光合细菌不同属类的分离培养

光合细菌的分离培养

光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。

1光合细菌的富集培养的一般方法

①分离源

光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。

②光合细菌富集培养基

用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。

基本培养基I：

KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g

NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7

根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋

性菌种，可加入3%NaCl等等。另外，如分离源中含有较多的硫酸还原菌时（尤其是采自海洋的样品），为了抑制硫酸还原菌的生长，可把基本培养基I中的(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O替换成NH4Cl和MgCl2·6H20。

含单一有机化合物的基本培养基I配置方法如下：

①在容积为20mL的螺口试管中，加入最终浓度为一定量（0.05～0.1%）的有机物。

②加入基本培养基I至1/2试管的量，松松地旋上螺盖。

③ 121℃，灭菌15分钟。

④冷却后加入过滤除菌的10%抗坏血酸钠溶液0.1mL（最终浓度为

0.05%），作为还原剂。

⑤用另行灭菌的基本培养基I注满试管，旋紧螺盖。

用同样方法可配制含各种不同的单一有机化合物的基本培养基I。

基本培养基II：

KH2PO4 1.0g，NH4Cl 1.0g，MgCl2·6H2O 0.2g，CaCl2·2H2O 0.05g，微量元素溶液（见后）1mL，生长因子溶液（见后）1mL，蒸馏水1000mL，根据需要，可在该培养基中加入0.1%硫代硫酸钠、3% NaCl或0.05%乙酸钠等。

含一定浓度的H2S和CO2，并有特定pH的基本培养基II的配制，可参照表5-5进行。例如，要配制NO.1的基本培养基II，其中含0.1%Na2S·9H2O 和0.2%NaHCO3，pH=6.4，具体方法如下：

①在螺口试管（容积为20mL）中加入半管量的基本培养基II，松松地旋上螺盖。

②121℃，灭菌15分钟。

③冷却后依次加入0.3mL1NHCl、0.5mL8%的NaHCO3溶液（过滤除菌）和

1.0mL2%的Na2S·9H2O溶液（高压灭菌）。

④用另行灭菌的基本培养基II注满试管，旋紧螺盖。

用同样方法可配制含所需H2S浓度和pH值的各种基本培养基II。将制得的装有培养基的试管充分振荡后，在冷暗处放置1昼夜，使培养基内完全呈厌氧状态。在这种状态下可保存1个月左右。

表5-5 各种基本培养基II 的配制方法 培养基中的浓度（%）*

最终培养基20mL 中应加入mL 数 培养基编号

NaHCO 3 Na 2S·9H 201NHCl 1NaOH 培养基的pH

1 0.

2 0.1 0.

3 6.4

2 0.2 0.1 0.2

6.7 3 0.2 0.1 0.15 6.9 4 0.2 0.1 0.1

7.1 5 0.2 0.1 0.05 7.3 6 0.2 0.1 7.6

7 0.2 0.1 0.05 7.9 8 0.2 0.05 0.15 6.6 9 0.2 0.05 0.1

6.9 10 0.2 0.05 0.05

7.0 11 0.2 0.05 7.2

12 0.2 0.05

0.05 7.5 13 0.2 0.05

0.15 7.8 14 0.2 0.025 0.05

6.9 15 0.2 0.025

7.1

16 0.2 0.025

0.05 7.3 17 0.2 0.025

0.1 7.5 18 0.2 0.025 0.15 7.9 * 最终培养基量20mL 中，加入8%NaHCO 3溶液0.5mL 时，其最终浓度为0.2%；若分别加入2%Na 2S·9H 2O 溶液1.0、0.5、0.25mL ，它们的最终浓度分别为0.1%、0.05%、0.025%。

微量元素溶液：

EDTA -2Na 2000mg ， FeSO 4·7H 2O 2000mg ， H 3BO 3 100mg ，

CoCl 2·6H 2O 100mg ，