HPLC法测定饲料中维生素A_维生素D_3和维生素E(精)

HP LC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E

摘要:建立了以w (C 2H 5OH =95%乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280n m 和254n m 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18(25c m ×416mm ×5μm ,流动相为甲醇水,流速为112mL /m in 。维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在110mg/L ~2010mg/L 、015mg/L ~15.0mg/L 、

215mg/L ~5010mg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为013×10

-6

μg 、0104×10-6

μg 、

510×10-6μg,相对标准偏差分别为116%、217%、214%,平均回收率分别为99%、102%、98%。

关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素D 3;维生素E;饲料

中图分类号:O65717+2文献标识码:B 文章编

号:10062009(200502003302

To D etect V itam i n A,V it am i n D 3and V it am i n E i n Feed w ith HPLC

(Changsha Environm ental P rotection Technology Institute,Changsha,Hunan 410004,China

Abstract:To detect V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E in feed,which t o directly extract with

w (C 2H 5OH =95%glycollic,with HP LC in 280n m and 254n m.Chr o mat ographic colu mn was Hy persil ODS

C 18(25c m ×

4.6mm ×5μm ,mobile phase was methanol -water,vel ocity of fl ow was 1.2mL /m in .W hen the mass concentrati on of V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E was 1.0mg/L ~20.0mg/L 、0.5mg/L ~1

5.0mg/L 、

2.5mg/L ~50.0mg/L,there had a well lineal relati onshi p.Detecti on li m it was

0.3×10-6

μg 、0.04×10-6μg 、5.0×10-6

μg

.Relative standard deviati on was 1.6%、2.7%、2.4%,recovery rate was 99%、102%、98%.Key words:HP LC;V ita m in A;V ita m in D 3;V ita m in E;Feed

收稿日期:20040323;修订日期:20050130

作者简介:王安群(1962—,女,江西吉安人,高级工程师,学士,从事环境监测教学工作。

维生素是维持机体正常活动必不可少的物质,适量的各种维生素作为饲料添加剂能促进禽畜生长,增强禽畜体质,产生显著的经济效益。目前常采用分光光度法

[1]

或皂化后用乙醚、石油醚[2]

、丙酮、正己烷[3,4]

提取再用高效液相色谱法(HP LC

测定脂溶性维生素A 、维生素D 3、维生素E,手续较为繁琐。今在多年的分

析检测基础上,参阅文献[5],建立了一种快速简便的测定方法。1实验

111主要仪器和试剂

W aters 244高效液相色谱仪,美国W aters 公

司,配2487紫外检测器和江申色谱工作站;依利特Hypersil ODS C 18色谱柱,25c m ×416mm ×5μm ,大连中科院化物所;溶剂及试样过滤处理系统,M illi pore 产;维生素A 、维生素D 3、维生素E,E mer 2ck 产;实验用水为去离子水经0145μm 滤膜过滤。112色谱条件

柱温室温;流动相V (甲醇∶V (水=98∶2,流量112mL /m in;紫外检测器,

波长维生素A 、维生素E 为280n m ,维生素D 3为254n m;灵敏度

015~0105AUFS 。

113样品预处理和测定

称取012g ~2g 样品(多维样品称012g,预混

料视含量为015g ~2g ,加入w (C 2H 5OH =90%乙醇5mL,浸泡10m in,再补加无水乙醇5mL,于超声波发生器中超声提取30m in,用

0145μm 滤膜过滤,在给定色谱条件下测定。维生

素A 、维生素D 3、维生素E 色谱峰见图1。

维生素D 3、维生素E 的提取率均达到了96%以

上。同时,还进行了w (C 2H 5OH =100%、w (C 2H 5OH =95%和w (C 2H 5OH =90%乙醇的提取实验,w (C 2H 5OH =100%乙醇超声提取30m in,维生素A 、维生素D 3提取率约为50%和70%;w (C 2H 5OH =90%乙醇提取,维生素D 3有明显降解,维生素E 峰有拖尾现象;w (C 2H 5OH =95%乙醇提取,维生素D 3稍有降解。在提取过程

中,加入维生素C 011g,可防止维生素A 、维生素D 3的降解。

图1维生素A、维生素D

3

、维生素E色谱峰

2结果与讨论

211流动相的选择