铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛组培方案样本
铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目二、理解铁皮石斛培养办法和环节, 纯熟掌握外植体取材、消毒、接种、初代培养操作过程。
三、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
四、实验环节配方：依照不同阶段, 培养基配方有所差别。
如表1表1 各种培养基配方配制（以1000ml幼株生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于干净大烧杯中, 加热至沸腾；2）精确称量100g香蕉果肉, 切成碎片状, 并倒入上述烧杯中, 加热煮沸5min, 其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序, 量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水烧杯, 混合均匀；4）将2）和3）溶液混合, 然后加入30g蔗糖, 并移取2ml NAA（0.1mg/ml）, 混合均匀；5）加热至沸腾, 加入8g琼脂并煮沸5min, 其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时, 调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内, 33.3ml/瓶。
注意事项:①溶解香蕉蒸馏水尽量多, 以保证香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时, 要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序；③煮沸时, 小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表, 保证灭菌锅各指标和功能正常, 以防事故发生；2）把带灭菌培养基装入锅内, 盖上锅盖, 对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀, 调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后, 关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后, 调节电压至135V, 保持20min；6）关闭电源, 使之自动降温至0℃。
10min后, 打开排气阀和锅盖；7）5—10min后, 取出培养基放于实验台上冷却, 待用。
铁皮石斛组织培养课件
根据培养的材料和目的，组织培养可以分为胚胎培养、 愈伤组织培养、器官培养和细胞培养等类型。
组织培养技术的发展历程
01 19世纪中期
植物组织培养的萌芽期，科学家开始尝试将植物 组织放在人工控制的条件下进行培养。
02 20世纪初
植物组织培养技术的初步形成，科学家发现植物 细胞具有全能性，能够发育成完整的植株。
开花时，铁皮石斛会形成黄绿色的花朵，并散发 03 出淡淡的香气。
铁皮石斛的生长环境
铁皮石斛主要生长在温暖湿润的环境中，如热带 01
雨林、季雨林等。
它需要附生于树木或岩石上，并需要较高的空气 02
湿度和适度的光照。
02 适宜的生长温度为15-25℃，且需要保持一定的 空气流通，以斛具有滋阴清热、生津止渴的功效，常用 于治疗热病伤津、口渴咽干等症状。
它还具有益胃生津、滋阴清热的功效，对于胃脘 痛、上腹胀痛等症状也有一定的疗效。
此外，铁皮石斛还具有一定的抗肿瘤、抗氧化、 增强免疫力等作用。
组织培养技术概述
组织培养的定义与分类
组织培养的定义
组织培养是一种在人工控制的条件下，将植物的细胞、 组织或器官进行离体培养，使其生长、发育的技术。
02
快速繁殖
通过组织培养技术可以实现铁皮石斛的快速繁殖， 提高种苗质量和产量，满足市场需求。
铁皮石斛组织培养的实践操 作
实验材料与设备
实验材料
铁皮石斛幼苗、培养基质（如珍珠岩、 蛭石等）、活性炭、植物生长调节剂 等。
实验设备
超净工作台、培养皿、玻璃瓶、烧杯、 量筒、天平、灭菌锅、PH试纸等。
实验操作流程
培养条件
将接种好的培养皿放入恒温培养箱 中，设定适宜的温度和光照时间， 保持一定的湿度。
铁皮石斛组织培养培训材料
技术要求高、成本较高、可能存在变 异和遗传稳定性问题等。
02
铁皮石斛组织培养基本流程
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的铁皮石斛植株作为外植体，如茎尖、 叶片等。
外植体的处理
对外植体进行清洗、消毒、切割等处理，以去除表面污垢和 微生物。
无菌操作技术
01
02
03
无菌操作环境
在无菌操作室内进行组织 培养操作，确保环境清洁 无菌。
光照与温度控制
总结词
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要环境因素。
详细描述
适宜的光照强度、光照时间和温度能够促进铁皮石斛组织的生长和分化。在不同的生长阶段，需要调整光照和温 度条件，以满足铁皮石斛生长的需求。
激素的种类与浓度
总结词
激素的种类和浓度是调控铁皮石斛组织培养的关键因素。
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，需要添加适量的激素，如生长素和细胞分裂素，以促进细胞的分裂和生 长。同时，激素的种类和浓度也需要根据实验需求进行选择和调整，以达到最佳的组培效果。
4. 将接种好的培养皿 放置在适宜的温度和 湿度条件下进行培养。
实验操作步骤与注意事项
注意事项 1. 在操作过程中要保持无菌环境，避免交叉污染。
2. 取材时要选择健康、无病虫害的植株，并确保取下的组织健康无病。
实验操作步骤与注意事项
01
3. 培养基的成分和pH值要适宜， 以保证组织的正常生长。
02
病虫害防治
总结词
病虫害是影响铁皮石斛组织培养的重要 因素，防治病虫害是组培过程中的重要 环节。
VS
详细描述
在铁皮石斛组织培养过程中，可能会受到 细菌、真菌等病原体的侵害，以及害虫的 侵害。为了防治病虫害，需要定期检查组 培苗的生长情况，及时发现并处理病虫害 ，同时采取生物、化学、物理等多种防治 方法进行综合防治。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛的组织培养作者：黄子聪来源：《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要：铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，为传统名贵中药。
由于对生境要求十分苛刻，加之人为过分采收，现已濒临灭绝，已被列为“濒危珍稀植物”。
对铁皮石斛的组织培养及人工栽培进行研究，实现保护野生铁皮石斛资源的同时满足人们的消费需求，具有重要的现实意义。
关键词：铁皮石斛；组培快繁一、铁皮石斛组培培养（一）材料与方法1.供试材料供试材料：果荚：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的铁皮石斛单株进行授粉，获得果荚。
茎段：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的、二年生的、具有20厘米以上的铁皮石斛，自上而下剪下15厘米左右，带回实验室，备用。
2.方法（1）消毒方法果荚的消毒方法：将生长了5个月的果荚用消毒的剪刀从植株上剪下，带到超净工作台下，用75%的酒精浸泡2分钟，然后用灭菌去离子水清洗两次，放在灭菌的空瓶中。
播种前，将要切开的部位及花朵着生位置在酒精灯下稍微过火，然后再将基切开，播种。
（2）种子无菌播种将灭菌的果荚在果荚蒂附近的位置上用灭菌的手术刀切开一个约1.5厘米的切口，然后直接将种子均匀地撒在培养基上。
放在培养架上进行光照培养。
培养基配方：Z0：MS+NAA0.1mg/L+土豆汁100g/L（3）原球茎的增殖及分化将转绿的原球茎转接到增殖分化培养基上，每瓶接种6个点，每个点5个原球茎，5瓶一个重复，设3次重复。
茎段的消毒方法：选取茎段特征明显的铁皮石斛单株，用消毒的剪刀从节间靠下的位置将优选单株剪下，然后将叶片摘除，在自来水下将表面的灰尘洗去。
接下来将茎段上的叶鞘撕掉，特别是底部与节相连接的位置要去干净，同时注意不要伤到休眠芽，再用洗洁精进行表面清洗，在自来水下将洗洁精清洗干净，带到超净工作台下，用75%酒精浸泡两分钟，期间不断地搅拌，再用灭菌去离子水清洗2两，切成每段3-5节，用0.1%升汞（加吐温20 2滴）浸泡9分钟，期间不断地搅拌，倒去升汞溶液，再用灭菌去离子水清洗6次，每次2分钟。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。
从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。
铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。
《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。
现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。
由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。
为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。
1 种子萌发1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。
叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。
2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ;4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。
1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。
赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。
1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。
2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。
6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。
KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。
铁皮石斛的组织培养
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。
而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。
因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。
石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。
原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。
特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。
铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。
野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。
由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。
现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。
1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。
研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。
培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。
种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。
在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45天以下，萌发率极低，萌发时间长；60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6％；90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87％；120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95％以上。
铁皮石斛的组织培育
铁皮石斛的组织培育简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种常见的地生兰花，被广泛用于中药材的生产和兰花观赏。
由于其极高的药用价值和观赏价值，铁皮石斛的组织培育技术日益受到关注。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养原理、培育步骤以及培育过程中需要注意的问题。
组织培育原理铁皮石斛的组织培育是通过体细胞分裂和再生的方法，通过悬浮培养、离体培养和液体培养等技术手段，将铁皮石斛的一部分组织或细胞培养繁殖，获得大量的无性繁殖植株。
组织培育的原理基于植物的细胞分化和再生能力，通过合适的培养基和生长因子的添加来促进细胞分裂和再生。
组织培育步骤1. 选择合适的母株：选择生长旺盛、健康无病虫害的铁皮石斛母株作为组织培育的起始材料。
2. 材料消毒：将选取的铁皮石斛茎段进行表面消毒，以防止外来病菌的污染。
3. 切割茎段：将消毒后的茎段切割成1.5-2.0厘米的小段，保证每个小段都有叶鞘和芽。
4. 建立悬浮培养：将切割好的茎段转移到含有适量植物生长因子的悬浮培养基中，使其暴露在光照下，利用悬浮培养的方式促进茎段细胞分裂和再生。
5. 培养条件控制：控制培养温度在25-30摄氏度，光照强度在2000-3000勒克斯，通风和湿度适宜。
6. 培养时间：一般培养时间为6-8周，待茎段上出现新芽后再进行下一步操作。
7. 幼苗分离：将培养好的茎段转移到含有植物生长调节剂的培养基中，促进幼芽的生长，待幼苗生长到一定程度后进行分株。
注意事项- 消毒环节非常重要，一定要保证茎段的无菌状态，以防止病菌和病毒的感染。
- 培养环境的温湿度要适宜，过高或过低的温度、过干或过湿的环境都会影响铁皮石斛的组织培育效果。
- 选择合适的培养基和生长调节剂，可以促进茎段的细胞分裂和再生，提高组织培育的成功率。
- 铁皮石斛的组织培育需要耐心和细心，注意观察幼嫩茎段的生长情况，及时调整培养环境和添加必要的营养物质。
结论铁皮石斛的组织培育是一种有效的繁殖方法，它可以大幅提升植物繁殖速度和质量。
铁皮石斛组培技术
铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养目录摘要 (3)Abstract (4)前言 (5)1. 培养基 (6)配方 (6)配制（以1000ml 幼株的生根壮苗培养基为例） (6)灭菌 (8)2. ............................................................ 转接9转接前准备 (9)转接 (9)培养 (9)3. .......................................................... 炼苗10炼苗目的 (10)炼苗方法 (10)4. .......................................................... 移栽11基质选择 (11)移栽技术要求 (11)5. 结论与分析 (12)参考文献 (13)摘要铁皮石斛(De ndrobium offic in ale )是兰科(Orchidaceae)石斛属(De ndrobiumSw)多年生草本植物。
铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。
铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。
铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。
为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,namedfor its ferric green a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words: Dendrobium orchid Dendrobium tissue cultureculture medium adapter rapid propagation前言多年生草本，具有气生根。
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖(1)
移栽前， 先将试管苗练苗 １ 周， 出瓶时注意 不要伤及根茎部， 用流水洗去根部附着的培养基 后， 在阴凉通风处晾根半天， 栽入盛锯木屑和塘 基兰石的穴盘中， 或者混合基质（ ２ 份陶粒 ＋１ 份 腐叶土 ＋１ 份树皮 ＋１ 份锯木屑） ，（ 下转第 １３ 页）
时， 立即喷药防治， 使用的药物与防治红蜘蛛的药
物一样。
４．５ 蚧类
主要有吹绵蚧、盾蚧类等， 为害枝条和果实，
削弱树势， 诱发煤烟病， 降低果实的产量和品质。
防治方法： 冬季用 １６￣２０ 倍液的松脂合剂清园，
并剪去虫枝。防治重点掌握在 ５～６ 月间第 １ 代若
虫盛发期连续喷药 ２ 次， 使用的药剂有： ４０％ 氧化
柑桔类的病虫害种类较多， 介绍几种主要病 虫害的为害症状及防治方法。 ４．１ 疮痂病
主要为害嫩枝叶、幼果。叶片染病开始出现水 渍状小斑点， 后成蜡黄色。果实受害后常长出许多 瘤状突起。防治方法： 第 １ 次在春芽萌动 １ 粒米长 时， 第 ２ 次在谢 花结束时， 各 喷 １ 次 ５０％ 退 菌 特 ５００ 倍液或 ７０％ 甲基托布津 ８００ 倍液。 ４．２ 炭疽病
将增殖后的胚状体转到（ ８） 中壮苗， 可提高 植株的健壮度， 培养 ３０ 天后再转到培养基（ ９） 、 （ １０） 、（ １１） 中 ，（ ９） 、（ １０） 号 培 养 基 迅 速 分 化 长出具根的小苗， ６０ 天后形成的丛生苗已具 ３ 片 真叶和 ４ 条 ３￣５ｃｍ 长的根。（９） 号培养基苗高可 达 ５￣６ｃｍ， 但苗基部易产生丛芽， 不利于试管苗的 移栽， 所以（ ９） 号培养基更有利于生根移栽。 ３ 试管苗的移栽
铁皮石斛组织培养PPT课件
02
组织培养技术概述
组织培养的定义与分类
组织培养是指在人工控制的条件下，将植物的离体组织或细胞培 养在人工配置的培养基上，使其生长、发育、繁殖并产生次生代 谢产物的技术。
根据培养的植物材料不同，组织培养可以分为器官培养、胚胎培 养、细胞培养、原生质体培养等。
组织培养技术的发展历程
19世纪中期
植物细胞全能性的发现，为组织培养奠定了理论 基础。
利用组织培养技术，可以对铁皮 石斛进行深入研究，探索其生长 、发育和代谢机制等。
07
参考文献
参考文献
02
01
03
[请在此处插入参考文献1] [请在此处插入参考文献2] [请在此处插入参考文献3]
THANK YOU
感谢聆听
02
03
04
根
铁皮石斛的根为须根，呈白色 或灰白色，较为细长。
茎
铁皮石斛的茎为圆柱形，多节 ，表面有纵纹，呈黄绿色或紫 红色。
叶
铁皮石斛的叶为革质，呈长圆 形或椭圆形，表面光滑，有光 泽。
花
铁皮石斛的花为白色或淡黄色 ，呈单生于叶腋间，花瓣为6 片。
铁皮石斛的药用价值
滋阴清热
铁皮石斛具有滋阴清热的功效，可用于治疗热病伤 津、口渴咽干等症状。
以防止污染。
选择适宜的培养基
根据实验需求选择适宜的培养 基配方，以保证铁皮石斛的正
常生长。
控制培养环境
保持恒定的温度、湿度和光照 条件，以满足铁皮石斛的生长
需求。
定期观察与记录
对培养中的铁皮石斛进行定期 观察，记录生长情况，以便及
时发现问题。
实验问题及其解决方案
污染问题
若发现培养基中出现菌落， 应立即弃去污染的培养基， 并检查操作过程，确保无菌 操作。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛组培技术
• • • • • • • • • • • 一 茎段培养 必要的培养条件 取材与消毒 诱导培养 增殖培养 生根培养 出瓶苗的过渡管理 二 种子培养（胚培养） 三 茎尖培养 四 原球茎培养 五 根尖培养
石斛生产基地
实训时，我们看到的批量的铁皮石斛的生产，以及 工作人员正在上盆，移栽石斛。由此，我们了解到 铁皮石斛生长缓慢，周期长。
组织培养的流程
培养基的流程
培养基配制 灭菌 接种 培养 驯化移栽
灭菌
•接种前我们应该做的灭菌工作： 1.在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫 外线灯； 2.接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿 拖鞋等； 3.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然 后搽拭工作台面； 4.先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾 过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
铁皮石斛的组织培养
园艺3133 王冬玲 12号
目录
一 组织培养的概念 五 驯化移栽
二
组织培养的流程
六
铁皮石斛简介
三
灭菌
七
ห้องสมุดไป่ตู้
铁皮石斛的组培技术
四
接种
八
石斛生产基地
组织培养的概念
• 植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分 离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无 菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植 株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
接种
无菌接种的具体步骤： •将初步洗涤及切割的材料放入烧杯， 带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用 无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放 置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 •．材料吸干后，一手拿镊子、一手 拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的 切割。 •用灼烧消毒过的器械将切割好的外 植体插植或放置到培养基上。
铁皮石斛组织培养
小苗可以用苔藓或水苔!中苗就要树皮石子加苔藓!大苗可用石子树皮等!至于用来培养组织苗的培养基属难告知恩，这个我知道，我就想出了MS培养基，没有其他适合的了吗？培养基也属于商业秘密啊？很多好一些的营养基都是商业密秘!我会去给你找个适合石斛的营养基.只能给你个普通的!希望你喜欢石斛较常见的培养基配方,花宝三克,百分之十到百分之二十的萍果汁一千毫升,蔗糖浓度百分之三点五.琼脂十五克.蒸溜水一千克氢离子浓度调节到一万纳摩/升(PH5.0)常规铁皮石斛开花后采用人工方法授粉，将其种子接种在１／２ＭＳ液体培养基中非共生萌发培养时，再转入含有０．０１％Ｏｒｙｚａｌｉｎ＋０．０１％秋水仙碱的１／２ＭＳ液体培养基中进行诱变处理，然后转入１／２ＭＳ固体培养基上，光照；取新生长的根尖固定，用压片法制备染色体标本，卡宝品红染色液染色，染色体数目为２ｎ＝７６的幼苗为四倍体铁皮石斛，按通常方法进行栽培管理。
现在大部分采用松树皮发孝后来种的！铁皮石斛组织培养的培养基用到的主要基本培养基是MS培养基，也不只是这一种，其它的WV、winte等都可以用，但是一般多用MS培养基，也可以用1/2MS培养基，大量元素减半，其它元素不变。
除此之外，还有加一些生长素（如IAA、IBA、NAA等），细胞分裂素（如6-BA等）。
但是不同的培养时期也不同的激素配合。
如诱导愈伤组织时，要两种激素的配合。
增殖传代时也要两种激素的配合，但生长素为主；分化时以分裂素为主，壮苗和生根以生长素不主。
一般用量都是0.1-10mg/L这个范围里。
此外，还有的加了什么香蕉素，椰看你是用什么外植体，或是想诱导什么先了，一般如果是茎段的话，用一般的MS+0.3mg/L NAA+5mg/L 6-BA做诱导培养基就好，但是如果你要用根茎做外植体诱导原球茎的话，最号用1/2MS加上水解乳蛋白和激动素和6-BA 就好,量看你外植体了，不同的类型不同乳等。
一般NAA：6-BA是10：1，即2：0.2mg/L（一）繁殖技术石斛的繁殖方法分为有性繁殖和无性繁殖两大类，目前生产上主要采用无性繁殖方法。
铁皮石斛组织培养
IBA
BA
NAA
土豆汁
香蕉汁 IAA
生根培养基的设计 生根培养基
1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
,1999,24(1):29-31。 • [5]张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展[J].中国中药杂志
,2000,25(6):323-326。
B1小组成员展示结束
谢谢！
接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记
各时期的培养条件
• 茎段的诱导时间在5~11天之间 • 培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光照时间10h/d
参考文献
• [1]郑宽瑜,邓君浪,赵培快繁技术体系研究[J].云南农业科技,2009,(S2):57-59。 • [2]周根余,谢薇,程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的若干因素[J].江西科学
,1999,17(4):231-235. • [3]叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究[J].中国药业,2001,10(1):53。 • [4]李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培[J].福建热作科技
生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养， 约1~2周后即生根，以长成完整植株。
铁皮石斛的组培及污染处理技术
精将裸露在外面 的部分灭菌 。 进入接 种
上空喷 ７ ％ ５ 酒精进 行消毒 ， 将灭菌盘放
在组织培养过程中 ， 多种因素容 易 染 的组培苗应及时处理掉 ， 以免大面积
室后用 清洁布将台面擦拭干净 ， 台面 造成铁 皮石斛组培苗的污染 ， 在 如发现污
般在接种 １—２ 后极 易发生 。 天 造成细
严 的温度 。光照强度大于 １ ０１ 时需遮 的活性 ， 重影响苗的脱分化和器官分 ０００ｘ 的因素主要有苗 中酚类物质 的含 量 、 外
等。
、
培 养 基 的 制 作 及 接 种
１制 作培 养基 ．
在 制作 培 养基 时
培养基 的成分 、 素类 型 激 口膜 的皮筋 ， 不要揭 开封 口膜（ 但 如是 植体 的大小 、
２玻璃化 苗 ． 在组培 过程 中， 组培
半 阳的环境 ， 不耐寒。 石斛可分为黄草 、
金钗 、 马鞭等数 １ ， 皮石斛为石斛 ０种 铁
将 大小 苗混插 ， 长点数 要插够 ， 生 以保 苗叶片和嫩梢呈透明水渍状 的现 象 ， 它 证 苗的质量 。丛生芽单独插 １ 瓶。
二 、 养 及 炼 苗 培
化 进行 人工种植 ， 而通过组培技术可 以 获得更 多的铁皮石斛种苗 。
一
苗转 入大棚中进行炼苗 ， 让种苗长的 更
功 地将 只能在 野外 生长 的铁皮 石斛驯 健 壮 ， 根据 天气 情况 适当地调节大棚 中
荫 ，一 般 采用 ７％遮荫 能达 到理 想效 ０ 果 。在大棚中放置 ２天后 ， 解开绑扎封
的 光 照 （ 照时 间 为 １ 时 ／ ， 照 光 ２小 天 光 时间等 。
０ｘ和温度 （５ ℃ ）湿度 ０ ２ ±２ ， 由于它 生长条件十分苛刻 ， 自然产量极 强度为 ２ ０１）
铁皮石斛组织培养实验流程
铁皮石斛组织培养实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!1. 材料准备选择健康、无病虫害的铁皮石斛植株作为实验材料。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。
而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。
因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。
石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。
原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。
特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。
野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。
由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。
现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。
1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。
研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。
培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。
种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。
在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45
天以下，萌发率极低，萌发时间长；60天胚龄的胚具34个细胞，萌发率为6％；90天胚龄的胚细胞为74个，萌发率为87％；120天胚龄的细胞数为90个，萌发率95％以上。
实验表明，组织培养的最适胚龄以种子成熟时较好，随着胚龄增长，其胚细胞愈多，萌发率越高。
原球茎增殖分化的最适培养基为改良N6+NAA0.2mg/L+2％蔗糖。
种子萌发成苗后需及时将小苗转移到合适的培养基中进行生根、壮苗培养。
有报道，铁皮石斛试管茁壮苗阶段的适宜培养基为B6（或1/2MS）+10％香蕉水提物+NAA2.0mg/L+2％蔗糖。
生根壮苗培养基为改良N6+10％香蕉+2％蔗糖，苗长得更粗壮。
将萌芽石斛继代培养于N6+10％香蕉汁生根壮苗培养基中，苗长得更粗壮。
2 茎尖培养：取铁皮石斛当年萌发的嫩茎尖，用10％次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗4~5次后接种到培养基上。
研究结果表明，培养温度为25~28℃，光照度1600~2000lx，每日光照10~12h。
在MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L培养基中培养30天左右，外植体则可诱导出大小不一的白色颗粒状愈伤组织，再过20天形成不定芽。
将愈伤组织和不定芽切割开，再接种到MS+NAA0.2mg／L+6-BA0.5mg/L中，愈伤组织会增殖并产生不定芽，再将不定芽移到N6+10％香蕉汁中培养30天左右，则会生根长成植株。
3 幼嫩茎段培养：剪取铁皮石斛幼嫩茎段，按常规表面灭菌，切成2.0cm左右的切段，每一切段应至少保留1个节，将其接入芽增殖培养基
MS+NAA0.1~0.5mg/L+6-BA0.5~2.0mg/L。
（蔗糖浓度3.0％，PH5.4~5.8，下各培养基均同）中培养。
培养条件：培养温度（25±2）℃，连续光照培养，光照强度1500lx。
培养30~50天后，可在节间处长出1~2个新芽。
将新芽切下，再接入芽增殖培养基中继代培养，经过30天培养，在切口处长出4~6个芽，形成丛生芽簇。
将丛生芽切割后，在芽增殖培养基中继续增殖培养，则可获得大量丛生芽。
将上述丛生芽切割成单苗，转入壮苗培养
基MS（无激素）中培养，40天后，芽可发育成高3.0cm以上并具2~3片叶的健壮无根苗。
再将经过壮苗培养的无根苗，转接到生根培养基1/2MS+IBA0.1mg/L中培养40~60天，在苗基部便可长出多条肉质、绿色气生根，形成完整植株。
尚有报道，取铁皮石斛茎，去叶、洗净、表面灭菌后，在无菌条件下切成约5mm长的小段，每段必具一个茎节，接种于1/2MS或努森培养基内，置（26±1）℃光照条件下培养，约2周，腋芽长出，约1个月则可形成完整植株。
4 炼苗与移栽：当试管苗有4~5片叶展开，并具有3~4条1~2cm长的根时，即可揭开瓶盖，在室内炼苗1周后，将再生植株移植于细土与牛粪（1：2）的栽培基质中，盖上薄膜，保持湿度90％以上，基质以湿润、不积水为宜，置通风阴凉处，成活率可达60％。
或以碎砖4份，碎木炭1份，珍珠岩和蕨根适量组合为移栽基质，其既能透气，又能排水保水。
经研究表明，铁皮石斛试管苗的出瓶移栽，在4~6月温度较高、湿度较大时的成活率最高。
移栽后的小苗放在阴湿且通风地方，一周内不浇水，以防湿度过大而烂根。
以后随植株生长而加强管理，则可确保铁皮石斛试管苗的成活。