金针菇多糖提取
微波技术提取金针菇多糖的工业研究
微波技术提取金针菇多糖的工业研究1 引言多糖是天然大分子物质，它几乎存在于所有生物体中，既是提供能量的主要物质(如淀粉、糖原等)，又是生物的结构物质(如纤维素、半纤维素等)。
近几十年来的研究表明，从一些生物体内提取出的多糖物质具有抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、增强免疫力等生理功能，具有显著的生物活性[1]，生物多糖的应用越来越受到人们的关注。
金针菇多糖是由D-葡萄糖、D-甘露糖、L-岩藻糖等组成的[2]。
目前提取主针菇多糖的方法多为热水法或碱溶法，提取率较低。
采用超声波协同法提取可使多糖提取率提高，但存在着作用时间长、不利于连续化大生产等缺点。
从已查阅的文献资料看，虽然对金针菇子实体多糖的研究已经有了很大进展。
但是，这些研究基本局限在其组成、结构及生物活性的相关研究上，而对其提取工艺的研究则较少，且研究不够系统和深入，提取技术还有待成熟。
新一代的研究体系主要对金针菇子实体多糖提取方法及其强化工艺进行研究，探讨温度、时间、液料比等因素对提取率的影响，并进行碱法和酶法[3]及微波和超声波强化提取的工艺优化。
也有对物理法与化学溶剂提取法相结合提取和分离多糖的工艺进行研究[4—5]。
研究表明，应用新的提取方法对金针菇子实体多糖进行提取，其多糖的提取率比热水提法明显提高。
应用微波和超声波强化均能提高多糖的提取率，微波和超声波强化处理后再在热水中提取效果会更好。
最佳的微波处理时间为3min，超声波处理时间为8min。
此法较传统的提取方法有很多优点，快速、安全、高效，是对资源的合理开发，实现自然资源再生的绿色工艺。
通过高效利用及无(少)废物生产的接口技术，将系统内各组分衔接成良性循环的整体，加快系统内的物质循环流动和能量的多级传递。
在提高生态系统的自我调节与自然能力的同时，形成一个产投比高的开放经济系统。
本文就微波提取法在提取功率、提取时间、料液比和热水浸提时间四个方面对金针菇多糖取得率的影响进行了研究，运用的方法为正交实验法,确定出提取金针菇多糖的最佳工艺为微波功率520W，微波处理时间5min，料液比1:25,，60℃热水浸提时间40min。
蘑菇多糖提取实验报告
一、实验目的1. 学习蘑菇多糖的提取方法；2. 掌握蘑菇多糖的鉴定与检测技术；3. 研究蘑菇多糖的生物活性。
二、实验原理蘑菇多糖是一种生物活性物质，具有多种生物学功能，如抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等。
本实验采用水提醇沉法提取蘑菇多糖，并对其理化性质、结构特征和生物活性进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蘑菇子实体：香菇、金针菇等；- 无水乙醇、丙酮、正己烷等有机溶剂；- 碘液、硫酸铜溶液等试剂；- pH计、紫外分光光度计等仪器。
2. 实验仪器：- 电子天平；- 磁力搅拌器；- 烘箱；- 冷冻离心机；- 超声波清洗器；- 离心管、烧杯等实验器材。
四、实验方法1. 蘑菇子实体的预处理将蘑菇子实体洗净，去除杂质，切碎，用蒸馏水浸泡过夜。
2. 蘑菇多糖的提取将浸泡好的蘑菇子实体加入蒸馏水中，搅拌提取2小时；将提取液过滤，收集滤液；将滤液用无水乙醇沉淀，离心分离；将沉淀物用蒸馏水溶解，重复上述沉淀、离心步骤，直至沉淀物基本溶解；将溶解后的沉淀物用丙酮沉淀，离心分离；将沉淀物用蒸馏水溶解，得蘑菇多糖粗品。
3. 蘑菇多糖的鉴定与检测（1）外观鉴定：蘑菇多糖粗品为白色粉末；（2）溶解性检测：蘑菇多糖粗品可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂；（3）分子量测定：采用凝胶渗透色谱法（GPC）测定蘑菇多糖的分子量；（4）单糖组成分析：采用高效液相色谱法（HPLC）分析蘑菇多糖的单糖组成；（5）生物活性检测：通过体外抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等实验，检测蘑菇多糖的生物活性。
五、实验结果与分析1. 蘑菇多糖粗品的外观为白色粉末，可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂。
2. GPC结果显示，蘑菇多糖的分子量在10-100 kDa之间。
3. HPLC分析表明，蘑菇多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖等单糖组成。
4. 生物活性检测结果显示，蘑菇多糖具有抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等生物活性。
六、实验结论本实验成功提取了蘑菇多糖，并通过鉴定与检测，证实了蘑菇多糖具有多种生物活性。
金针菇液体培养提取菌丝体多糖的工艺
金针菇液体培养提取菌丝体多糖的工艺
金针菇液体培养提取菌丝体多糖的工艺，具体操作流程如下：
1. 选取优良的金针菇菌株，接种到麦芽汁琼脂培养基中，保存于25℃下。
2. 用金针菇菌种接种至液体培养基中（如马铃薯蔗糖培养基），在28℃、180rpm的条件下培养2-3天。
3. 培养结束后，通过高速离心分离菌丝体和培养基，将菌丝体用去离子水洗涤数次。
4. 洗涤干净的菌丝体用去离子水重悬，加入0.1mol/L的NaOH 进行超声破细胞处理。
5. 破细胞后，用去离子水洗涤数次，去除残渣和碎细胞。
6. 用去离子水调整溶液pH至
7.0左右，加入适量的酸进行沉淀，后过滤取沉淀物。
7. 最后，取沉淀物用去离子水重悬，经过凝胶色谱等方法可以得到高纯度的金针菇菌丝体多糖。
以上工艺流程可用于金针菇菌丝体多糖的大规模生产和提取。
金针菇多糖的提取、分离纯化及部分生物活性研究的开题报告
金针菇多糖的提取、分离纯化及部分生物活性研究
的开题报告
一、研究背景
金针菇（Flammulina velutipes）是一种常见的食用菌，具有较高的营养价值和药用价值。
其中的多糖是其重要的活性成分，具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、调节免疫等，因此备受关注。
目前，多糖的提取、分离纯化和活性研究已成为金针菇研究的热点之一。
二、研究目的
本研究旨在提取、分离纯化金针菇多糖，探究其部分生物活性。
三、研究内容
1. 金针菇多糖的提取
采用加热水提取法或超声波提取法，优化提取条件，确定最佳工艺参数。
2. 金针菇多糖的分离纯化
采用离子交换层析、凝胶渗透层析等方法对多糖进行分离纯化，并测定纯化后的多糖含量和分子量。
3. 金针菇多糖的部分生物活性研究
采用体外试验方法，测定多糖的抗氧化和抗肿瘤活性，并探究其作用机制。
四、预期结果
1. 确定金针菇多糖的最佳提取工艺条件。
2. 分离纯化金针菇多糖，得到高纯度的多糖。
3. 研究金针菇多糖的抗氧化和抗肿瘤活性，为其应用于食品和药品等领域提供理论依据。
五、研究意义
本研究可以为金针菇多糖的加工利用提供技术支持，同时也对其生物活性的探究具有重要意义，为金针菇在食品和药品领域开发和利用提供了新思路。
金针菇多糖的提取及其美容功效评价
金针菇多糖的提取及其美容功效评价李守勉1，任清2，李明1，田景花1（1.河北农业大学园艺学院，河北保定071000 2. 北京工商大学植物资源研究开发重点实验室，北京100037 ）摘要：利用热水浸提法从金针菇中提取多糖，通过四因素三水平的正交实验得到金针菇多糖的最佳提取工艺为：料水比为1：5、浸取温度为95℃、浸取时间为5h、pH值为8，最高得率为：1.1254%。
通过抗氧化效果和保湿效果测试证明了金针菇多糖具有较好的保湿能力和一定的抗氧化能力。
关键词：金针菇多糖：提取：抗氧化；保湿Extraction of polysaccharides in Flammulina velutipe and itsfunctions in cosmeticsLI Shou-mian 1; REN Qing 2 ; Li-ming 1; Tian-jinghua 1（1.Department of Horticulture;Hebei Agricultural University;Baoding 071001;China 2. Schoolof Chemical and Environmental Engineering;Beijing Technology and Business University;Beijing 100037;China;）Abstract: Ploysaccarides was extracted from Flammulina velutipes by the method of immerse in hot water. The optimum conditions for the extraction were obtained by using four three levels matrix-experiment. The suitable conditions for the extraction design are as follows: ratio of raw material to water is 1:5, extraction temperature is 95℃, time is 5h, pH 8, the biggest extract-ratio is 1.12545%. By the anti-oxidation test and Moisture test, it was indicated that polysaccharides extracted from Flammulina velutipes have good moisture retaining quality and certain anti-oxidation quality.Keywords:Flammulina velutipes polysaccharide, extract, anti-oxidation, moisturize金针菇（Flammulina velutipes）别名毛柄金钱菇、枸菇、冬菇、朴菇和构菌等0，金针菇属于伞菌目、口蘑科和小火焰菌属0。
金针菇多糖的提取及含量测定
２ 实验原理
金针菇多糖在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍 生物， 后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物［６］， 与同法 处理的标准葡萄糖溶液比色定量。
３ 结果与讨论
３．１ 葡萄糖标准曲线的制作 分 别 吸 取 标 准 葡 萄 糖 溶 液 ０．０５， ０．１０， ０．２０，
０．３０， ０．４０， ０．６０， ０．８０ ｍＬ， 置于具塞比色管中， 用 蒸 馏 水 稀 释 至 １．０ ｍＬ， 摇 匀 。 然 后 分 别 加 入 蒽 酮 试 剂 ４．０ ｍＬ， 迅 速 浸 于 冰 水 浴 中 摇 匀 冷 却 ， 各 管 一 起 浸 入 沸 水 浴 中 １０ ｍｉｎ， 取 出 后 冷 水 冷 却 ， 室 温 放 置 １０ ｍｉｎ， 于波长 ６２０ ｎｍ 测吸光度， 以 １．０ ｍＬ 水按同 样操作作为空白， 以葡萄糖浓度 Ｃ 为横坐标， 吸光 度值 Ａ６２０ 为纵坐标， 制得葡萄糖标准曲线。
＊ 为通讯作者： 逯家富 （ １９６１－ ） ， 男， 吉林人， 教授。Ｅ－ ｍａｉｌ： ｌｕｊｉａｆｕ８８８＠１６３．ｃｏｍ。
２００７ 年第 ９ 期
徐亚杰， 等： 金针菇多糖的提取及含量测定
·７１·
温度 ７０ ℃恒温水浴箱中浸提 ４ ｈ， 在转速 ４ ０００ ｒ／ｍｉｎ 下， 离心 ５ ｍｉｎ， 收集上清液。采用 ｓｅｖａｇ 法［５］， 将提 取 液 与 等 体 积 ４∶１ 氯 仿 正 丁 醇 混 合 ， 过 夜 去 蛋 白 ， 然后用旋转蒸发仪减压浓缩至 １００ ｍＬ， 用 １ 倍的体 积 分 数 为 ９５％的 乙 醇 沉 淀 多 糖 ， 离 心 ， 上 清 液 用 ２ 倍的 体 积 分 数 为 ９５％的 乙 醇 沉 淀 多 糖 、 离 心 ， 上 清 液 用 ４ 倍 体 积 的 体 积 分 数 为 ９５％ 的 乙 醇 沉 淀 多 糖 ， 将收集得到的各级组分多糖沉淀溶解、定容于 １ ０００ ｍＬ 的容量瓶中， 备用。
金针菇多糖的提取及生物活性研究进展
中国果菜China Fruit &Vegetable综合利用Comprehensive Utilization 第43卷,第3期2023年3月收稿日期:2022-07-26基金项目:山东省农业科技资金（园区农业提升工程）项目（2019YQ011）第一作者简介:马传贵（1985—），男，中药师，本科，主要从事食药用菌的栽培生理及功能产品开发工作*通信作者简介:王春燕（1979—），女，高级工程师，硕士，主要从事果蔬保鲜、综合利用方面的研究与编辑工作金针菇多糖的提取及生物活性研究进展马传贵1，张志秀1，王春燕2*（1.北京京诚生物科技有限公司，北京102600；2.中华全国供销合作总社济南果品研究所，山东济南250014）摘要:金针菇是我国最早进行人工栽培的食用菌之一，也是栽培量最大的食用菌之一。
金针菇富含蛋白质、多种矿质元素和微量元素，具有较高的营养价值及保健功能。
多糖是金针菇的主要活性成分之一，有调节免疫、抗氧化、抗炎、保肝、抗肿瘤、抗菌等功效。
因此优化金针菇多糖的提取纯化工艺，并研究其生物活性对金针菇多糖的综合开发利用具有重要的理论价值和现实意义。
本文总结了近些年金针菇多糖提取纯化及其生物活性方面的研究进展，为金针菇多糖的开发应用提供参考。
关键词:金针菇；多糖；提取；纯化；生物活性中图分类号：S646.1文献标志码：A文章编号：1008-1038(2023)03-0044-05DOI：10.19590/ki.1008-1038.2023.03.008Research Progress in Extraction and Bioactivity of PolysaccharidefromMA Chuangui 1,ZHANG Zhixiu 1,WANG Chunyan 2*(1.Beijing Jingcheng Biotechnology Company Limited,Beijing 102600,China;2.Jinan Fruit Research Institute,All-China Federation of Supply and Marketing Cooperatives,Jinan 250014,China)Abstract:is one of the earliest cultivated edible fungi in China,and also one of the largestcultivated edible fungi in China..is rich in protein,mineral elements and trace elements,and has highnutritional value and health function.As one of the main active ingredients,polysaccharide of .has many biological activities such as immune regulation,antioxidation,anti-inflammatory,liver protection,anti-tumor,antibacterial and so on.Therefore,optimizing the extraction and purification process of .polysaccharide and studying its biological activity have important theoretical significance and practical value.This paper summarized the research progress in the extraction,purification and biological activity of .polysaccharides in recent years,providing reference for the theoretical research and the comprehensive exploitationand utilization of .polysaccharides.Keywords:.;polysaccharide;extraction;purification;biological activity金针菇（.）又叫朴菇、冬菇、构菌、金钱菌等，属于伞菌目、口蘑科、金钱菌属。
金针菇多糖提取实验注意事项
金针菇多糖提取实验注意事项《关于金针菇多糖提取实验的那些事儿》嘿，朋友们！今儿来和你们唠唠金针菇多糖提取实验的注意事项，这可都是经验之谈呐！首先呢，你得选好金针菇。
可别小瞧了这步，就跟选对象似的，得精挑细选。
别整那些看起来就焉巴巴或者有啥毛病的金针菇，咱得要那水灵灵、精神头十足的，这样提取出来的多糖才够劲儿呢！咱就是说，选金针菇也得有点眼光，可别被那些“歪瓜裂枣”给糊弄了。
然后呢，实验操作的时候可别毛手毛脚的。
你想啊，这多糖提取可不是闹着玩的，得小心翼翼地对待。
就好像呵护你最宝贝的东西一样，稍不注意可能就前功尽弃啦！所以，动作得轻柔点，别跟个大力水手似的，把啥都给整坏咯。
比如说那个提取剂，滴的时候就得悠着点，别“哗啦”一下全倒进去了，那不就完蛋了嘛！还有哦，提取过程中的温度和时间可得把握好了。
这就好比做饭，火候大了小了都不行。
温度太高了，搞不好多糖就被你给“烤焦”了；温度太低呢，又半天提取不出来，能把人急死。
时间也是一样，太短了提取不完全，太长了又浪费时间。
哎，真是让人头疼啊，就跟那纠结出门穿啥衣服一样难搞。
再来说说仪器设备吧，那可得当宝贝一样供着。
用完了赶紧清洗干净，别弄得脏兮兮的下次没法用。
就像你的爱车，你不得经常保养嘛！这些仪器设备也是咱的好伙伴，得好好对待它们呀。
另外啊，做实验的时候记得要做好记录。
别以为自己的脑子好使，到时候一忙起来啥都忘了。
好记性不如烂笔头，把每一个步骤、数据都老老实实记下来，以后分析起来也方便，不然到时候哭都没地儿哭去。
最后呢，可别着急忙慌地就得出结论。
得仔细分析分析数据，看看有没有啥不对劲的地方。
有时候可能就是那么一点点小疏忽，就导致结果偏差老大了。
所以啊，做实验得有耐心，心急可吃不了热豆腐哟。
总之呢，做金针菇多糖提取实验可得打起十二分的精神，每一个细节都不能马虎。
这。
金针菇水溶性多糖提取与含量测定
金针菇水溶性多糖提取与含量测定生物技术二班组长：韩晓煜组员：吴林林，韩厅，王艺超，陈金，李满成，徐鹏飞，陶道亮金针菇水溶性多糖提取与含量测定实验目的：金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、朴菇、冬菇、朴菰、冻菌、金菇、智力菇等，英文为："Enoki Mushroom "，拉丁文学名为Flammulina velutiper (Fr.) Sing.。
因其菌柄细长，似金针菜，故称金针菇，属伞菌目白蘑科金针菇属，是一种菌藻地衣类。
金针菇具有很高的药用食疗作用。
本实验采用水提醇沉法提取多糖。
实验原理：利用多糖的水溶性而不溶于乙醇的特性方法提取金针菇中的水溶性多糖，并测定提取出的多糖的含量实验材料：金针菇实验仪器:微波炉、恒温水浴锅、粉碎机、离心机，恒温箱、量筒、烧杯、锥形瓶、玻璃棒、容量瓶、电子天平试剂：蒸馏水、95%乙醇试验步骤：一、粉碎：取新鲜的金针菇若干，放入微波炉中烘干，取烘干后的的金针菇放入清理干净的粉粹机里粉碎5min；二、称量：取出粉碎后的金针菇粉末，精确称量20g三、浸提：按照料液比1:16与蒸馏水混合装进容量瓶，放入微波功率为600w的微波炉中，辐射时间为10min，然后将样品放在90℃的水浴锅内，加热2小时；四、离心：将水浴后的混合液在转速为5000r/min离心机内离心30min，取上清液，弃沉淀；五、 醇沉：加入2倍体积的95%乙醇，轻轻摇动，静置10min ；六、 离心：然后再在转速为5000/min 离心机内离心30min ，弃上清液，取底部沉淀，沉淀为粗制多糖；七、 干燥：将得到的粗制多糖放入恒温烘箱内烘干；八、 称量：用电子天平称量得到的粗制多糖的质量。
实验现象：实验数据：金针菇的质量： 多糖的含量：实验结果：计算多糖的含量）金针菇粉末质量（）总多糖含量（多糖提取率g g实验讨论：。
金针菇多糖提取
金针菇多糖提取试剂：蒸馏水、纤维素酶、无水乙醇、氯仿、正丁醇、氯化钠、三氯乙酸、氢氧化钠仪器设备：烘箱、浓缩装置、离心机、真空干燥机、冰箱、色谱柱、冷冻干燥机工艺流程：原料-预处理--酶解--浸提--浓缩--醇析--脱蛋白--干燥--多糖纯品--精制--多糖精品（1）原料新鲜金针菇（2）预处理新鲜金针菇65°C烘干6h制成干品，将金针菇子实体干品粉碎，粉碎粒度为3--5mm，粉碎后装入容器中加入2倍质量的水，在90-95°C条件下加热处理10-15min，得到金针菇子实体匀浆（3）酶解向匀浆中加入0.15%的纤维素酶以破坏金针菇子实体的细胞壁，使多糖释放出，来，酶解温度40°C ,ph为4,5时间为3h（4）浸提向容器中加入20倍样品质量的水，在100°C，ph6.5的条件下浸提1h，过滤并收集滤液（5）浓缩将滤液在40°C压力0.2MPa条件下浓缩至原体积是我1/3（6）醇析向浓缩液中加入无水乙醇至乙醇含量为70%，可以看到有沉淀析出，静置一段时间至沉淀完全析出，在离心分离，收集沉淀，并烘干得到多糖粗品（7）纯化脱蛋白质将多糖粗品按样品与氯仿-正丁醇（氯仿-正丁醇之比为1:0.2）之比为1:0.25复溶并进行充分震荡，可将游离蛋白变性成为不容性物质，经离心分离去除，此过程通常反复进行5-8次，每次震荡30min，才能很好的去除蛋白质，除蛋白后的多糖溶液进行真空干燥，即可得到纯多糖产品（8）精制粗多糖粉末溶于0.1mol/L的氢氧化钠溶液中，至于5-8°C冰箱冷置12h,离心弃去沉淀、滤液加入40%的三氯乙酸使之达到8%的含量，再置于冰箱中5-8°C冷置12h离心，将沉淀加入0.1mol/L氯化钠溶液洗脱分离，用硫酸-苯酚跟踪检测，收集（收率约为45%）多糖组分的母液，再取母液以0.1mol/L的氢氧化钠溶液中和至ph6.5-7.0，然后将上述洗脱液适当浓缩，蒸馏透析后，在用色谱分离纯化。
复合酶法提取金针菇多糖及光谱分析
复合酶法提取金针菇多糖及光谱分析摘要:研究了复合酶法提取金针菇(Flammulina velutipes)多糖的最佳工艺条件,并对金针菇多糖进行了光谱分析｡采用木瓜蛋白酶､纤维素酶复合处理,对加酶质量比､酶解温度､pH､酶解时间4个因素对多糖提取率的影响进行了正交试验｡确定了复合酶法提取金针菇多糖的最佳工艺条件为酶解温度60 ℃,复合酶添加量0.5%,加酶质量比(木瓜蛋白酶∶纤维素酶)2∶1,pH 6.0,酶解时间2 h,此条件下多糖提取率可达9.1%｡关键词:金针菇(Flammulina velutipes)多糖;复合酶法提取;正交试验;光谱分析Combined-Enzyme Extraction and Spectral Analysis of Flammulina velutipes PolysaccharidesAbstract: The polysaccharides were extracted from Flammulina velutipes by combined-enzyme method and detected by spectral analysis. The factors including dose of cellulase and papain, pH, digestion temperature and time were analyzed by orthogonal test. The results showed that the optimum enzymatic Flammulina velutipes polysaccharides extraction conditions were enzymatic reaction temperature, 60 ℃; Mass ratio of compound enzyme, 0.5%; Application ratio of papain to cellulase, 2∶1; pH, 6.0; Reaction time, 2 h. The extraction yield was up to 9.1% under these conditions.Key words: Flammulina velutipes polysaccharides; combined-enzyme extraction; orthogonal test; spectral analysis金针菇(Flammulina velutipes)又名冬菇､朴菇､构菌､青杠菌､毛柄金钱菌,隶属担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)伞菌目(Agaricales)口蘑科(Tricholomataceae)金钱菌属(Flammulina)｡金针菇菌盖滑嫩､菌柄细长脆嫩､形美､味鲜,是世界上著名的食药两用菌和观赏菌[1],具有较高的营养价值和药用价值,有广阔的开发前景｡金针菇子实体中除含有蛋白质､氨基酸､矿物质､维生素和对人体有益的微量元素外还含有一种重要的生物活性高分子多糖,金针菇多糖由于具有抑制肿瘤､抗癌､增强肌体免疫力[2-4]等作用而受到广泛重视｡如何提高金针菇多糖的提取率､降低成本已成为拓展金针菇使用范围､提高其应用价值的关键｡传统的浸提法虽然是提取多糖的经典方法,但时间长､效率低､能耗大;金针菇多糖通常被包裹在植物细胞壁内,并且多糖往往和蛋白质结合在一起,以蛋白质多糖的形式存在｡研究表明中性蛋白酶能有效酶解与多糖结合在一起的蛋白质,从而将多糖释放出来而提高多糖提取率,同时降低了多糖中蛋白质的含量,提高了多糖的纯度[5]｡复合酶法处理可以提高多糖提取率､减少能源消耗､缩短提取时间｡因此,探索更为高效､经济､可靠的提取方法对金针菇多糖的研究开发具有重要的现实意义｡1 材料与方法1.1 材料1.1.1 原料取市售新鲜金针菇,除去根部,清洗切块,粉碎,干燥,过40､60､80､100目筛,过筛之后把各级金针菇干粉分别装到清洁干燥的烧杯中,置于真空干燥箱中待用｡1.1.2 试剂苯酚,天津市科密欧化学试剂开发中心;葡萄糖,天津市凯通化学试剂有限公司;Sephadex G-75色谱柱,Pharmacia公司;纤维素酶,国药集团化学试剂有限公司;木瓜蛋白酶,北京世纪时尚科贸有限公司｡所用试剂均为分析纯｡1.1.3 仪器与设备电热恒温水浴锅:上海跃进医疗器械厂;电子天平:北京赛多利斯仪器系统有限公司;722型紫外分光光度计:北京赛多利斯仪器系统有限公司;离心机:上海跃进医疗器械厂;九阳料理机:山东九阳小家电有限公司;THZ-82A 型台式恒温振荡器:上海跃进医疗器械厂;Lambda-35紫外可见分光光度计:美国PE公司;Spectum one傅里叶变换红外光谱仪:美国PE公司｡1.2 方法1.2.1 葡萄糖标准曲线的制定以葡萄糖浓度为横坐标､吸光度为纵坐标作图｡得葡萄糖标准曲线的回归方程为■=0.007 3x+0.014 6,r=0.996 6,在0~50 μg/mL 范围内呈良好的线性关系｡1.2.2 多糖清液的提取方法称取80~100目的金针菇干粉5 g,放入250 mL的三角瓶中,加入一定量去离子水,混合均匀后置于50 ℃水浴锅中水浴30 min,调节pH,称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混合,加入5 mL去离子水溶解,金针菇溶液放在水浴中预热至酶解温度,将酶液加入到金针菇溶液中,在恒温振荡器上提取,反应结束,将三角瓶放到沸水锅中,沸水浴10 min灭酶,灭酶结束冷却至室温,将酶提取液放入到离心管中,5 000 r/min离心,取上清液,即得到复合酶法提取的多糖清液｡1.2.3 蛋白质的去除方法采用Sevag法去除多糖清液中的蛋白质[6]｡在多糖清液中加入其1/4体积的氯仿-正丁醇(氯仿与正丁醇体积比4∶1),将其置于具塞试管中,充分摇匀30 min后用离心机离心10 min,剔去下面的白色浑浊液,取上清液,这样的操作重复进行3~4次即可除去蛋白质｡1.2.4 多糖的获得方法金针菇多糖在水中的溶解度较大,所以先用去离子水初步提取,之后取上清液,用20 g/L的活性炭脱色1 h,加入体积分数为95%的乙醇,使溶液中乙醇的体积分数达到75%进行醇沉,醇沉过程中要将其保存在4 ℃冰箱中,保持24 h后5 000 r/min离心15 min,取沉淀,置于真空干燥箱中干燥,即可得到金针菇多糖[7]｡1.2.5 多糖含量的测定方法采用苯酚-硫酸比色法[8],苯酚-硫酸法是以硫酸､苯酚作为显色剂,它们与金针菇多糖发生显色反应后在490 nm波长处测定其吸光度,再通过已经获得的葡萄糖标准曲线计算求得金针菇中的多糖含量｡1.2.6 单因素试验1)物料粒度对金针菇多糖提取率的影响｡将金针菇粉通过40､60､80､100目筛,分别得到小于40目､40~60目､60~80目､80~100目和100目以上的金针菇粉,取一定量的以上5种样品,选择料水质量比1∶15,50 ℃水浴中提取1 h,计算各样品的多糖提取率,研究物料粒度对金针菇多糖提取率的影响｡2)料水质量比对金针菇多糖提取率的影响｡等量称取80~100目的金针菇粉5份,选择料水质量比1∶10､1∶15､1∶20､1∶25､1∶30,分别于50℃水浴中提出1h,计算各样品的多糖提取率,研究料水质量比对金针菇多糖提取率的影响｡3)复合酶添加量对金针菇多糖提取率的影响｡等量称取80~100目的金针菇粉4份,选择料水质量比1∶20,加入适量复合酶[加酶质量比(木瓜蛋白酶∶纤维素酶)=1∶1),控制复合酶质量分别为金针菇粉质量的0.3%､0.4%､0.5%､0.6%,在50℃水浴中提取1 h,计算各样品的多糖提取率,研究复合酶添加量对金针菇多糖提取率的影响｡1.2.7 正交试验影响金针菇多糖的提取因素很多,通过预试验选择其中的4个因素作为研究的对象:加酶质量比(木瓜蛋白酶∶纤维素酶)､酶解温度､pH､酶解时间｡采用四因素三水平正交试验确定提取金针菇多糖的最佳条件,因素与水平见表1｡1.2.8 多糖的色谱分离纯化方法金针菇多糖粗品水溶解后,取10 mL上Sephadex G-75色谱柱｡用恒流泵控制流速(20 mL/h),自动部分收集器收集,每管收集2.0 mL,用苯酚-硫酸法测定各洗脱液于490 nm处的吸光度,收集其流出液,冷冻干燥得到纯化后的样品｡1.2.9 多糖成分分析方法1)红外吸收光谱分析｡采用美国PE公司的Spectum one傅里叶变换红外光谱仪,在400~4 000 cm-1范围内对提取的金针菇多糖进行红外吸收光谱扫描｡2)紫外吸收光谱分析｡采用美国PE公司的Lambda-35紫外可见光分光光度计,在190~800 nm范围内对提取的金针菇多糖进行紫外吸收光谱扫描｡2 结果与分析2.1 单因素试验结果2.1.1 物料粒度对金针菇多糖提取率的影响从图1可知,小于40目､40~60目､60~80目､80~100目和100目以上的金针菇粉的多糖提取率分别为2.7%､2.9%､3.1%､3.4%和3.3%,由此可知80~100目的金针菇粉多糖提取率最高(图1)｡因此试验选定物料粒度为80~100目｡2.1.2 料水质量比对金针菇多糖提取率的影响从图2可知,料水质量比为1∶10､1∶15､1∶20､1∶25､1∶30的条件下金针菇的多糖提取率分别为 2.3%､3.1%､3.4%､3.5%和3.5%,当料水质量比在1∶15和1∶10之间,随着料水质量比的减小,多糖提取率较快地增长,继续减小料水质量比多糖提取率仍有升高,但升高速率减小｡在提取中加水太少､太多皆不利于以后的分离,而且加重了生产中的负担｡因此试验确定料水质量比为1∶20｡2.1.3 复合酶添加量对金针菇多糖提取率的影响从图3可以看出,随着复合酶添加量的增加,多糖提取率也逐渐增加,复合酶添加量大于0.5%后多糖提取率增加趋于平缓,考虑到酶的成本及效果,复合酶添加量宜为0.5%｡2.2 金针菇多糖提取的正交试验结果分析由表2中4个因素的极差值可知,影响金针菇多糖提取率的4个因素的主次顺序是A>D>C>B｡通过正交试验可知复合酶法提取金针菇多糖的最佳工艺条件为A3B2C2D2,即加酶质量比(木瓜蛋白酶∶纤维素酶)为2∶1,酶解温度为60 ℃,pH 6.0,酶解时间为2 h,此时金针菇的多糖提取率为9.1%｡2.3 金针菇的多糖成分分析结果2.3.1 金针菇多糖结构红外吸收光谱分析结果红外吸收光谱是有机化合物结构表征的重要方法,在实验室得到了普遍的应用｡有机化合物的化学键或官能团都有各自的特征振动频率,因此可以测定化合物的红外吸收光谱,根据吸收带的位置,推断出分子中可能存在的化学键或官能团,再结合其他信息便可确定化合物的结构[9,10]｡由图4可知,3 475和3 416 cm-1处峰值是由多糖中O-H的伸缩振动引起的,羟基在分子间发生缔合,并不是游离的;在2 907 cm-1处是由多糖中C-H的伸缩振动引起的;在1 637~1 618 cm-1处吸收峰是-CHO的C=O的伸缩振动引起的,为肽链上酰胺碳基的吸收峰;在1 564 cm-1处是由多糖中C-H的变角振动引起的;在1 472 cm-1处是由多糖中C-O-C和C-O-H的伸缩振动引起的;在849 cm-1处是由β-吡喃环中C-H的变角振动引起的;在820 cm-1处为α-吡喃环中C1-H的变角振动吸收峰;在805 cm-1处是由吡喃环中C1-H的变角振动引起的｡金针菇多糖具有典型的多糖物质的吸收峰,而且多糖中存在吡喃环和呋喃环,具有α､β构p 采用正交试验确定了金针菇多糖复合酶法提取的最佳工艺条件,即木瓜蛋白酶与纤维素酶质量比为2∶1,复合酶添加量为0.5%,酶解温度为60 ℃,pH为6.0,酶解时间为2 h,此时多糖提取率为9.1%｡参考文献:[1] 姜思昌,孙云汉.金针菇的保健功能[J].食品研究与开发,2003, 24(4):88-90.[2] KIHO T,MORIMOTO H,KOBAYASHI T,et al. Effect of a polysaccharide(TAP) from the fruiting bodies of Tremella auranitia on glucose metabolism in mouse liver[J]. Biochnol Biochem,2000,64(2):417-419.[3] 吴梧桐,高美凤,吴文俊. 多糖的抗肿瘤作用研究进展[J]. 中国天然药物,2003,1(3):182-186.[4] KIHO T,USHI S,UKAI S,et al. Structural features and hypoglycemic activity ofa polysaccharide (CS-F10) from the cultured mycelium of Cordyceps sinensis[J]. Biol Pharm Bull,1999,22(9):966-970.[5] 王雪冰,赵天瑞,樊建. 食用菌多糖提取技术研究概况[J].中国食用菌,2010,29(2):3-6.[6] 叶凯贞,黎碧娜,王奎兰. 多糖的提取､分离与纯化[J].广州食品工业科技,2004(3):144-145.[7] 李世敏,刘冬. 金针菇多糖提取新工艺的优化[J]. 食品与发酵工业,2002,28(10):45-48.[8] 董群,郑丽伊,方积年. 改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J]. 中国药学杂志,1996,31(9):550-552.[9] 郭亚贞,王慥,曲鹏鹏. 香菇多糖的纯化和结构分析[J]. 上海水产大学学报,2000,9(1):35-39.[10] 张正行. 有机光谱分析[M]. 北京:人民卫生出版社,1995.[11] TOMATI U,BELARDINELLI M,GALLI E,et al. NMR characterization of the polysaccharidic fraction from Lentinula edodes grown on olive mill waste[J]. Carbohydrate Research,2004,339(6):1129-1134.[12] 叶姜瑜,谈锋. 紫芝多糖的纯化及组分分析[J]. 西南师范大学学报(自然科学版),2002,27(6):945-949.。
金针菇加工副产物水溶性多糖提取工艺研究
蛋 白 质 含量 ／ ・ｇ ） （ ｋ ｇ 图 ２ 蛋 白质 含 量 标 准 曲 线
２２ 单 因 素试 验 结 果 与 分 析 ．
２２１ 料 液 比对 多糖 提 取 率 的影 响 取 ４ 金 针 菇 子 实 体 ． ． 份 粉末 ， 分别 以 １ １ 、 ：０ １３ 、 ：０ 入 蒸 馏 水 ， ９ ℃提 取 ：０ １２ 、 ：０ １４ 加 在 ０
Ｒ
０．９ ０． ０ ０ ２ ０ ３ ３ １６ ．０ ０３ ７ ．７
由 图 ５ 知 ， 糖 提 取率 随 时 间 的增 加 而逐 渐 增 加 ， 是 可 多 但 随 着 提 取 时 间 的增 加 超 过 ３ｈ ， 糖 提 取 率 变 化 减 小 ， 虑 后 多 考 到 提取 时 间 过 长 给工 艺 带 来 不 便 ， 此 选 择 ３ 因 宜。 ｈ为 ２ ． 提 取 次 数 对 多糖 提 取 率 的影 响 取 ４ 金 针 菇 子 实 ．４ ２ 份 体 粉 末 ， １ ２ 加 入 蒸 馏 水 ， ９ ￣提 取 温 度 下 浸 提 ２ｈ 分 按 ：Ｏ 在 ０ Ｃ ，
０
溶 性 多 糖 ， 金 针 菇 多 糖 产 品 开 发 提 供 一 定 参 考 意 义 ， 金 为 为 针 菇 加 工 副 产 物 的综 合 利 用 提 供 一 条 切 实 可 行 的 途 径 。
葡 萄 糖 含 量／ｍｇｋ ） （ －ｇ
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 与 仪 器 ． 金 针 菇 加 工 副 产 物 （ 柄 、 盖 、 形 菇 菌 菌 畸
解 后 采 用 Ｓｖｇ 除 蛋 白 。离 心 取 上 清 液 进 行 浓 缩 后 真空 冷 ｅａ 法 冻 干 燥 ４ ， 金 针 菇 粗 多 糖 。 ８ 得 ｈ １ ． 含 量 测 定 采用 苯 酚 一 酸 法 测 定 多 糖 含 量 ： 用 考 ．２ ３ 硫 采 马斯 亮 蓝 法 测 定 蛋 白质 含 量 Ｉ 。
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金针菇多糖提取
试剂：蒸馏水、纤维素酶、无水乙醇、氯仿、正丁醇、氯化钠、三氯乙酸、氢氧化钠
仪器设备：烘箱、浓缩装置、离心机、真空干燥机、冰箱、色谱柱、冷冻干燥机
工艺流程：原料-预处理--酶解--浸提--浓缩--醇析--脱蛋白--干燥--多糖纯品--精制--多糖精品（1）原料新鲜金针菇
（2）预处理新鲜金针菇65°C烘干6h制成干品，将金针菇子实体干品粉碎，粉碎粒度为3--5mm，粉碎后装入容器中加入2倍质量的水，在90-95°C条件下加热处理10-15min，得到金针菇子实体匀浆
（3）酶解向匀浆中加入0.15%的纤维素酶以破坏金针菇子实体的细胞壁，使多糖释放出，来，酶解温度40°C ,ph为4,5时间为3h
（4）浸提向容器中加入20倍样品质量的水，在100°C，ph6.5的条件下浸提1h，过滤并收集滤液
（5）浓缩将滤液在40°C压力0.2MPa条件下浓缩至原体积是我1/3
（6）醇析向浓缩液中加入无水乙醇至乙醇含量为70%，可以看到有沉淀析出，静置一段时间至沉淀完全析出，在离心分离，收集沉淀，并烘干得到多糖粗品（7）纯化脱蛋白质将多糖粗品按样品与氯仿-正丁醇（氯仿-正丁醇之比为1:0.2）之比为1:0.25复溶并进行充分震荡，可将游离蛋白变性成为不容性物质，经离心分离去除，此过程通常反复进行5-8次，每次震荡30min，才能很好的去除蛋白质，除蛋白后的多糖溶液进行真空干燥，即可得到纯多糖产品
（8）精制粗多糖粉末溶于0.1mol/L的氢氧化钠溶液中，至于5-8°C冰箱冷置12h,离心弃去沉淀、滤液加入40%的三氯乙酸使之达到8%的含量，再置于冰箱中5-8°C冷置12h离心，将沉淀加入0.1mol/L氯化钠溶液洗脱分离，用硫酸-苯酚跟踪检测，收集（收率约为45%）多糖组分的母液，再取母液以0.1mol/L的氢氧化钠溶液中和至ph6.5-7.0，然后将上述洗脱液适当浓缩，蒸馏透析后，在用色谱分离纯化。
用0.1mol/L的氢氧化钠溶液洗脱。
收集洗脱液的糖样
（9）精品将此糖样经减压浓缩后，冷冻干燥得到的白色粉末状金针菇多糖精品。