
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa） ATCC 27853——阳性对照菌株大肠埃希氏菌（Escherichia coli） ATCC 25922——阴性对照菌株

平铺时应避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。
2.2.3 检验程序
结果观察：

所有显蓝色或绿色（绿脓色素）的菌落，初步判定为铜绿假单胞菌。所有发荧光不产绿脓色素疑似铜绿假单胞菌菌落，进行乙酰胺肉汤确证性试验。

将其它所有红褐色不发荧光的菌落进行氧化酶测试、乙酰胺肉汤、金氏B培养基确证性试验。

1.1 生物学特性

无特殊营养要求，该菌在普通营养琼脂上生长良好，琼脂通常会被染成蓝绿色或黄绿色。该菌在血琼脂平板上生长为灰绿色或蓝绿色菌落，并形成透明溶血环。在营养肉汤中呈混浊生长，液面可长出菌膜，菌液上层为蓝绿色。

1.1 生物学特性

生化反应： 1）氧化酶阳性； 2）液化明胶； 3）硝酸盐还原试验阳性； 4）吲哚阴性； 5）绿脓菌素试验阳性； 6）其它生化试验（糖利用试验、脱羧酶试验等等）。

－P：呈蓝/绿色的菌落数（所有证实为铜绿假单胞菌的菌落）。－F：显荧光的菌落数。－R：呈红褐色的菌落数。－nF：进行产氨测试的显荧光菌落数。－CF：产氨阳性的显荧光菌落数。－nR：进行产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光测试的红褐色菌落数。－CR：产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光测试均呈阳性的红褐色菌落数。

铜绿假单胞菌检验原始记录

Cr: 产氨。氧化酶。金氏B培养基上显荧光测试均呈阳性的红褐色菌落数。
培养
___日___时至___日___时
计数
菌落计数公式: N=P+F(cF/nF）+R（cR/nR）
实验
结果
阴性：
阳性：
CFU/250mL
备注
P：显兰/绿色的菌落数.
F: 显荧光的菌落数.
R: 显红褐色的菌落数。
nF: 进行产氨测试的荧光的菌落数。
cF: 产氨阳性的荧光的菌落数.
nR：进行产氨。氧化酶. 金氏B培养基上显荧光测试的红褐色菌落数.
检验项目
确
证
性
试Байду номын сангаас
验
营养琼脂
要求
36±1℃；20h～24h。
培养
___日___时至___日___时
氧化酶试验
要求：用玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在试纸上.10S内显色
金氏B(King`s B）培养基
要求
36±1℃;20h～24h.
培养
___日___时至___日___时
乙酰胺肉汤
要求
36±1℃；20h～24h.
铜绿假单胞菌
检验依据：GB/T8538-2008
样品制备：
釆用滤膜法。将250mL水样用孔径为0。45um的滤膜过滤,并将滤膜移至CN琼脂选择性培养基上，于36±1℃培养20-24h。
检验项目
现象
结果
分离
培养
假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂
要求
36±1℃；20h~24h。
培养
___日___时至___日___时

黏液型铜绿假单胞菌感染实验鉴定和病例回顾分析

黏液型铜绿假单胞菌感染实验鉴定和病例回顾分析铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）在由各种原因所致的人体抵抗力低下时引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染等，亦可导致菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性，该菌引起的慢性肺部感染占有较大的比例。

其临床表型分为黏液型及非黏液型。

黏液型铜绿假单胞菌（mucoid pseudomonas aeruginosa，mPa）与非黏液型在生长特点、致病性及药物敏感方面均存在差异。

现对我院分离的一株mPa进行回顾性分析，以此为临床诊疗提供一些帮助。

实验室鉴定一、研究对象临床微生物室分离的一株mPa，药敏试验同时采用纸片琼脂扩散法（K-B法）和肉汤稀释法（MIC法），作对照比较。

二、试剂和仪器深圳迪尔DL-96细菌测定系统及其提供的NE鉴定板条，普通公司的MH肉汤和MH琼脂平板，英国OXOID公司生产的药敏纸片，质控菌株铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923均购自湖北省临检中心。

三、方法1.菌株鉴定及药敏试验取病患留取的晨痰做涂片和接种哥伦比亚血平板、含万古巧克力平板（三区划线），痰涂片一张行革兰氏染色，一张行萋-尼抗酸染色。

镜检为合格痰（上皮细胞25个/LP），未发现抗酸阳性杆菌。

平板在35℃、C02孵箱培养24h后观察，均长出水滴样菌落，在血平板的第三区，水滴样菌落>5个，半定量判定为4+，具有临床意义。

取巧克力平板上水滴样菌落分纯，第二天做氧化酶试验：阳性。

刮取黏液型菌落接种于营养肉汤，35℃孵育5h后，调节菌液浓度至0.5麦氏单位，按照试验要求接种迪尔公司提供的NE板条；无菌棉拭子蘸取MIC法多余的药敏液接种MH平板，贴药敏纸片。

35℃孵育48h判读结果。

2.结果48h后，利用迪尔DL-96细菌测定系统判读为铜绿假单胞菌（P：99.58），两种方式的药敏结果如下（以2017年更新的CLSI为判读标准）：3.比较发现哌拉西林、头孢他啶的药敏结果不相符，美罗培南的K-B抑菌圈直径过大（标准菌株ATCC27853对美罗培南的抑菌圈直径为27～33mm）。

药品微生物限度检验记录(铜绿甲单胞菌)

革兰染色、镜检（现象）：
氧化酶试验
培养基
名称
营养琼脂培养基
绿
脓
菌
试
验
培养基
名称
PDP琼脂培养基
批号
批号
培养
温度
℃
培养
温度
℃
时间
日时至日时，计小时
时间
日时至日时，计小时
现象：
现象：
结果判定：
结果判定：
检验项目标准规定检验结果
铜绿假单胞菌每1不得过检出□未检出 □检出结论：检验人：复核人：
药品微生物限度检验记录
（铜绿假单胞菌）
检验号REC-QC-057-00
品名
跌打活血散（混合生药粉）
规格
批号
数量
来源
紫外消毒时间
时分至时分
取样日期
报告日期
检验依据
铜绿假单胞菌
增菌培养：取供试液10ml，直接接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养。
培养基
名称
胆盐乳糖培养基
培养
温度
℃
批号
时间
日时至日时，计小时
分离培养：取上述培养物，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的平板上，培养。
培养基
名称
溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
培养
温度
℃
批号
时间
日时至日时，计小时
现象：
确证试验：从上述分离平板上挑选2〜3个疑似菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18〜24小时。取斜面培养物进行革兰染色、镜检及氧化酶试验。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定

铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，属于假单胞菌属（Pseudomonas），广泛存在于自然界中，是一种耐受力很强的细菌。

铜绿假单胞菌在人类和动植物体内都有可能成为病原菌，引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染、皮肤感染等。

对铜绿假单胞菌的菌种鉴定十分重要。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定主要包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。

形态学观察是最为简单直观的方法，通过观察细菌在琼脂培养基上的形态特征来初步鉴定。

铜绿假单胞菌在琼脂培养基上形成典型的青绿色凝块状菌落，通常呈金黄色至淡黄色，具有辛辣气味。

除了形态学观察外，生理生化特性检测也是菌种鉴定的重要方法之一。

铜绿假单胞菌具有一系列特殊的生理生化特性，如利用氧化物作为唯一氧化剂和膜脂组成特殊等。

铜绿假单胞菌产生溶血素、胞外聚合物酶、脂肪酶等多种外源酶，可以降解寡糖、脂质等物质。

分子生物学方法也成为现代菌种鉴定的重要手段。

通过PCR扩增和测序技术，可以对靶基因进行测序分析，比如16S rRNA基因序列分析。

铜绿假单胞菌16S rRNA序列具有较高的保守性，同时又有足够的变异性，能够帮助界定种和属的分类关系。

在进行铜绿假单胞菌菌种鉴定的过程中，需特别注意以下几点：1. 选择合适的菌落：铜绿假单胞菌菌落为青绿色，有金黄色至淡黄色的边缘。

需避免选择其他青绿假单胞菌属菌种带来的干扰。

2. 确认生理生化特性：对于一些特殊的生理生化特性，如氧化物利用情况、酶产生等，可以通过专门的生化试验进行验证。

3. 结合分子生物学方法：如果需要进一步确定菌种的归属，可结合分子生物学方法进行16S rRNA序列分析，加深对菌种的认识。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一项重要且复杂的工作，需要结合形态学观察、生理生化特性检测和分子生物学方法等多种手段进行综合分析。

只有准确鉴定出铜绿假单胞菌的菌种，才能更好地开展相关的医学、环境等研究工作，为防治相关感染病害提供科学依据。

化妆品菌落总数检测原始记录

培养基及试剂
生理盐水、卵磷脂吐温80营养琼脂培养基、0.5%TTC（氯化三苯四氮唑）溶液
样品制备
取g（mL）样品以mL无菌生理盐水稀释为1:10样品稀释液。
实验步骤
1、用灭菌吸管吸取1：10稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，……等，每个稀释度应换1支吸管。
备注：
项目编号
样品名称
检测项目
铜绿假单胞菌
样品性质
收样时间
检测时间
环境条件
温度： ℃ 湿度： %
检测依据及方法
《化妆品安全技术规范》2015版第五章微生物检验方法 2 菌落总数检验方法
设备及编号
电热恒温培养箱DHP-9082B（KLM-YQSB-006）、生物安全柜BHC-1300ⅡA2（KLM-YQSB-002）、立式蒸汽灭菌器LDZM-60KCS-Ⅱ（KLM-YQSB-022）、恒温恒湿培养箱HSP-150BE（KLM-YQSB-007）、水浴锅HH-4双列四孔（KLM-YQSB-017）
3、为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
4、菌落计数方法：先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用5倍~10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
2、将融化并冷至45℃~50℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培养48h±2h，为空白对照。

微生物限度检验记录

微生物限度检验记录一、检验目的：确认产品是否满足微生物限度要求，保证产品的安全性和质量。

二、检验项目：1.总大肠菌群：用于评估产品是否受到粪便污染。

2.霉菌和酵母菌：用于评估产品是否受到霉菌和酵母菌的污染。

3.沙门氏菌：用于评估产品是否受到沙门氏菌的污染，沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌。

4.铜绿假单胞菌：用于评估产品是否受到铜绿假单胞菌的污染，铜绿假单胞菌是一种常见的致病菌。

5.谷氨酰胺酶阳性菌：用于评估产品是否受到谷氨酰胺酶阳性菌的污染，谷氨酰胺酶阳性菌是一种常见的致病菌。

三、检验步骤：1.样品准备：从产品中取得一定量的样品，确保样品的代表性。

2.样品处理：根据产品的不同特性，选择适当的方法进行样品处理，如水解、稀释等。

3.培养基制备：根据所需的检验项目，制备相应的培养基。

4.培养基接种：将处理后的样品接种到相应的培养基中，利用无菌技术确保操作的无菌。

5.培养：将接种过的培养基培养在适宜的温度和湿度条件下，培养一定的时间，一般为24-72小时。

6.检查结果：观察培养基上是否有菌落形成，记录菌落的数量和形态特征。

7.鉴定：对培养出的菌落进行进一步的鉴定，如形态学观察、生理生化特性测试等。

8.统计和分析：根据检查结果，统计并分析微生物的数量，计算出产品的微生物限度。

四、检验结果：1.总大肠菌群：每克不超过100个。

2.霉菌和酵母菌：每克不超过10个。

3.沙门氏菌：每克不得检出。

4.铜绿假单胞菌：每克不得检出。

5.谷氨酰胺酶阳性菌：每克不得检出。

五、检验记录样例：日期：2024年4月1日样品名称：XXX产品检验员：XXX检验项目：1.总大肠菌群结果：每克10个，符合微生物限度要求。

2.霉菌和酵母菌结果：每克2个，符合微生物限度要求。

3.沙门氏菌结果：未检出，符合微生物限度要求。

4.铜绿假单胞菌结果：未检出，符合微生物限度要求。

5.谷氨酰胺酶阳性菌结果：未检出，符合微生物限度要求。

六、结论：根据检验结果，XXX产品符合微生物限度要求，产品安全可靠。

铜绿假单胞菌检测(滤膜法)

铜绿假单胞菌检测（滤膜法）
录入时间:2015-4-27 10:30:42 来源：青岛海博生物
一、原理
将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒温箱中培养48h，能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20nm）照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。

二、培养基和试剂
1.假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂（配制好之后低温避光保存）
2.金氏B（King’s B）培养基（配制好之后低温避光保存）
3.乙酰胺肉汤（用蒸馏水配制，配置好之后低温避光保存）
4.营养琼脂
5.氧化酶试剂
6.钠氏试剂（配制好之后低温避光保存）
7.设备和仪器
8.玻璃器具：所有玻璃器皿使用前需121℃高压蒸汽灭菌15分钟
9.恒温培养箱：36℃±1℃
10.紫外灯：波长应为360±20nm
11.滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μｍ（处理方法：如滤膜未经灭菌，则使用前需先将
滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15 min。

前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。

建议使用一次性无菌滤膜。

）12.显微镜：10×～100×
13.冰箱：0℃～8℃
三、操作流程图。

铜绿假单胞菌的药敏试验结果及耐药性分析

铜绿假单胞菌的药敏试验结果及耐药性分析【摘要】分析我院2008年1月-2009年12月份临床标本中分离出的115株铜绿假单胞菌对常用抗生素的药敏试验结果以及耐药趋势，为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供参考。

方法用合肥恒星HX-21细菌鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定和药敏试验，检测115株铜绿假单胞菌对临床常用抗生素的敏感性。

结果 1358份临床标本中共分离出115株铜绿假单胞菌，铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林、头孢他啶及环丙沙星的敏感率较高，而对头孢噻肟、庆大霉素、复方新诺明、氨苄西林等抗生素已表现出较高的耐药性。

而且耐亚胺培南铜绿假单胞菌比例也日渐增高。

结论近年来，铜绿假单胞菌的分离率已经很高，多重耐药菌日趋增多，耐药机制复杂。

因此，加强铜绿假单胞菌对常用抗生素的药敏试验监测可为临床提供最新的流行病学，尽量减少临床经验用药，避免盲目和滥用抗生素。

【关键词】铜绿假单胞菌药敏试验耐药趋势抗生素【Abstract】 Purpose It aims to analyze the drug susceptible experiment results and the drug resistant tendency of the commonly-used antibiotics under the influence of 115 pseudomonas ageruginosa， which were isolated from our hospital’s clinical specimen between January 2008 and December 2009. And meanwhile， it is expected to offer reference for curing pseudomonas ageruginosa infection in clinic. Usage method It utilizes HX-21 drug susceptible analysis instrument for bacterial appraisal of Hefei Hengxing Company to identify bacteria and carry out drug susceptible experiment， and then to check the susceptibility of the commonly-used clinical bacteria under the effect of 115 pseudomonas ageruginosa. Findings Among the 115 pseudomonas ageruginosa isolated from 1358 clinical samples， pseudomonas ageruginosa are found to be more sensible to amikacin， piperacillin，ceftazidime and ciprofloxacin， but show its drug resistance towards some antibiotics， such as cefotaxime， gentamicin， SXT and ampicillin. Plus， the proportion of pseudomonas ageruginosa resistant to imipenemis also increasing. Conclusion In recent years， the isolation rate of pseudomonas ageruginosa has been high. Multidrug-resistance bacteria are increasing and resistance mechanisms are complex. Thus， such drug susceptible experiment detest by combining Pseudomonas ageruginosa with commonly used antibiotics can provide the newest epidemic study for clinical medicine， help to reduce the use of medicine as much as possible， and avoid the abuse of antibiotics.【Key words】 Pseudomonas ageruginosa drug susceptible experiment resistance tendency antibiotics铜绿假单胞菌为临床最常见的条件致病菌，尤其是在医院感染中占有非常重要的地位。

矿泉水铜绿假单胞菌

南昌市疾病预防控制中心NCCDC(原)-010-03
矿泉水微生物检验原始记录
共页第页样品编号样品名称
收样日期年月日检测环境温度℃；湿度%RH
检验日期年月日样品状态□正常□异常
检验项目□大肠菌群□粪链球菌□铜绿假单胞菌□产气荚膜梭菌
检测方法□GB/T8538—2008
检验仪器□GNP-9270A型隔水式电热恒温培养箱（NCCDC-SB-644）□BUGBOX厌氧培养箱（NCCDC-SB-515）
培养基
（批号）
□KF（）□CN（）□SPS（）□BGB（）
结果记录
大肠菌群（多管发酵法）
接种量(ml)10ml×5 1ml×5 0.1ml×5
检验结果
(MPN/100ml) 乳糖胆盐发酵阳性管数
（36±1℃,24h）
BGB培养
（36±1℃,48h）
粪链球菌250ml水样用孔径为0.45um
滤膜过滤，将滤膜贴于KF平板,
培养36±1℃,48h
生长情况:G染色: BHIM斜面: H2O2试验:CFU/250ml
铜绿假单
胞菌250ml水样用孔径为0.45um
滤膜过滤，将滤膜贴于CN平
板,培养36±1℃,48h
生长情况:乙酰胺: 氧化酶:金氏B培养
基上产生荧
光:
CFU/250ml
产气荚膜
梭菌50ml水样用孔径为0.22um
滤膜过滤，将滤膜贴于SPS平
板,厌氧培养36±1℃,24h
生长情况:FT:
G染色:
动力-硝酸盐
含铁牛奶:
卵黄琼脂:CFU/50ml
检验者：复核者：检毕日期：年月日。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定

铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阴性杆菌，也是一种条件致病菌，常见于水和土壤中。

它可以引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染和伤口感染等。

准确鉴定铜绿假单胞菌对于预防和治疗相关感染至关重要。

铜绿假单胞菌的鉴定主要通过形态学、生理学和生化学特征以及分子生物学方法进行。

下面将详细介绍铜绿假单胞菌的菌种鉴定方法。

1. 形态学特征鉴定我们可以通过铜绿假单胞菌在琼脂培养基上的形态学特征来初步鉴定。

铜绿假单胞菌在琼脂培养基上呈不规则的、细长的、呈青绿色的菌落，有时呈褐色或黄色。

在显微镜下观察，可见到细长的革兰氏阴性杆菌。

但仅凭形态学特征鉴定并不够准确，因为有些细菌形态相似，需要进一步进行生理学和生化学检测。

铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，不发酵葡萄糖，产生氧化酶和嫌氧酶。

在进行生理学鉴定时，可以利用生理生化分析系统（API 系统）或者其他相关系统进行检测。

通过检测铜绿假单胞菌的碳水化合物利用情况、氧化还原反应及其他生理生化特征，可以更准确地鉴定。

铜绿假单胞菌具有一些特殊的生化学特征，如产生金属蛋白酶、松香酸酶和氢氰酸等。

这些特征可以通过生化学测试来确定。

铜绿假单胞菌还对氧化还原反应有特殊的反应，可以利用氧化还原试剂来进行鉴定。

4. 分子生物学方法鉴定随着分子生物学技术的发展，PCR扩增和16S rRNA测序已成为鉴定铜绿假单胞菌的重要手段。

通过PCR扩增细菌DNA中的特定基因片段，再通过测序比对16S rRNA序列，可以准确识别铜绿假单胞菌。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一个综合性的过程，需要结合形态学、生理学、生化学和分子生物学等多个方面来确定。

只有准确鉴定了菌种，才能采取针对性的预防和治疗措施。

希望通过本文的介绍，读者对铜绿假单胞菌的菌种鉴定有了更加清晰的认识。

第二篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、植物等环境中。

保健用品微生物检验方法-—铜绿假单胞菌测定

保健用品微生物检验方法第3部分：铜绿假单胞菌测定警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了保健用品中微生物中铜绿假单胞菌的测定方法。

本标准适用于生产和经营的保健用品中的铜绿假单胞菌测定。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 19489 实验室生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。

此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 ℃±1 ℃条件下能生长。

4 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯。

实验用水符合GB/T 6682中二级水的要求。

4.1 灭菌生理盐水:详见附录A.1。

4.2 灭菌液体石蜡:详见附录A.2。

4.3 灭菌吐温-80:详见附录A.3。

4.4 SCDLP:详见附录A.4。

4.5 十六烷基三甲基溴化铵:详见附录A.5。

4.6 乙酰胺:详见附录A.6。

4.7 革兰氏染液:详见附录A.7。

4.8 绿脓菌素测定培养基:详见附录A.8。

4.9 硝酸盐蛋白胨水:详见附录A.9。

4.10 明胶液化培养基:详见附录A.10。

5 仪器和设备5.1 天平：感量0.1 g。

5.2 灭菌刻度吸管:10 mL、5 mL、1 mL。

5.3 高压灭菌器。

5.4 量筒：100 mL、200 mL、2000 mL。

5.5 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5 ℃±0.5 ℃。

5.6 无菌锥形瓶：100 mL、200 mL、250 mL、2000 mL。

铜绿假单胞菌方法学验证报告

GB 8538—2016铜绿假单胞菌方法学验证报告一、验证目的验证《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验法GB 8538-2016》-铜绿假单胞菌检验在本实验室的适用性。

二、验证方法样品采样方案依据GB4789.1-2016 《食品微生物学检验总则》的要求进行，本实验样品取三个不同品牌的饮用天然矿泉水的典型样品进行实验，严格按照GB8538-2016进行。

除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株铜绿假单胞菌（CMCC(B)10104）接种培养而成，与样品实验程序同时进行。

三、验证设备和试剂1.冰箱：SC-322 青岛海尔电器2.生化培养箱：SPX-150B-Z 上海博迅实业3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）成都世纪方舟科技有限公司4.恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂5.菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司6.天平：JE-502 上海浦春计量仪器有限公司7.六联不锈钢过滤器北京中兴伟业仪器有限公司8.三用紫外分析仪：ZF-2 上海安亭电子仪器厂培养基和试剂：1.假单胞菌琼脂基础培养基北京陆桥技术股份有限公司2.绿脓菌素测定用培养基北京陆桥技术股份有限公司3.金氏B培养基北京陆桥技术股份有限公司4.营养琼脂北京陆桥技术股份有限公司5.氧化酶试剂北京陆桥技术股份有限公司6.乙酰胺肉汤北京陆桥技术股份有限公司7.三氯甲烷国药集团有限公司8.纳氏试剂北京陆桥技术股份有限公司四、验证环境1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜进行清洁消毒灭菌并记录；3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及生物安全柜进行沉降菌检测并记录；4.无菌室检验：详见《XXXX》；五、验证步骤1.操作步骤1. 1水样过滤在100级的洁净工作台进行过滤操作。

铜绿假单胞菌的菌种鉴定

铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种革兰氏阴性细菌，通常是一种耐药性很强的致病菌。

对于铜绿假单胞菌的鉴定可以从多个角度进行：
1. 形态特征，铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状。

在培养基上形成圆形、平滑、有金属光泽的绿色或蓝绿色细菌落。

2. 生理生化特征，铜绿假单胞菌对氧的需求较高，是一种好氧菌。

它能够利用多种碳源和氮源进行代谢，产生酶类如氧化酶和蛋白酶。

此外，铜绿假单胞菌还能产生金属螯合物和溶解磷酸盐等特性。

3. 生化试验，进行一系列生化试验，如氧化/发酵葡萄糖、产气、利用麦尔刻姆盐基本培养基等试验，可以帮助鉴定铜绿假单胞菌。

4. 分子生物学鉴定，利用PCR技术对细菌的16S rRNA基因进行扩增和测序，然后与已知的铜绿假单胞菌的序列比对，可以准确
鉴定出细菌的种属。

总的来说，铜绿假单胞菌的鉴定需要结合形态特征、生理生化
特征、生化试验和分子生物学方法，综合分析才能做出准确的鉴定。

这些方法的综合运用可以帮助科研人员和临床医生准确诊断和治疗
相关感染。

铜绿假单胞菌检验

1.1 生物学特性
革兰氏阴性细长杆菌，大小为1.5～3.0×0.5μm，菌体长短不一，呈球杆状或长丝状，成对或成短链排列。菌体一端有一根鞭毛，运动活跃，无芽孢，无荚膜。专性需氧菌。最适温度为35℃，42℃生长，4℃不生长。（所以一般情况下不能冷藏保存，需在室温下于阴凉处保存）可产生多种，主要为绿脓素，是一种水溶性色素，但是也产生能溶于氯仿、蓝绿色、无荧光的吩嗪类色素。

平铺时应避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。
2.2.3 检验程序
结果观察：

所有显蓝色或绿色（绿脓色素）的菌落，初步判定为铜绿假单胞菌。所有发荧光不产绿脓色素疑似铜绿假单胞菌菌落，进行乙酰胺肉汤确证性试验。

将其它所有红褐色不发荧光的菌落进行氧化酶测试、乙酰胺肉汤、金氏B培养基确证性试验。

2. 检验方法
2.1

铜绿假单胞菌检验方法（GB/T 8538）
2.1.1 Water quality -- Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa -Method by membrane filtration （ ISO 16266:2006 ） 2.1.2 《饮用天然矿泉水检验方法》（GB/T8538－ 2008/ 4.54）铜绿假单胞菌检验
2.2.3 检验程序
确证性试验
（4）乙酰胺肉汤将新鲜纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，36℃±1℃，20h～24h。向每支试管培养物加入1～2滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。
3. 结果表示
菌落计数公式：N＝P＋F(CF/nF)＋R(CR/nR)

铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验结果分析

１２１分离．．培养（、汁标本先增菌，划线分离）行纯培养，手工和血胆再再用
ＡＴＢ细菌鉴定仪两种方法鉴定。
期问送检的痰、汁、、、便、汁、流液等１８５份标脓血尿大胆引７
日益严重。本文对２００４年８月至２００６年７月送检的１８５例７标本进行了分离鉴定和药敏试验，报道如下。现１材料与方法
１１材料．
酰胺酶检测纸片购自法国生物一里埃公司。梅１１３质控菌株铜绿假单胞菌ＡＴＣ７５、炎克雷伯菌．．ｃ２８３肺
２０年７月期间送检的１８５标本进行细菌分离鉴定及药敏试验，取其中的１９株锕绿假单胞菌进行分析。０６７例选２结果在各种送检标本中，标本的铜绿假单胞菌检出率较高。药敏结果分析，亚胺培南、痰对头孢哌酮／巴坦、舒奈在临床治疗中，合理使用抗菌药物，格按照药敏试验结果用药。要严
王爱玲李莉，学华１山东省青岛市肿瘤医院２６４；．岛卫生学校），冯（．６０２２青
【要】目的摘探讨铜绿假单胞菌感染的标本来源、株分布及药敏情况。方法对本院自２０菌０４年８月至

临床标本铜绿假单胞菌药敏分析

重要原因。细菌还能从生物被膜中游离出来并繁殖，可能是这
临床上常看到的反复检测阳性引起久治不愈的原因之一。
Ｐｅ亚胺培南的耐药率上升很快，其主要原因是由于ａ对
细菌外层细胞壁的外膜蛋白ＯｒｐＤ是碳青酶烯类抗菌药物进入的通道，因突变导致药物不能进入细菌体内，基流出机制也
导致通透性下降、青霉素结合蛋白改变以及形成生物膜而对
抗菌药物产生耐药性。本次分离的Ｐｅａ对常用抗菌药物阿莫
构成的生物被膜，它可阻止和抑制白细胞、巨噬细胞、抗体及
抗菌药物泵人生物被膜中杀灭细菌，是造成抗菌药物耐药的
西林的耐药率为１０亚胺培南、０％；头孢哌酮／巴坦、舒头孢他
室标准化委员会ＮＣｓＣＳ）２０ＣＬ（ＬＩ０８年标准进行，验数据实由世界卫生组织（ＷＨＯ）菌耐药监测网提供的ＮＴ５３软细Ｅ．件进行分析。
１质量控制：大肠埃希菌ＡＣ２９２．４ＴＣ５２、铜绿假单胞菌ＡＣ２８３购自广东省临床检验中心。ＴＣ７５
・
９７・４
医蕉苤查Ｑ生筮鲞箜塑』！Ｑ
￡￡１堕丛
！Ｑｇｅｅｔｂｒ０１Ｖ１１，ｏ９ｓｐｍｅ１，ｏ８Ｎ．Ｓｅ２．
・
药物研究・
临床标本铜绿假单胞菌药敏分析
广东省惠州市惠阳区人民医Ｆ５６１）￣（１２１林定忠