免疫磁珠

⑶IMS法 将样品增菌液分成DICA法阳性和阴性 两组．均取1ml加入1.5ml ep离心管中(离心管事 先已加入20μl免疫磁珠)振摇20～30min，上磁铁 板吸附沉淀免疫磁珠，吸去上清液，反复用PBTT洗涤2次，加50μl PBs-T重悬浮、混匀，分涂于2 块CT-SMAC平板37℃培养18～20h，挑取中等大 小不发酵山梨醇的无色半透明可疑菌落和发酵山 梨醇的红色菌落(防止发酵山梨醇的E.Coil O157， H7，漏检)接种克氏双糖，选取双糖符合者，再进 行形态染色、相关生化反应、E．Coil O157及H7， 诊断血清做玻片凝集．均符合者可判为E．Coil O157：H7。对DICA法阳性．而IMS集菌阴性的增 菌液，再进行第二次IMS集菌分离。
中的应用也越来越广泛，与生物磁珠技术结合后，更是产生了诱人的发展前景，并
广泛地应用于分离纯化RNA、mRNA、核酸片段等及相关研究。
5、用于分型 免疫磁珠法可被应用于临床器官移植供受者的快速选配。在高梯度磁场下,用 免疫磁珠法分离静脉或腹腔血中T、B淋巴细胞，并利用分离的淋巴细胞进行 HLA-ⅠⅡ类抗原分型。如采用磁珠技术和单抗试剂建立起可在1.5h完成HLAⅠⅡ类抗原一类分型的新方法，还可应用免疫磁珠分离技术进行肾移植供受体的 HLA分型、探讨血液病患者反复血小板输注的治疗效果与HLA之间的相关性。
6、 用作靶向释药系统的载体 免疫磁性微球作为靶向释药系统的载体可使免疫磁性微球上的抗癌药物更易 与癌细胞接触，服用这种制剂后，在体外适当部位用一适宜强度的磁铁，将磁性 微球引导到体内特定靶区，提高了杀伤癌细胞的效果。很多研究者使用不同的方 法制成了针对不同癌细胞的免疫磁性微球，作为靶向释药系统的载体并在实验中
证实这种释药载体具有良好的功效。
斑点免疫层析、免疫磁分离技术在 E．coli 0157：H7检测中的应用
1、 E．coli 0157：H7 • 是大肠杆菌的其中一个类型，该种病菌常见于牛羊等温 血动物的肠内。这一型的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素， 并可能导致肠管出现严重症状。已被世界卫生组织确定为 新发现的28种传染病病原体之一,成为各国食品安全和公 共卫生监控的重点。 ⑴病征：患者可能出现各种症状，包括严重的腹泻、带血 腹泻、发烧、腹绞痛及呕吐。情况严重时，更可能并发急 性肾病。5岁以下的儿童出现该等并发症的风险较高。若 治疗不当，可能会致命。
的研究在医学检测方面的应用，可以简便快速地诊断膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、
腹膜胃癌、上皮肿瘤细胞等，使免疫磁性分离技术的应用更加广泛。 4、在核酸与基因工程上的应用
免疫磁球可以看作是亲合层析技术中的微型配基裁体，借助亲合素-生物素（
Biotin-Avidin）系统免疫磁球可与非蛋白质结合，生物素和亲合素间有着高度的亲 和力，两者的结合迅速、专一、稳定，在分子生物学、医学、免疫组织化学等领域
⑵传播途径： 该种疾病可通过饮用受污染的水或 进食未熟透的食物(特别是免治牛肉、汉堡扒及烤 牛肉)而感染。饮用或进食未经消毒的奶类、芝士、 蔬菜、果汁及乳酪而染病的个案亦有发现。此外， 若个人卫生欠佳，亦可能会通过人传人的途径， 或经进食受粪便污染的食物而感染该种病菌。 ⑶潜伏期： 通常为3至4日，但亦会长达9日。
4 、免疫磁性微球的制备
基本技术路线：制成磁性材料的微球，再在微球表面引入活性基团， 通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上，形成免疫磁性微球。 优质微载体的性能： 合适且均一的磁响应强度, 较小且均一的粒径, 稳定均一、特异吸附的表面性能。
磁性微载体的制备：
包埋法：将磁性粒子分散于高分子溶液中，通过雾化、絮凝、沉 积、蒸发等手段得到磁性高分子微球。
三、免疫磁性微球的应用
1、用于细胞分离和提纯 使用IMB进行分离细胞有两种方式；直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方
法，称为阳性分离；用免疫磁珠去除无关细胞，使靶细胞得以纯化的方法称为阴
性分离。免疫磁珠技术可用来分离人类各种细胞如红细胞、外周血嗜酸/碱性粒细 胞，神经干细胞、造血细胞、T淋巴细胞、γδT淋巴细胞，人类关节滑膜细胞，树 突状细胞，内皮细胞、及多种肿瘤细胞等。 2、体外细胞扩增 树突状细胞(Dendriticcells，DC)、造血干、祖细胞等细胞在科研及临床上都具 有巨大的应用价值，但是在体内含量较少而且分布广泛，难以获得大量高纯度的 细胞，限制了该领域的发展。体外扩增辅以免疫磁珠技术有望解决这一难题。在 这一过程中， 用免疫磁性微球分离纯化出待扩增的细胞， 用特定的因子组合培 养，许多研究者用这样的方法寻找扩增的最佳细胞因子组合和移植的最佳时机。
单体聚合法：在磁性粒子和单体存在下，加入引发剂、稳定剂等 聚合而成的核/壳式磁性高分子微球。
抗体与磁性载体的结合：磁性微载体表面的高分子层活化后悬于抗体 溶液中，在室温或低温(冰水浴)下摇动一段时间即可将抗体连接到微球表 面上，得到免疫磁性微球。
5、该技术的主要优点
⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应 提供了较大的接触面积 ⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便 快速地获得分离，且对被分离物无损伤 ⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受 到颗粒性杂质等的影响较小 ⑷、作为一种流动性的固相支持物，其洗涤 和反应都进行得更加充分
2、免疫磁珠法分类 ⑴、阳性分离法 磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 ⑵、阴性分离法 磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞 为所需细胞
一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性 分离法的大，阳性分离法用的更多。
3、磁性微珠(magnetic beads):
• 磁性微珠是以金属离子为核心，
外层均匀包裹高分子聚合体的 固相颗粒。 • 磁性微珠上既可标记针对某种 细胞表面抗原的特异性抗体 （直接法）; 也可标记羊抗鼠 IgG抗体(间接法），使分离细 胞的范围大大扩大
3、检验方法
⑴mEC增菌培养 取样品5g接种到50ml 10％新 生霉索mEC增菌液中 摇匀放恒温摇床，37℃振 荡培养6h。 ⑵DICA法 用试剂盒所配专用棉拭子，沾取样 品增菌液后，插入EHE．Coli检测卡一端的加样孔 中，10min内读取结果；只有质控带出现红色条 带表明无E．Coli O157抗原存在．同时也表示实验 正确；出现两条红色条带(测试和质控带)表示可 能有E．Coli O157抗原存在,如均无出现红色条带， 表示实验失败。
二、免疫磁珠分离技术 1、免疫磁珠分离技术原理 利用人工合成的内含铁成分，可被磁铁磁力 所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白 质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠 上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物 质结合后，则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合 物，这种复合物具有较高的磁响应性，在 磁铁磁力的作用下定向移动，使复合物与 其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化 微生物或特异性抗原物质的目的。
• 前言 • 免疫磁珠分离技术介绍 • 免疫磁分离技术的应用
一、前言
• 免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic
beads sep—aration techniques，IMB) 是 将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的 磁响应性相结合的一种新的免疫学技术； 是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫 学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国 内外研究较多的一种新的免疫学技术。 • 目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学 及微生物学检测等方面均取得了较大的进 展，是目前最有推广价值的技术之一。
⑷治理方法： 感染大肠杆菌O157 :H7的临床治理方 法主要属支持性治疗。若患者出现腹泻，补充失 去的水份及电解质十分重要。约50%有肾并发症 的患者在出现急性症状时需要特别治疗或输血。
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2、斑点免疫层析法（DICA)
• 又称免疫胶体金标记法．是利用免疫色层
技术来检测样品中E.Coli O157在E．Coli检测 卡上，将胶体金标记的兔抗O157，抗体和兔 抗羊IgG抗体分别固定在膜上下，做为测试 带和质控带。样品增菌液滴加到加样孔膜 上并展开．若含有E.Coli O157就会结合到检 测带处形成抗原—抗体复合物而星现可见 的红色带，而羊IgG结台到质控带星现红色， 它具有简便、快速定性作用。
3、免疫检测 免疫磁性微球可以简单快速地从血液或者骨髓中富集、清除癌细胞，广泛地应用 于疾病检测、癌症治疗和自身骨髓移植中，还被用于从母体外周血中分离胎儿细胞 进行无创性产前诊断。免疫磁珠分离技术用在微生物检测方面能准确快速地检测出 样品中的Coli O 157，这对于食品卫生和预防疾病的传播具有重要的意义。PCR技术 与免疫磁珠技术结合在分子生物学、医学诊断学等方面有非常重要的作用，这方面