酶标分析仪校准的标准操作程序

SOP_03-4 酶标分析仪校准的标准操作程序

一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠

的结果报告。

二、适用范围：免疫检验项目的校准。

三、操作人员：检验科授权工作人员

四、操作步骤：一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一

般必需从下面几方面着手：

(1)选好测定方法；(2)质量过硬的试剂盒；(3)质优的测试仪器；(4)进行正确的校准；

(5)规范化操作；(6)室内质量控制；(7)室间质评活动；(8)一支素质高的队伍。

1 校准：

1.1 酶标分析仪与生化分析仪一样，不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标

本结果是随着标准限的设置不同而变化的。校准仪器是室内质控的重要部分。

1.2 对于一个临床检测项目，如果其所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一

个不同，都可能得到不同的测定结果。因此，想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该建立一个标准测定系统。鉴于目前的ELISA方法许多测定项目尚无统一的国家标准，在全自动酶标分析仪上应使用配套的试剂和标准品尤其重要，不能乱用。

2 检验方法、仪器和试剂盒的选择：

实验室检验应使用最可靠的测定方法，检测仪器须经严格选择和科学的评价。

临床检测中使用的检测试剂（国产和进口）均须是经过国家药品监督管理局批准和中国药品生物制品检定所批批检合格的诊断试剂盒，实验室使用试剂时，应优先选择经过临床评估质量优良的试剂盒。

3 校准方法：实验室中的设备必须定期进行维修与校准，并制定设备维修与校准的制度。3.1 ELISA洗板机与酶标读数仪是最常用和最重要的仪器，应该设立预防性的

维护制度，以保证仪器的正常工作。方法如下：

每天：每次操作要按要求设立对照。核对酶标仪滤光片波长、检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。

每周：清洗仪器表面，保护光学零件，不沾灰尘。

每月：洗涤时检查各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。这是保证各孔洗涤均衡一致的前提。

每年：检查、清洗滤光片，如果滤光片出现破裂或霉点则要更换，根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的使用波长吸光度的精密度进行校验，测

定20次．计算精密度。精密度应该控制在厂家说明书中所规定的范围(厂方

代表校验)。校验结果要有记录，保留测定原始结果。

根据实际使用情况更换主要设备（如洗板机、全自动免疫分析系统）内的所有液体装置

和管子(厂方代表维修)。

3.2 光路检测：同一酶标板正/反方向重复测量一次，查同孔吸光值是否相同。3.3 滤光片：采

用染料法校验。

3.4 酶标仪的稳定性(漂移)：选用492nm波长，在吸光度0.0A处，测定标称值为1.0A的光谱中

性滤光片(测定操作按仪器说明进行)，记录仪器示值或均值，10分钟后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过±0.005A。

3.5 吸光度测定的准确度：选用405，492和620nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为0.5

和1.0A的光谱中性玻璃滤光片，使用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3 次，按下式计算准确度：△A=1／3(A1+A2+A3)-As(As为标准值)；

3.6 吸光度测定的重复性：波长选择同(3.5)，在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加入浓

度为200μg／ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次，记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值，按下式计算重复性：

δA=max│Ai –1/5(A1+A2+A3+A4+A5)│

×100％

1/5(A1+A2+A3+A4+A5)

3.7 酶标仪的线性：选用540nm波长，将标称值 O.5，1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样

本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次线性误性

aA = A1+A2-A1,2

×100％

A1+A2

式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值；A2为第二片中性滤光片吸光度均值；

A1,2：为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。

3.8 测定速度的检定：选用492nm波长，放入96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器的打印出

全部数据的时间。

附：200μg／ml重铬酸钾溶液的配制；将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中，在105±5℃下烘2小时后，置于干燥器内冷却30分钟，在分析天平上准确称取0.2829g，置于1OOml烧杯中，用0.05mol／L稀硫酸溶解后，移人500ml容量瓶中，以少量0.05mol／L稀硫酸洗烧杯3次，洗液并人容量瓶中，用0.05mol／L稀硫酸稀释至刻度线，摇匀。

参考资料：

1 王毓三主编．医院检验科建设管理规范［Ｍ］．南京.东南大学出版社，2003：1~168

2 卫生部临床检验中心．临床实验室质量管理［Ｍ］．北京：2000：1~231