氟喹诺酮类药物检测(高效液相色谱法).
高效液相色谱法快速测定多种临床常用酌喹诺酮类药物
・ 药 品检验 ・
高效 爽 李 晓华 张 永玲 游 广辉
４ ５ ０ ０ ０ ３
徐 国防
郑 州人 民医 院 ， 河南 郑 州
【 摘 要１目的 建 立一 种可 快 速测 定 多种 临床 常 用喹 诺 酮类 药物 浓 度 的 Ｐ Ｒ— ＨＰ Ｌ Ｃ法 。方 法 以 Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｈ ｏ ｍｅ ， Ｃ１ ８ 不 锈 钢柱（ ２ ５ ０ ｍｍｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ Ｉ ｘ ｍ 色谱 柱 ） ， ０ ． ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ磷 酸 二氢 钾 一 甲醇一 ０ ． ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ四丁基 溴化 氨 （ ７ ８ ： ２ ２ ： ４， ） 为 流 动相 ． 流 速 ：１ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ 。 柱温 ： ４ ０ ｃ Ｉ ： ， 波 长 依受 检药 物 为定 ， 灵敏 度 ： ０ ． ０ ０ １ Ａ Ｆ Ｕ。 外 标 法定 量 。以二 氯 甲烷 （ 含２ ％ 异丙 醇 ） 萃取 样 品 ， 氮气 吹干后 以流 动 相复 溶 ， 进样 ２ ０ Ｌ 。 结果 按 上述 色 谱 条件 和 样 品处 理 ， 左 氧氟 沙 星 、 莫 西 沙 星 等 ５种 喹诺 酮类 药 物 可得 到 可 靠分 离 和 准确 检 测 。 结论 所建 立 的 Ｐ Ｒ — Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 简 便 易行 ，准 确 可靠 。
ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｎｔ ａ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｓ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗａ ｓ ４ ０ ℃ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｉ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
高效液相色谱法测定诺氟沙星胶囊含量结果的比较
图 ２ 对照 品溶液谱 图
图 ３ 供试 品溶液谱 图
作者单位 ： １ ２ １ ０ ０ ０ 锦州市食 品药 品检 验所
・
２ ３ ４・
中国现代药 物应用２ ０ １ ４ 年３ 月第８ 卷第６ 期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｍ ｏ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ Ａ ｐ ｐ ｌ ， Ｍ ａ ｒ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ８ ， Ｎ ｏ ． ６
５ 讨 论
符合规定 ， 对诺 氟沙 星的生产提供 强有力 的实验依 据 ， 并对
以上试验均按 照 ２ ０ １ ０ 年版药典二部标准检验 ， 经过 对 １ ２ 个 厂家 １ ５个批次 的靠 ， 诺 氟沙星含量在 （ ９ １ ． ５ ％～ １ ０ ５ ． ８ ％） 均
置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 用 流动相稀释至刻度 ， 摇匀 。
４ 结 果
似作 用是调节 ｐ Ｈ ， 其实 际最大作用是 调整峰 型 ， 因为诺氟 沙 星有 含氮极性基 团 ， 在 酸性环境 中容易与色谱柱 中的硅羟 基
表 １ 高效液相色谱法测定各 厂家诺氟沙星胶囊含量结果 的 比 较 ［ ｎ （ ％ ） ］
谱抗 菌药效 ， 特别是对需 氧革兰 阴性 杆菌具有非 常高 的抗 菌
产生静 电作用而拖尾 ， 而三乙胺可 以代替物质与硅羟基作 用 ， 保 证了物质 的峰型 。检测 波长 ： ２ ７ ８ｎ ｍ， 柱温 ： ２ ５ ℃， 流速 １ ． ０
活性 ， 如绿脓 杆菌 、大肠杆 菌有较 强杀菌作 用 ， 对体 外多重 ｍｌ ／ ｍ ｉ ｎ ， 进样量 ２ ０儿 ｌ ， 按外 标法以峰面积计算 。 耐药 菌也具有非 常好 的抗 菌活性 ， 而且 细菌对本 品也不易产 ３ 溶 液 制备
生耐药性 。在 临床 上 具有很好的应用价值 ， 常用剂型 主要 为 系统适用性溶液 的制备 ： 精密称取诺 氟沙星 、环丙沙星 、 胶囊剂 ， 是治疗 泌尿系统 、胃肠道 系统 细菌感染 等疾病的首 依诺 沙星对 照品加 ０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ盐 酸溶液溶解 ， 用流动相稀释制 选药物 。截至 目前 ， 对 其含量 的测量方 法有很 多种 ， 包括非 成 含诺 氟沙星 ２ ５￣ ｇ ／ ｍ Ｊ 、环 丙沙星 ５ ｌ ｌ ｌ 、依诺沙 星 ５￣ ｇ ／ ｍｌ 水滴定法 、高效液相 色谱法 、 紫外分光 光度法 、荷移 分光光 的混合溶 液。诺氟 沙星 峰的保 留时间约 为 ９ ｍｉ ｎ 。诺 氟沙 星 度法 ， 本 文主要介绍 的是高效液相色谱 法测量诺 氟沙星胶囊 峰 与环 丙沙星峰和诺 氟沙星峰与依诺沙 星峰的分离度均应大 ． ０ （ 均符合规定 １ 。 含量 ， 并将不 同厂家及 批次 的含 量测定 结果相 比较 ， 为临床 于 ２
超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物
超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物引言随着社会的发展和人们对美的追求，化妆品行业逐渐成为了一个庞大的产业。
随着化妆品行业的发展，一些不法商家为了谋取暴利，往往会在产品中添加一些违禁物质，给消费者带来安全隐患。
氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于抗菌和抗炎的药物，但是其在化妆品中的使用是被禁止的。
对氟喹诺酮类药物在化妆品中的检测显得尤为重要。
本文主要介绍了超高效液相色谱-串联质谱法在测定化妆品中氟喹诺酮类药物方面的应用。
氟喹诺酮类药物的特性及危害氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于医学领域的抗菌和抗炎药物，主要用于治疗细菌感染和炎症。
由于其具有一定的毒副作用，多国已经规定氟喹诺酮类药物不能用于化妆品中。
氟喹诺酮类药物在化妆品中的使用可能会导致以下危害：1. 皮肤敏感：氟喹诺酮类药物可能引起皮肤过敏反应，导致肌肤瘙痒、红肿等症状。
2. 毒副作用：长期接触氟喹诺酮类药物可能会引发毒副作用，对人体健康造成危害。
3. 法律责任：根据相关法律法规，化妆品中添加氟喹诺酮类药物是违法行为，生产商将承担相应的法律责任。
超高效液相色谱-串联质谱法的原理超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）是当今分析领域中应用十分广泛的一种方法，它通过将超高效液相色谱和串联质谱技术相结合，能够提供更快、更准确的分析结果。
其基本原理如下：1. 色谱分离：样品中的化合物首先通过超高效液相色谱柱进行分离，根据化合物的亲和性和极性来进行分离。
2. 质谱检测：分离后的化合物通过质谱进行检测，同时进行定量和定性分析。
3. 数据处理：利用专业的数据处理软件对获取的数据进行处理和分析，得出最终的结果。
UHPLC-MS/MS在氟喹诺酮类药物检测中的应用UHPLC-MS/MS在氟喹诺酮类药物检测中的应用主要分为样品前处理、色谱分离和质谱检测三个方面。
1. 样品前处理在化妆品中检测氟喹诺酮类药物时，首先需要进行样品前处理。
通常采用溶剂提取或固相萃取的方法来提取样品中的氟喹诺酮类药物。
高效液相色谱-荧光法检测禽肉中七种氟喹诺酮类药物残留的研究
氟沙星 、双氟沙星、沙拉沙星标准 品，纯度 ≥９ ％，日本 ８ 关东株式会社生产 。
１ 色 谱 条 件 ． ３ 色 谱 柱 ：ＷＡ Ｅ Ｓ Ｓ ｍｍｅ ｙ ｈｅ Ｔ Ｐ ８ ４６ ｎｘ Ｔ Ｒ ｙ ｔ Ｓ ｉｌＭ Ｒ Ｉ ． ｒ ｄ ｍｉ
的肉鸭的肉品和营养价值显著高于高网平养 。
４ 结论 通 过 对 不 同 的 饲 养 方 式 下 生 长 的 肉 鸭 的产 肉 性 能 及 体 成 分 的 比 较 研 究 ， 说 明 高 网 饲 养 与 地 网饲 养 的 肉鸭 的 产 肉性 能 差 异 不 显 著 ，但 地 网 饲 养 肉 鸭 的 体 成 分 指 标 显
氟 喹 诺 酮 类 药物 （ｌｏｏ ｕｎ ｏｏ ｅ，Ｆ ） 近 年 来 发 Ｆｕ ｒｑ ｉ ｌ ｓ Ｑｓ ｎ ｎ 是
展迅速 并被广泛 应用 的新一代全 合成抗生 素。它抗 菌谱 广 、高效、低毒 、组织 穿透力强 ，抗菌作用 是磺胺类 药 的近千倍 ，与第３ 代头孢类抗 生素相媲美 。 由于Ｆ ｓ Ｑ 是化
目前 ，用 于Ｆ ｓ 留检测 的方法有微生物法 、气相色 Ｑ残 谱法 、气相色谱． 质谱 、 免 疫 分 析 法 等 。 但 在 现 行 国 内标 准 和 报 道 文 献 中
常用 的高效液 相色谱法只 能检测２ 种 药物残 留，本研 、３ 究采用 液液萃 取进 行样 品前处理 ，用带荧光 检测器 的液 相色谱仪梯 度洗脱检测 ，可同时测 定氧 氟沙星（ Ｆ Ｘ 、 Ｏ Ｌ ）
山东畜牧兽医
２１ ０ ０年第 ３ ｌ卷
高 效液 相 色 谱． 光 法检 测 禽 肉 中七种 氟 喹 诺酮 类 荧 药 物残 留 的研 究
优化超高效液相色谱法对鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测
诺 酮 类 药 物 的 常 规 方法 主要 有 固相 萃 取一 高 效 液 相 色谱 法 、 酶联 免 疫 法 、 薄 层 色 谱 法 和 荧 光 法
等ｒ ２ 一 。该 文借 鉴农 业 部现 行有 效标 准高 效液 相 色
氟 喹诺 酮 类药 物主 要用来 预 防和 治疗 动物 疾
供 试试 剂 有环 丙沙 星 、 恩 诺沙 星 、 达 氟 沙星及
病， 作 为一 种 临床上 比较 常用 的抗 菌类 药 物 ， 少 量
使 用可 以对 动 物具 有 一 定 的生 长 促 进 作 用 ， 但 因
沙 拉沙 星标 准 品 ， 乙腈 （ 色谱纯 ） ， 购 自美 国 Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ
李 宁。 林 小莉 。 董 艳峰
（ 哈 尔滨 市兽 药饲料 监 察所 ， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ １ ０ ）
摘要 ： 为 制 定 畜产 品 中沙 星 类 药 物 残 留 高效 实用 的检 测 标 准 ， 建 立 一 种 测定 鸡 蛋 中 ４种 氟喹 诺 酮 类 药 物 （ 环丙 沙星、 恩诺 沙星、 沙拉沙星 、 达氟沙星） 残 留 的超 高 效 液 相 色谱 检 测 方 法 。结 果 表 明 ： ４种 氟喹 诺 酮 类 药 物峰 面 积 与 质 量 浓 度 呈 良好 的 线 性 关 系 ， Ｒ 均 大于 ０ ． ９ ９ ９ ８ 。环 丙 沙星 、 恩诺 沙墨 、 沙拉 沙 星的 线性 范 围为 ０ ～ ５ ０ ０ ｇ ・ Ｌ ～， 达氟 沙 星的 线性 范 围为 ０ ～１ ０ ０ ｇ ・ Ｌ 。鸡 蛋样 品 中氟喹 诺 酮 类 药物 的 回收 率 为 ７ ８ ． ９ ～
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于人类和动物医疗领域的抗生素药物。
由于其广泛使用以及潜在的药物残留问题，对氟喹诺酮类药物残留进行检测和监管变得尤为重要。
为此，国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法和限量要求进行了规定。
国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法主要包括色谱法和质谱法。
色谱法是一种常用的分析方法，通过分离样品中的药物成分，再进行定量分析。
常用的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
质谱法则是一种能够识别和定量药物成分的高灵敏度分析方法，包括气相质谱法（GC-MS）和液相质谱法（LC-MS）。
这些分析方法能够快速准确地检测氟喹诺酮类药物残留。
国家标准还规定了氟喹诺酮类药物残留的限量要求。
限量是指在食品、饲料和水产品中，允许的最高残留量。
这些限量值是根据对药物的毒理学评估和风险评估结果确定的。
国家标准对不同食品和饲料中氟喹诺酮类药物的限量值进行了详细的规定，以确保人类和动物食品的安全。
氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于药物残留监管机构、食品和饲料生产企业、检验检测机构以及消费者都具有重要意义。
对于药物残留监管机构来说，国家标准的解读能够帮助他们制定监管政策和规范，确保食品和饲料中的氟喹诺酮类药物残留不超过限量要求。
对于食品和饲料生产企业来说，国家标准的解读可以帮助他们确保产品符合法规要求，提高产品质量和竞争力。
对于检验检测机构来说，国家标准的解读则是他们进行检测和评估的基础，确保检测结果准确可靠。
对于消费者来说，国家标准的解读能够提供关于食品和饲料安全的信息，保护消费者权益。
总之，氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于保障食品和饲料安全、规范药物残留监管具有重要意义。
各相关方应根据国家标准的要求，加强对氟喹诺酮类药物残留的监管和控制，以确保公众的健康和安全。
超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留
超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文峰【摘要】为寻求快速、高效和低成本的样品分析方法,在高效液相色谱法基础上通过前处理条件及色谱条件的优化,建立快速检测鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星残留的超高效液相色谱法(UPLC),即选用1％磷酸-乙腈作为提取溶液、水饱和正己烷作为除脂溶液、Waters Oasis HLB柱为固相萃取柱及1/4提取液过柱、89％(0.05 mol/L磷酸/三乙胺)∶11％(乙腈)的流动相比例,并对建立的方法进行验证.结果表明:利用新建立的UPLC检测,4种氟喹诺酮类药物在0.2～50 μg/kg线性范围良好(R2＞0.999 7),经添加低中高3种不同浓度的混和标准液进行回收率和变异系数分析,其回收率在85.7％～94.3％,变异系数为1.50％～3.77％,最低检测限为0.17～0.59 μg/kg,定量限为0.81～2.01 μg/kg.该方法易于操作,准确度和精密度高,能满足大批量鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测需要.%The UPLC method to rapidly detect Enrofloxacin,Ciprofloxacin,Danofloxacin and Sarafloxacin residues in eggs was built by simplified pre-treatment and optimized chromatographic condition based on HPLC to explore a rapid,efficient and low cost method of detecting fluoroquinolone residues in eggs.The UPLC method includes 1％ phosphoric acid-acetonitrile for extraction,water saturation n-hexane for degreasing,Waters Oasis H LB column for solid-phase extraction,1/4 extract for purification and mobile phase ratio of 89％ L-phosphoric acid/triethylamine:11％acetonitrile.Results:The linear range of four fluoroquinolones is good between 0.2～50 ug/kg (R2＞ 0.999 7) under the UPLC method.The recovery rate,variation coefficient,minimum detection limit andquantification limit of four fluroquinolones respectively added with three different concentrations are 85.7％～ 94.3％,1.50％～ 3.77％,0.17 ～0.59 μg/kg and 0.81 ～2.01 μg/kg separately.The established UPLC method with advantages of easy operation,high accuracy and high precision can be used in detection of fluoroquinolone residues in mass eggs.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2018(046)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】鸡蛋;氟喹诺酮;超高效液相色谱法;药物残留【作者】孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文峰【作者单位】黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000【正文语种】中文【中图分类】S481+.8氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones, FQNs)是一类人工合成抗菌药，抗菌效果极强，其中，恩诺沙星(Enrofloxacin, ENR)、环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)、达氟沙星(Danofloxacin, DAO)和沙拉沙星(Sarafloxacin, SAR)在畜禽生产中被广泛应用[1]。
高效液相色谱法测定猪肉中氟喹诺酮类药物
猪 肉为 各 地 方送 检 样 品 。 乙腈 、 正 己烷 、磷 酸 二 氢钠 、磷 酸 天 津 市光 复 精 细 化 工研 究所 ； 三 乙胺 上 海 晶 纯 实 业 有 限 公 司 ； 无 水硫 酸 钠 烟 台三 和 化 学试 剂有 限 公司 。 ｌ 仪 器 与设 备 － ２
童中枢神经系统 的副作用也有报道 ，另氟喹 诺酮类药物 还有潜在的致癌性和遗传毒性 ，同时还容 易使病菌产生
耐药 性 ，所 以欧盟 和 北 美等 国家 只 批准 恩 诺 沙星 为动 物 专 用 的 抗 菌 药 ， 环 丙 沙 星 已禁 止 在 水 产 养 殖 业 中 使用 。 动物 源 性 食 品 的安 全 性 ，对 其 残 留最 的检 测 越 来越 受 到 关注 【 ｌ ＿ 。氟 喹 诺酮 类 药物 在动 物 组织 中的残 留分析 方 法 主 要 有 酶联 免疫 吸 附测 定法 （ Ｌ Ｓ 、高 效 液相 色 谱法 Ｅ Ｉ Ａ） （ Ｐ Ｃ ｔ 和液 相色谱 一 Ｈ Ｌ） 】 质谱法（ ＣＭＳ。本方 法研 究建 立 Ｌ — ） 的 Ｈ Ｌ ．Ｌ Ｐ Ｃ Ｆ Ｄ检测方法 ＿］ ９】 ＿ ，用 １ 醋酸 一 腈 溶液 ［ １作 Ｉ ％ １５ ４】 － 为提 取 液 ， 町同 时检 测 猪 肉 中环 丙 沙星 、恩 诺沙 星 两 种 氟 喹 诺 酮 类 药 物 ， 该 方 法 分 析 时 间 短 、 操 作 简 单 、 节
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１０ ．１ ３２ ）００ ２ —３ ０ １８ ２ （０ １１．０ ９０
氟 喹诺 酮（ ｕ ｒｑ ｉｏｏ ｅ ，Ｆ ｓ类 药 物 ，具 抗菌 ｎ ｏｏ ｕｎ ｌｎ ｓ Ｑ ） 谱 广 、 高 效 、 低 毒 、 组 织 穿 透 力 强 等 特 点 ， 目前 氟 喹诺 酮 类 药 物在 医学 和 兽 医学 中应 用广 泛 ，但 其 残 留可 导致 人 体 病 原体 的耐 药 性 ，而 Ｈ有 关 氟喹 诺 酬 类 药物 儿 ．
高效液相色谱法检测水产品中氟喹诺酮类药物残留量方法的优化
高效液相色谱法检测水产品中氟喹诺酮类药物残留量方法的优化李佩佩;陈雪昌;张小军;梅光明【摘要】建立了高效液相色谱-荧光检测法测定水产品中3种氟喹诺酮类药物(诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星)残留量的方法.均质后的样品用酸化乙腈提取,乙腈饱和的正己烷脱脂,旋转蒸干流动相溶解后经反相色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量.诺氟沙星、恩诺沙星的线性范围为4.0 ～400 μg/kg；环丙沙星的线性范围为0.8～80μg/kg,方法的线性关系良好,相关系数均大于0.9990.3种氟喹诺酮类药物的加标回收率为84.3％～91.0％；相对标准偏差为4.57％～8.10％；诺氟沙星、恩诺沙星的检H,限为1.0 μg/kg；环丙沙星的检出限为0.2μg/kg.本方法简便、灵敏、通用性强,适用于水产品中3种氟喹诺酮类药物的同时检测.【期刊名称】《中国渔业质量与标准》【年(卷),期】2012(002)002【总页数】5页(P84-88)【关键词】高效液相色谱;水产品;氟喹诺酮类药物;残留【作者】李佩佩;陈雪昌;张小军;梅光明【作者单位】浙江省海洋水产研究所,浙江舟山316100;浙江省海洋水产研究所,浙江舟山316100;浙江省海洋水产研究所,浙江舟山316100;浙江省海洋水产研究所,浙江舟山316100【正文语种】中文【中图分类】S94诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星均为常见的氟喹诺酮类合成抗菌剂，广泛应用于畜禽和水产养殖。
此类药物的不恰当和过量使用所导致的药物残留会危害人体健康，同时也会使致病菌产生耐药性，从而间接危害人类健康［1-2］。
我国及多个国家和地区均规定了氟喹诺酮类药物的最高残留限量［1］。
目前检测氟喹诺酮类药残的方法有微生物法［3-4］、酶联免疫法(E LISA)［5-6］、毛细管区带电泳法［7-8］、电解分析法［9］、高效液相色谱法(HPLC)［10-12］、高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)［13-16］等。
高效液相色谱法快速测定多种临床常用的喹诺酮类药物
高效液相色谱法快速测定多种临床常用的喹诺酮类药物目的建立一种可快速测定多种临床常用喹诺酮类药物浓度的PR-HPLC 法。
方法以Scienhome，C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm，5 μm色谱柱），0.01 mol/L 磷酸二氢钾-甲醇-0.5 mol/L四丁基溴化氨（78∶22∶4，V/V）为流动相，流速：1.0 mL/min。
柱温：40℃，波长依受检药物为定，灵敏度：0.001 AFU。
外标法定量。
以二氯甲烷（含2%异丙醇）萃取样品，氮气吹干后以流动相复溶，进样20 μL。
结果按上述色谱条件和样品处理，左氧氟沙星、莫西沙星等5种喹诺酮类药物可得到可靠分离和准确检测。
结论所建立的PR-HPLC法简便易行，准确可靠。
可在基层医院对多种喹诺酮类药物进行血药浓度检测。
标签：反相高效液相色谱法；喹诺酮类药物；血液浓度监测喹诺酮类药物是由人工合成的一类高效、广谱、低毒的抗菌药，具有体内分布广泛、不良反应较轻微、消除半衰期较长等优点，且與其他抗菌药物之间不存在交叉耐药性。
喹诺酮类药物对G+和G-都有较强的杀灭作用，尤其是对G-菌的抗菌作用很强，临床上主要适用于治疗呼吸道、泌尿生殖道、消化道、皮肤软组织等细菌性感染疾病。
不过喹诺酮类药物的杀菌效果呈明显的浓度依赖性，即浓度越高其抗菌活性越强，最大血药浓度与最低抑菌浓度之间的比值（Cmax/MIC）大于8～10时呈明显的杀菌活性且可减少耐药菌株的产生，但随着血药浓度的增加，药物不良反应明显增加，因此对于某些特殊患者进行喹诺酮类药物的血液浓度监测有显著的临床意义。
现在临床常用的喹诺酮类药物共有四代数十种，而关于喹诺酮类药物血药浓度测定的方法也是五花八门各不相同[1-6]，有些方法对实验设备和实验技术要求较高，基层实验室难以完成，本文介绍一种血样处理简单，试验条件易于满足，检测灵敏度高的HPLC方法，可在临床对多种喹诺酮类药物进行血药浓度监测。
氟喹诺酮类抗生素的检测方法及检测试剂
氟喹诺酮类抗生素的检测方法及检测试剂一、氟喹诺酮类抗生素的检测方法1、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是检测氟喹诺酮类抗生素的常用方法之一。
它基于化合物在流动相和固定相之间的分配差异来实现分离和检测。
HPLC 具有高分辨率、高灵敏度和准确性的特点。
在检测过程中，样品经过提取、净化和浓缩等预处理步骤后，注入高效液相色谱仪。
通过选择合适的色谱柱、流动相组成和检测波长，可以实现对不同氟喹诺酮类抗生素的有效分离和定量分析。
2、液相色谱质谱联用法（LCMS/MS）液相色谱质谱联用法结合了液相色谱的分离能力和质谱的高选择性和高灵敏度。
这种方法可以同时检测多种氟喹诺酮类抗生素，并且能够对其结构进行确证。
在 LCMS/MS 中，样品经过液相色谱分离后，进入质谱仪进行离子化和质量分析。
通过监测特定的离子对，可以实现对目标化合物的精准定量。
3、酶联免疫吸附测定法（ELISA）ELISA 是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法。
针对氟喹诺酮类抗生素制备特异性抗体，然后将样品与抗体和酶标记的抗原进行竞争结合反应。
通过测定酶反应产物的吸光度，可以间接定量样品中氟喹诺酮类抗生素的含量。
ELISA 具有操作简便、快速、成本低的优点，适用于大量样品的初步筛查。
4、毛细管电泳法（CE）毛细管电泳法利用在电场作用下离子的迁移速度差异来分离化合物。
它具有高效、快速、样品用量少等优点。
对于氟喹诺酮类抗生素的检测，CE 可以通过选择合适的缓冲液体系和检测条件，实现对目标化合物的分离和检测。
5、微生物检测法微生物检测法基于抗生素对微生物生长的抑制作用。
常用的有琼脂扩散法和肉汤稀释法。
在琼脂扩散法中，将含有待测样品的滤纸片放置在接种了敏感菌株的琼脂平板上，观察抑菌圈的大小来判断抗生素的存在和浓度。
肉汤稀释法则是通过测定能抑制微生物生长的最低抗生素浓度来定量。
二、氟喹诺酮类抗生素的检测试剂1、标准品标准品是检测中的重要试剂，用于建立标准曲线和进行定量分析。
高效液相色谱法同时测定禽蛋中4种氟喹诺酮类药物残留量
高效液相色谱法同时测定禽蛋中4种氟喹诺酮类药物残留量林玲;杨春亮;查玉兵;刘丽丽;刘杰【摘要】建立了一种同时测定禽蛋中4种氟喹诺酮类药物的高效液相色谱荧光检测法.样品经磷酸二氢钾缓冲液提取两次,离心合并上清液.上清液经C_(18) 固相萃取柱净化,以流动相洗脱定容,用高效液相色谱荧光检测法测定,外标法定量.结果表明,该方法对环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、达氟沙星的最低检出限分别为0.005、0.005、0.005、0.001 mg/kg、,方法相对标准偏差为1.48%～3.00%.平均回收率为90%～95%.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2010(000)002【总页数】4页(P17-20)【关键词】高效液相色谱法;荧光检测器;禽蛋;环丙沙星;达氟沙星;恩诺沙星;沙拉沙星【作者】林玲;杨春亮;查玉兵;刘丽丽;刘杰【作者单位】中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001【正文语种】中文1 前言恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星均为常见的氟喹诺酮类(FQS)抗菌药物。
此类药物具有广谱抗菌、抗菌作用强、毒副作用小等特点，已被广泛用于人类、畜禽和水产养殖业。
由于氟喹诺酮类药物在动物体内的残留消除缓慢，过量的药物残留会危害人体健康。
因此，建立此类药物的检测方法很有必要。
到目前为止，对氟喹诺酮类药物残留检测方法的报道较多，有微生物法、毛细管电泳法、薄层色谱法、气-质联用、液-质联用、液相色谱荧光法和液相色谱紫外法[1-8]等。
但应用最普遍、检测准确度好、操作较方便的方法还是高效液相色谱法。
但是有关禽蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测方法尚未见报道。
本文通过对前处理方法的摸索、流动相的选择和色谱条件的优化，建立了一种可同时测定禽蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的高效液相色谱荧光法。
高效液相色谱法检测水产品中氟喹诺酮类药物残留量方法的优化
中 国 渔 业 质 量 与 标 准
Ｃ ｉｅｅＦｓｅｙＱ ａｔ ａｄＳ ｎ ａｄ ｈ ｓ ｉ ｒ ｕｌｙ ｎ ｔ ｄｒｓ ｎ ｈ ｉ ａ
Ｊ ｎ ０ ２ ｕ ｅ２ １
Ｖｏ ＿ Ｎｏ ２ ｌ２ ．
高效 液 相 色谱 法 检 测 水产 品 中氟 喹诺 酮 类 药 物 残 留 量 方 法 的 优 化
方法的线性 关系 良好 ， 相关系数均大于 ０ ９ ９０ ．９ 。３种氟喹诺 酮类药物 的加标 回收率 为 ８ ．％ 一 １０ ； ４３ ９ ．％ 相对 标准偏
差为 ４ ５ ％ 一８ １％ ； ．７ ．０ 诺氟沙星 、 恩诺沙星的检出限为 １０ ． ｋ； ｇ 环丙沙 星的检 出限为 ０ ２ ／ ｇ ． ｇ ｋ 。本方 法简便 、 灵 敏、 通用性强 ， 适用 于水产 品中 ３种氟喹诺 酮类 药物的同时检测 。［ 中国渔业质量与标准 ，０ ２ ２ ２ ：４— ８ ２ １ ，（ ）８ ８ ］
实验 前 处理 ， 优化 了检测 过程 。经 实验证 明 改进后 的
乙腈 、 己烷 、 丙 醇 （ 正 异 色谱 纯 ） 四 丁基 溴 化 铵 ； （ 级纯 ） 浓盐 酸 （５ 一 ７ ， 优 ； ３ ％ ３ ％ 优级 纯 ）磷 酸 （ 级 ； 优 纯 ） 超 纯 水 ； 水 硫 酸 钠 （ 析 纯 ，４ Ｃ灼 烧 ４ ｈ ； 无 分 ６０ ｏ 后 ， 于密 闭容 器 中备 用 ） 酸化 乙腈 ： 贮 ； 乙腈 ＋ ０ 盐 ５％
关键词 ： 高效液相色谱 ； 水产 品； 氟喹诺 酮类药物 ； 留 残
中 国 分 类 号 ：９ ｓ４ 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ５—１３ （０ ２ ０ ０ ８ ０ ２９ ８３ ２ １ ）２— ０ ４— ５
高效液相色谱法检测多种动物组织中氟喹诺酮类药物残留量的研究
量 限为 １ ｇｋ ， ／ ｇ 在肝脏 、 肾脏组 织 中的定量 限为 ２ ｇｋ 。在 指定 的三个 浓度 添加 水平 下 ， 药物 ／ｇ ５种 在 各 组 织 中的平 均 回收 率 为 ６ ２％ ～１３％ ； 内 变异 系 数 为 ０ ３ ０ 批 ． ０％ 一１ ８％ ， 间 变 异 系数 为 批 １０％ 一１ 。该 方法操作简单 ， 确度 和精 密度好 ， ． ７％ 准 动物 品种及 动物组织覆盖 范围广 ， 以很好 地满 可
ｄ ｆ ｘ ｃ ｎ ｉ ｓ ｌ ，ｆｔ ｉｅ ｎ ｉ ｎ ｙ ｏ ｗ ｎ ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｍｕ ｃ ｅ ａ ，ｌ ｒ ａ ｄ ｋ ｄ ｅ ｆ ｓ ｉ ｅ，ｃ ｉｋ ｎ ｃ ｔ ｅ，ｓ ｅ ｐ ａ ｄ ｒｂ ｉ ｂ ｅ ｅ ｅｏ ｅ ． Ｔ ｅ ｌ ｖ ｈｃ ｅ ， ａｔ ｌ ｈ ｅ ｎ ａ ｂｔ ｅ ｎ ｄ ｖ ｌ ｐ ｄ ｈ ａ ａｙ ｅ ｅ ｅ ｅ ｔ ｃ ｅ ｔ ｈ ｓ ｈ ｔ ｏｕ ｉｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｓ ｐ ｒ ａａ ｔｏ ｈ ｘ ｒ ｃ ｓ ａ ｐ ｉ ｄ ｏ ｔ ｏｉ ｎ ｔｓ ｗ ｒ ｘｒ ｔｄ ｗｉ ｐ ｏ ｐ ａｅ ｓ ｌ ｔ ｈ ｕ ｅ ｎ ｔ ｎ ｆ ｔ ｅ ｅ ｔ ｔｗａ ｐ ｌ ｎ ｏ ａ Ｃ１ ｓ ｌ ｌ ａ ｈ ｏ ｎ ａ ｅ ８ ｄ ｐ ａ ｅ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｃ ｌ ｍｎ ｆｒｃ ｅ ｎ—ｕ ．Ｔ ｅ ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ｗａ ｃ ｉｖ ｄ ｂ Ｌ ｈ ｓ ｘｒ ｃ ｉ ｏｕ ｌａ ｏ ｏ ｐ ｈ ｅ ａ ａｉ ｓ ａ ｈ ｅ ｅ ｙ ＨＰ Ｃ，ａ ｄ ｔ ｅ ｄ ｔｃ ｉｎ ｗａ ｅ ｆｒ ｅ ｏ ｎ ｈ ｅｅ ｔ ｓ ｐ ｒｏ ｏ ｍ ｄ ｗｉ ｕ ｒ ｓ ｅ ｃ ｅｅ ｔ ｒ Ｔ ｅ ｃ ｌ ｒ ｔ ｎ ｃ ｒ ｅ ｈ ｗ ｄ ｎ ａ ｌ ｅ ｆ ｃ ｉ ｅ ｒｔ ｅｗ ｅ ｈ ｅ ｋ ａ ｅ ｓ ａ ｄ ｔ ａ ｆ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｄ ｔ ｃｏ ． ｈ ａｉ ａｉ ｕ ｖ ｓ ｓ ｏ ｅ ｅ ｒ ｐ ｒ ｔ ｌ ａ ｉ ｂ ｔ ｅ ｎ ｔ ｅ ｐ ａ ａ ｎ ｈ ｌ ｂ ｏ ｙ ｅ ｎ ｙ ｒ
液相色谱-荧光法测定饲料中氟喹诺酮类药物
４ ３
检测分析
Ｄ ａｎ ｄ ｙ ｍｒ ｔ ￣ ｉ ， ｉａ Ａｄ ｓ ， 。ｎ ｎ ｓ ｆ
液祖 色谱 一荧光 法测 定饲 料中 氟喹 诺酮 类药 物
贾 涛
摘
要 ：本 文 以高 效 液 相 色 谱 一 光 法 检 测 饲 料 中 的 荧
１ 磷 酸二 氢钾 ： ． ７
１ ５０ ｌ ． ． ／ 氧化钠 溶 液 ：移 取氢 氧化 钠饱 合 ８ ｍ０ Ｌ氢
溶 液 ２ ｍ 加水稀 释 至 １ ０ 。 ８ Ｌ。 ０ ｍＬ 摇匀 ； １ ００ ｍｏ Ｌ氢 氧化 钠 溶液 ： 取 ５０ ｌ ． ． ９ ３ ｌ ／ 移 ． ／ ｍｏ Ｌ氢 氧 化 钠溶 液 （ ．） ． ， １ ０６ ８ ｍＬ 加水 稀 释至 １０ ， 匀 ； ０ ｍＬ 摇 １１ ００ ｍ １ ．０ ．５ ｏ Ｌ磷 酸 一 乙胺 溶 液 ：移 取 磷 酸 ／ 三 （ ．）．ｍ 用 水稀 释至 １０ ０ Ｌ 用 三 乙胺 （ ．） １ ３ Ｌ， ２ ４ ０ ｍ ， １ ６ 调节 ｐ Ｈ值＝ ．： ２４ １１ 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 ：称 取 磷 酸 二 氢 钾 （ ．） ．１ １ ７ ６８ ， 水使 溶解 并 稀 释 至 ５ ０ Ｌ， ５ ｍ ｌ ． 加 ｇ ０ ｍ 用 ． ｏ Ｌ氢 ０ ／ 氧 化钠 调节 ｐ 值＝ ．： Ｈ ７ ０
１ ． 环丙 沙星 对 照品 ， ．３ １ 含量 Ｉ９ ．％； ＞ ９ ０ １ ． 沙拉 沙星 对 照品 ． ．４ １ 含量 Ｉ９ ．％。 ＞ ９ ０
检 测 器 测 定 ． 发 波 长 ２ ０ ｍ． 射 波 长 ４ ０ ｍ 处 测 定 其 激 ８ｎ 发 ５ｎ 吸光度 ． 同条 件 下测 定氟 喹 诺 酮 类 药 物 标 准 品 相 对 应 的 峰
高效液相色谱法同时测定水产品中四种氟喹诺酮类药物残留前处理条件的优化
将 固相萃取柱依次用 ３ ． ０ ｍ Ｌ甲醇和 ３ ． ０ ｍ Ｌ四
丁基 溴化 铵缓 冲液 （ ７ ． ０ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ， Ｄ Ｈ １ ． ０ ） 活化 ， 取２ ． ０
氟 喹诺 酮类 化合 物分 离情 况 。 １ ． ４ ． ５ 药 物 标 准 线 性 范 围 和定 量 限 的确 定 采 用 氧氟 沙 星 、 诺 氟沙 星 、 恩诺 沙 星 和环 丙 沙 星 ４种 药 物 的标 准 品 ，配 制 ０ ． ０ ０ ２ 、 ０ ． ０ ０ ５ 、 ０ ． ０ ２ ５ 、 ０ ． ０ ５ 、 ０ ． ５ ｇ ／
ｍ Ｌ甲醇 （ ５ ％） 溶 液淋 洗 。３ ． ０ ｍ Ｌ甲醇洗 脱 ， 收集 洗 脱 液 于玻 璃试 管 中 ， ５ ０℃氮气 吹干 ， １ ． ０ ｍＬ流 动 相
采用 ４套 不 同实 验 方 案 ， 通过改变活化 、 淋 洗
表 １ 前处理中固相萃取过程的优化
和洗脱时的不同试剂的选择及 Ｄ Ｈ值 １ ７的改变 ， 确定前 处 理 中固相 萃取 过程 的优 化条 件 （ 表 １ ） ， 并 比较其 样 品 回收率情 况 。 １ ． ４ ． ４ 色谱分离 条件的优化流动相 ｐ Ｈ值 、 水相缓 冲液 浓度 、 有机 相 与水 相 比例 及 不 同的 流动 相体 系 分别为 ： ０ ． ０ ５ ｍ ｏ ｌ ／ ｍ Ｌ柠檬 酸 乙 酸铵缓 冲液 （ ｐ Ｈ ３ ． ５ ）
＋乙腈 ＝１ ６＋８ ４ ，四丁基 溴化铵 溶 液 ＋乙腈 ＝９ ４
个 添加浓 度 的 回收 率和精 密度 试验 。
２ 结果
左氧氟沙星原料及其制剂利用高效液相色谱法测定的有关物质
左氧氟沙星原料及其制剂利用高效液相色谱法测定的有关物质左氧氟沙星为第三代氟喹诺酮类抗生素，具有光谱抗菌的作用，在临床上有广泛的应用，本文采用高效液相色谱法对其原料和制剂中的杂质进行测定，详细阐述了实验过程中的检测方法。
标签：左氧氟沙星原料及其制剂；高效液相色谱法；测定一左氧氟沙星简介左氧氟沙星是喹诺酮类药物中的一种，为第三代氟喹诺酮类抗生素，是氧氟沙星的左旋异构体，其体外抗菌活性约为氧氟沙星的两倍，具有广谱抗菌作用，抗菌作用强，它是通过抑制细菌DNA旋转酶的活性，阻止细菌DNA的合成和复制而导致细菌死亡。
自1993年在日本上市以来，在呼吸道感染、泌尿生殖系感染和皮肤软组织感染等方面取得很好的治疗效果，对治疗急性和慢性下呼吸道感染的有效率达到了80%-100%，对于妇产科、耳鼻喉科等感染的有效率到达90%以上，其药物的治疗效果非常好。
二高效液相色谱法简介及特点1、高效液相色谱法简介高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，又称为“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等。
它的测定方法是将单一溶剂或混合溶剂、缓冲液等液体作为流动相，将其泵入色谱柱，柱内的固定相和流动相的成分被分离后，通过检测器进行检测，对样品进行分析的过程。
这种方法被普遍用于化工、医药、食品、环境等领域，成为重要的分析手段。
2、高效液相色谱法特点①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。
可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μl数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
高效液相色谱法快速测定鸡蛋中5种氟喹诺酮类药物残留
高效液相色谱法快速测定鸡蛋中5种氟喹诺酮类药物残留王成真;刘戎;张嘉慧;沈祥广;杜小溪;匡徐;冯可莹【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2018(037)005【摘要】建立了一种检测鸡蛋中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、二氟沙星及沙拉沙星残留的高效液相色谱方法.该方法前处理简便快速,样品经低浓度乙腈结合加热促使蛋白质快速沉淀,正己烷脱脂,分离清液后进高效液相色谱仪分析.流动相为0.05 mol/L磷酸/三乙胺溶液-乙腈溶液(80:20),荧光检测器的激发波长为280 nm,发射波长为450 nm.该方法对环丙沙星和二氟沙星的定量下限为5μg/kg,达氟沙星的定量下限为0.5μg/kg,恩诺沙星的定量下限为2.5μg/kg,沙拉沙星的定量下限为10 μg/kg.在定量下限及低、中、高4种加标浓度下,5种氟喹诺酮类药物的平均回收率为92.2％～ 107.1％,批内相对标准偏差(RSD)为0.6％～ 5.8％,批间相对标准偏差为1.5％～ 5.0％.方法具有前处理简单、环保、快捷、准确度和灵敏度高等优点,适合生产线和流通环节鸡蛋样品的快速检测.【总页数】6页(P615-620)【作者】王成真;刘戎;张嘉慧;沈祥广;杜小溪;匡徐;冯可莹【作者单位】华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;华南农业大学兽医学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】O657.72;TQ460.72【相关文献】1.超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留 [J], 孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文峰2.优化超高效液相色谱法对鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测 [J], 李宁;林小莉;董艳峰3.UPLC-MS/MS法测定鸡蛋、鸡肉中4种氟喹诺酮类药物残留 [J], 门婷婷;刘晨;刘珂飞4.LC-MS/MS法测定鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留 [J], 张昕; 屈俊成; 王丹; 左英芳; 张慧利5.高效液相色谱法测定鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量前处理方法的优化 [J], 陈蔷;达列亚·阿合买提;张崇威;司慧民;张磊;宋志超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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试剂和材料
16．达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准储备液：分别去达氟沙 星对照品约 10mg，恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约 50mg，精密称定， 用 0.03mol/L 氢 氧 化 钠 溶 液 溶 解 并 稀 释 成 浓 度 为 0.2mg/mL （ 达 氟 沙 星 ） 和 1mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星）的标准储备液。置2℃-8℃冰箱中保 存，有效期为3个月。
测定步骤
5．测定 （1）色谱条件 a)色谱柱：C18 250mm×4.6mm，粒径5μ m，或相当者。 b) 流动相： 0.05mol/L 磷酸溶液 / 三乙胺 - 乙腈（ 82+18 ， V/V ） , 使用前经微孔滤 膜过滤。 c)流速：0.8mL/min。 d)检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm。 e）柱温：室温。 f）进样量：20μ L。
测定步骤
（2）测定法 取试样溶液和相应的对照溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。对照 溶液及试样溶液由达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星响应值均应在仪器检
测的线性范围内。在上述色谱条件下，对照溶液和试样溶液的高效液相色谱图。
（六）空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
仪器和设备
6．离心机。 7．匀浆杯：30mL。
8．离心管：50mL。
9．固相萃取柱：C18柱。 10．微孔滤膜（0.45um）。
测定步骤
1. 试样的制备
（1）取绞碎后的供试样品，做为供试试料。 （2）取绞碎后的空白样品，做为空白试料。 （3）取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的对照溶液，作为空白添加 试料。
2．恩诺沙星：含恩诺沙星不得少于99.0%。
3．环丙沙星：含环丙沙星不得少于99.0。
试剂和材料
6．氢氧化钠。 7．乙腈：色谱纯。 8．甲醇。 9．三乙胺。 10．磷酸二氢钾。 11．5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液 28mL，加水稀释至100mL。
3．净化
固相萃取柱依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过
柱，用水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经
滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。
测定步骤
4．标准曲线的制备 准确量取适量达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液， 用流动相稀释成浓度分别为 0.005μ g/mL 、 0.01μ g/mL 、 0.05μ g/mL 、 0.1μ g/mL 、 0.3μ g/mL 、 0.5μ g/mL 的对照溶液，供高效液相色谱分析。
氟喹诺酮类药物检测方法
高效液相色谱法
兽药残留检测
原理
用磷酸缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。以磷 酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水符合
GB/T6682规定的二级水。
1．达氟沙星：含达氟沙星不得少于99.0%。
（七）结果计算和表述
按下式计算试料中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量。
测定步骤
式中： X——试料中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量，单位为 （ng/g）； A——试样溶液中相应药物的峰面积； AS——对照溶液中相应药物的峰面积； CS——对照溶液中相应药物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V1——提取用磷酸盐缓冲液的总体积，单位为毫升（mL）； V2——过C18固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升（mL）； V3——洗脱用流动相体积，单位为毫升； M——供试试料的质量，单位为（g）。
试剂和材料
12．0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5.0mol/L氢氧化钠溶液0.6mL，加水稀释至 100mL。 13 ． 0.05mol/L 磷酸 / 三乙胺溶液：取浓磷酸 3.4mL ，用水稀释至 1000mL 。用三 乙胺调pH至2.4。 14 ． 磷 酸 缓 冲 溶 液 ： 取 磷 酸 二 氢 钾 6.8g ， 加 水 使 溶 解 并 稀 释 至 500mL ， 用 5.0mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0。 15．磷酸盐溶液：取磷酸二氢钾 6.8g，加水溶解并稀释至500mL，pH为4.0-5.0。
17．达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液：准确量取适量标
准储备液用乙腈稀释成适宜浓度的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星 标准工作液。置2℃-8℃冰箱中保存，有效期为1周。
仪器和设备
1．高效液相色谱仪。
2．天平：感量0.01g。 3．分析天平：感量0.00001g。 4．振荡器。 5．组织匀浆机。
测定步骤
2．提取 取 （ 2±0.05g ） 试 料 ， 置 30mL 匀 浆 杯 中 ， 加 磷 酸 缓 冲 溶 液 10.0mL ，
10000r/min匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌
肉 、 脂 肪 10000r/min 5min ； 肝 、 肾 15000r/min ， 5min ； 肝 、 肾 15000r/min 10min）。合并两次上清液，混匀，备用。