感染性疾病的分子诊断PPT课件
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感染性疾病的诊断与治疗指南ppt课件
强调国际间在感染性疾病防控领域的合作与交流的重要性，共 同应对全球性的卫生挑战。
探讨新技术、新方法在感染性疾病防控领域的应用，如基因编 辑、疫苗研发等，提高防控工作的效率与效果。
加强感染性疾病防控知识的普及与宣传，提高公众的防控意识 和能力。
THANK YOU
感谢聆听
疫苗接种
通过接种疫苗来预防疾病的发生，提高人群的免 疫水平。
个人防护
加强个人卫生习惯，如勤洗手、戴口罩、避免接 触患者等，减少感染风险。
传染病测
建立健全的传染病监测体系，及时发现、报告和 控制疫情。
环境卫生
改善环境卫生条件，减少病原体在环境中的传播 。
感染性疾病与公共卫生
传播方式
介绍感染性疾病的传播方式，包 括空气传播、飞沫传播、接触传 播等，以及不同传播方式的防控
分类
感染性疾病可根据病原体种类、传播方式、发病部位等多种方式 进行分类，如细菌感染、病毒感染、呼吸道感染等。
感染性疾病的流行病学特征
传染源和传播途径
感染性疾病的传染源可以是患者、带菌者、动物等 ，传播途径包括空气飞沫传播、食物和水传播、接 触传播等。
易感人群
不同年龄段、职业、地域的人群对不同的感染性疾 病有不同的易感性。
对症治疗
疼痛管理
对于感染引起的疼痛，采 用合适的镇痛药物进行疼 痛缓解，提高患者的舒适 度。
退热处理
对于发热症状，采用解热 药物或物理降温方法，帮 助患者降低体温，缓解热 感不适。
维持水电解质平衡
对于感染引起的代谢紊乱 ，及时纠正水电解质平衡 紊乱，保持内环境稳定。
免疫治疗
免疫增强剂
使用免疫增强剂，增强患者的免 疫功能，提高机体对病原体的抵
实验室诊断方法
探讨新技术、新方法在感染性疾病防控领域的应用，如基因编 辑、疫苗研发等，提高防控工作的效率与效果。
加强感染性疾病防控知识的普及与宣传，提高公众的防控意识 和能力。
THANK YOU
感谢聆听
疫苗接种
通过接种疫苗来预防疾病的发生，提高人群的免 疫水平。
个人防护
加强个人卫生习惯，如勤洗手、戴口罩、避免接 触患者等，减少感染风险。
传染病测
建立健全的传染病监测体系，及时发现、报告和 控制疫情。
环境卫生
改善环境卫生条件，减少病原体在环境中的传播 。
感染性疾病与公共卫生
传播方式
介绍感染性疾病的传播方式，包 括空气传播、飞沫传播、接触传 播等，以及不同传播方式的防控
分类
感染性疾病可根据病原体种类、传播方式、发病部位等多种方式 进行分类，如细菌感染、病毒感染、呼吸道感染等。
感染性疾病的流行病学特征
传染源和传播途径
感染性疾病的传染源可以是患者、带菌者、动物等 ，传播途径包括空气飞沫传播、食物和水传播、接 触传播等。
易感人群
不同年龄段、职业、地域的人群对不同的感染性疾 病有不同的易感性。
对症治疗
疼痛管理
对于感染引起的疼痛，采 用合适的镇痛药物进行疼 痛缓解，提高患者的舒适 度。
退热处理
对于发热症状，采用解热 药物或物理降温方法，帮 助患者降低体温，缓解热 感不适。
维持水电解质平衡
对于感染引起的代谢紊乱 ，及时纠正水电解质平衡 紊乱，保持内环境稳定。
免疫治疗
免疫增强剂
使用免疫增强剂，增强患者的免 疫功能，提高机体对病原体的抵
实验室诊断方法
感染性疾病的分子诊断ppt课件
• 用于感染性疾病治疗的监控和预测、病 情发展过程的危险性评价及疾病预后等。 • 耐药性的检测 • 细菌的分型 • 流行病调查
17
第一节 病毒的基因检测
人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒性肝
炎、脑炎、流行性感冒等等，占人类传染疾
病的75%左右。400多种不同病毒。
病毒结构：大 小：20-300nm
15
3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相 关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样 本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。 4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不 能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群
16
五、感染性疾病分子诊断 的临床应用及评价
5' 3'
引物B
图8-3
NASBA原理示意图
11
nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)
12
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
19
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAPol
完整的乙肝病毒颗粒直径42纳米 20 由双层外壳和一个核心组成的，核心直径为27纳米， 内含DNA双链和DNA多聚酶
（一）病毒基因组结构
• 3.2kb双链DNA病毒 • 不完全双连环状DNA 长链L为负链：有4个开放阅读框S、C、P、X S区编码外膜蛋白（HBsAg） C区编码HBeAg 、HBcAg p区编码DNA聚合酶 X区位编码X蛋白，可能与病毒蛋白表 达有关。 21 短链S为正链：长短不一
17
第一节 病毒的基因检测
人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒性肝
炎、脑炎、流行性感冒等等，占人类传染疾
病的75%左右。400多种不同病毒。
病毒结构：大 小：20-300nm
15
3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相 关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样 本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。 4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不 能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群
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五、感染性疾病分子诊断 的临床应用及评价
5' 3'
引物B
图8-3
NASBA原理示意图
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nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)
12
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
19
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAPol
完整的乙肝病毒颗粒直径42纳米 20 由双层外壳和一个核心组成的，核心直径为27纳米， 内含DNA双链和DNA多聚酶
（一）病毒基因组结构
• 3.2kb双链DNA病毒 • 不完全双连环状DNA 长链L为负链：有4个开放阅读框S、C、P、X S区编码外膜蛋白（HBsAg） C区编码HBeAg 、HBcAg p区编码DNA聚合酶 X区位编码X蛋白，可能与病毒蛋白表 达有关。 21 短链S为正链：长短不一
感染性疾病的分子诊断课件
包膜（envelope） 刺突（spike）
核酸（nucleic acid）
DNA or RNA
衣壳（capsid）
衣壳粒
蛋白质衣壳 核酸
17
第一节 病毒的基因检测
检测病毒的方法
血清学检测 病毒分离鉴定（诊断的金标准） PCR技术（检出率最高）
18
第一节 病毒的基因检测
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV
10
感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原体：衣原体、螺旋体、病毒、细菌、真菌、原虫、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生
11
感染后果（转归）
病原体被清除 ------ 通过非特异性或特异性免疫 隐性感染 ------ 是感染过程中最常见的类型 显性感染（临床感染） ------ 感染致病，慢性感染引起炎症 潜伏性感染
基因病的分子诊断
Molecular diagnosis for genic diseases
1
基因病概念
1975年，Dulbecco 提出：人类的DNA序列 是人类的真谛，包括癌症在内的人类疾病的 发生都与基因直接或间接有关
1978年，Susumu Tinegawa：从人类所有的 疾病都与基因受损有关的角度出发，提出了 人类疾病新概念——基因病（genic disease）
复杂性（多因素）疾病，诸如：肿瘤、心脑血管 疾病、代谢病、神经系统疾病、自身免疫性疾病 等等
核酸（nucleic acid）
DNA or RNA
衣壳（capsid）
衣壳粒
蛋白质衣壳 核酸
17
第一节 病毒的基因检测
检测病毒的方法
血清学检测 病毒分离鉴定（诊断的金标准） PCR技术（检出率最高）
18
第一节 病毒的基因检测
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV
10
感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原体：衣原体、螺旋体、病毒、细菌、真菌、原虫、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生
11
感染后果（转归）
病原体被清除 ------ 通过非特异性或特异性免疫 隐性感染 ------ 是感染过程中最常见的类型 显性感染（临床感染） ------ 感染致病，慢性感染引起炎症 潜伏性感染
基因病的分子诊断
Molecular diagnosis for genic diseases
1
基因病概念
1975年，Dulbecco 提出：人类的DNA序列 是人类的真谛，包括癌症在内的人类疾病的 发生都与基因直接或间接有关
1978年，Susumu Tinegawa：从人类所有的 疾病都与基因受损有关的角度出发，提出了 人类疾病新概念——基因病（genic disease）
复杂性（多因素）疾病，诸如：肿瘤、心脑血管 疾病、代谢病、神经系统疾病、自身免疫性疾病 等等
感染性疾病实验诊断ppt课件
组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本，进行病理学检查，观察组织结构和 细胞形态的变化，从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病，如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化，有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样，包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担，对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段，通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ，为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况，有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长，需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体，间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
THANKS
感谢观看
优化检测流程
对检测流程进行优化，减 少操作环节和时间，降低 误差率，提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ，确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系，确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准，及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测
《分子诊断技术》课件
2010年代至今
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
感染性疾病的分子诊断PPT课件
精选ppt
7
引物A 5’端带
5' 引物A
有T7RNA聚
3'
合酶结合位点， 5'
3’端碱基与靶 3'
RNA 3’端序
5'
列互补;引物B
的碱基序列与
5'
cDNA 3’端序
3'
列互补
T7RNA聚合酶
5'
3'
5' 靶RNA
RT RNAseH
3' cDNA 5' RNA
3' cDNA
RT
引物B
3' cDNA模板
5'
引物A 5'
3'
5'
100-1000 RNA扩增子
3'
5'
3'RNA
5' 3'
引物B
RNAseH
5' cDNA
3' RNA 5' cDNA
图8-3 NASBA原理示意图
精选ppt
11
nucleic acid sequence-b精as选epdptamplification (NASBA)
12
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
核心区：核酸（DNA或RNA）
外周衣壳：蛋白质
包膜：脂质（镶嵌有蛋白质）
精选ppt
18
一、 乙型肝炎病毒
我国是HBV高流行区，50%－70%的人
受过感染，8%－10%是HBV携带者，肝
《医学分子诊断》课件
诊断原理
分子诊断基于检测和分析样本中的生物分子，如DNA、RNA和蛋白质，以确定疾病的存在、类型和进展程度。
常见的分子诊断方法
1 聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增目标DNA段，从而检测和识别基因变异和感染病原体。
2 基因测序
通过读取DNA序列，揭示基因突变、致病基因和个体遗传信息。
3 蛋白质组学
《医学分子诊断》PPT课 件
欢迎来到《医学分子诊断》PPT课件! 在这个课件中，我们将深入探讨包括研 究目的、诊断原理、常见的分子诊断方法、分子诊断在临床中的应用、分子 诊断的优势和挑战、未来发展方向以及总结等内容。
研究目的
我们的研究目的是探索如何利用分子诊断技术提高疾病的早期检测和诊断准 确性，为患者提供更好的治疗方案。
分子诊断的优势和挑战
1
优势
早期检测和诊断、个体化治疗、快速结果、高敏感性和特异性、广泛应用于临床 实践。
2
挑战
技术复杂性、标准化和质量控制、高成本、信息处理和隐私问题、临床实践中的 应用限制。
未来发展方向
未来的分子诊断将更加便携、快速、准确和个体化，结合人工智能和大数据 分析，推动医学进步和健康管理的革新。
总结
分子诊断作为一项重要的医学技术，正在为疾病的早期检测和个体化治疗提 供无限可能。通过不断的研究和发展，我们可以期待更加精准、有效和可靠 的分子诊断技术的出现。
通过分析样本中的蛋白质组成和表达水平，为疾病的诊断和治疗提供重要信息。
分子诊断在临床中应用
癌症诊断
通过检测肿瘤标志物和肿瘤细 胞的分子变化，实现早期癌症 的检测和个体化治疗。
遗传病筛查
通过检测患者的基因序列，提 前发现遗传病风险，为家庭计 划和婴儿出生前干预提供依据。
感染性疾病ppt课件
流行病学特征与影响
疾病的传播方式
描述感染性疾病的主要传播方式，如
接触传播、空气传播、食物传播等。 01
预防措施的必要性
阐述采取预防措施对于减少疾病传播
和控制感染性疾病流行的重要性。
03
疾病的影响范围
介绍感染性疾病对社会、经济和公共
卫生的广泛影响，强调防控的重要性。 02
公共卫生干预与防控
疾病预防控制
感染性疾病可分为细菌性感染、病毒性感染、 立克次体感染、支原体感染、衣原体感染、
真菌感染、寄生虫感染等多种类型。
感染途径与传播方式
01
接触传播
病原体通过直接或间接接触传播，如握手、拥抱、共用餐具等。
02
飞沫传播
病原体通过飞沫传播，如咳嗽、打喷嚏、谈话时产生的飞沫。
03
空气传播
病原体通过空气传播，如悬浮在空气中的微小颗粒或气溶胶。
针对感染性疾病的流行病学特点，制定科学的预防控制措 施，如疫苗接种、疫情监测等。
健康教育与宣传
通过广泛的健康教育和宣传，提高公众对感染性疾病的认 识和防控意识，促进健康行为。
社会参与与协作
动员社会各界参与感染性疾病的防控工作，形成全社会共 同参与的防控格局。
感染性疾病与全球健康
全球健康威胁
感染性疾病是全球健康的主要 威胁之一，对全球公共卫生造 成严重影响。
病情监测与护理
病情观察与 记录
通过监测患者生命 体征、症状和体征 变化，记录病情变 化，及时调整治疗 方案。
护理措施
采取适当的护理措 施，如保持病房清 洁、消毒、隔离等， 减少感染传播风险。
营养与心理 支持
提供适当的营养支 持和心理支持，增 强患者免疫力和治 疗信心，促进康复。
感染性疾病的分子诊断 ppt课件
感染性疾病的分子诊断
Molecular diagnosis for infectious diseases
感染的慨念
感染是病原体和宿主之间的相互作用过程 病原体：病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体、螺旋体、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
精品资料
扩增片段大小(bp) 278
477
Ｃ基因特异 5’-GCTTTGGGGCATGGACATTGACCCCTATAA-3’
258
片段
5’-ATGGGATCCCTGGATGCTGGGTCTTCCAAA-3’
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
1．样本处理（样本处理区） 2．核酸扩增
UNG
用量
17.8ul
0.2ul
0.03ul
计算好各试剂的用量，加入一适当体积试管中，充分混合均匀，向 设定的n个Roche毛细管中分别加入18ul，转移至样本处理区
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
2. 2 加样（样本处理区）
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
感染后果（转归）
方向、尽可能吸弃上清且不碰沉淀] 再加入25ul DNA提取液2，振荡10sec [沉淀需打散、混匀] 2,000rpm离心10 sec，100℃干浴或沸水浴10min 13,000rpm离心10min，保留上清备用. （如果样本裂解产物当天不使用，则要保存在-20℃）
Molecular diagnosis for infectious diseases
感染的慨念
感染是病原体和宿主之间的相互作用过程 病原体：病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体、螺旋体、寄生虫 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
精品资料
扩增片段大小(bp) 278
477
Ｃ基因特异 5’-GCTTTGGGGCATGGACATTGACCCCTATAA-3’
258
片段
5’-ATGGGATCCCTGGATGCTGGGTCTTCCAAA-3’
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
1．样本处理（样本处理区） 2．核酸扩增
UNG
用量
17.8ul
0.2ul
0.03ul
计算好各试剂的用量，加入一适当体积试管中，充分混合均匀，向 设定的n个Roche毛细管中分别加入18ul，转移至样本处理区
HBV DNA FQ-PCR（real time PCR）
2. 2 加样（样本处理区）
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
感染后果（转归）
方向、尽可能吸弃上清且不碰沉淀] 再加入25ul DNA提取液2，振荡10sec [沉淀需打散、混匀] 2,000rpm离心10 sec，100℃干浴或沸水浴10min 13,000rpm离心10min，保留上清备用. （如果样本裂解产物当天不使用，则要保存在-20℃）
分子诊断学--绪论、感染性疾病的分子诊断 ppt课件
ppt课件 39
ppt课件
40
2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学 研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段 长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规 和实时定量PCR技术。
( on April 10, 2003）
ppt课件 18
2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
ppt课件
19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
ppt课件
9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
ppt课件
10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
ppt课件
ppt课件
40
2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学 研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段 长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规 和实时定量PCR技术。
( on April 10, 2003）
ppt课件 18
2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
ppt课件
19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
ppt课件
9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
ppt课件
10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
ppt课件
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疫
IgD IgE 与原虫和蠕虫感染有关
精品课件
6
二、感染性疾病分子诊断 的常用方法
根据目的基因是否被放大， 可分为杂交法和扩增法。 • 信号放大技术检测方法
靶分子数目不变，而检测的探针信号放大 采用多酶、多探针或二者结合等方法来增加探针标志 物的浓度使检测信号得到放大。 • 靶分子扩增技术检测方法 靶分子（RNA、DNA或探针）的扩增 • PCR、替代扩增、LCR等
• 完整性策略：
– 检出病原体 – 分型（分类）－亚型－耐药性 – 常用方法：杂交、PCR、基因芯片、DNA测序
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5
感染性疾病分子诊断标志物
• 病原体核酸分子（DNA/RNA）
• 基因表达产物
• 代谢物
• 免疫应答分子 细
致敏T细胞
胞 免
T
T
疫
淋巴因子
体
IgM 感染早期出现
液 免
B
浆细胞
IgG 临近恢复期出现 IgA
pre-c X
P
pre-S1
pre-S2
S
pre-C
C
P
X
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pre-S1蛋白 pre-S2蛋白 HBsAg HBeAg HBcAg DNAP HBxAg
22
HBV 基因分型
• HBV基因序列差异的多少，可将HBV划分为不同的基因 型，至今为止已发现A、B、C、D、E、F、G、H共8种基 因型：
5'
引物A 5'
3'
5'
100-1000 RNA扩增子
3'
5'
3'RNA
5' 3'
引物B
RNAseH
5' cDNA
3' RNA 5' cDNA
图8-3 NASBA原精理品课示件意图
11
nucleic acid sequence-b精a品se课d件amplification (NASBA)
12
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
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7
引物A 5’端带 有T7RNA聚
5' 引物A 3'
合酶结合位点， 5'
3’端碱基与靶 3'
RNA 3’端序
5'
列互补;引物B
的碱基序列与
5'
cDNA 3’端序
3'
列互补
T7RNA聚合酶
5'
3'
5' 靶RNA
RT RNAseH
3' cDNA 5' RNA
3' cDNA
RT
引物B
3' cDNA模板
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引物A 5’端带 有T7RNA聚
5' 引物A 3'
合酶结合位点， 5'
3’端碱基与靶 3'
RNA 3’端序
5'
列互补;引物B
的碱基序列与
5'
cDNA 3’端序
3'
列互补
T7RNA聚合酶
5'
3'
5' 靶RNA
RT RNAseH
3' cDNA 5' RNA
3' cDNA
RT
引物B
3' cDNA模板
病原体：病毒、细菌、原虫、支原 体、衣原体、立克次体、螺旋体、
寄生虫
。
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3
常规检测方法：
•
免疫学方法
•
微生物学方法
受敏感性、特异性限制，不易早期诊断，
并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信 息。
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4
感染性疾病的分子诊断策略
• 一般性策略（检出病原体）：
– 判断有无感染 – 是何种病原体感染 – 常用方法：PCR ＋ 杂交
• 不完全双连环状DNA
长链L为负链：有4个开放阅读框S、C、P、X
S区编Ag 、HBcAg
p区编码DNA聚合酶
X区位编码X蛋白，可能与病毒蛋白表
达有关。
短链S为正链：长短不一精品课件
21
pre-s1
pre-s2
HBV基因组结 构
S
HBV DNA 3.2 kb C
DNA 聚合酶 HBcAg
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19
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAPol
完整的乙肝病毒颗粒直径42纳米 由双层外壳和一个核心组成的，核心直径为2精7品纳课米件， 内含DNA双链和DNA多聚酶20
（一）病毒基因组结构
• 3.2kb双链DNA病毒
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13
三、感染性疾病分子诊断 的标本处理
• 标本采集处理主要包括选择合适的标本 种类、标本量、抗凝剂等及对标本进行 合适的传送、保存和预处理。
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14
四、感染性疾病分子诊断 的结果解释
1. 阴性结果 假阴性可能性 方法的灵敏度太低 方法失败 目标分子
2. 阳性结果 假阳性可能性 方法的特异性 受到污染
第八、九章 感染性疾病的分子诊断
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1
感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原微生物：致病菌（条件致病菌）
共
生
微 生
状
物
态
人
体
微
生
物
不
人
同
体
的
感
染
状
态
在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生
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2
感染性疾病：由某种病原体所致， 通过不同方式引起人体发生感染并 出现临床症状的疾病。
5'
引物A 5'
3'
5'
100-1000 RNA扩增子
3'
5'
3'RNA
5' 3'
引物B
RNAseH
5' cDNA
3' RNA 5' cDNA
图8-3 NASBA原精理品课示件意图
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nucleic acid sequence-b精a品se课d件amplification (NASBA)
9
• NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器， 不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制， 循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR， 特异性好。
• 用于感染性疾病治疗的监控和预测、病 情发展过程的危险性评价及疾病预后等。
• 耐药性的检测 • 细菌的分型 • 流行病调查
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17
第一节 病毒的基因检测
人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒性肝 炎、脑炎、流行性感冒等等，占人类传染疾 病的75%左右。400多种不同病毒。
病毒结构：大 小：20-300nm
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15
3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相 关信息
临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样 本中仍可以检测出相应的病原体。
有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。
4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不 能说此病原体就是引起疾病的直接原因。
该病原体可能是一种正常菌群
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16
五、感染性疾病分子诊断 的临床应用及评价
核心区：核酸（DNA或RNA）
外周衣壳：蛋白质
包膜：脂质（镶嵌有蛋白质）
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一、 乙型肝炎病毒
我国是HBV高流行区，50%－70%的人
受过感染，8%－10%是HBV携带者，肝
炎患者中60%是慢性肝炎患者，导致肝硬
变，HBV又与原发性肝癌密切相关。
外壳（HBsAg): 外壳蛋白成分为表面抗原 核心（HBcAg)： DNA