色谱常见问题解答
色谱问题解答
1.流动相：流动相首选甲醇-水，其比例根据被测药物的极性而定，被测药物的极性小则70％甲醇先试，被测药物的极性大，则30％甲醇先试，被测药物的极性中等，则50％甲醇先试，当然还要根据药物结构的不同，选用一些添加剂和缓冲盐等。
色谱柱：柱子以ODS柱，即C18为通用。
被测药物的极性小，可用C8或氰基柱等，被测药物的极性大，则可选用氨基柱或能用纯水洗的改性柱。
检测波长：如果所测药物不是在近UV区<215nm，波长只要能满足检测需要，应以靠长波方向及不是坡度太大之处为宜，这是药品分析与生物分析的不同之处。
匆此。
我再补充些:流动相:还可通过调节缓冲液的PH来改善峰型,如酸性的药物可加入适当的酸如磷酸、乙酸等,碱性药物可加入适当的碱如三乙胺等柱：同时还要考虑不同柱之间的差异，同样ODS或C8会有不同的适合范围，可看柱说明书。
波长：当然还要考虑杂质的吸收，测含量可照上。
由于在反相色谱中，极性大的先出峰，所以可减小有机相来增加RT2.回应：我想请教安捷仑1100色谱仪B泵的泵头压力(PURGR压力)比A泵的高30BAR(使用用一溶剂情况下),咋回事?你可以检查一下A、B各流路的管道、泵或者滤头等是否有堵塞的问题，也许是某个地方脏了。
问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：1．提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。
2．玻璃的惰性不不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。
3．易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。
4．可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。
从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。
问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？答:1．进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。
色谱常见故障及排除方法
色谱常见故障及排除方法1、柱压升高色谱柱入U滤片被流动相或样品中颗粒堵住。
样品组分在滤片上沉淀堵住滤片。
卸下入口接头的滤片，使用1：1的硝酸溶液超声清洗5min，再用水、甲醇清洗除去水份。
样品及流动相使用0．45µm滤膜除去微量杂质。
使用流动相作溶剂配制样品。
2、新柱柱效低柱外死体积大.样品在流动相中溶解不好，影响传质过程。
更换连接管，重新连接色谱柱，降低死体积。
使用合适的流动相或使用流动相溶解样品。
3、旧色谱柱柱效低，分离不好，柱入口床层塌陷。
填料被流动相溶蚀而流失。
用同型填料填补柱效可部分恢复。
对硅胶质填料，流动相PH 值在2—7范围内，否则可能被溶蚀。
4、旧色谱柱柱效低分离不好，有时出现双峰。
入门填料被污染变质所致。
用强溶剂冲洗。
刮除被污染的床层，用同型的填料填补柱效可部分恢复。
污染严重，则废弃或重新填装。
5、新柱接到仪器上后，柱头漏液。
柱接头与仪器之间连接管的压环变形量不够。
用扳手顺时针方向拧紧1／4圈直到不漏液为止。
6、新柱接到仪器上后，启动仪器没有柱压降。
柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。
继续开泵，用流动相将柱内气体置换掉。
7、新柱接到仪器上后，检测器出口不断有小气泡出现。
①同上。
②流动相脱气不彻底特别是MeOH／H20体系由于氢键作用很容易出现气泡。
①同上。
②配好流动相后一定要进行脱气处理。
8、新柱接到仪器上后柱压降不断增加，甚至超过仪器的耐压限。
柱入口滤片被固体颗粒堵塞(或被毒菌堵塞)。
更换或清洗柱入口滤片；用0．45µm 过滤膜过滤流动相除去微小颗粒物。
9、进样次数增加柱压降逐渐增加。
.①样品中含有不溶于流动相的微小颗粒物。
②样品在流动相中析出微小结晶。
①用0．45μm过滤膜过滤样品。
②推荐使用流动相溶解样品。
10、使用—段时间后，柱效下降，分离不好。
①柱填料被流动相溶解而流失。
②柱填料被样品杂质污染。
①推荐使用予柱。
如柱床层塌陷，用相同型号填料填补。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
色谱岗位基础知识问答
色谱岗位基础知识问答1、什么是气相色谱？答：用气体做载气的色谱法称为气相色谱法。
2、气相色谱分离原理是什么？答：根据气化样品中的各组分在色谱柱中的流动相和固定相间分配系数或吸附能力不同进行分离。
3、气相色谱仪主要分为哪几部分？答：进样系统、分离系统、检测系统三部分。
4、气相色谱有哪些特点？答：高性能、高选择性、高灵敏度、分析速度快、样品用量少、应用范围广。
5、气相色谱常用载气有哪些？答：氮气、氢气、氦气、氩气等。
6、什么是色谱图？答：色谱柱流出物通过检测器系统时产生的响应信号。
7、什么是基线？答：基线是指仅有载气通过检测器系统时产生的响应信号。
8、什么是死时间？答：不被固定相滞留的组分（如空气或甲烷）从进样到出现峰最大值所需的时间称为死时间。
9、什么是保留时间和调整保留时间？答：组分从进样到出现峰最大值所需的时间称为保留时间，调整保留时间就是保留时间减去死时间。
10、什么是保留指数？答：保留指数是定性指标的一种参数。
通常以色谱图上位于待测组分两侧的相邻正构烷烃的保留值为基准，用对数内插法求得。
11、气相色谱对载气有何要求？答：作为载气要求其不能与被分析样品和固定相发生反应，载气必须纯净，价格便宜容易得到，并且载气必须与所使用的检测器匹配。
12、什么是分离度？答：分离度是指两个相邻色谱峰的分离程度，它是以两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比（R）表示：R=2（t R2-t R1）/（W1+W2）13、什么是检测器的灵敏度？答：灵敏度是指被检测物质通过检测器时，物质量变化时响应信号的变化率。
14、常用的检测器有哪几种？答：浓度型检测器：热导池检测器（TCD）、电子捕获检测器（ECD）等。
质量型检测器：氢火焰离子化检测器（FID）、火焰光度检测器（FPD）、氮磷检测器（NPD）等。
15、什么是检测限？答：检测限是指随单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分所产生的信号等于基线噪声信号二倍时的量，用D表示。
色谱那些常见问题你会解决了么？
色谱那些常见问题你会解决了么？1、用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，缘由何在?如何解决? 答：关于漂移问题：a、温度掌握不好，解决方法是采纳恒温装置，保持柱温恒定；b、流淌相发生变化，解决方法是防止流淌相发生蒸发、反应等；c、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。
关于快速变化问题：a、流速发生变化，解决方法是重新设定流速，使之保持稳定；b、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；c、流淌相不合适，解决方法为改换流淌相或使流淌相在掌握室内进行适当混合。
2、色质联用中毛细柱的选择应留意什么问题?答：柱效要高、热稳定性好、化学惰性强。
详细选择应留意：a、柱极性：依据分析样品选择不同极性的柱子进行分析；b、柱子内径：内径大小打算柱容量；c、液膜厚度：分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄；d、柱长度：柱越长，柱效越高，分别效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要依据样品考虑柱子长度；e、外涂层(柱体)的选择；f、另外还有仪器型号、分析对象等因素。
3、液相色谱中峰消失拖尾或消失双峰的缘由是什么?答：a、筛板堵塞或柱失效，解决方法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；b、存在干扰峰，解决方法为使用较长的柱子，改换流淌相或更换选择性好的柱子。
4、从那些方面可以简洁判别毛细管柱子的热稳定性好坏?答：a、安排容量(或容量因子)K：好的柱子在高温运行后，安排容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好；b、理论塔板数n：热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定；c、柱子的极性：热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，详细表现为保留指数I值没有大的变化；d、噪声：热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加；e、柱子的去活层：毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性，质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应当变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。
液相色谱常见问题及其对策
HPLC如何得到好的结果 …
• 流动相
• 缓冲液 / 溶剂选择, 梯度优化, 流速选择 • 脱气，流速稳定, 流动相制备
•柱
• 高柱效, 二级作用力, lot variation, 温度控制
• 检测
• 灵敏度, 选择性, 温度波动影响
• 样品
• 提取方法选择, 样品溶剂选择, 氧气影响
• 仪器
吸滤头
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液相色谱容易出问题的部件
吸滤头 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断
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液相色谱容易出问题的部件
LC-10ATvp泵：串联 式往复泵
LC-10ADvp泵：并联式 往复泵
泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）
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液相色谱常见问题及其对策－漏液
进样阀漏液 可能原因 1、转子密封损坏 2、定量环堵塞 3、进样口密封松动 4、进样针尺寸不合适 5、废液管产生虹吸 6、废液管堵塞
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液相色谱常见问题及其对策－漏液
检测器漏液 可能原因 1、流通池垫片损坏 2、流通池透镜破碎 3、手紧接头处漏液 4、废液管堵塞 5、流通池堵塞
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液相色谱容易出问题的部件 柱子
故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉 峰），保留时间的改变
解决措施：清洗
正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸
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液相色谱容易出问题的部件
峰产生有肩或分叉的原因
1. 柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙）
气相色谱常见问题及解决
气相色谱常见问题及解决1：基线不稳的可能因素1. 进样针受污染。
清洗进样针；做一浓缩试验，载气线路可能也要清洗。
2. 色谱柱受污染。
烘焙色谱柱，限定时间1-2h。
3. 检测器不平衡。
检测器一般需要24h才能得到平衡。
4. 在程序升温的时候改变载气流速2.1 ：基线噪音1. 进样针受污染。
清洗进样针；做一浓缩试验，载气线路可能也要清洗。
2. 色谱柱受污染。
烘焙色谱柱，限定时间1-2h。
3. 检测器不平衡。
清洗检测器，通常噪音不是突然增大而是逐渐产生。
4. 污染或载气质量降低。
使用高质量的载气或检查气体是否泄露。
一般在换载气钢瓶的时候会突然发生。
5. 柱子安装太过。
可重新安装。
6. 载气流速不合适。
重新设定流速。
7. 与MS、ECD、TCD联用时发生漏洞，查找并消除漏洞即可。
8. 检测器的灯或电子倍增管老化。
2.21. 电器方面的原因首先将检测器信号线断开，在采集状态下观察基线运行情况，如果基线波动很大则可判断该故障是电器方面的原因，此时，需要进一步检查仪器接地是否良好（接地电阻应小于 5 Ω）、线路板及各插件是否松动等。
2. 测量系统污染断开信号线后，在采集状态下检查基线运行的情况，如果基线运行正常则证明测量系统污染。
需要检查色谱柱是否失效（需活化处理）、柱进口是否污染（更换玻璃丝、玻璃衬管等）、检测器污染，主要是离子头的污染，3：分离度下降1. 柱温不同。
检查柱温。
2. 不同的色谱柱的维数和相位。
核实色谱柱的特性。
3. 改变载气流速。
4. 色谱柱受污染，应用溶媒清洗柱子。
5. 进样器的改变。
检查进样器的设置。
6. 样品的浓度或溶解能力的改变。
试用一个不同的浓度。
4：峰形改变答：1. 检测器响应改变。
检查气体流速、温度和设置。
2. 样品的浓度改变。
检查并检验样品的浓度，样品的蒸发或成分的改变都可能引起。
3. 色谱柱受污染。
5：进样器或载气被污染1. GC 在40- 50℃保持8 小时或8 小时以上。
色谱操作过程中遇到的问题及处理方法
五、分流和尾吹有什么作用？
• 分流的作用：减小柱容量，减小柱污染。 • 分流的原因：因为毛细管相对柱容量很小，并
且很容易污染，所以用分流，把进进去的样品大 部分分到外面，只有小部分留经柱子。
• 尾吹的作用：增加柱出口到检测器载气速度以
减小这段死体积的影响，使仪器的灵敏度与峰形 有所改善。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
四、气相色谱仪在使用一段时间后，其灵敏 度降低了，可能是什么原因？
可能出现原因有：
（1）进样垫是否漏气了。 （2）柱子连接端口是否有漏气。 （3）进样针是否坏了，特别是使用1ul 进样针， 在进粘度相对较大的样品时时常会出现。 （4）FID 中的喷嘴有漏气，火焰太大。
（5）在使用毛细管柱时，分流端漏气，尾吹堵、 漏气也会使灵敏度下降。 （6）TCD 中电流的下降。 （7）FID 中，极化线圈氧化。 （8）TCD 中钨丝氧化不平衡。
图1 正常的峰型
（1）前伸峰、拖尾峰
• 定义： • 峰前沿较后沿平缓的不对称峰叫前伸峰， 后沿较前沿平缓的不对称峰称为拖尾峰。
图2 前伸峰
图3 拖尾峰
• 产生拖尾峰的原因是：
• • • • • A、进样室温度过低 B、柱温过高 C、进样技术差 D、色谱柱对试样组分有吸附 E、色谱系统死体积大。
排除办法：
一、不规则基线的原因是什么？
基线不能调节是由于三方面原因引起的： 1、基流太大 2、放大器有故障 3、检测器元件有故障。
二、用气相色谱法进行分析，把试样制备好后进样， 进样后不出峰，应从哪几个方面考虑排除此故障？
• （1）从气路方面考虑：检查是否漏气（包括进样口）， 微量进样器是否有毛病。 • （2）从检测器考虑：如果是使用氢火焰检测器，应检查 火焰是否点燃或熄火。如果是热导池检测器，应检查热丝 是否燃断，电源开关是否有问题。
气相色谱常见问题及解决方法
气相色谱常见问题及解决方法
气相色谱常见问题及解决方法包括：
1. 色谱峰形状畸变问题：可能原因包括柱温不稳定、进样量过大、进样器污染、柱老化等。
解决方法可以是调节柱温稳定性、减少进样量、清洁进样器、更换柱子等。
2. 色谱峰分离不良问题：可能原因包括柱子选择不合适、进样器选择不合适、流速不合适等。
解决方法可以是选择合适的柱子、进样器、调整流速等。
3. 柱子寿命较短问题：可能原因包括进样量过大、进样器污染、样品中存在较多杂质等。
解决方法可以是减小进样量、清洁进样器、预处理样品等。
4. 色谱峰尾扩散问题：可能原因包括柱温过高、流速过快、柱老化等。
解决方法可以是降低柱温、调整流速、更换柱子等。
5. 色谱峰漂移问题：可能原因包括进样器温度过高、进样器污染、柱子老化等。
解决方法可以是降低进样器温度、清洁进样器、更换柱子等。
6. 噪声问题：可能原因包括进样器污染、柱子老化、仪器问题等。
解决方法可以是清洁进样器、更换柱子、维护仪器等。
7. 保留时间不稳定问题：可能原因包括进样量不稳定、柱温不稳定、流速不稳定、进样器问题等。
解决方法可以是调整进样
量、提高柱温稳定性、稳定流速、检查并维护进样器等。
8. 色谱柱效不稳定问题：可能原因包括柱子老化、进样器问题、进样量过大等。
解决方法可以是更换柱子、检查并维护进样器、减小进样量等。
这些是气相色谱常见问题及解决方法的一些例子，具体问题和解决方法还需根据实际情况来确定。
色谱知识35问题
一、分别说明硅藻土载体Chromosorb W AW DMCS中“W”、“AW”、“DMCS”的含义? 答:W—白色;AW—酸洗;DMCS—二甲基二氯硅烷处理。
二、对气相色谱固定液有哪些基本要求？答：1、选择性好：对不同组分有不同的溶解和解析能力，以便达到所规定的分离要求；2、极性范围广：具有多种类型的作用力，以利于分析多种不同类型的样品；3、化学稳定性佳：不与载气或样品组分发生不可逆的反应，以免出现固定液变质或干扰分析的现象；4、液态粘度小：组分能在其中快速完成溶解和解析过程，以便实现高效快速分析之目的；5、热稳定性高：有较宽的工作温度范围，能承受较高的工作温度和较低的凝固点，以便完成对沸程较宽样品的分离分析工作；6、附着力强：能在载体表面上形成一层均匀的不易脱落的薄膜，以利于提高柱效率；7、蒸汽压低：在使用条件下流失少，以便获得稳定的基线和较长的柱寿命；三、制备色谱填充柱时，应注意哪些问题？答:A.选择合适的固定液和担体,注意合适的配比;B.根据分析样品性质选择合适的柱管材质,如不锈钢,玻璃,聚四氟乙烯;C.充分清洁柱管内壁,必要时对内壁做钝化处理;D.配置合适浓度的固定液使其能在适量的担体上均匀分布;E.充分干燥配置好的填料;F.事先计算好柱体积,以便验证柱子装填是否紧密;G.注意装好柱端的玻璃棉(或不锈钢网)后再连接到真空泵;H.确定装填紧密后,在通载气状态下对柱子进行老化(注意:检测器端不连接).四、气相色谱分析，柱温的选择主要考虑哪些因素？答：1、被测组分的沸点2、固定液的最高使用温度；3、检测器灵敏度；4、柱效。
五、气相色谱分析的保留值是何含义？答：保留值是表示试样中各组分在色谱柱中的停留时间的数值，通常用时间或用将组分带出色谱柱所需载气的体积来表示。
其表示了溶质通过色谱柱时被固定相保留在柱内的程度。
六、何谓气相色谱的相对保留值？相对保留值有何意义？答：以一种物质作为标准，而求出其他物质的保留值对此标准物的比值，称为相对保留值。
常见色谱故障分析处理
常见色谱故障分析处理
一、基线波动和漂移
可能原因：
1、流量和温度设置值改变：在分析过程中可通过运行柱补偿来修正基线的漂移。
2、色谱柱被污染：可通过彻底老化来将此效应降到最小。
3、气体被污染：使用合适的净化器，并定期维护。
4、在注射样品后的瞬间，隔垫处有泄漏：常在一个大峰之后导致基线改变，应更换隔垫，并使用直径更小的注射针头。
二、基线噪音过大
可能原因：
1、检测器被污染：拆下色谱柱，按上死堵，升高检测器温度，进行热清洗，不建议个人拆开检测器清洗。
2、气体受到污染或质量较差：使用合适净化器，或更换质量好的气体。
3、进样口被污染：更换合适的衬管和隔垫。
三、保留时间漂移
可能原因：
1、色谱柱的规格发生了变化。
2、隔垫或色谱柱的连接处发生了泄漏。
3、分流管理堵塞：可以清洗分流平板，更换分流口捕集阱，检查流量控制阀。
4、色谱柱污染：可截去色谱柱前端。
0.1-1m，并在工作站中进行色谱柱的校准。
四、响应值变小
可能原因：
1、检测器响应能力的改变：可能被污染，或者检测能力下降。
2、分流比或进样量的变化。
3、进样口吸附效应：可更换惰性衬管。
4、注射器泄漏或堵塞。
五、前伸峰
可能原因：
1、色谱柱过载：减小进样量，稀释样品，增加分流比。
2、注射技术问题：推杆压力不稳定。
六、拖尾峰
可能原因：
1、衬管、分流平板或色谱柱被严重污染。
2、色谱柱安装不正确，泄漏或柱端切割不平整。
3、进样口温度太高或太低。
4、注射技术问题。
色谱技术答案
1若想建立某中药的醇提液的RPHPLC 指纹图谱，是采用等度洗脱还是梯度洗脱？简述其分析条件的优化。
答：1系统梯度洗脱由于中药的醇体液成分复杂，样品的K （容量因子）范围宽，不能用等度洗脱，梯度洗脱可以使不同K 值的样品成分洗脱时随流动相的连续改变而趋于同一K 值，谱峰尖锐而对称，分离度改善，缩短分离时间，降低最小检测量和提高分离精度，从而让所有成分均出峰2．优化思路：梯度期间，强溶剂的浓度B%增大，优化梯度条件起始B%，终止B%，梯度时间t 和溶剂B 的种类，因此在RPHPLC 指纹图谱建立时，考虑流动相种类，流动梯度范围和梯度斜率三方面。
（1） 流动相种类的选择：RPHPLC 中常用甲醇，乙腈，四氢呋喃等有机溶剂与水混合，流动相种类由样品分离难易程度决定。
MeoH 、CAN 、THF 洗脱强度逐渐增高，样品易分离时采用溶剂优化法选择流动相和水的最佳比例，调整K 值，使其在1—20(t R :3—35min).（2） 梯度范围：即起始和终止B%一般为5%--100%（t R ：30min ）若谱图前段空白可提高初始B%，末端空白需降低终止浓度，可节省时间缩小梯度范围使所有组分短时间从柱中洗脱出来（3） 梯度斜率：根据初步分离的谱图，峰密集部位可降低斜率，减小强溶剂B%变化速度，峰疏散部分提高梯度斜率，时间短2，根据Van deemter f 方程在液相色谱中的表现形式，分析在HPLC 中影响柱效的因素及实验条件的选择。
答：Van Deemter 方程在液相色谱中表现形式为:(1) 影响柱效的因素：a. 涡流扩散项：为避免涡流扩散而引起的峰扩张，需用小而均匀颗粒填充颜色等等b. 纵向扩散项：HPLC 中Dm 仅有Gc 的10-4—10-5倍，该项系忽略。
c. 固定相传质阻力项：降低固定液膜厚度，加快组分在固定相中的扩散d. 流动相传质阻力项：组分分子随流动相进入色谱柱时，靠近固定相颗粒的部分分子流速较慢，中央分子流速较快，而引起峰扩张，要降低该项需减小dp 和u ，增大Dm.e. 流动相滞留传质项：固定相的多孔性使部分流动相滞留于固定相某一局部，流动相中组分分子必须自流动相扩散到滞留区，才能与固定相进行质量交换，为降低该项，应采用颗粒小，微孔浅，孔径大的固定相。
常见色谱分析问题解疑
常见色谱分析问题解疑一、产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？（1）拖尾：1.干扰峰，优化条件分离2 色谱柱塌陷，更换色谱柱 3 流动相p H不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下（2）前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂2 样品过载，降低进样量3 柱温太低，升高柱温4 色谱柱损坏，更换色谱柱5 干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。
拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。
柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。
图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。
一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。
柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。
二、怎样避免拖尾和前沿，有何措施？选择合适的色谱条件和色谱柱，就可以避免峰拖尾和前沿在处理样品时选择合适的流动相最为重要，所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等相关问题，摸条件时找到较好的流动相，是避免拖尾峰出现的最好方法。
避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量，每种色谱方法有一定的线性范围，超过这一范围不对称峰则会出现。
要看是由于什么原因造成的：分析物本身的性质：这类问题首先要选择合适的色谱柱，另样品的前处理非常重要，部分样品在分析过程中分解，那肯定是拖尾的。
离子色谱仪常见问题的原因和解决方法
离子色谱仪常见问题的原因和解决方法
离子色谱仪常见问题及解决方法如下:
1. 柱子不干净或被污染会导致信号不明显或峰形不准确。
解决方法:使用预处理液或使用高剂量的质谱化试剂来去除杂质。
2. 柱子或色谱柱堵塞会导致信号不明显或峰形不准确。
解决方法:使用活性炭或聚苯乙烯来清洗柱子,或者使用不易被污染的色谱柱。
3. 进样不均匀会导致信号不明显。
解决方法:使用合适的进样器,并在进样前进行必要的预处理。
4. 检测器故障会导致信号不明显或峰形不准确。
解决方法:定期检查检测器,并进行必要的维护。
5. 电源故障会导致信号不明显。
解决方法:使用合适的电源,并定期检查电源线和插头。
6. 色谱柱未正确安装会导致信号不明显或峰形不准确。
解决方法:将色谱柱正确安装在色谱柱架上,并确保色谱柱头与色谱检测器垂直。
7. 色谱柱洗脱液不干净或使用过量会导致信号不明显。
解决方法:使用适量的色谱柱洗脱液,并在进样前将色谱柱冲洗干净。
8. 样品制备不正确会导致信号不明显。
解决方法:按照正确的样品制备方法进行制备,并在进样前进行必要的预处理。
气相色谱常见问题及解决方法
气相色谱常见问题及解决方法气相色谱（Gas Chromatography，简称GC）是一种分离和鉴定化合物的常用分析技术，它通过样品中化合物在气相和固定相之间的分配行为来实现分离效果。
GC在很多领域中都有广泛的应用，包括环境监测、食品安全、药物研究等。
然而，在进行GC分析的过程中，常常会遇到一些问题，比如峰形异常、背景噪声、峰分离不良等。
本文将介绍一些常见的气相色谱问题，并提供相应的解决方法。
问题一：峰形异常峰形异常是指在气相色谱图上出现的不正常的峰形，比如峰宽过宽、峰高不对称、肩峰等。
峰形异常可能由多种因素引起，包括进样量不当、进样器温度不稳定、柱温度梯度不合适、柱老化等。
解决方法：1. 检查进样量：确保样品进样量适当，避免过大或过小的进样量对分析结果造成影响。
可以通过逐渐增加或减小进样量来优化峰形。
2. 检查进样器温度：确保进样器温度稳定，尽量避免温度的波动。
可以使用稳定性良好的热解吸器来缓解温度波动的问题。
3. 优化柱温度梯度：柱温度梯度是控制分离效果的重要参数。
可以通过调整柱温度梯度来改善峰形。
通常情况下，初始温度设置为较低的温度，然后逐渐升温。
4. 更换老化的柱：如果柱老化严重，也会导致峰形异常。
在出现峰形异常时，可以考虑更换新的柱。
问题二：背景噪声背景噪声是指在气相色谱图上出现的不相关的信号，它会干扰到目标化合物信号的检测。
背景噪声可能由多种因素引起，包括进样器的污染、仪器的电源干扰、环境的干扰等。
解决方法：1. 清洁进样器：定期清洁进样器，避免进样器表面的污染物带入样品。
可以使用溶剂或有机溶剂进行清洗。
2. 优化仪器环境：保证仪器的工作环境干净和稳定，尽量减少电源干扰和环境干扰对分析结果的影响。
3. 选择合适的流动气体：选择合适的流动气体，如氢气、氮气等，可以降低背景噪声的水平。
4. 调整检测器参数：不同的检测器有不同的参数可以调整。
可以根据具体情况优化检测器的化学增强剂量、扫描速度等参数，降低背景噪声。
色谱中常出现的问题与解决办法
A所有组分峰变小可能原因建议措施1进样针缺陷使用新针或无缺陷的针2进样后漏夜判断漏夜点，维修之3 MAE UP过大：分流比过大调整气体流速和分流比4 分析物质分子量过大，底挥发样品时提高INJ。
OVEN（主要柱子的最高使样品的汽化温度过低，或柱温度低用温度）5 NPD被污染物（二氧化硅）覆盖更换铷珠6NPD温度过高（使用或环境温度），气体不纯更换铷珠：避免高温使用7不分流进样，分流阀关闭快：初始OVEN温高8 检测器与样品不匹配9样品的挥发调整样品的的浓度或选择合适的溶剂B峰伸舌峰伸舌多右色谱柱过载减小进样量(可能需提高仪器的sensitivty使用大容量柱子：提高OVEN，INJ温度：增大气体流速C峰高峰面积不重复1进样不重复，偏差大自动进样器：加强手动进样的练习2其他峰型变化引起的峰错位，干扰3基线的干扰仪器系统参数设定的改变参数标准化，规范化D负峰1 Detector有数据处理系统信号极性接反信号连接倒置2 TCD中，样品导热系数大于载气导热系数选择数据处理中的“负峰处理”3 ECD被污染，可能在正峰后跟随负峰清洗ECD，更换之（若有必要）E样品的检测灵敏度下降1色谱柱，衬管被污染，使活性物质灵敏度小将清洗衬管：用溶剂（优级纯甲醇）清洗色谱柱：更换之（如有必要）2进样时样品渗漏（对易挥发物质更甚）查找渗漏点3 在splite汽化进样中，OVEN初始温度过高用低于样品溶剂的初始温度；致使样品汽化后扩散加剧，导致撕沸点样品灵敏度下降使用高沸点溶剂F 峰分叉1 进样过激，不稳定，形成二次进样练习手动进样：使用自动进样器2色谱柱安装失败重新安装3 spliteless或柱头进样，样品溶剂的混合使用相同的溶剂4柱子温度波动修理稳控系统5 spliteless进样，量大，时间长。
希望用“溶剂在毛细管色谱柱前端安装5米的去效应“谱带浓缩时，溶剂的固定相的湿润性差活化，未覆盖固定液的毛细管溶剂将在柱子中形成几米长，厚度不等的溶剂带破坏正常的浓缩，使峰拉宽分叉J 峰拖尾1衬管，色谱柱被污染；有活性点清洗，更换之（如有必要）2衬管，色谱柱安装不党，存在死体积注射甲烷，峰若拖尾，则重新安装3色谱柱柱头不平用金刚砂切割，使之平4固定相的极性指标与样品分析不匹配换匹配的柱子5 样品流通路线中有冷井消除路线中的过低温度区6衬管或色谱柱中有堆积切割碎屑清洗更换衬管；切除柱头10cm7 进样时间过长缩短之8分流比低增大分流比（至少大于20/1）9进样量过高减小进样体积或稀释样品10 醇胺，伯胺，叔胺和羧酸类易拖尾用极性大的色谱柱；样品衍生处理H保留时间漂移1 温度变化检查柱温箱的温度2气体流速变化注射甲烷，测定载气线速度3进样口泄露检查进样垫；判断其他泄露处4溶剂条件变化样品，标准品使用相同的溶剂5色谱柱被污染切除柱头10cm；高温老化，清洗I分离度下降1色谱柱被污染方法同上2 固定相被破坏（柱流失）更换之3 进样失败检查泄露，维修之检查吹扫时间检查温度的适应性；检查衬管4样品浓度过高稀释；减少进样量；用高分流比H溶剂峰拉宽1色谱柱安装失败2进样渗漏3进样量高提高汽化温度4分流比低提高分流比5OVEN低6 分流进样时，初始OVEN过高降低初始柱温，使用高沸点溶剂7吹扫时间过长（不分流进样）定义短时间的吹扫程序基线问题A基线向下漂移1 新安装的柱子，基线连续向漂移几分钟继续老化2 检测器未达到平衡延长检测器的平衡时间3 检测器或GC系统中其他部分有沉积物被烤出来清洗之B 基线向上漂移1色谱柱固定相被破坏2 载气流速下降调整载气压力；清洗压力和流量调节阀C噪音1毛细管末插入检测器太深重新安装色谱柱2 使用ECD，TCD气体泄露引发基线噪音检查，维修气路3 FID ，NPD，FPD燃气流速或燃气选择不当高纯燃气，调整流速4进样口被污染清洗进样口；更换搁垫；更衬管中的玻璃纤维或硅烷化5毛细管色谱柱被污染切除首端10cm；用溶剂清洗色谱柱；更换之6检测器发生故障维修，更换之7检测器电路发生故障联系生产商或维修机构（专业）D Offset(基线位置的突然改变1电源电压波动使用稳压器2 电路接口处连接不好检查，清洗其接口处，拧紧接口3进样口被污染4色谱柱被污染5毛细管末端插入检测器太深6 检测器被污染E毛刺1 电磁干扰关闭电磁干扰源2颗粒污染进入检测器3气路密封松动，气体泄露拧紧松动的密封4检测器内部电路接口或输入，输出信号接口松动检查，清洗，拧紧接口，更换之积尘或被腐蚀F Wander（低频率的噪音）1温度，压力等环境条件的波动找到环境因素变化与基线的关系，然后稳定之2温度控制漂移测量检测器的温度3 载气中含杂质（温度稳定时）更换载气或气体净化器4进样口被污染5毛细管被污染6气体流速控制失灵清洗或更换气体气相色谱常见故障检查诊断气相色谱种类很多，性能也各有差别。
色谱100问
色谱100问色谱柱100问1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。
反冲后是正者用，还是反着用。
具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。
反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相，在调整梯度的时候发现，刚开始用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变化，30%也没有变化，一直调到20%的时候，RT突然变到了约13分钟，请问这是什么原因?我用的是离子交换柱。
答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。
譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。
因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。
具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。
用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。
特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
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色谱常见问题解答问题1:为什么有些峰出现拖尾答:①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是 1 英寸到 1 米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5 至 1 分钟范围内.③未吹扫(死)体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙(制备色谱柱).如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.问题2:如何改善峰形(前伸峰,拖尾峰)答:前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少. 这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.问题3:什么原因导致峰比原来大,而且出现的早答:过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.问题4:何时需更换隔垫或衬管答:通常比较好的隔垫至少能保证100 次进样不发生问题. 当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.问题5:随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗答:如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.问题6:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题7:如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积答:如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1 微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.问题8:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题9:色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗答:如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.问题10:为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰答:有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.问题11:什么原因导致基线不稳和干扰答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.4. 在程序升温的时候改变载气流速(在很多情况下为正常现象).问题12:什么原因导致过多的基线噪音答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.4. 污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.5. 柱子安装太过.可重新安装.6. 载气流速不合适.重新设定流速.7. 与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.8. 检测器的灯或电子倍增管老化.问题13:什么原因导致峰形改变答:1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.3. 色谱柱受污染.问题14:如果分离度下降,如何处理1.柱温不同.检查柱温.2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.3.改变载气流速.4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.5.进样器的改变.检查进样器的设置.6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.问题15:如果出现分裂峰,如何处理1.试着改变一下进样方法.2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.3.重新安装色谱柱.4.减小进样温度.问题16:如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测1. GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.2. 运行一个空白分析(开启GC,但不进样).3. 收集空白分析的色谱图.4. 第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.5. 收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.6. 假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了毛细管柱被污染了(进样器或载气被污染).7. 假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器或载气是比较干净的.假如8. 假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和(或)基线漂移,那通常也就表明了进样器或载气被污染了.问题17:保护柱应为多长比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问题19.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载，减少进样量。
问题20.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。
调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡。
解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适。
调整流速即可。
⑩检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
问题21.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；②比例阀失效，更换比例阀即可；③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
问题22.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。
尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。
正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。
因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。
在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。
问题23.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。
④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。