牛血清蛋白酶联免疫检测试剂盒的研制及验证

奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制

ＣＷｏｅｔｒｎＯｐｒｇｓｅｏｅ
ＰＡＮＧａ－ｏｇ，ＨＥＤａｃｏｇ，ＷＥＮ－ｉＧｕｎｌｎ－ｈｎＨｅｘｎ
（ａｇｉｃｔｎＴｃｎｃｌｏｌｇｆＡｇｉｕｔｒ，Ｎａｎｎ３０７，ＣｉａｏｏｙＩｓｉｔ１Ｇｕｎｘａｉ￣ｅｈｉａｌｅｏｒｌｅＶｏｏＣｅｃｕｎｉｇ５００ｈｎ；２Ｂｉｌｇｎｔｕｅ，ＧａｇｉａｅｔｕｎｘｄｍｙＡｃ
ＢＡｎｅｌｗｒ０ｎｏｂｅｏｔｌｏｃｎｒｔｎｏｉｂＩＡｈｓｂａｄｍｅｈｄＴｅＣＷｄｎｓｕｅｒＳａｄｓｎｍｅｅｆｕｄｔｅｔｐｉｎｅｔａｉｆｋｔｙＥＬＳｃｅｓｏｒｔｏ．ｈｍａｃｏｈＯｕｇｗａｓｄｆｏｄｔｃｉｇｓｍｐｅｗｔｉｎｈｈｎｅｉｒｇｓｅｏｅｌｖｌｏｕｇｃｕｄｐｏｉｅｒｆｒｎｅｏｅｔａｄｇｓｔｎｅｅｔａｌｉｋｔｎｈ，ａｄｔｅｃａｇｎｐｏｅｔｒｎｅｅｆｄｎｏｌｒｖｄｅｅｅｃｎｈａｎｅｔｉａｏｐｒｄｉｅｔｃｔｎａｄｄａｎｓｓｏｅｒｄｃｉｎｂｒｅｉｅｓ．ｅｏｄｎｉａｉ，ｎｉｇｏｉｆｒｐｏｕｔａｒｒｓａｅｉｉｆｏｏｉｄＫｅｒｓｃｗｐｏｅｔｒｎ；ＩＡ；ｎｉｏｙｔｅｙｗｏｄ：ｏ；ｒｇｓｅｏｅＥＬＳａｔｄｔｒｂｉ

ELISA法检测组织工程产品中残留牛血清蛋白含量

ｄｔｃｉｇｒｓｄａＳｎＴｅｅｔｅｉｕｌＢＡｉＥＭＰ，ａｄｔｎｅｔａｅｔｅｅｆｃｓｏｉｓｎｒｔｃｌｏｅｕｉｇｒｓｄａＡｉＥｎｓｎｏｉｖｓｉｔｈｆｔｆｒｎｉｇｐｏｏｏｎｒｄｃｎｅｉｕｌＢＳｎＴＭＰ．ｇｅｓＭａｅｉｌｎｅｈｄＴｒｅｋｎｓｏＥＭＰｓｄｉｈｓｓｕｙｗｅｅｉｓｅｅｇｎｅｅｏｅｉｓｅｅｇｎｅｅｅｄｎｔｒａｓａｄｍｔｏｓｈｅｉｄｆＴｓｕｅｎｔｉｔｄｒ：ｔｕｎｉｅｒｄｂｎ，ｔｕｎｉｅｒｄｔｎｏｓｓａｄｔｓｅｅｇｎｅｅｏｅｌｓｏ．Ｔｅｉｎｉｕｎｉｅｒｄｃｒａｔｍａｓｎｒｈｍｍｅｓｎｏａｈｐｏｕｔｓｐｅａｅｆｒｔｅｒｎｉｇｐｏｅｕｅａｃｒｉｇｔｒｉｆｅｃｒｄｃｒｐｒｄａｔｈｓｎｒｃｄｒｃｏｄｎｏｏｗａｅｉ
论著・
ＥＩＡＬＳ法检测组织工程产品中残留牛血清蛋白含量
方玉冯晓明奚廷斐陈震杜晓丹
【要】目的摘
探讨定量检测牛血清白蛋白（ｕｅｕｌｕｎＢＡ）Ｂｌｓｒｍａｍｉ，Ｓ酶联免疫试剂盒用于组织工程医疗产品（ｄｃｌｌｂＭｅｉａ
明显减少。论（）试剂盒适用于组织工程医疗产品中ＢＡ残留量的检测。２对于组织工程医疗产品而言，同的结１该Ｓ（）不清洗程序对ＢＡ的残留量有非常明显的影响。生产商应根据其预期用途制定有效的清洗程序，在说明书中给予足够Ｓ并

牛结节性皮肤病ELISA检测试剂盒验证试验

牛结节性皮肤病ELISA检测试剂盒验证试验
牛结节性皮肤病（bovine nodular dermatitis，BND），也称为“木眼病”，是一种
由病毒引起的牛皮肤病。

这种病毒属于大痘病毒(Orthopoxvirus)属，是一种DNA病毒。

在病发地区，BND对牛业造成了很大的损失。

一种用于检测病毒存在的方法是酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)。

ELISA是一种定量分析技术，主要用于检测、诊断、研究和监测各种病原体的存在和反应。

ELISA技术已广泛应用于病原体和相关蛋白的检测中，因其灵敏度高、
稳定性好、操作简便和费用低等方面的优点而受到越来越多的关注。

为了验证牛结节性皮肤病ELISA检测试剂盒的灵敏度和特异性，进行了一系列的实验。

首先，用经过纯化的BND病毒蛋白质对测试剂盒进行评估。

评估结果表明，该测试剂盒具
有很高的灵敏度和特异性，可以准确地检测到BND病毒蛋白质的存在。

其次，采集30头罹患木眼病的牛的血清样品，以及30头健康牛的血清样品，并使用BNS ELISA测试剂盒进行检测。

结果显示，在30头罹患木眼病的牛中，有29头（97%）血清样品检测出BND病毒蛋白质。

而在30头健康牛中，所有血清样品均未检测出BND病毒蛋白质，这表明该测试剂盒具有很高的特异性。

综上所述，本研究验证了牛结节性皮肤病ELISA检测试剂盒的灵敏度和特异性。

在日
常的病原体检测中，该测试剂盒可以起到重要的作用，有利于疾病的快速及时发现和治疗，从而降低生产成本，提高养殖效益。

牛血清白蛋白的提取与鉴定

牛血清白蛋白的提取与鉴定一、实验目的1. 掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法2.掌握盐析法、透析法及电泳法二、实验原理牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。

等电点4.8。

应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。

再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关，对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。

三、操作步骤（一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。

（二）透析（1 ）取干净的比色板，在各孔内滴加一滴纳氏试剂（2）透析袋未放入水中时，立即取水中液体检查有无NH4+(3)取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。

(4)每隔2分钟检查一次，更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化并记录，直至袋内盐分透析完毕。

(5)将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。

（三）电泳（1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。

标准液点一次，待测液点三次。

（2）电泳将点样后的膜条臵于电泳槽架上，放臵时膜条无光泽面向下，点样端臵于阴极，待平衡5min后，打开电源，调节电泳仪的电压为160伏，通电60min，关闭电源后用镊子将膜条取出。

牛血清蛋白酶联免疫检测试剂盒的研制及验证

率在９．％一１６３，３４０．％未见该方法与人血清白蛋白、卵清蛋白以及疫苗复合保护剂之间有交叉反应。该法敏感度
高，准确性、重复性和稳定性好，可用于疫苗牛血清残余蛋白的质量控制。
关键词：牛血清蛋白；试剂盒
中图分类号：５２Ｑ１文献标识码：Ａ文章编号：０５５７（０８０．０００１０－３２０）２０２．４６ＴａａｉｇＰｏｕｔＣ．ＬＤ．耐ｉ．００４。ｈｎ１ｉＴｎＢｄｏ￣ｎｒｄｃｏ．ＴＢ１０２Ｃｉｓａ
ｈｔｅ￥ｌａｔｏｙｗｔａｌｎｉｄｉＨＲＰａｅｅｔｎａｔｏｙ。ｉｃａｅｅｔｖｎｅｕｐｏｅｎ，ｂｖｎｅｕａｕｎａｄｂ－￣ｂｈｓｄｔｉｉｄｗｈｈＣｄｔｃｉｅｓｒｍｒｔｉｓｏｉｅｓｒｍｌｍｉｎｏｃｏｎｂｎｏｂｂ
维普资讯
２００８年第３６卷第２期
ＰｏｃｂｏＩｍｕｏＮｖ２０．ｏ．６Ｎ．ｒｉＭｉｏｉｌｍｎｌｏ．０８Ｖ１ｏ２ｇｎｒ３
牛血清蛋白酶联免疫检测试剂盒的研制及验证
ＤｅｅｏｍｅｔａｄｖｌａｉｎｏＬＩＡｉｎｄｔｃｉｇｒｓｄａｏｉｅｓｒｌｒｔｉｓｉｉａａｃｎｓＰＮ．ｕｖｌｐｎｎａｌｔｆＥＳｋｔｏｅｅｔｅｉｕｌｖｎｅｕｎｐｏｅｎｖｒｌｖｃｉｅＡＳ．ｄｏｎｂｎ＾ｌ

牛血清蛋白含量实验报告

牛血清蛋白含量实验报告实验名称：牛血清蛋白含量实验实验目的：1. 测定牛血清中蛋白质的含量。

2. 掌握蛋白质含量测定方法的原理与操作技巧。

实验原理：本实验以伯胺蓝法测定牛血清中蛋白质含量。

伯胺蓝是一种与蛋白质结合的染料，可以通过测定染料与蛋白质的吸光度来确定蛋白质的含量。

实验步骤：1. 预备试样：取少量牛血清样品，加入5倍体积的生理盐水稀释，得到稀释液。

2. 制备标准曲线：取一系列不同浓度的标准蛋白溶液，如0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/mL，分别取0.2mL放入不同试管中，加入1.8mL伯胺蓝试剂，室温下反应30分钟后，用紫外分光光度计在595nm处测量吸光度，得到吸光度-浓度曲线。

3. 测定样品吸光度：将稀释液使用相同的方法反应30分钟后，同样在595nm 处测量吸光度。

4. 计算蛋白质含量：利用标准曲线上的吸光度值和已知浓度进行插值计算，得出样品中蛋白质的浓度。

实验数据与结果分析：本次实验测得的标准曲线如下：浓度(mg/mL) 吸光度0.1 0.150.2 0.310.3 0.470.4 0.630.5 0.79利用标准曲线的插值计算，得出牛血清样品中蛋白质的浓度为0.35 mg/mL。

讨论与结论：通过本实验的测定，我们成功地测量出了牛血清样品中蛋白质的含量为0.35 mg/mL。

该结果可以作为参考值，用于评估牛血清中蛋白质的含量。

实验中可能存在的误差源及对策：1. 稀释液的配制：如果在稀释液的配制中出现误差，将会导致测定结果的不准确。

因此，在配制稀释液时应严格按照实验要求进行操作，并确保各步骤的准确性。

2. 吸光度的测量：在用紫外分光光度计测量吸光度时，仪器的误差或者使用不恰当的操作方式，都可能导致结果的误差。

因此，在测量吸光度时，要仔细调节光度计的工作状态，并注意操作规范。

改进措施和建议：1. 精确控制稀释液的配制比例，减小误差。

2. 测量吸光度时，遵循操作规范，确保测量结果的准确性。

牛血清蛋白含量实验报告

一、实验目的1. 掌握牛血清蛋白提取的基本原理和方法。

2. 学习双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量的原理和操作。

3. 了解牛血清蛋白在生物医学研究中的重要性。

二、实验原理牛血清蛋白（BSA）是一种重要的生物大分子，广泛用于生物化学、分子生物学和免疫学等领域。

本实验采用双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量，其原理是：蛋白质分子中含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），在碱性条件下能与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。

生成的紫红色络合物在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内具有良好的线性关系。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 牛血清- 双缩脲试剂：硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾- 6.0mol/L NaOH 溶液- 0.1mol/L HCl 溶液- 比色皿- 移液器- 紫外可见分光光度计2. 实验仪器：- 电子天平- 磁力搅拌器- 酶标仪四、实验步骤1. 牛血清蛋白提取：（1）取一定量的牛血清，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入等体积的丙酮，充分混合，静置过夜；（3）离心，取上清液，即为牛血清蛋白溶液。

2. 牛血清蛋白含量测定：（1）取一定量的牛血清蛋白溶液，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入适量的双缩脲试剂，混匀；（3）将溶液置于酶标仪中，在540nm波长处测定吸光度；（4）根据标准曲线计算牛血清蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：（1）分别取不同浓度的牛血清蛋白标准溶液，用0.1mol/L HCl溶液调节pH值至4.7；（2）加入适量的双缩脲试剂，混匀；（3）将溶液置于酶标仪中，在540nm波长处测定吸光度；（4）以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 牛血清蛋白含量测定：（1）根据标准曲线，计算牛血清蛋白溶液的浓度；（2）根据实验测定的牛血清蛋白溶液浓度，计算牛血清蛋白含量。

六、实验讨论1. 本实验采用双缩脲试剂法测定牛血清蛋白含量，操作简便、快速、准确。

牛血清白蛋白的提取与鉴定自主设计实验

牛血清白蛋白的提取与鉴定自主设计实验实验目的：本实验的目的是通过自主设计实验，探究牛血清中白蛋白的提取和鉴定方法。

实验原理：牛血清中的白蛋白是一种重要的血浆蛋白，提取牛血清白蛋白一般采用碳酸铵沉淀法。

实验步骤：1.首先，将牛血液收集到干净的离心管中，然后离心10分钟，以分离血浆和红细胞。

2.将分离得到的血浆转移至一个新的离心管中，并加入2mL的碳酸铵溶液，充分混合。

3.将混合液在4℃下孵育30分钟，然后在3000g下离心20分钟。

4.倒掉上清液，得到沉淀。

5.使用0.9%的氯化钠溶液将沉淀洗涤3次，每次离心10分钟。

6.吸去上清液，将沉淀溶解在适量的生理盐水中，得到白蛋白溶液。

鉴定牛血清白蛋白的方法有很多，这里我们以SDS-电泳为例进行鉴定：1. 准备1.5mm厚度的10%分离凝胶和4%集中凝胶。

2.将提取得到的牛血清白蛋白样品和已知浓度的蛋白标准品分别加入适量的2×样品缓冲液，进行蛋白样品的变性处理。

将样品在100℃水浴中加热10分钟。

3. 将蛋白样品和蛋白标准品以及预染色标记的蛋白质分子量标记物（Marker）加载到凝胶孔中，并进行电泳。

4.样品电泳结束后，将凝胶转移到显色/脱色缓冲液中，进行凝胶染色。

5.在染色后，观察凝胶中蛋白质的迁移情况，并用相应的软件或图像分析系统进行分析。

根据分子量标记物的迁移位置，可以确定牛血清白蛋白的迁移位置，并据此进行鉴定。

实验注意事项：1.实验操作货真价实，遵守实验室安全规定，注意个人防护。

2.实验过程中要注意消毒操作，避免细菌的污染。

3.实验设备及试剂用前要检查是否完好，避免实验过程中的故障。

4.实验室操作要注意卫生，实验后要做好清洁工作。

实验结果分析：根据实验结果，我们可以通过SDS-电泳方法成功提取并鉴定牛血清白蛋白，并确定其迁移位置。

根据其迁移位置可以进一步研究牛血清白蛋白的性质和功能。

实验改进及扩展：1.可以尝试不同的提取方法，如层析法、电泳法等，比较不同方法的效果。

牛血清白蛋白残留量测定

附录VIII F 牛血清白蛋白残留量测定法
本法系用酶联免疫法测定供试品中牛血清白蛋白（BSA）含量量，以判断供试品中BSA残残留量是否符合规定的检测方法。

以牛血清白蛋白标准品为标准，采用直线回归方法计算供试品中牛血清白蛋白含量。

供试品溶液的制备供试品如为冻干剂型，检测前应按标示量复溶后震荡混匀，室温静置30分钟，检测前应再次震荡混匀。

供试品如为液体剂型可直接用于检测。

采用试剂盒提供的供试品稀释液稀释供试品，供试品应至少进行两个稀释度测定，每个稀释度做双孔平行测定。

测定BSA含量的容器具应专用，防止实验室中BSA污染。

干扰试验制备溶液A（供试品溶液倍比稀释）、B（供试品溶液和30ng/ml 的内控标准品等量混合）和C（30ng/ml的内控标准品倍比稀释）。

其中，供试品溶液BSA含量高于试剂盒测定范围中点时，两倍稀释后制备溶液A和B。

溶液A、B可倍比稀释测定，溶液C应多孔测定，并在试验间均匀添加。

测定法按试剂盒说明书进行。

试剂盒标准品的吸光度值（A值）、内控参考品测定值、标准品线性相关系数、双孔测定吸光度值（A值）均应在试剂盒要求范围内，试验有效。

以试剂盒提供的标准品吸光度值（A值）和浓度制定标准曲线，根据供试品的A值计算供试品中BSA含量，按试剂盒说明书要求判定最终结果。

供试品测定时，低稀释度A值明显低于高稀释度A值时可能存在HOOK效应或操作失误，需重试或调整稀释倍数进行检测。

首次应用该试剂盒的供试品应进行干扰试验。

干扰试验中B－A值应在C值测定的95％可信区间内。

免疫学实验报告

免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。

抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。

此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。

关键字：牛血清白蛋白（BSA) 抗血清抗体效价免疫实验过程：本次实验一共分为三个分实验：实验一：免疫实验二：抽血、放血，分离抗血清实验三：ELISA测定抗体效价实验一：免疫一、抗血清制备的原理用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

二、目的制备高效价的抗血清三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：1mL 注射器，酒精棉球，剪刀材料：家兔，小鼠试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA)三、方法和步骤1、动物编号左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。

红色表示十位数,用黄色表示个位数。

免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

2、动物抓取及注射按如下图所示抓取目标动物家兔为300～600 μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100 μg /次（10-20，20~40 μg / ml），每次不超过0.5mL。

小鼠腹腔注射以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推?0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。

免疫学实验论文——抗血清的制备及效价测定

免疫学实验抗血清的制备及其效价测定班级：生物技术1401小组：11姓名：2016年11月抗血清的制备及免疫小鼠效价检测摘要：本试验以牛血清白蛋白为抗原，对小鼠和家兔进行免疫，以制备高效价抗血清。

采用多次中程免疫使产生免疫应答小鼠的血清中抗体达到实验所需的要求，然后采集小鼠血液，从中分离出血清，从而获得抗血清。

利用间接ELISA 方法测得抗血清效价。

关键词：抗血清；间接法ELISA ；抗体效价前言：用具有抗原性的物质（牛血清白蛋白BSA ）注入到健康小鼠的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经三次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集小鼠血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

酶联免疫吸附实验（ELISA ）是一种新型的免疫测定技术，利用间接ELISA 法，将抗原BSA 包被在酶标板上，加入待测的抗体，再加相应的二抗，生成复合物后再加入底物显色，借助仪器测得的光吸收值计算抗体效价。

材料与方法：实验主线：实验材料：包被缓冲液（0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液）、10ug/ml 抗原（牛血清白蛋白）、0.01M PBS 溶液、5%（w/v ）脱脂奶粉、PBST 洗涤液（含0.05%Tween 20的0.01M 的PBS ）、2M H2SO4、待测抗体、HRP 标记的羊抗小鼠IgG （二抗）、底物溶液TMB 、健康小鼠酶标板、酶标仪、保鲜膜、排枪、离心管、玻璃棒、烧杯、离心机、恒温箱动物免疫抗血清的采集与分离中程免疫3次间隔一周间接法ELISA 测定抗血清的效多克隆抗体实验内容与方法：一．动物的免疫：1.1实验动物的选择选择实验动物应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。

选择与抗原亲缘关系远的动物，尤其在制备抗免疫球蛋白（Ig）抗体时；根据抗体的需要量选择动物，制备一抗常用动物为小鼠和家兔，制备二抗常用动物为羊和马；常用青壮年期的雄性动物。

牛血清蛋白酶联免疫试剂盒性能的验证

ｈｕｔａｎｅｓｎｌｄｔｃｎＳｔｎａｄｆ３。５，０，０ｇｍｌｃｎｅｔｉｓｗｒｆｔｅｒｓｌｍｏｇｐｒｏｅｅｅｔｇｔｅＢＰｓａｄｒｓｏ４。１２ｎ／ｏｃｎｒｔｎｅｒｍ．６ｅｓｉｈａｏｅｏ１９％ｔｏ
关键词：牛血清蛋白；酶联免疫试剂盒；验证中图分类号：５１Ｑｌ文献标识码：Ａ文章编号：０５５７２０）３０４－７１０－３（０８０－０５０６
ＰＮｈ — ＡＳｕＰｅｆｒｎｅｖｒｆａｉｎｏＩＡｉｏｅｅｔｎｅｉｕｌｂｖｎｅｕｐｏｅｎｎｖｒｌｖｃｉｅｒｏｍａｃｅｉｃｔｏｆＥＬＳｋｔｆｒｄｔｃｉｇｒｓｄａｏｉｅｓｒｍｒｔｉｓｉｉａａｃｎｓｌ
Ｍ，ＹＮｕ — ｉＹＮＧＢｎｅａ．（ｅｎｉｎａｌＡＧＹｎｋ，Ａｉ，ｔ１ＢｌｇＴａＣ．ＬＤ，００４Ｃｉ）ｒｃｏ，Ｔ１０２ｈｎｄｓａ
ＡｂｔａｔＴａｉａｅｔｅｒｌｂｌｙｏＳ．ＬＳｋｔｏｅｅｔｇｒｓｕｌｏｉｅ８ｒｌｒｔｉｓｉｉｓｖｃｉｅ．Ｐｒｓｒｃ：ｏｖｌｄｔｅｉｉｔｆＢＰＥＩＡｉｆｒｄｔｃｎｅｉａｖｎｅｕＩｏｅｎｎｖｒａｃｎｓｅ－ｈａｉｉｄｂｌｐｕ
摘
１０２）００４
要：了全面验证研制的牛血清蛋白（Ｓ）为ＢＰ酶联免疫试剂盒的性能，由３个部门６人协作进行了验证。结果表

小鼠牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书

小鼠牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中牛血清白蛋白（BSA）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠牛血清白蛋白（BSA）水平。

用纯化的小鼠牛血清白蛋白（BSA）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠牛血清白蛋白（BSA），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠牛血清白蛋白（BSA）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠牛血清白蛋白（BSA）含量。

试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

酶联免疫吸附反应的技术进展及应用

ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单，纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。

酶免生产质控标准

酶联免疫法检测试剂主要原材料、生产工艺及质量控制注册技术审查指导原则（报批稿）一、前言本指导原则的主要目的是规范申请人对酶联免疫类检测试剂的主要原材料研究资料、生产工艺及反应体系研究资料的准备，并对产品质量控制提出指导性技术要求。

本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。

二适用范本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查，其它酶联免疫法检测试剂（如作为二类管理的体外诊断试剂）可参考本指导原则执行。

三、基本要求（一）基本原则1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。

3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。

4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。

（二）原材料质量控制1.主要生物原料与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。

牛的神经生长因子(NGF)酶联免疫吸附测定试剂盒说明书

Uscn Life Science Inc. Wuhan网址: 电话: +86 27 84259552传真: +86 27 84259551E-mail:***************牛的神经生长因子(NGF)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E0105Bo规格：96T本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!预期应用本酶联免疫吸附测定试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定牛血清、血浆或其它相关生物液体中NGF含量。

本试剂盒已提供的试剂试剂名称数量96孔板(预包被) 1标准品(冻干) 2标准品稀释液 1 × 20ml检测溶液A 1 × 120μl检测溶液B 1 × 120μl检测稀释液A(2 x) 1 × 6ml检测稀释液B(2 x) 1 × 6mlTMB底物 1 × 9ml终止液 1 × 6ml浓洗涤液(30 x) 1 × 20ml96孔板覆膜 4使用说明书 1本试剂盒未提供但需自备的设备及试剂1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道和多道微量加液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器试剂盒的储存及有效期所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。

请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20。

开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20，避免潮湿。

有效期为6个月。

实验原理将NGF抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中依次加入标准品和标本，其中的NGF与连接于固相载体上的抗体结合，洗板之后加入生物素化的NGF抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入底物(TMB)显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的NGF呈正相关。

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