铁标准液吸光度(A) 标准曲线
铁含量的测定.
铁含量的测定一、实验原理铁的吸光光度法所用的显色剂较多，有邻二氮菲（又称邻菲罗啉、邻菲绕啉）及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
其中邻二氮菲分光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，是较普遍采用的一种方法。
在pH值为2—9的溶液中，Fe2+可与邻二氮菲生成极稳定的橙红色络合物[Fe(Phen)3]2+该络合物在波长510mm处有最大吸收，其吸光度与铁含量成正比，可用比色法测定。
二、试剂和器材10%盐酸羟胺溶液（用时配制）；0.12%邻菲罗啉显色剂；乙酸钠溶液（1mol/L）；HCl溶液（2mol/L）；HCl溶液（1:1）。
铁标准储备液；铁标准使用液；比色管（50ml），电子天平，分光光度计。
三、实验步骤1、样品处理精确称取样品3~5g，用干灰化法灰化后，加少量水润湿，加盐酸溶液（1:1）10mL 溶解，移入100mL容量瓶中，用水冲洗坩埚3~4次，并入容量瓶中，用水定容后过滤。
2、标准曲线的绘制吸取10ug/mL的铁标准使用液0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置于6个50mL比色管中，分别加入1mL盐酸羟胺溶液、2mL邻菲罗啉显色剂、5mL乙酸钠溶液，每加入一种试剂都要摇匀。
然后用水稀释至刻度。
10min后，用1cm比色皿，以不加铁标准使用液的试剂空白作参比，在510nm波长处测定各溶液的吸光度。
以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、测定准确吸取上述待测溶液1~5mL于50mL比色管中，按标准曲线的绘制步骤，加入各种试剂，测定吸光度，在标准曲线上查出相应的铁含量（ug）。
4、结果计算x=m0/(m× V 1/ V2) ×100x—样品中铁的含量，ug/100g；m0—从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，ug；V 1—测定用样液的体积，ml；V2—样液定容的总体积，ml；m—样品质量，g四、注意事项1. 应该注意显色时所加试剂的顺序不能改变，否则影响测定结果2. 由于高氯酸对显色剂有干扰，故不能采用硝酸-高氯酸体系消化样品，可采用硝酸-盐酸体系。
铁标准曲线的绘制
铁标准曲线的绘制方法1.方法原理亚铁在pH3~9之间的溶液中，可与邻菲啰啉生成很稳定的橙红色络合物。
高铁离子可以通过还原剂还原成亚铁进行测定。
测量波长在510nm处，用邻菲啰啉分光光度法可测量Fe2+、Fe3+及总铁含量。
2.方法适用范围此方法适用于一般环境水和废水中铁的监测，最低检出浓度为0.03mg/L，测定上限为5.00 mg/L。
对铁离子大于5.00 mg/L的水样，可适当稀释后再按照本方法进行测定。
3.仪器及试剂3.1使用仪器分光光度计，10mm比色皿3.2试剂3.2.1铁标准贮备溶液称取0.7020g硫酸亚铁铵，溶于 (1+1)硫酸50mL中，转移至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液含铁浓度为100μg/mL。
3.2.2 铁标准使用液准确移取标准贮备溶液25.00mL置于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。
此溶液含铁浓度为25.0μg/mL。
3.2.3盐酸(ρ1.19g/mL)，(1+3)盐酸溶液3.2.4盐酸羟胺溶液OH·HCl)=100g/L]：称取10g盐酸羟胺溶于水中，稀盐酸羟胺溶液[ρ(NH2释至100mL。
3.2.5 缓冲溶液：40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL。
3.2.6邻菲啰啉溶液：邻菲啰啉溶液：称取0.5g邻菲啰啉溶于水中，加数滴盐酸帮助溶解，稀释至100mL。
3.2.7饱和乙酸钠溶液4.铁标准曲线的绘制方法4.1 标准曲线的绘制将25.0μg/mL的铁标准溶液稀释5倍，变成5mg/L的铁标准溶液。
再依次移取铁标准液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL置于50mL比色管中，加(1+3) 盐酸1mL，100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL，再加适量蒸馏水，在水浴中加热。
然后冷却至室温，加一小片刚果红试纸，滴加饱和乙酸钠溶液至刚果红试纸刚刚变红，加入5mL缓冲溶液和邻菲啰啉溶液2mL，加水至标线，摇匀。
显色15min后，用10mm 比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度。
邻二氮菲吸光光度法测定铁实验操作方法
实验仪器一：紫外-可见分光光度计的使用邻二氮菲吸光光度法测定铁一、实验目的1. 初步熟悉分光光度计的使用方法。
2. 熟悉测绘吸收光谱的一般方法。
3. 学习标准曲线定量方法。
二、实验原理在建立一个新的吸收光谱法时，必须进行一系列条件试验，包括显色化合物的吸收光谱曲线（简称吸收光谱）的绘制、选择合适的测定波长、显色剂浓度和溶液pH 值的选择及显色化合物影响等。
此外，还要研究显色化合物符合朗伯－比尔定律的浓度范围、干扰离子的影响及其排除的方法等。
本实验利用分光光度计能连续变换波长的性能，测定邻二氮菲－Fe2+的吸收光谱，并选择合适的测定波长。
在pH=3～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲（phen ）生成稳定的橙红色络合物，λmax ＝508nm,ε＝1.1×104L/（mol ·cm ），lg β3=21.3(20℃)()++→+2323phen Fe phen Fe （橙红色） Fe3+与邻二氮菲生成1：3的淡蓝色络合物（lg β3=14.1），故显色前应先用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+，其反应为-++++++↑+→⋅+Cl H O H N Fe HCl OH NH Fe 24222222223在508nm 处测定吸光度值，用标准曲线法可求得水样中Fe2＋的含量。
若用盐酸羟胺等还原剂将水中Fe3＋还原为Fe2＋，则本法可测定水中总铁、Fe2＋和Fe3＋各自的含量。
三、仪器与试剂1．仪器722型分光光度计、酸度计、容量瓶（50mL ）、吸量管（5mL ，10mL ）等。
2．试剂（1）铁标准溶液准确称取0.2152克优级纯铁铵矾（NH4Fe（SO4 )2 ·12H2O）于小烧杯中，加水溶解，加入6mol∕L HCl溶液5mL，定量转移至250mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀。
所得溶液每毫升含铁0.100 mg（即100ug/mL）。
（2）0.15％邻二氮菲（又称邻菲咯琳）水溶液：称取 1.5g邻二氮菲，先用5～10mL 95％乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到1000mL。
实验 分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁
姓名###专业 化学工程与工艺 学号 2904090120 日期 2011 年 11 月 9 日 星期三
一、实验原理
吸光光度法是根据溶液中物质对光选择性的吸收而进行的分析方法。它具有较高的灵敏 度和一定的准确度，特别适宜于微量祖坟的测定。 吸光光度法测定微量铁的显色剂， 目前大多数采用邻二氮菲为显色剂。 在 pH=2~9 的挑件下， 二价铁离子与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物，络合物的 lgK=21.3 ，摩尔吸光系数为 1.1*104。 显色前要用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子，测定是应控制溶液浓度在 pH=5 左右为宜。 分光光度法测定物质含量是应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色 反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物质的消除方 法等。 测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液。 本实验帮助学生研究邻二氮菲测铁摘入射光波长、 络合物肉 on 工业的稳定性、 显色剂浓度、 溶液 pH 值的影响等几个方面确定实验的最佳条件。
条件实验 显色剂用量的选择
取 7 个 50mL 的容量瓶， 各加入 1mL 铁标准溶液， 1mL 盐酸羟胺， 摇匀。 在分别加入 0.1、 0.3、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0mL 邻二氮菲和 5mLNaAc 溶液，以水实施至刻度，摇匀，放置 10min。用 1cm 比色皿，以蒸馏水为参比溶液，在选择波长系测定各溶液的吸光度。以邻二 氮菲溶液的体积 V 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，绘制 A 与 V 的关系的显色剂用量影响曲 线。得出测定铁是显色剂的最适宜用量。
没有干扰离子。 2、本实验量取各种试剂时应分别采用何种量器较为合适？为什么？ 答：应采用移液管或是滴定管，因为要准确量取物质的体积。 3、对所做的条件实验进行讨论并选择适宜的测量条件。 答：显色剂为 2mL 的邻二氮菲溶液，显色时间 10min 为宜。
06-吸光光度法测铁含量
实验关键
1．两人一组，数据记录写上：合作者： 名字
1．铁标液与待测试液体积的准确加入及准确定容；
2．光度计的正确操作： 预热 0.5h → 机械调0（T＝0） → 参比调0，T＝100%(A＝0) → 装液（比色皿拿法）→ 选择λ → 测量（波长变，参比重新 调0）→ 归位 3．标准曲线的合理正确绘制与处理。
全部吸收 全部透射
T = 0.0 % T = 100.0 %
o lg 1 Kbc I T t
A kbc
K 比例常数
b ～cm
c～ g · L –1或mol · L –1 入射光波长 温度
物质的性质
c：mol · L
–1
K
A cb
摩尔吸光系数 L· mol –1 · cm -1 吸光系数a L· g –1 · cm -1
选用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,在440～560 nm之间扫描， 选择最佳测量波长(λmax)。
加入试剂 \ 编号
1（参比）
4
Fe3+标液(10µg/mL)
NH2OH· HCl Phen NaAc /mL /mL /mL
0.00
1.0 2.0 5.0
6.00
1.0 2.0 5.0
稀释至 /mL
（max=525nm，对绿光吸收最强） 不同物质吸收光谱的形状以及max 不同 525 nm
溶液颜色—紫红色
——定性分析的基础
同一物质，浓度不同时，吸收光谱的
形状相同，Amax 不同
——定量分析的基础
朗伯-比耳定律
入射光 I0 透射光 It
透光率定义：
It T I0
A lg I
1.0
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一. 实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
二．实验原理在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
三．仪器与试剂1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
实验二十 水中微量铁的测定—邻菲啰啉分光光度法
实验二十水中微量铁的测定—邻菲啰啉分光光度法一、实验目的1.学习如何选择吸光光度分析的实验条件；2.掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法；3.掌握分光光度计和吸量管的使用方法。
二、实验原理铁的吸光光度法所用的显色剂较多，有邻二氮菲（又称邻菲啰啉，菲绕林）及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐、5－Br－PADAP等。
其中邻二氮菲分光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，因而是目前普遍采用的一种方法。
在pH为2～9的溶液中，Fe2＋与邻二氮菲（Phen）生成稳定的橘红色络合物Fe（Phen）32＋：其中lgβ3＝21.3，摩尔吸光系数ε508＝1.1×104 L·mol-1·cm-1。
当铁为＋3价时，可用盐酸羟胺还原：Cu2＋、Co2＋、Ni2＋、Cd2＋、Hg2＋、Mn2＋、Zn2+等离子也能与Phen 生成稳定络合物，在少量情况下，不影响Fe2＋的测定，量大时可用EDTA隐蔽或预先分离。
吸光光度法的实验条件，如测量波长，溶液酸度、显色剂用量、显色时间、温度、溶剂以及共存离子干扰及其消除等，都是通过实验来确定的。
本实验在测定试样中铁含量之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的方法。
条件试验的简单方法是：变动某实验条件，固定其余条件，测得一系列吸光度值，绘制吸光度－某实验条件的曲线，根据曲线确定某实验条件的适宜值或适宜范围。
三、仪器与药品1.分光光度计，pH计，50mL容量瓶8个（或比色管8支）2.100 μg·mL-1铁标准溶液：准确称取0.8634 g 分析纯 NH4Fe（SO4）2·12H2O于200mL烧杯中，加入20mL 6mol·L-1 HCl溶液和少量水，溶解后转移至1L容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。
3.邻二氮菲 1.5 g·L-1。
（新配制）；4.盐酸羟胺100 g·L-1（用时配制）。
5.NaAc 1mol·L-1。
07实验7 邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
722S型或721型分光光度计、容量瓶(100mL,50mL)、吸量管 １、铁标准溶液：含铁0.1mg/ml。 准确称取0.8634g的NH4Fe(SO4)2·12H2O，置于烧杯中，加入 20ml1:1HCl和少量水,溶解后,定量地转移至１升容量瓶中，以水稀释之 刻度，摇匀。 ２、邻二氮菲：0.15％(10-3mol/L)新配制的水溶液。 ３、盐酸羟胺： 10％水溶液（临用时配制） ４、醋酸钠溶液 1mol/L
实验七 邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
一、实验目的
1.学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2.掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。 3.学会722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。 4.学会数据处理的基本方法。 5.掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理
根据朗伯—比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时， 在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要 绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光 度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还 可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结 果。
选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液(为什么?)，取4号容量瓶 试液，选择440～560nm波长，每隔10nm测一次吸光度，其中500～520nm 之间，每隔5nm测定一次吸光度。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长 λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择测 定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用的显色剂有邻二氮菲 (又称邻菲罗啉)及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。而目前一般采 用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消 除等优点。
分光光度法测定水中微量铁
2 实验原理
根据朗伯-比耳定律：A=ε bc，当入射光波长λ 及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质 的浓度c成正比。只要绘出A-c标准曲线，测出试液的吸光度， 就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样中铁的含量。
2 +
N
N
3
N N
2 + +F e
N
F e
N N
N
在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定 的桔红色配合物Fe(phen)32+。此配合物的lgK稳=21.3，摩 尔吸光系数ε 510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与 邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在 加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为 Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。酸度太高， 反应进行较慢；酸度太低则水解，影响显色。
5 思考与讨论
1.本实验中哪些试剂应准确加入，哪些不必严格准确 加入? 加入溶液的顺序能否颠倒？为什么? 2.加入乙酸钠的目的是什么?
谢谢！
序号
0 1 2 3 4 5
铁标准液 （mL） 0 2 4 6 8 10
盐酸羟胺 （mL） 1 1 1 1 1 1
邻二氮菲 （mL） 2 2 2 2 2 2
乙酸钠 （mL） 5 5 5 5 5 5
标准曲线 作图区
标准曲线测定区 样品池 控制区 未知浓度试样测定区
标准曲线 参数区
分光光度法测铁实验报告
分光光度法测铁实验报告一、实验目的1、掌握分光光度法测定铁的基本原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉标准曲线的绘制和样品浓度的计算。
二、实验原理分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。
在分光光度法中，通常选择某一特定波长的单色光，让其通过含有被测物质的溶液，测量溶液对该波长光的吸光度。
吸光度与溶液中被测物质的浓度之间存在一定的定量关系，符合朗伯比尔定律：A ＝εbc其中，A 为吸光度，ε 为摩尔吸光系数，b 为液层厚度（通常为比色皿的光程长度），c 为溶液中物质的浓度。
本实验中，利用邻二氮菲（1,10-菲啰啉）作为显色剂与 Fe²⁺形成稳定的橙红色配合物。
在 pH ＝ 2～9 的条件下，该配合物的吸光度与Fe²⁺的浓度成正比。
通过测定一系列已知浓度的 Fe²⁺标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，然后测定未知样品溶液的吸光度，即可从标准曲线上查出样品中 Fe²⁺的浓度。
三、实验仪器与试剂1、仪器722 型分光光度计容量瓶（50 mL、100 mL）移液管（1 mL、5 mL、10 mL）刻度吸管（5 mL、10 mL）烧杯（50 mL、100 mL）2、试剂铁标准储备液（100 μg/mL）：准确称取 07020 g 分析纯硫酸亚铁铵(NH₄)₂Fe(SO₄)₂·6H₂O于 100 mL 烧杯中，加入 20 mL 3 mol/L 硫酸溶液溶解，转移至 1000 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
铁标准使用液（10 μg/mL）：用移液管准确吸取 1000 mL 铁标准储备液于 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲溶液（015%）：称取 015 g 邻二氮菲，加入少量无水乙醇溶解，再用水稀释至 100 mL，摇匀，置于棕色瓶中备用。
盐酸羟胺溶液（10%）：称取 10 g 盐酸羟胺，用水溶解并稀释至100 mL，摇匀。
标准曲线的绘制吸光度标准曲线绘制
标准曲线的绘制-吸光度标准曲线绘制生物化学实验报告ALT与其吸光度的标准曲线绘制采集样本：广西医科大学口腔医学2016级13班四个组中7组生物化学实验数据采集时间：2016年11月15日2016~2016上学期第十一周周一下午采集人：何洁梅一、几组ALT与其吸光度的标准曲线数据记录ALT活力单位A520吴修团1组A520黎丁菱1组A520杨璇璇1组A520谢晓兰2组A520莫雪玲2组A520李文良3组A520文全海4组00000000二、各采集样本汇总图样本1测定得待测血清ALT活力单位为50U/L样本2测定得待测血清ALT活力单位为97U/L样本3测定得待测血清ALT活力单位为135U/L样本4测定得待测血清ALT活力单位为70U/L样本5测定得待测血清ALT活力单位为148U/L样本6测定得待测血清ALT活力单位为45U/L样本7测定得待测血清ALT活力单位为98U/L四、采集数据处理结果分析1．数据总结样本编号测定的ALT活力单位是否大于40U/L正常/非正常150是非正常297是非正常3135是非正常470是非正常5148是非正常645是非正常798是非正常平均值92均为“是”均为“非正常”2.针对数据处理结果的分析采集的7组数据经标准曲线测量后，得到的ALT活力单位值均大于40，即均为非正常值，综上，认为待测血清中ALT 含量超于正常值。
3.针对源数据的分析采集的7组数据中样本4、5、6的数据经画图后可基本分布呈过原点的线性关系，符合理论规律，但其他的数据误差较大。
另外，比较符合理想标准曲线的4、5、6样本的三个ALT活力单位值也存在较大的出入。
4.经分析，总结可能的误差来源如下配置丙酮酸标准溶液、底物溶液、磷酸缓冲液的混合溶液时，丙酮酸标准溶液的剂量都很小，容易造成误差。
加入2,4—二硝基苯肼的时间可能有误差，保温的时间，以及加入NaOH 以停止反应的时间都有可能有偏差，容易造成较大。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一、实验目的 1、学会吸收曲线及标准
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会722型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合，此配合物的lgK=21.3，摩尔吸光ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，稳=14.1。
所以在加入显色剂之而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc 缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
但Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+、Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀干扰测定。
实验八 分光光度法条件实验及测定微量铁
实验八分光光度法条件实验及测定微量铁（5学时）*一、目的1、学习如何选择吸咣光度分析的实验条件。
2、掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、原理1、光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。
显色反应的条件有显色剂的用量，介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。
2、二氮杂菲-亚铁络合物：邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。
在pH=2～9的条件下Fe2+离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物，此络合物的lgK=21.3, 摩尔吸光系数ε510=1.1×104稳在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3＋离子还原为Fe2＋离子，其反应式如下：2 Fe3＋+2NH2OH·HCl→2 Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-测定时，控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。
酸度过高，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+离子水解，影响显色。
Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。
因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。
三、试剂100µg/mL的铁标准溶液：准确称取0.864g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O ，置于一烧杯中，以30mL 2mol/L HCl 溶液溶解后移入1000 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
10 µg/mL的铁标准液：由100µg/mL的铁标准溶液准确移取稀释10倍而成。
盐酸羟胺固体及10%溶液（因其不稳定，需临时用时配），0.1%邻二氮杂菲（新配制），1mol/LNaAc溶液。
四、步骤1、条件实验（1）吸收曲线的绘制：准确移取10 µg/mL 铁标准溶液5mL于50mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺1mL，摇匀，稍冷，加入1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲3mL，以水稀释至刻度，在分光光度计上，用1cm 比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长从570 nm 开始到430nm为止，每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁【最新】
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、目的要求1．学习723型分光光度计的使用方法。
2．学习测绘吸收曲线的方法。
3．掌握利用标准曲线进行微量成分测定的基本方法和有关计算。
二、实验原理微量铁的测定有邻二氮菲法、硫代甘醇酸法、磺基水杨酸法、硫氰酸盐法等。
由于邻二氮菲法的选择性高、重现性好，因此在我国的国家标准（GB）中，许多冶金产品和化工产品中铁含量的测定都采用邻二氮菲法。
邻二氮菲又称邻菲罗啉（简写Phen），在pH值为2—9的溶液中，Fe2+离子与邻二氮菲发生下列显色反应：Fe2+ + 3Phen = [Fe（Phen）3]2+生成的橙红色配合物非常稳定，lgK稳=21.3（20℃），其最大吸收波长为510nm，摩尔吸光系数ε510=1.1×104 L•cm-1•mol-1。
显色反应的适宜pH值范围很宽，且其色泽与pH值无关，但为了避免Fe2+离子水解和其它离子的影响，通常在pH值为5的HAc-NaAc缓冲介质中测定。
邻二氮菲与Fe3+离子也能生成淡篮色配合物，但其稳定性较低，因此在使用邻二氮菲法测铁时，显色前应用还原剂将Fe3+离子全部还原为Fe2+离子。
本实验采用盐酸羟胺为还原剂：4Fe3+ +2NH2OH = 4Fe2+ + 4H++ N2O+ H2O邻二氮菲与Fe2+离子反应的选择性很高，相当于含铁量5倍的Co2+、Cu2+离子，20倍量的Cr3+、Mn2+、V（Ⅴ）、PO43-离子，40倍量的Al3+、Ca2+、Mg2+、Sn2+、Zn2+、SiO32-离子都不干扰测定。
利用分光光度法进行定量测定时，通常选择吸光物质（即经显色反应后产生的新物质）的最大吸收波长作为入射光波长，这样测得的摩尔吸光系数ε值最大，既测定的灵敏度最高。
为了找出吸光物质的最大吸收波长需绘制吸收曲线。
测定吸光物质在不同波长下的吸光度A值，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，描点绘图即得吸收曲线，曲线最高点所对应的波长为该吸光物质的最大吸收波长。
铁锰铜锌铬铝汞砷标准曲线
目录1 铁2 锰3 铜4 锌5 六价铬6 铝7 砷8 汞使用范围：水质分析检测项目：铁方法依据：GB/T5750.6-2006 二氮杂菲分光光度法标准溶液配置：铁标准溶液（10.00ug/ml）:用1000ug/ml GBW08616铁标准溶液（国家标准物质研究中心）逐级稀释而成。
仪器条件：723分光光度计（022）波长：510nm 比色皿：1cm标准曲线：m（Fe2+，ug）0.0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 吸光度A：0.011 0.022 0.031 0.051 0.091 0.132 0.171 0.212 △A 0 0.011 0.020 0.040 0.080 0.121 0.160 0.201回归方程与相关系数：Y=bX+a b=4.021×10-3 a=9.030×10-5r=0.9999使用范围：水质分析检测项目：锰方法依据：GB/T5750.6-2006 过硫酸铵分光光度法标准溶液配置：锰标准溶液（10.00ug/ml）:用1000ug/ml GBW（E）080157锰标准溶液（国家标准物质研究中心，不确定度：0.5%）逐级稀释而成。
仪器条件：723分光光度计（022）波长：530nm 比色皿：1cm标准曲线：m（Mn2+，0.0 2.5 5.0 10.0 30.0 50.0 100.0 150.0 200.0ug）吸光度A：0.005 0.006 0.011 0.014 0.030 0.046 0.087 0.129 0.170 △A 0 0.001 0.006 0.009 0.025 0.041 0.082 0.124 0.165 回归方程与相关系数：Y=bX+a b=8.226×10-4a=9.030×10-4r=0.9999使用范围：水质分析检测项目：铜方法依据：GB/T5750.6-2006 二乙基二硫代氨基甲酸钠分光光度法标准溶液配置：铜标准溶液（1.000ug/ml）:用1000ug/mlGBW08615铜标准溶液（国家标准物质研究中心）逐级稀释而成。
测量吸光系数实验报告
一、实验目的1. 了解吸光系数的概念和计算方法。
2. 掌握吸光光度法的基本原理和操作步骤。
3. 通过实验，验证朗伯-比尔定律，计算吸光系数。
二、实验原理吸光系数是物质在特定波长下，单位浓度和单位厚度溶液的吸光度。
根据朗伯-比尔定律，吸光度与溶液浓度和光程成正比，即A = εlc，其中A为吸光度，ε为吸光系数，l为光程，c为溶液浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液器、容量瓶、比色皿、电子天平等。
2. 试剂：铁标准溶液、稀硝酸、水等。
四、实验步骤1. 标准溶液配制：准确量取一定量的铁标准溶液，用稀硝酸稀释至所需浓度，分别配制一系列不同浓度的铁标准溶液。
2. 吸光度测定：将铁标准溶液依次加入比色皿中，用紫外-可见分光光度计在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据朗伯-比尔定律，以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
从曲线中求出吸光系数。
五、实验数据1. 铁标准溶液浓度（mol/L）：0.00、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.322. 对应吸光度：0.000、0.012、0.024、0.048、0.096、0.192、0.384六、数据处理1. 标准曲线绘制：以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 吸光系数计算：从标准曲线中找到浓度与吸光度相对应的点，计算吸光系数。
七、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，曲线线性良好。
2. 吸光系数计算：根据标准曲线，计算吸光系数为0.012。
八、实验结论通过本次实验，验证了朗伯-比尔定律，成功计算了吸光系数。
实验结果表明，吸光系数与溶液浓度和光程成正比，符合朗伯-比尔定律。
九、实验注意事项1. 实验过程中，注意保护仪器，避免损坏。
2. 移液操作要准确，避免误差。
3. 实验数据要真实可靠，确保实验结果的准确性。
十、实验拓展1. 探究不同波长下吸光系数的变化规律。
2. 研究不同溶剂对吸光系数的影响。