对氯苯肼盐酸盐的反相HPLC测定
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按实验方法 ,以流动相空白为参比 ,在紫外 可见分光光度计上绘制吸收曲线 ,结果发现 ,在 233nm 处 ,用峰面积归一化法测定的含量与外标 法测定的含量基本一致 ,本试验采用 233nm 为检 测波长 。 213 线性范围
按实验方法 ,以对照品的含量 X( mg/ L) 为横 坐标 ,色谱峰面积 Y 为纵坐标作图 ,并进行线性 回归 ,结果表明 ,被测样品在 5～100mg/ L 范围内 线性关系良好 ,其回归方程为 :
1 实验部分
111 仪器和试剂 WatersTM600 型四元梯度液相色谱恒流泵 ,
Waters 600 型 液 相 色 谱 恒 流 泵 控 制 器 , Wa2 ters2487 型 紫 外 检 测 器 ( 美 国 Waters 公 司 ) ; JL120 型超声波器 (上海杰理科技有限公司) ; UV - 2401PC 型紫外 - 可见分光光度计 (日本岛津公 司) 。
[ 1 ] 潘富友 ,杨健国 ,梁华定 1 应用化学[J ] ,2001 ,18 (12) :10011 [ 2 ] 潘富友 ,梁华定 1 分析化学[J ] ,1998 ,26 (5) :5281 [ 3 ] 潘富友 ,梁华定 ,分析化学[J ] ,1998 ,26 (12) :15221 [ 4 ] 潘富友 ,杨健国 ,梁华定 ,葛昌华 1 冶金分析[J ] ,2002 ,22 (1) :
3 样品测定
按实验方法 ,记录实际样品的峰面积 ,分别以 外标法及峰面积归一化法计算含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品测定结果 Table 1 Analytical results of samples n = 6 , %
样品 Sample
000801 3 000802 000803 000804
对氯苯肼盐酸盐是新一代消炎镇痛药的重要 起始原料 。我们已报道了其合成方法[1 ] 。由于 原料中苯胺 、间氯苯胺及邻氯苯胺的存在 ,以及在 合成过程中重氮盐的偶合和水解作用 ,使产物变 得非常复杂 ,与此同时 ,由于该产品作为医药中间 体其质量要求甚高 。因此 ,如何采用简单 、快速 、 有效的产品质量跟踪检测方法 ,这对工厂生产过 程中及时调整工艺配方 ,提高产品质量是非常重 要的 。我们在利用反相 HPL C 测定医药及其中 间体的基础上[2～4 ] ,经反复试验 , 找到了对氯苯 肼盐酸盐在反相 ( RP) - HPL C 上分离检测的适 宜条件 ,经 10 多种流动相组成试验 ,结果表明 ,用 乙腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙酸) = 315 :615 作流动相 ,流速为 1mL/ min , 于 233nm 处 ,在 shim - pack CL C - ODS 柱 (5μm , 250mm ×416mm I1D) 上 ,能很好地分离主产物与 副产物 ,并能准确地测定其含量 ,这为工业化生产 中动态跟踪反应过程 ,调整工艺条件 ,提高产品质 量提供了一个快速有效的检测方法 。
2 结果与讨论
211 流动相的选择 按实验方法 ,采用实际工业样品研究了不同
流动相组成及不同流速的保留时间 。结果表明 , 甲醇 、乙腈 、甲醇 - 水 (10 :90～90 :10) ,乙腈 - 水 (10 :90～90 :10) 等在流速 015～115mL/ min 均不 能有效的分离对氯苯肼盐酸盐与其中的杂质对氯 苯胺盐酸盐 、间氯苯肼盐酸盐 、邻氯苯肼盐酸盐和 苯肼盐酸盐 ,只有乙腈 : 缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙酸) 为 315 : 615 ,流速为
401
Reversed phase high performance liquid chromatographic determination of p2chlorophenylhydrazine hydrochloride PAN Fu2you
(Depart ment of Chemistry , Taizhou College , Taizhou 317000 ,China)
第 22 2002
卷第 6 期 年 12 月
冶 金 分 析 Metallurgical Analysis
Vol. 22 ,
December
No . 6 , 2002
文章编号 :1000 - 7571 (2002) 06 - 0036 - 02
准确称取 2510mg 对氯苯肼盐酸盐对照品 , 置 100mL 容量瓶中 ,加适量流动相 ,振摇使之溶 解并稀释至刻度 、摇匀 ; 准确量取 110 ,310 ,510 , 710 ,1010 , 1510mL 溶液 , 置 25mL 容量瓶中 , 加 流动 相 稀 释 至 刻 度 、摇 匀 , 选 择 检 测 波 长 为 233nm ,流速为 1mL/ min ,分别取 20μL 进样 , 记 录峰面积 。
参考文献 :
图 1 对氯苯肼盐酸盐的 RP - HPLC 图 Fig11 Chromatogram( RP - HPLC) of p - chloro
- phenylhydrazine hydrochloride 11 苯肼盐酸盐 ,51510min ;21 邻氯苯肼盐酸盐 ,81119min ; 31 对氯苯肼盐酸盐 ,91858min ;41 对氯苯胺盐酸盐 ,151808min。
1000mL of water) mixed in a ratio of 3 :7 (v/ v) was as mobile phase1 The flow rater was 110mL/ min1 The detection wavelengt h was 233nm1A good linearity was obtained in t he concentration range of 5 - 100mg/ L for CPH1 The regressive equation was Y = 42324192X - 31559106 , r = 0199991 The met hod has been used to determine CPH in samples wit h satisfactory results1
3 该批号为对照品 ,其它为工业样品
4 结论
用本wenku.baidu.com测定对氯苯肼盐酸盐是可行的 ,操作 简便 ,灵敏度高 ,重复性好 ,结果可靠 。本法能快 速有效地分离其杂质 ,这为动态跟踪反应过程 ,调 整工艺条件 ,提高产品质量提供了一个快速有效 的检测方法 ;本法建立的外标法及归一化法基本 相符 ,结果令人满意 ;在实际样品测定中可直接使 用峰面积归一化法 。
Key words :p2chlorophenylhydrazine hydrochloride ;reversed phase high performance liquid chromatography ;determination
— 37 —
外标法 E1S1
测得值 RSD
Found 100100 0 98160 0162 99143 0152 96142 0168
峰面积归一化法
Normalization method in peak area 测得值 RSD Found
100 98169 99141 96138
0 0151 0148 0157
收稿日期 :2001 - 08 - 12
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第 22 2002
卷第 6 期 年 12 月
冶 金 分 析 Metallurgical Analysis
Vol. 22 ,
December
No . 6 , 2002
1mL/ min ,才能有效地分离 ,结果见图 1 。 212 检测波长的选择
对氯苯肼盐酸盐的反相 HPLC 测定
潘富友
(浙江省台州学院化学系 ,浙江台州 317000)
摘 要 :采用 shim - pack CLC - ODS 柱 (5μm ,250mm ×416mm I1D1) ,乙腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙 酸) = 315 :615 (v/ v) 为流动相 ,检测波长为 233nm ,流速为 1mL/ min ,在 5～100mg/ L 浓度范围内 ,在反相 HPLC 中 ,对氯苯 肼盐酸盐的峰面积与浓度之间线性关系良好 (r = 019999) ,RSD 为 0152 % ,方法简便 、准确 ,结果满意 。这为工业化生产中动 态跟踪产品质量提供了一个快速有效的检测方法 。 关键词 :对氯苯肼盐酸盐 ;反相 HPLC ;测定 中图分类号 :O65717 + 2 文献标识码 :B
Y = 42324192X - 31559106 ,r = 019999 。
214 精密度及稳定性 准确称取同一批号样品 6 份 ,按实验方法测
定 ,其 RSD 为 0152 % ( n = 6) ,将同一配置样品放 置 015 ,110 ,215 ,310 ,315 ,410h 后 ,按实验方法测 定 ,得 RSD 为 0160 % ,放置时间超过 3h ,则发现 稳定性欠佳 。
甲醇、乙腈为一级色谱试剂 ,水为双重蒸馏水 (均经 5μm 滤膜过滤) ;对氯苯肼盐酸盐对照品(经本 实验室多次精制得到 ,经 HPLC 多次测定纯度为 100100 %) ,其它批号样品为工厂实际生产样品。 112 色谱条件
色谱 柱 : shim - pack CL C - ODS 柱 ( 5μm , 250mm ×416mm I1D) ,柱温为室温 ;流动相为乙 腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙 酸) = 315 :615 ,流速为 1mL/ min ;检测波长 :233nm。 113 实验方法
Abstract :The RP - HPLC determination of p - chlorophenylhydrazine hydrochloride (CPH) was carried out by using shim - pack CLC - ODS column (5μm ,250mm ×416mm I1D1) 1 The medium of acetonitrile and buffer ( 017g sodium 12heptanesulfonate ,210mL glacial acetic acid in
按实验方法 ,以对照品的含量 X( mg/ L) 为横 坐标 ,色谱峰面积 Y 为纵坐标作图 ,并进行线性 回归 ,结果表明 ,被测样品在 5～100mg/ L 范围内 线性关系良好 ,其回归方程为 :
1 实验部分
111 仪器和试剂 WatersTM600 型四元梯度液相色谱恒流泵 ,
Waters 600 型 液 相 色 谱 恒 流 泵 控 制 器 , Wa2 ters2487 型 紫 外 检 测 器 ( 美 国 Waters 公 司 ) ; JL120 型超声波器 (上海杰理科技有限公司) ; UV - 2401PC 型紫外 - 可见分光光度计 (日本岛津公 司) 。
[ 1 ] 潘富友 ,杨健国 ,梁华定 1 应用化学[J ] ,2001 ,18 (12) :10011 [ 2 ] 潘富友 ,梁华定 1 分析化学[J ] ,1998 ,26 (5) :5281 [ 3 ] 潘富友 ,梁华定 ,分析化学[J ] ,1998 ,26 (12) :15221 [ 4 ] 潘富友 ,杨健国 ,梁华定 ,葛昌华 1 冶金分析[J ] ,2002 ,22 (1) :
3 样品测定
按实验方法 ,记录实际样品的峰面积 ,分别以 外标法及峰面积归一化法计算含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品测定结果 Table 1 Analytical results of samples n = 6 , %
样品 Sample
000801 3 000802 000803 000804
对氯苯肼盐酸盐是新一代消炎镇痛药的重要 起始原料 。我们已报道了其合成方法[1 ] 。由于 原料中苯胺 、间氯苯胺及邻氯苯胺的存在 ,以及在 合成过程中重氮盐的偶合和水解作用 ,使产物变 得非常复杂 ,与此同时 ,由于该产品作为医药中间 体其质量要求甚高 。因此 ,如何采用简单 、快速 、 有效的产品质量跟踪检测方法 ,这对工厂生产过 程中及时调整工艺配方 ,提高产品质量是非常重 要的 。我们在利用反相 HPL C 测定医药及其中 间体的基础上[2～4 ] ,经反复试验 , 找到了对氯苯 肼盐酸盐在反相 ( RP) - HPL C 上分离检测的适 宜条件 ,经 10 多种流动相组成试验 ,结果表明 ,用 乙腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙酸) = 315 :615 作流动相 ,流速为 1mL/ min , 于 233nm 处 ,在 shim - pack CL C - ODS 柱 (5μm , 250mm ×416mm I1D) 上 ,能很好地分离主产物与 副产物 ,并能准确地测定其含量 ,这为工业化生产 中动态跟踪反应过程 ,调整工艺条件 ,提高产品质 量提供了一个快速有效的检测方法 。
2 结果与讨论
211 流动相的选择 按实验方法 ,采用实际工业样品研究了不同
流动相组成及不同流速的保留时间 。结果表明 , 甲醇 、乙腈 、甲醇 - 水 (10 :90～90 :10) ,乙腈 - 水 (10 :90～90 :10) 等在流速 015～115mL/ min 均不 能有效的分离对氯苯肼盐酸盐与其中的杂质对氯 苯胺盐酸盐 、间氯苯肼盐酸盐 、邻氯苯肼盐酸盐和 苯肼盐酸盐 ,只有乙腈 : 缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙酸) 为 315 : 615 ,流速为
401
Reversed phase high performance liquid chromatographic determination of p2chlorophenylhydrazine hydrochloride PAN Fu2you
(Depart ment of Chemistry , Taizhou College , Taizhou 317000 ,China)
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冶 金 分 析 Metallurgical Analysis
Vol. 22 ,
December
No . 6 , 2002
文章编号 :1000 - 7571 (2002) 06 - 0036 - 02
准确称取 2510mg 对氯苯肼盐酸盐对照品 , 置 100mL 容量瓶中 ,加适量流动相 ,振摇使之溶 解并稀释至刻度 、摇匀 ; 准确量取 110 ,310 ,510 , 710 ,1010 , 1510mL 溶液 , 置 25mL 容量瓶中 , 加 流动 相 稀 释 至 刻 度 、摇 匀 , 选 择 检 测 波 长 为 233nm ,流速为 1mL/ min ,分别取 20μL 进样 , 记 录峰面积 。
参考文献 :
图 1 对氯苯肼盐酸盐的 RP - HPLC 图 Fig11 Chromatogram( RP - HPLC) of p - chloro
- phenylhydrazine hydrochloride 11 苯肼盐酸盐 ,51510min ;21 邻氯苯肼盐酸盐 ,81119min ; 31 对氯苯肼盐酸盐 ,91858min ;41 对氯苯胺盐酸盐 ,151808min。
1000mL of water) mixed in a ratio of 3 :7 (v/ v) was as mobile phase1 The flow rater was 110mL/ min1 The detection wavelengt h was 233nm1A good linearity was obtained in t he concentration range of 5 - 100mg/ L for CPH1 The regressive equation was Y = 42324192X - 31559106 , r = 0199991 The met hod has been used to determine CPH in samples wit h satisfactory results1
3 该批号为对照品 ,其它为工业样品
4 结论
用本wenku.baidu.com测定对氯苯肼盐酸盐是可行的 ,操作 简便 ,灵敏度高 ,重复性好 ,结果可靠 。本法能快 速有效地分离其杂质 ,这为动态跟踪反应过程 ,调 整工艺条件 ,提高产品质量提供了一个快速有效 的检测方法 ;本法建立的外标法及归一化法基本 相符 ,结果令人满意 ;在实际样品测定中可直接使 用峰面积归一化法 。
Key words :p2chlorophenylhydrazine hydrochloride ;reversed phase high performance liquid chromatography ;determination
— 37 —
外标法 E1S1
测得值 RSD
Found 100100 0 98160 0162 99143 0152 96142 0168
峰面积归一化法
Normalization method in peak area 测得值 RSD Found
100 98169 99141 96138
0 0151 0148 0157
收稿日期 :2001 - 08 - 12
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第 22 2002
卷第 6 期 年 12 月
冶 金 分 析 Metallurgical Analysis
Vol. 22 ,
December
No . 6 , 2002
1mL/ min ,才能有效地分离 ,结果见图 1 。 212 检测波长的选择
对氯苯肼盐酸盐的反相 HPLC 测定
潘富友
(浙江省台州学院化学系 ,浙江台州 317000)
摘 要 :采用 shim - pack CLC - ODS 柱 (5μm ,250mm ×416mm I1D1) ,乙腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙 酸) = 315 :615 (v/ v) 为流动相 ,检测波长为 233nm ,流速为 1mL/ min ,在 5～100mg/ L 浓度范围内 ,在反相 HPLC 中 ,对氯苯 肼盐酸盐的峰面积与浓度之间线性关系良好 (r = 019999) ,RSD 为 0152 % ,方法简便 、准确 ,结果满意 。这为工业化生产中动 态跟踪产品质量提供了一个快速有效的检测方法 。 关键词 :对氯苯肼盐酸盐 ;反相 HPLC ;测定 中图分类号 :O65717 + 2 文献标识码 :B
Y = 42324192X - 31559106 ,r = 019999 。
214 精密度及稳定性 准确称取同一批号样品 6 份 ,按实验方法测
定 ,其 RSD 为 0152 % ( n = 6) ,将同一配置样品放 置 015 ,110 ,215 ,310 ,315 ,410h 后 ,按实验方法测 定 ,得 RSD 为 0160 % ,放置时间超过 3h ,则发现 稳定性欠佳 。
甲醇、乙腈为一级色谱试剂 ,水为双重蒸馏水 (均经 5μm 滤膜过滤) ;对氯苯肼盐酸盐对照品(经本 实验室多次精制得到 ,经 HPLC 多次测定纯度为 100100 %) ,其它批号样品为工厂实际生产样品。 112 色谱条件
色谱 柱 : shim - pack CL C - ODS 柱 ( 5μm , 250mm ×416mm I1D) ,柱温为室温 ;流动相为乙 腈 :缓冲溶液 (每升含 017g 12庚磺酸钠 ,210mL 冰乙 酸) = 315 :615 ,流速为 1mL/ min ;检测波长 :233nm。 113 实验方法
Abstract :The RP - HPLC determination of p - chlorophenylhydrazine hydrochloride (CPH) was carried out by using shim - pack CLC - ODS column (5μm ,250mm ×416mm I1D1) 1 The medium of acetonitrile and buffer ( 017g sodium 12heptanesulfonate ,210mL glacial acetic acid in