实验3-环境微生物的检测
微生物检测实验
微生物检测实验微生物是指肉眼无法看见的微小生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们存在于我们生活的方方面面，对人类和环境都产生着重要的影响。
为了更好地了解微生物的特性和其对我们健康和生活环境的影响，进行微生物检测实验是非常必要的。
一、实验目的和方法我们可以选择不同的实验方法来进行微生物的检测。
例如，“凝胶扩散法”是一种常见的方法，它通过在琼脂培养基上滴洒待测微生物，观察其周围是否会出现菌落生长的明暗带，从而可以初步判断出微生物的存在。
如果有需要更精确的定量检测，我们还可以使用“菌落计数法”或者“分子生物学方法”来进行研究。
这些方法都具有一定的可行性和灵敏度，能够帮助我们更好地认识微生物的分布和特性。
二、实验的应用范围微生物检测实验在许多领域都有广泛的应用。
首先，在食品安全领域，微生物检测可以帮助我们检测食品中是否有有害微生物的污染，以保障人们的健康。
其次，在环境保护领域，我们可以通过微生物检测来评估某些有机物质对环境的影响，掌握生态系统的健康状况。
此外，微生物检测还常用于医学研究、制药工业等领域，用于疾病诊断、药物研发、医疗设备的清洁消毒等。
三、实验的挑战和解决方法当然，进行微生物检测实验也会面临一些挑战。
首先是微生物的数量很小，很难直接通过肉眼观察进行定性检测。
其次，微生物的种类繁多，不同类型的微生物需要使用不同的检测方法。
此外，实验过程中的污染也是一个重要的问题，可能会导致实验结果的偏离。
为了克服这些困难，科学家们在实验方法和设备的改进上进行了很多研究。
例如，引入自动化技术可以提高实验的精确性和效率；开发新的培养基和药剂可以增强微生物的检出能力和灵敏度。
四、实验中的意义和启示微生物检测实验的意义不仅在于提供了科学依据和数据支持，还有助于我们更好地了解微生物的生态学特性和其对我们生活环境的影响。
通过对微生物的检测，我们可以及时发现和解决潜在的食品安全问题，保障公众的健康；可以帮助我们评估和改善环境质量，保护生态系统的平衡；可以推动医学和制药领域的科学研究和技术发展。
微生物学 实验三 平板菌落计数法
微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法实验三平板菌落计数学习菌种的平板菌落计数的基本原理和方法。
平板菌落计数法就是将试样样品经适度吸收之后，其中的微生物充份集中成单个细胞，挑一定量的吸收样液注射至平板上，经过培育，由每个单细胞生长产卵而构成肉眼可知的菌落，即为一个单菌落应当代表原样品中的一个单细胞。
统计数据菌落数，根据其吸收倍数和采样注射量即可折算出来样品中的含菌数。
但是，由于试样样品往往难于全然集中成单个细胞，所以，孵出的一个单菌落也可能将源自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往相对较低，为了确切地阐释平板菌落计数的结果，现在已女性主义采用菌落形成单位（colony-formingunits,cfu）而不以绝对菌落数去则表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。
1．菌种：大肠杆菌菌悬液。
2．培养基：lb培养基。
3．仪器或其他用具：1ml无菌液体，无菌平皿，器皿4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10、10、10（稀释度）各3套，另-1-2-3-4-5挑6支盛存有4.5ml无菌水的试管，依次标是10、10、10、10、10、用1ml无菌吸管吸取1ml已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放-10.5ml至10的试管中，此即为10倍吸收。
将多余的菌液送回原菌液中。
-6-4-5-6将10试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支1ml吸管插入10试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
3-微生物检测一般流程
微 生 物 检 验 一 般 程 序 图
报告
一、检验前准备
Preparation for Microorganism Examination
1. 准备好所需的各种仪器
2. 准备好所需的各种玻璃器皿
3. 准备好所需的各种试剂、药品、培养基
4. 无菌室灭菌
5. 检验人员的工作衣、帽、鞋、口罩等灭菌后备用
抽样次数：
3 样品的种类
Sample Type 样品可分为大样、中样和小样。 大样：一整批样品 中样：从样品各部分取得的混合样 小样（检样）:分析用的样品。 抽样量：指从全批产品（或全过程） 的单位包装。 抽取
检验量：是指检验用量，是抽样量各包装的 混合样品的一部分。 检验量与抽样量是两种不同的范畴的量，抽样 量大于检验量。
A 固体样品
机械分散法（适用于固体及油性样品）
电动匀质法 研磨法 整粒振荡法
B
冷冻样品
0-4℃ 18h;45 ℃ 15min
C 粉状或颗粒状
搅匀后称取，制成1：10稀释液
（3）油脂性样品
乳化法适用于油脂性样品，在供 试品中加入适量的乳化剂及稀释剂， 在保温情况下混匀（机械分散法）， 使之成为均匀分散的乳浊液。
产品受外来微生物的污染，污染可有可无， 1 微生物限度检验的特殊性 可多可少；种类多样。依条件而定，非产
Particularity of the Microbial Limit Testing 品本身所固有。因此微生物限度检验对象 是不确定的。污染是意外事件。污染批号 （ 1）微生物限度检验对象的特性 中的不合格品是一个随机变量。 一个批号内的产品有的被污染，有的不被 污染，分布不均匀；在被污染的部分中有 的数量极多，有的较少，种类复杂或单一。 不确定性 这种不均匀性源于污染源的复杂性。 以活的微生物作为检验对象也是其独特 特性，不同菌种的生长率和死亡率不尽 分布的不均匀性 相同，检测结果只代表取样时的状态。
空气环境微生物检测报告
空气环境微生物检测报告引言空气中的微生物是指一种微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们存在于我们周围的空气中，并且常常对人类的健康产生重要的影响。
因此，对空气环境中的微生物进行检测和监测是非常重要的。
本报告旨在通过空气环境微生物的检测结果，为建筑物、办公室和其他公共场所的环境卫生提供科学依据和参考。
本报告将介绍所采用的检测方法、检测结果和相应的解读。
检测方法在本次空气环境微生物检测中，我们采用了常用的空气采样和实验室检测方法。
具体步骤如下：1.空气采样：采用空气采样仪器，在被检测的场所中进行空气采样。
采样仪器能够捕集空气中的微生物颗粒，并将其固定在采样器中。
2.样品处理：将采集到的空气样品送往实验室进行处理。
处理过程包括样品的过滤、培养基的准备等步骤。
3.培养和鉴定：将处理后的空气样品接种在适当的培养基上，并在适当的温度和湿度条件下培养。
培养一段时间后，观察培养基上是否有微生物生长。
4.结果记录：对培养基上生长的微生物进行鉴定和计数，并记录相关信息。
检测结果菌落总数菌落总数是指在特定培养条件下，培养基上形成的微生物菌落的总数。
菌落总数是评估空气环境微生物污染程度的重要指标。
根据本次检测结果，空气中的菌落总数为XXX CFU/m³。
根据卫生标准，空气中的菌落总数应该控制在合理的范围内，超过规定的限值可能对人体健康产生潜在风险。
病原微生物病原微生物是指能够引起疾病的微生物。
在空气环境中存在的病原微生物有很多种类，包括细菌、真菌和病毒等。
根据本次检测结果，我们未检测到空气中存在的病原微生物。
这说明被检测场所的空气环境相对较为安全，对人体的健康风险较低。
常见微生物类型除了菌落总数和病原微生物外，还存在许多其他常见的微生物类型。
这些微生物在空气环境中广泛存在，并且对人体的健康也有一定的影响。
根据本次检测结果，我们检测到了以下常见的微生物类型：1.细菌：XXX (例：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等)2.真菌：XXX (例：霉菌、酵母菌等)3.病毒：XXX (例：流感病毒、冠状病毒等)结论与建议根据本次空气环境微生物检测结果，空气中的菌落总数控制在合理的范围内，未检测到病原微生物，并且检测到了常见的微生物类型。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物检验是一种重要的实验室技术，用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具，并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质，比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息，包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后，需要尽快进行处理，避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行，使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释，以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行，以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存，确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前，需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上，避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行，避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养，促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况，记录生长的数量和形态，用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时，需要进行鉴定和分析，确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准，进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读，判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
实验三细菌的分布与消毒灭菌
实验三细菌的分布与消毒灭菌【目的】①了解细菌广泛分布于自然界及正常人体，树立“有菌观念”，从而认识无菌操作对于微生物学及医学实践的重要性。
②了解正常人体中寄居着种类繁多的细菌，正常情况下不引起人类疾病，称为正常菌群。
③熟悉外界因素对细菌的影响，学习常用的消毒灭菌方法。
④了解不同细菌对外界因素具有不同的抵抗力。
一、细菌的分布检查（一）空气中的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【方法】①取普通琼脂平板一只开启皿盖，培养基面向上放于实验桌上，暴露5～30min后盖好。
②置37℃培养18～24小时后观察结果。
【结果】（填表10-1）平板培养基表面或多或少有菌落生长。
（二）地面水中的细菌检查【材料】地面水(河水、井水或池水)、高层琼脂培养基、1ml无菌吸管、灭菌培养皿。
【方法】①以无菌吸管吸取1ml地面水，加入灭菌平皿中。
②将已溶化且冷至45℃左右的高层琼脂倾注人上述平皿中，加盖后轻轻摇动，使水与琼脂充分混匀，静凝。
③37℃ 24小时后取出观察，计数菌落。
【结果】（填表10-1）（三）衣服、票证、头发、手指皮肤上的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【方法】取普通平板一个，用蜡笔在平板背面玻璃上划成四等分，并贴上标签(图10-1)。
然后以无菌操作法，用衣袖角、票证、头发及手指或指甲内污物，在平板培养基表面相应部位轻轻涂抹，置37℃培养24【结果】填表培养基表面涂抹处有菌落生长。
衣服、票证、头发、手指皮肤上的细菌检查（四）正常人体咽喉部的细菌检查【材料】血液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接种环、酒精灯。
【方法】取灭菌棉拭一支，在被检查者咽喉部轻轻涂擦后，再涂于血液琼脂培养基—侧，然后改用灭菌接种环作分离划线接种。
盖上皿盖，37℃孵育24小时（或者采用咳喋法）。
【结果】（填表10-1）琼脂平板表面有菌落生长。
其中占优势的是一种细小菌落，其周围有草绿色的不完全溶血环。
此为咽喉部的正常菌群—甲型链球菌。
（五）实验结果观察(填表)二、消毒灭菌试验（一）煮沸与高压灭菌法【原理】高温对细菌有明显的致死作用，主要机制是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌细胞膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。
实验3-螺旋藻
实验三、环境生物螺旋藻、颤藻的形态结构、生物学特性及其应用一、实验目的：通过显微镜玻片观察与绘图，结合课堂讲解和资料查询，对螺旋藻等藻类的形态结构特征、分类、生物学习性、在环境科学中的应用等进行深入的了解。
二、指导老师：王旭、邝春兰三、实验时间：20周四、实验地点：环境生物学实验室五、实验人员：六、实验内容（一）概述螺旋藻是生长在热带地区碱水湖中的一种原始微生物，属于蓝藻门,颤藻科。
它在这个星球上已生存了35亿多年，是地球是最早出现的自养光合生物。
1940年，法国药物学家克莱（Creach）博士到非洲深险,来到中非乍得湖畔，发现湖面上漂着一种绿色植物，当地土著佳尼姆人用最传统的方式从湖面捞取它们，直接拌以辣椒及香料作酱食用，或置于沙滩上晒成干品食用。
这种绿色漂浮物就是一种螺旋形状的藻类--螺旋藻（Spirulina）。
在地理位置上，螺旋藻主要分布在南北纬35度的亚洲、非洲和南北美洲的碱性水体中，螺旋藻的品种很多，其中得到广泛重视和研究的只有两种：钝顶螺旋藻（S.Platensis）、极大螺旋藻（S.Maxim）。
这两个种分别原产于中非的乍得湖和中美洲的墨西哥，并已被国内外应用于工厂化生产。
从1962年起,法国国立研究院的G·克雷曼博士进一步对螺旋藻的成分、生态、培养方法、食用安全性、保健功效进行了十余年的专题研究，并在1973年于美国麻省理工学院召开的第二届国际微生物蛋白质会议及1974年联合国粮农组织会议将他的研究结果公开发表,从而受到全世界的关注。
螺旋藻被现代营养学家称之为“人类营养的微型宝库”，被联合国粮食与农业组织（FAO）誉之为“二十一世纪最理想和最完美的食品”螺旋藻比其他任何食物含有更丰富、更均衡的优质蛋白质及多种维生素、矿物质、叶绿素、r-亚麻酸等不饱和脂肪酸和β-胡萝卜素等。
它所含有的人体不能合成的8种必需氨基酸，与联合国“FAO”标准几乎一致。
1克螺旋藻粉所含的营养相当于1000克各种蔬菜营养的总和。
中护微生物实验3细菌分布检查与消毒灭菌实验
一、细菌的分布检查
1.空气中细菌的检查 材料:琼脂平板 方法:将制作好的琼脂平板敞开放置在空气中 5min -10min,后盖上皿盖，然后分别做好标 记，37度温箱内培养18-24小时后观察结果。 意义：检测环境达标与否
2.咽喉部细菌的检查
(1)咽喉拭子法：
材料：血平皿、咽拭子 方法：
1. 用干净棉签咽部取材； 2. 将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上； 3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。
第5格作为空白对照。 盖上皿盖，置37度温箱培养24小时观察结果。
皮肤消毒实验
材料：琼脂平板、2.5%碘酒、75%酒精棉球 Leabharlann 法：消消毒
毒
前
后
37℃温箱内培养24小时 意义：比较皮肤消毒前后细菌分布情况
2.热力灭菌实验（示教）
取4支肉汤培养基标以1、2、3、4号 1、2号接种大肠埃希菌（无芽孢菌） 3号接种枯草芽胞杆菌（芽胞菌） 4号管不接种细菌作对照。 将其中1、3号同时放入100度水浴内煮沸5分钟。 然后将4支管同时置37度温箱培养24小时观察结果。
在涂布细菌的培养基表面，各纸片距离大致相等。纸片放置后不要再挪 动，因挪动将影响实验结果。 4.把平板倒放在 37℃温箱内培养 18～24 小时后取出观察结果，测定 抑菌环的大小。
三、药物敏感实验（纸片法）
• 抑菌环的形成：琼脂平板内含有大量的水分，纸片上 的药物具有水溶性。因此可逐渐扩散到周围的培养基 中，其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低，从而 形成了以纸片为中心，药物浓度逐渐减小的浓度剃度。 当药物浓度降低到某一程度时，细菌足以抵抗其抑菌 杀菌作用；在此范围以外，细菌将正常生长，而在此 范围以内则无细菌生长。以此界线为边缘所形成的抑 菌杀菌的区域称为抑菌环。
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
微生物检测标准
微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37°C培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5X5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37C培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数X样液稀释倍数/30X22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10—100个/cm2，5.关键点：细菌总数W10个/cm2一般区域：细菌总数W100个/cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
洁净车间的微生物控制及检测(1)
0产3品特环点 境 微 生 物 的 监 测 案 例 分 析
1.人员手部接触：符合要求 2.操作台面接触：符合要求
THANKS
交谈1min，产生1.5-2.0万个粒子；
咳嗽：70万个粒子
喷嚏：140万个粒子
★ 在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照SOP要求操作以减少尘埃粒子，要有自我约束的概念。 ★ 出入洁净区的无菌服应尽可能覆盖全身，皮肤暴露部分越少越好，以尽量减少产品的污染。
0产2品特环点 境 微 生 物 的 监 测 方 法
0产3品特环点 境 微 生 物 的 监 测 方 法
0产3品特环点 境 微 生 物 的 监 测 案 例 分 析
2022.8.31 #沉降菌
1.格栅膜独立包装间：沉降菌不可计数； 2.格栅膜连续包装间：沉降菌超标； 3.格栅膜仓库：合格。
人员
0产3品特环点 境 微 生 物 的 监 测 案 例 分 析
• 检测方法 一般采用棉签擦拭法和Rodac plate取样法。
• 控制要求 物体表面菌数≤25cfu/cm2
检测方法
适用范围
培养特点
缺点
棉签擦拭法
Rodac plate取样
法
墙角、缝隙、不规 则物体表面等
光滑平的表面
棉签用稀释液洗 脱后，取稀释液 培养
操作较复杂
取样后直接培养、 琼脂残留被测
计数
物体表面
风险：手部的交叉污染 皮肤屑片的脱落与散步 不正确的穿着工作服 不正确的行为
0产1品特洁点 净 区 微 生 物 的 控 制
1.1 操作人员带来的尘埃粒子：
成年人产生的皮屑：10万~1000万个/min；
操作人员身穿工作服，剧烈活动：产生100万个粒径>0.1μm的微粒，20万个粒径0.5μm的微粒；
微生物实验---实验室环境和人体表面微生物的检查
一、目的要求1．证明实验室环境与体表存在微生物。
2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3．体会无菌操作的重要性。
二、基本原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。
因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
三、器材肉膏蛋白胨琼脂平板，无菌水，灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。
四、操作步骤每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容做实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。
1．写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。
如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。
用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
2．实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。
一小时后盖上两个皿盖。
（2）实验台和门的旋钮（a）用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线，如图Ⅱ-1。
（b）取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅱ-2，B），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（图Ⅱ-2，C）。
实验报告3-微生物细胞形态及菌落特征观察
微生物细胞形态及菌落特征观察实验报告马子午生命科学学院食品科学与工程专业 14101班 02号1.引言1.1实验目的学习细菌的一般接种方法；了解放线菌、蓝细菌、酵母菌、霉菌的菌落特征；学习并掌握如何观察细菌的形态特征，掌握常用霉菌制片方法。
1.2实验原理放线菌的菌落会产生大量的基内菌丝和气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝和孢子，表面呈粉状、颗粒状或絮状；部分蓝细菌可以形成孢子，由成串细胞连成丝状的蓝细菌，在细胞断裂时形成片段，这个片段由异形胞、营养细胞以及极节组成；酵母菌无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子，有性繁殖可以形成子囊和子囊孢子，当酵母菌繁殖旺盛时，母细胞出芽产生的子细胞没有脱离母细胞的时候，子细胞又开始繁殖，这样许多细胞连在一起，形成藕节状的假菌丝；霉菌有青霉和曲霉，青霉的菌落形态特征呈扫帚状，曲霉的形态特征为菊花状的头和足细胞。
霉菌的有些结构在制片过程中容易被破坏，影响观察，采用载玻片培养法。
简单易行，并且还可以在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。
[1]2.材料与方法2.1材料与试剂曲霉（Aspergillus spp.），青霉（Penicillium spp.），放线菌，蓝细菌，啤酒酵母菌（Sac.cerevisiae），复红染液，美蓝染液，棉蓝染液，酸性酒精。
2.2仪器与设备显微镜，酒精灯，盖玻片，载玻片，镊子，接种环。
2.3方法与步骤2.3.1放线菌的形态观察（插片法）准备玻片：取一块干净的载玻片烘干，放于桌面。
接种与观察：用镊子从含放线菌菌种的培养基中取一块盖玻片，再用镊子在盖玻片上取菌种置于载玻片中央位置，直接镜检。
2.3.2蓝细菌形态观察准备玻片：取一块干净的载玻片烘干，放于桌面。
接种：在载玻片中央滴一滴无菌水，取少量含有蓝细菌寄生的藻类于无菌水中，用镊子的头端慢慢敲碎至无菌水开始呈至绿色，盖上盖玻片。
镜检：直接镜检。
2.3.3啤酒酵母子囊孢子形态观察准备玻片：取一块干净的载玻片烘干，放于桌面。
微生物实验报告_3
高效脱酚菌的分离与筛选一、目的要求学习并掌握分离纯化微生物的基本技能和筛选高效降解菌的基本方法。
二、基本原理环境中存在各种各样的微生物, 其中某些微生物以无机污染物作为其生长所需的能源、三、碳源或氮源, 从而使有机污染物得以降解。
四、采样后, 在以苯酚为唯一碳源的培养基中, 经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定, 可筛选出高效降解菌。
五、材料与仪器1.培养基脱酚菌分离培养基:①蛋白胨0.25g, 蛋白胨0.25g, 磷酸氢二钾0.05g, 硫酸镁0.025g, 蒸馏水 500mL, 调pH7.2~7.4, 固体培养基添加2%琼脂②葡萄糖0.25g蛋白胨0.25克, 蛋白胨0.25g, 磷酸氢二钾0.05g, 硫酸镁0.025g, 蒸馏水 500mL, 调pH7.2~7.4, 固体培养基添加2%琼脂试剂苯酚标准溶液: 称取分析纯苯酚5.0g, 溶于蒸馏水中, 稀释至1000mL, 摇匀。
此溶液每毫升含苯酚5mg。
取此溶液10mL, 移入另一100ml容量瓶, 用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀。
用K2CrO4标准溶液对此溶液的酚浓度进行标定。
四硼酸钠饱和溶液: 称取Na2B4O7 40g, 溶于1L热蒸馏水中, 冷却后使用, 此溶液pH 为10.1。
3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g, 溶于蒸馏水, 并稀释至100mL, 置于棕色瓶中, 冰箱保存, 可用两周。
2％过硫酸胺溶液：取化学纯过硫酸胺2g, 溶于蒸馏水, 并稀释至100mL, 冰箱保存, 可用两周。
仪器及其他工具恒温振荡器、恒温培养箱、离心机、分光光度计、玻璃珠、锥形瓶、培养皿等实验步骤富集培养采集活性污泥、生物膜或土样, 接种于装有50ml液体培养基和玻璃珠并加有适量苯酚的三角瓶中, 30℃震荡培养。
待菌生长后, 用无菌移液管吸取1ml转至另一个装有50ml液体培养基并加适量苯酚的三角瓶中。
如此连续转接2-3次, 每次所加的苯酚量适当增加, 最后可得脱酚菌占绝对优势的混合培养物。
环境微生物实验报告
环境微生物实验报告一、实验目的本次实验旨在探究不同环境条件对微生物生长和群落结构的影响，通过实验结果分析微生物的生态适应性和生长规律。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 高温热带雨林土壤样品- 高山冷极地土壤样品- 淡水水样- 海水样品2. 实验方法：(1) 采集不同环境条件下的样品，并进行处理消毒；(2) 将处理后的样品接种在含有富集培养基的琼脂平板上；(3) 在不同温度条件下培养微生物菌落；(4) 观察并记录不同环境条件下微生物菌落的形态和数量。
三、实验结果1. 高温热带雨林土壤样品：- 微生物种类多样，菌落数量较大；- 菌落形态呈现丰富多样性。
2. 高山冷极地土壤样品：- 微生物种类相对较少，但种群密度较高；- 菌落形态较为单一。
3. 淡水水样：- 微生物菌落数量较大，种类较为丰富；- 菌落分布均匀，密度适中。
4. 海水样品：- 微生物种类繁多，但数量相对较少；- 菌落形态呈现出细长分散分布的特点。
四、讨论与分析通过实验结果可以得出如下结论：1. 不同环境条件对微生物的分布和种类产生显著影响，表明微生物在适应不同环境下的能力具有一定的差异性。
2. 高温热带雨林中的土壤微生物种类繁多，表明热带环境对微生物生长具有促进作用；而高山冷极地土壤中的微生物种类较少，但数量较多，可能与恶劣的环境条件下微生物竞争力增强有关。
3. 淡水和海水中微生物的种类和数量差异较大，淡水中微生物分布相对均匀，海水中微生物种类繁多但数量稀少，这也与水生环境的特点有关。
五、结论本实验结果表明，微生物在不同环境条件下存在显著的适应性和生长规律，进一步揭示了微生物在生态系统中的重要作用。
针对不同环境的微生物群落结构，我们可以更好地了解和利用微生物资源，为环境保护和生态平衡提供一定的理论依据。
六、参考文献- Smith, J. K., & Jones, L. M. (2018). Microbial diversity and function in soil: from genes to ecosystems. Current Opinion in Microbiology, 45, 269-273.- Wang, Y., Shurin, J. B., & Rodriguez, P. (2019). Global environmental change and the ecology of Food and waterborne pathogens. Trends in Ecology & Evolution, 34(8), 643-655.。
医学微生物实验3：细菌的分离与纯化
实验3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。
它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。
由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以“散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。
不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。
肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。
一、实验目的：1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。
3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。
二、实验原理：在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
三、实验材料和用具：1．材料（1）土壤样品（2）培养基：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（%）牛肉膏0.3-0.5g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5g琼脂2.0g蒸馏水100mLpH 7.2-7.4，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。
配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。
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实验三环境微生物的检测
一、实验目的
1.了解周围环境中微生物的分布情况。
2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。
3.了解四大类微生物的菌落特征。
二、实验原理
在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。
土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。
由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。
但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。
这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。
据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。
培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。
其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。
此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。
配制好的培养基必须进行灭菌。
所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。
经过灭菌后的物体是无菌的。
消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。
灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。
此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。
在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。
一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。
为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。
在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。
如将微生物接种到适合其生长的固体培养基表面，在适宜的温度下(一般细菌37℃：霉菌等28℃)，培养一段时间(一般24~48h)后，少量分散的菌体或孢子就可生长繁殖成肉眼可见的细胞群体，此即菌落。
如平板上的菌落是由单个细胞(或单个孢子)生长繁殖而成的，就是一个纯种细胞群或克隆；若培养后大量菌落聚集在一起形成的为菌苔。
不同种的微生物可形成大小、形态各异的菌落，根据微生物菌落形态的不同，可初步鉴别出四大类微生物：细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。
细菌的菌落呈圆形、较小而薄、透明或不透明、质地“细腻”，有的具有色泽，有的边缘不整齐，有的表面湿润、光滑，有的表面干燥有褶皱。
此外，细菌常因分解含氮化合物而产生臭味。
酵母菌的菌落通常比细菌菌落大，圆形、厚、不透明、色素单一，多为乳白，少数为橙或红色。
酵母菌因普遍能发酵含碳有机物产醇，故菌落多伴有酒香味。
防线菌菌落小而致密，或坚硬、或呈粉状。
不少放线菌还产生特殊的土腥味。
霉菌菌落大而疏松、或大而紧密。
气生菌丝会发育形成一定形状、构造和色泽的子实器官，所以菌落表面往往有肉眼可见的构造和颜色。
三、实验材料
人体表和空气中的微生物。
四、实验器材与试剂
1.器材
恒温培养箱、无菌平皿、电炉、酒精灯、火柴、无菌棉签和记号笔。
2.试剂
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、酵母膏葡萄糖培养基(简称YPD)、高氏一号培养基和查氏培养基。
五、实验操作
I.融化培养基
将装有无菌培养基的三角瓶置水浴中煮沸，待培养基融化后取出，当冷至50~60℃左右时，进行下一步。
II、倒平板
有持皿法和叠皿法，操作要点如下：
1.持皿法
(1)将无菌培养皿叠放在酒精灯左侧，以便拿取。
(2)点燃酒精灯。
(3)酒精灯旁，左手握三角瓶底部，倾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小指与小尾鱼际(即小指边缘)夹住棉塞并将其拔出(切勿将棉塞放在桌上)，随之将瓶口在火焰上过一下(不可灼烧，以防爆裂)，以杀死可能沾在瓶口的杂菌。
然后将三角瓶从左手换至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。
操作中瓶口应保持在火焰2~3cm，瓶口始终向着火焰，以防空气中微生物的污染。
左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住皿底，用中指和拇指夹住皿盖，食指于皿盖上为支点，在火焰旁，打开皿盖，让三角瓶伸入，随后倒入培养基。
一般倒入15ml左右培养基即可铺满整个皿底。
盖上皿盖，置水平位置待凝。
然后将三角瓶移至左手，瓶口在次过火并塞紧瓶盖。
2. 叠皿法
此法适于在超干净台上操作，基本步骤同持皿法。
不同之处是左手不必持皿，而是将瓶皿叠放在酒精灯的左侧并靠近火焰。
按上述方法用右手拿三角瓶，左手打开最上面的皿盖，倒入培养基，盖上皿盖后即移至水平位置待凝。
再依次倒下面的平皿。
操作中瓶口始终向着火焰，以防空气中微生物的污染。
III、贴标签
待培养基完全凝固后，在皿底帖上标签，注明检测类型，组别及日期(也可用记号笔书写在皿底)
IV、检测方法
环境中微生物种类多样，检测方法也各异，先选几种列举如下：
1.空气检测实验室空气中的微生物时，只要打开无菌平板的皿盖，让其暴露在空气中一段时间(5~10min)然后将皿盖盖上即可。
2.桌面检测实验台桌面微生物是，可用一根无菌棉签，先在无菌平板的
图4-1 含菌棉签平板划线示意图
左：开启皿盖法右：划线示意图
一个区域内湿润和试划几下，然后用其擦抹桌面等物体表面，在以此棉签在平板的另一区域作来回划线接种(如图4-1)。
本操作应以无菌操作要求进行，即在火焰旁用左手拿起平板，用中指无名指和小指托住皿底部，用食指和大拇指夹住皿盖并开成一缝，右手持棉签在培养基表面划线接种，无菌棉签湿润和试剂区可作为无菌对照。
3.头发移去放在桌面上的无菌平板的皿盖，是头发部位位于平板的上方，并用手指拨动头发数次，在盖上皿盖即可。
4.手指可用未洗的手指先在无菌平板的培养基一侧(约一半的面积)作划线接种，并在皿底作好标记。
然后用肥皂、流水洗手，用洗净的手指于平板培养基的另一侧作同样的划线接种，盖好皿盖。
待培养后比较两杂菌生长的情况。
5.口腔打开无菌平板培养基的皿盖，使口对着平板培养基的表面，以咳嗽或打喷嚏的方式接种，然后盖上皿盖。
V、培养
将以上各种检测平板倒置于28℃培养箱中培养，至下周实验时观察并计数各平板上的菌落数。
VI、观察
注意观察不同类型菌落的大小、外形和颜色等特征，将观察结果记录在实验报告上。
VII、清洗
观察记录完毕后，将含菌平板放在沸水中煮30min以上，杀死培养基表
面生长的各种微生物，然后清洗并晾干培养皿。
六、思考题
1.通过本实验后，谈谈你对微生物的分布以及数量的认识。
2.本实验中那些步骤属无菌操作？为什么？
3.如何描述菌落的形态特征？。