荧光分析技术新进展

第27卷第5期 唐山师范学院学报 2005年9月 Vol. 27 No.5 Journal of Tangshan Teachers College Sep. 2005

────────── 收稿日期：2005-04-02

作者简介：孙继红（1969-），男，河北丰南人，唐山第九中学中教一级教师。 - 19 -

荧光分析技术新进展

孙继红1，钱丹青2

（1.唐山第九中学，河北 唐山 063000；2.唐山学院 机电系，河北 唐山 063000）

摘 要：荧光分析法因具有灵敏度高,线性范围宽等优点。综述了近年来荧光分析技术的发展情况，并对各种荧光分析新技术的特点和应用进行了归纳。

关键词：荧光分析；HPLC ；离子色谱

中图分类号：O657.3 文献标识码：B 文章编号：1009-9115（2005）05-0019-02

近年来荧光分析研究发展迅速，年文献量不断增加。主要应用领域有中西药、临床、生物大分子、食品营养和添加剂等试样。激光诱导荧光法诊断恶性肿瘤，显微荧光法研究药物与细胞的相互，DNA 编序及含量的荧光法测定均是目前受到关注的热点问题。 1 荧光分析新技术

近些年更多的研究者转向充分利用或开发仪器软件技术，以期提高发光分析的选择性和灵敏度，这方面年均论文数量增长了约两倍。刘绍璞先生等率先研究了分子二级散射光谱、共振荧光光谱、共振瑞利散射光谱的分析应用并取得了丰硕成果。郑飞跃等利用解卷积法、黄俊利用相调制技术研究了荧光寿命的测量。潘利华等[1-3]研究了激光诱导荧光寿命测量以及在稀土元素测定中的应用。其它关于金属配合物及镁、铝测定[4][5]及塑封料中铀的测定也有报道[6]。

导数光谱、多维光谱、偏振光谱、磁效应、时间分辨技术、恒能量、固定波长或可变角荧光法等，单独或几种方法的结合并借以化学计量学手段，在提高分析选择性方面具有很大的优越性，而且论文日趋增多，在医药临床、环境检测、石油勘探等领域得到广泛应用。吡哌酸的固体表面延迟荧光测定具有较好的灵敏度[7]。高灵敏检测器以及荧光成像技术对提高分析灵敏度、从有限样品中获取更丰富的化学信息显

示出大的威力。电感偶合检测器件（CCD ）[8-10]、增强型CCD

（ICCD ）[11][12]结合毛细管电泳及激光诱导荧光技术，使得分析检出限显著降低。荧光成像技术[13]可望获得单细胞的化学信息。国外单细胞或单分子检测的研究非常活跃，而上述技术的联合应用对此是必不可少的。

荧光免疫及生化分析持续好的势头。赵启仁等[14]研究了铕标记抗癌胚抗原单克隆抗体C17的应用。周四元等[15]提出对氟苯酚2过氧化氢2辣根过氧化物酶体系酶联荧光免疫法，并用于人血清中乙肝表面抗原和表面抗体测定。姚凤姬等[16]用非标记铕络合物荧光免疫法测定了血清中金属硫蛋白。王敏灿等[17]合成了荧光免疫分析中增强22萘甲酰三氟

丙酮。李建中等用新合成的荧光标记试剂KLUK 标记靶细胞K562，采用时间分辨技术，测量了NK 细胞毒性，具有很好的应用前景。

2 荧光检测技术与其它仪器联用

荧光分析法因具有灵敏度高，线性范围宽等优点，愈来愈引起人们的重视，尤其是近年来激光、计算机、电子学等新技术的飞速发展，加速了荧光分光光度计与其它技术的结合而形成多种多样的新型荧光分析。

荧光分光光度计的联用技术与紫外可见分光光度计的联用技术有许多相似之处。首先它可以作为一种仪器的检测器，其次可以作为一个独立的主体与其它附件相连接，形成一种新的测试系统，最后它还可以与其它分析技术相结合构成一种新型的分析仪器。 2.1 荧光检测与HPLC 联用

液相色谱检测器种类很多，灵敏度较高、选择性较好的荧光检测器在进行微量分析中经常使用。如许多芳香族化合物如蒽、菲、芴等在特定条件下发出特征荧光，利用HPLC 的荧光检测器可以同时测定上述物质。Tanabe 等[18]设计一种供HPLC 用的多波长荧光检测系统，有4个干涉滤光片和光电倍增管通道;Gluckman 等[19]研制的荧光检测器，流通池为150μL ，可用于毛细管HPLC 和超临界色谱，其最小检测量为0.2pg 。

2.2 荧光检测与离子色谱联用

Mho 等人[20]研制一套供离子色谱用的双光束激光激发间接荧光检测器，它用具有荧光的淋洗离子维持恒定背景信号，当待测离子淋出时，信息观测信号减少。这种荧光检测器可以检测纳克级阴离子，方法灵敏度非常高。 2.3 激光光源引入荧光分光光度计

激光光源引入荧光计在我国开发较早，也是目前应用比较成熟的仪器之一，如测铀仪就是其中的代表[21]。时间分辨激光荧光分光光度计的研制成功，大大改善了荧光仪器的性能，这类仪器已广泛应用于环境监测、稀土分析、冶金、化

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工以及生化等领域，LMA-1型激光微量物质分析仪是我国首次研制成功的时间分辨激光荧光仪，并已形成商品仪器。 2.4 显微荧光分光光度计

显微荧光分光光度计既有荧光分光系统，又有显微放大系统，其最大特点是能进行微区分析，可以得到许多微观参数，且不破坏样品，如检测有机包裹体中的荧光物质等。另外还有人[22]曾研制过由光学显微镜、

全息光栅光谱仪和多道检测器组成的激光显微荧光光度计，它可快速测定直径1μm 样品的荧光光谱，这有利于生物组织样品的荧光光谱研究。

2.5 荧光检测器与毛细管电泳联用

毛细管电泳具有强大的分离能力，与荧光检测器联用可以实现复杂体系的快速高灵敏检测。 2.6 荧光光度计与分子吸收技术相结合

厦门大学赵一兵等人研制一种测定非荧光吸光物质的荧光分光光度计。他们在激发光路中放置吸光物质(待测物质)，在液池放置标准荧光物质，扫描荧光光谱。从理论推导可得公式ΔF=F0εbc ，待测物质浓度c 与标准荧光物质的荧光强度衰减ΔF 呈正比，经实际体系测定证实了此结论的正确性。

参考文献：

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New Improvement on Fluorescence Analyzing Technology

SUN Ji-hong 1, QIAN Dan-qing 2

(1.Tangshan Number 9 Middle School, Hebei Tangshan 063000, China; 2.Mechanical Department, Tangshan College, Hebei Tangshan 063000, China)

Abstract: Fluorescence analyzing technology possess the advantages of high sensitivity, wide linear range, etc. The thesis make a induction on the development of fluorescence analyzing technology, classifying the characteristics and application of several new fluorescence analyzing technology.

Key words: fluorescence analysis; HPLC; ion chromatogram

责任编辑、校对：琚行松